Материалы и методы

Исследование проведено на 90 нелинейных крысах-самцах Rattus norvegicus Albinus с массой тела 200−250 г. Животные содержались в виварии Амурской государственной медицинской академии при соблюдении 12-ти часового светового режима, на стандартном пищевом рационе, при свободном доступе к пище и воде. Экспериментальные животные были разделены на 2 группы — группу сравнения (n 30) и группу коррекции (n 30). Окислительный стресс у экспериментальных животных моделировали путем ежедневного охлаждения в течение 4-х недель. Общее охлаждение проводили в климатокамере «ILKA» (Feutron, ГДР) при температуре -15С по 3 часа, с соблюдением адекватных условий влажности и вентиляции. Крысы из группы коррекции ежедневно перед охлаждением получали моллюскам per os в дозе 5 мг на кг массы тела животного. Интактные крысы (n 30), содержавшиеся в стандартных температурных условиях вивария, составили группу контроля. Животные выводились из эксперимента на следующий день после завершения путем декапитации под тиопенталовым наркозом. Все манипуляции c животными проводились на основании разрешения Этического комитета Амурской государственной медицинской академии (протокол № 1 от 23 декабря 2005 г.), протокол эксперимента исследования на этапах содержания, моделирования и выведения животных из эксперимента соответствовал принципам биологической этики, изложенным в «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (ЕЭС, Страсбург, 1985).

Для верификации окислительного стресса в сыворотке крови и тканях семенника определяли содержание гидроперекисей липидов, малонового диальдегида и диеновых конъюгатов, антиокислительную систему оценивали по содержанию витамина Е.

Для морфологического и количественного анализа использовали парафиновые срезы семенников толщиной 5 мкм, для окраски которых ставили ШИК-реакцию с последующим докрашиванием ядер клеток гематоксилином.

Количественный анализ семенников проводили при помощи аппаратно-программного комплекса, состоящего из программного обеспечения для количественного анализа ВидеоТесТ — Морфология 5.0, цифровой камеры DCM 130, адаптированной к световому микроскопу «Микромед-1», и персонального компьютера. Количественный анализ инкреторной активности семенников включал подсчет относительного количества клеток Лейдига, измерение диаметра цитоплазмы и ядра клеток Лейдига, определяли процентное соотношение различных морфофункциональных типов интерстициальных эндокриноцитов [5], в сыворотке крови крыс определяли концентрацию тестостерона методом иммуноферментного анализа с использованием стандартного набора (Вектор-Бест, Россия). Для количественной оценки генеративной активности семенников измеряли диаметр извитых семенных канальцев, вычисляли индекс сперматогенеза, подсчитывали цитологический профиль сперматогенеза [5].

Для статистической обработки количественных данных использовалось программное обеспечение Statistica 6.0 (StatSoft, США), все данные представлены как M±m. Гипотезу нормальности распределения значений в выборках проверяли при помощи теста Колмогорова-Смирнова, после чего для сравнения выборок применялся параметрический t-критерий Стьюдента. Различия между выборками считались статистически значимыми при р < 0,05.