Тонкослойная хроматография каротиноидов

Тонкослойная хроматография (ТСХ) — наиболее быстрый и дешевый способ определения индивидуальных компонентов в смеси каротиноидов и полуколичественной оценки их соотношения.

Хроматографию проводят на пластинках с силикагелем в разных системах растворителей. Если проводится ТСХ суммарной фракции пигментов без предварительного омыления, то хроматографию проводят в двух направлениях. В первой системе растворителей отделяют каротиноиды от хлорофиллов. Часто в этом случае в качестве растворителя используют бензин, бензол или петролейный эфир. После первого разделения проводят второе, в перпендикулярном направлении. В этом случае используют другую систему растворителей — смесь гексана с диэтиловым эфиром или ацетоном, что приводит к хорошему разделению каротиноидов.

Качественный состав каротиноидов и их количество определяют после элюции пятен с пластин и их спектрофотометрии. При этом по максимумам поглощения определяют принадлежность пятна к конкретному соединению, а по поглощению света с длиной волны 440 нм — относительное или абсолютное (после пересчета по формулам) содержание компонента. Второй способ определения количества каротиноидов при ТСХ — дензитометрия. При этом концентрацию вычисляют по площади пика на графике (отражает размер пятна и его яркость), а состав каротиноидов определяют по их Rf и оттенку пятна [см.: 26, с. 320].

ВЭЖХ каротиноидов

Данный метод позволяет надежно определять качественный и количественный состав каротиноидов. Однако при его использовании необходимо тщательно освободить экстракт от хлорофиллов, так как они вызывают загрязнение и порчу хроматографических колонок. Желательно перед ВЭЖХ каротиноидов провести очистку препарата на предколонке с обращенной фазой.

Для повышения точности определения каротиноидов можно использовать в качестве детектора МС. В этом случае препарат необходимо также тщательно очистить от ионов металла, которые остаются после омыления пигментов.