Полимеразная цепная реакция — экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе). Помимо амплификации (увеличения числа копий) ДНК, ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нуклеиновыми кислотами (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, выделения новых генов [12, 13, 14].
Метод ПЦР основан на многократном избирательном копировании определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. В отличие от амплификации ДНК в живых организмах, с помощью ПЦР амплифицируются относительно короткие участки ДНК [7].
В обычном ПЦР-процессе длина копируемых ДНК-участков составляет не более 3000 пар оснований. С помощью смеси различных полимераз, с использованием добавок и при определённых условиях длина ПЦР-фрагмента может достигать 20−40 тысяч пар нуклеотидов. Это всё равно значительно меньше длины хромосомной ДНК эукариотической клетки. Например, геном человека состоит примерно из 3 млрд пар оснований [10,11].
Диагностика методом ПЦР-ПДРФ (полимеразная цепная реакция — полиморфизм длин рестрикционных фрагментов) является стандартным анализом точковых мутаций для диагностики аллельного полиморфизма генов-кандидатов, связанных с продуктивными качествами сельскохозяйственных животных. По длине фрагментов (ПДРФ) делают вывод об отсутствии или наличии точковой мутации, а также о гомозиготности или гетерозиготности особи [5, 8].
В настоящее время возрастает интерес к технологиям, основанным на использовании ДНК-маркеров, которые находят широкое применение в национальных селекционных программах ряда стран с развитым животноводством и оказывают значительное воздействие на улучшение состава туши, качество мяса и эффективность производства мяса [1, 2, 3].
В качестве ДНК-маркеров рассматриваются гены, аллельные варианты которых связаны с фенотипическим проявлением экономически важных признаков животных (воспроизводительные качества, вес, рост, выход мяса и т. д.) [4, 5, 6, 9].
На сегодняшний день, в качестве перспективных генов маркеров рассматривают ген кальпастатина отвечающий за мясную продуктивность овец (CAST), ген гормона роста (GН), ген дифференциального фактора роста (GDF9) отвечающий за воспроизводительные качества овец [3].
Целью нашей работы было оптимизация протоколов проведения ПЦР-ПДРФ-анализа для генотипирования овец по гену гормона роста GН, гену отвечающему за воспроизводительные качества GDF9 и гену отвечающему за мясную продуктивность CAST.
