Оптические методы. 
Разработка методики определения альфа-токоферола ацетата в лекарственном препарате методом капиллярной газовой хроматографии

В ГФ XII издания для оценки подлинности витамина Е в субстанции рекомендован метод прямой спектрофотометрии. Инфракрасный спектр жидкой пленки субстанции в области средних частот 4000 — 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать рисунку спектра альфа-токоферола ацетата (рисунок 3).

Рисунок 3 — ИК-спектр б-токоферола ацетата.

Ультрафиолетовый спектр поглощения 0,01% раствора б-токоферилацетата в 96% этаноле в области 230 — 350 нм должен имеет максимумы поглощения при 278 нм, 284 нм и минимум при 254 нм. Определение витамина Е в готовых лекарственных формах проводят также спектрофотометрически при л=450 нм после его окисления комплексом меди (II) с неокупроином.

Для качественного и количественного колориметрического определения б-токоферола используется возможность его окисления с образованием окрашенных продуктов, химическая структура которых и их окраска разнообразны и зависят от характера окисления. Большое практическое применение в аналитической практике нашел метод Эммери-Энгеля, который основан на окислении токоферола хлоридом железа (III) в присутствиидипиридила или о-фенантролина и фотометрическом измерении окраски образовавшегося комплексного соединения при длине волны 520 нм. Однако хлорид железа (III) окисляет только свободные токоферолы, но не их эфиры, поэтому для определения последних по реакции Эммери — Энгеля необходимо проводить предварительное омыление.

Окисление витамина Е концентрированной азотной кислотой при нагревании приводит к образованию окрашенных в красно-оранжевый цвет о-токоферилхинонов, что служит основой для количественного фотоколориметрического определения при л=470 нм по методу Фуртера-Мейера с использованием стандартного образца.

Основным недостатком колориметрических методов определения витамина Е является их неспецифичность. С целью повышения селективности определения, посторонние мешающие вещества удаляют, применяя щелочное омыление спиртовым раствором гидроксида калия с добавкой антиоксидантов и последующей экстракцией токоферола из неомыленной части сернокислым эфиром, что значительно удлиняет и усложняет анализ. Кроме того, щелочное омыление небезразлично для б-токоферола, который нестоек в щелочной среде, тем более что мешающие вещества часто остаются в неомыляемой фракции.

Перечисленных недостатков лишен флуориметрический метод, основанный на образовании флуоресцирующего красителя феназина при конденсации окисленной формы б-токоферола — о-токоферилхинона — с о-фенилендиамином. Токоферолы обладают интенсивной флюоресценцией с максимумом возбуждения при 295 нм и излучения при 340 нм. Данный метод используют при количественном определении би г-токоферола в монои поливитаминных препаратах.

Метод поляриметрии дает важную информацию при анализе субстанции оптически активных веществ (б-токоферол), но не пригоден для анализа суммы изомеров оптически активных веществ без их предварительного разделения. Ведущие зарубежные фармакопеи (европейская и Фармакопея США) рекомендует проводить определение величины удельного вращения для 10% раствора рацемической смеси б-токоферола и его ацетата в этаноле [б]D20 = -0,01° до +0,01°. Величину удельного вращения для RRR-б-токоферола по ЕФ определяют для 20% раствора в диэтиловом эфире после его окисления гексацианоферратом калия до хинона — [б]D20 не менее +24°. Информация по применению данного метода для количественного определения токоферолов в научной литературе не обнаружена.

Предложен рефрактометрический способ определения б-токоферилацетата в препаратах витамина Е (концентрированные растворы в масле), ошибка которого не превышает 1% в диапазоне концентраций 20 — 50% масс. По сравнению с обращено-фазовой (ОФ) ВЭЖХ метод снижает затраты времени с 2−3 ч. до нескольких минут, поэтому он может быть рекомендован для выполнения серийных определений. Однако, ограничением данного метода является минимально определяемый уровень содержания б-токоферилацетата в соевом масле приблизительно 15 — 20% масс.

Измерены спектры ЯМР 1Н токоферола ацетата в дейтерированном хлороформе. Проведено отнесение характерных сигналов спектров, что позволяет надежно идентифицировать его данным методом. Для спектра токоферола ацетата характерно наличие триплетов протонов в положении 4 и 3 с химическими сдвигами д = 2,59 и 1,77 м.д. (J3,4 = 6,9 Гц) соответственно, синглетов протонов метильных групп в положениях 5, 7 и 8 (д = 2,09; 2,02; 1,97 м.д.) и в положении 2 (д = 1,23 м.д.). Метильные протоны боковой цепи регистрируются в виде дублета при д = 0,86 м.д. (J = 6,3 Гц), а ацетатной группы — в виде синглета при д = 2,32 м.д. Метиленовые и метиновые протоны боковой цепи наблюдаются в области д = 1,0 — 1,6 м.д. Данный метод с успехом может использоваться для установления или подтверждения структуры отдельных изомеров токоферолов после их разделения.