Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Исследование иммунновоспалительных маркеров развития атеротромботического ишемического инсульта и механизмов реализации ишемического повреждения головного мозга

ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Большое количество исследований, проведенных, в том числе, на кафедре фундаментальной и клинической неврологии и нейрохирургии РГМУ, расширили представления об участии иммунновоспалительных процессов, генетических и молекулярных механизмов апопотза в патогенезе ишемического инсульта. Было показано, что при формировании инфарктных изменений в ткани мозга человека, имеется дисбаланс цитокинового… Читать ещё >

Исследование иммунновоспалительных маркеров развития атеротромботического ишемического инсульта и механизмов реализации ишемического повреждения головного мозга (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.4,
  • Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Особенности каротидного атеросклероза
    • 1. 2. Значение То11-подобных рецепторов в развитии ишемического повреждения головного мозга
    • 1. 3. Роль БТШ70 в ишемическом повреждении головного мозга. РазЬ-индуцированный апоптоз
    • 1. 4. Воспалительные и противовоспалительные цитокины в патогенезе ишемического инсульта
    • 1. 5. Значение ММП-9 в патогенезе ишемического инсульта
  • Глава 2. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
    • 2. 1. Общая характеристика больных
    • 2. 2. Клинические методы исследования
    • 2. 3. Лабораторные методы исследования
    • 2. 4. Компьютерно-томографическое исследование
    • 2. 5. Ультразвуковое исследование
    • 2. 6. Статистическая обработка данных
  • Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ БОЛЬНЫХ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ
    • 3. 1. Клиническая характеристика пациентов основной группы
    • 3. 2. Краткая клиническая характеристика пациентов основной группы при их условном делении в зависимости от изучаемых параметров
  • Глава 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ
    • 4. 1. Исследование экспрессии рецептора системы врожденного иммунитета — TLR4 на моноцитах и гранулоцитах у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом

    4.2 Исследование спонтанного апоптоза клеток периферической крови, а также уровня регуляторов апоптоза — БТШ70 в моноцитах и гранулоцитах пациентов с ишемическим атеротромботическим инсультом и уровня sFasL.

    4.3 Исследование уровня ФНО-а и ИЛ 10 у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом.

    4.4 Исследование активности ММП-9 у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом.

    4.5 Взаимодействие изучаемых маркеров между собой, оценка их роли в патогенезе ишемического инсульта.

Медико-социальные аспекты проблемы церебрального инсульта.

Согласно международным эпидемиологическим исследованиям ежегодно^ в мире регистрируется более 30 миллионов случаев инсульта, из них умирают 4,7 млн человек. По данным ВОЗ, за 2004 г инсульт занимает первое и второе' место среди ведущих причин смерти в странах со средним и< высоким уровнем дохода соответственно, и в целом — второе место в мире, уступая лишь ишемической болезни сердца [12].

Инсульт является одной из ведущих причин смерти и инвалидизации в Европе, и по мере старения населения бремя этого заболевания для общества будет становиться все тяжелее [28].

По данным современных крупных международных исследований {STONE, Syst-Eur, NICS), в структуре сердечно-сосудистой патологии инсульты стали преобладать над инфарктами миокарда по частоте примерно на 30% («инсультный парадокс») [15]. Существует множество объяснений «инсультного парадокса». Наиболее обоснованной представляется связь инсульта с продолжительностью жизни [15,90]. Ежегодный риск инсульта в возрастной группе 45 — 54 года составляет 0,1%, 65 — 74 —1%, старше 80 лет -5% [30,89].

По данным регистра инсульта, в России ежегодно переносят инсульт более 450 тысяч человек, т. е. каждые 1,5 минуты у кого-то из россиян впервые развивается данное заболевание, при этом до 200 тысяч случаев заканчиваются летальным исходом, а из выживших пациентов до 80% остаются инвалидами разной степени тяжести. Доля острых нарушений мозгового кровообращения в структуре общей смертности в нашей стране составляет 21,4%, уступая лишь смертности от ишемической болезни сердца, а инвалидность после перенесенного инсульта достигает 3,2 на 10 тысяч населения, занимая первое место среди всех причин первичной инвалидности. Лишь около 20% выживших больных могут вернуться к работе [5]. Уровень заболеваемости инсультом в-Москве за последние 20 лет вырос с 2,2 до 3,5 на 1000 населения. [3].

Согласно Хельсингборгской декларации о европейских стратегиях в" отношении инсульта (2006 г.), приоритетным направлением в области научных исследований и разработок является, наряду с другими, разработка новых методов лечения ишемического инсульта, таких, как нейропротекторные препараты и другие лекарственные препараты и гипотермия.

Для этих целей необходимо изучение механизмов, реализующих формирование очага ишемии, степени вовлечения и влияния иммунной системы, в том числе элементов врожденного иммунитета, воспалительного" ответа и других факторов на патологический процесс, а соответственно и степень тяжести заболевания. Известно, что доформирование очага церебрального инфаркта происходит за счет активации генома с включением генетически-запрограммированных молекулярных механизмов, ведущих к развитию иммунных изменений, локального воспаления в очаге ишемии, апоптозу и апо-некрозу [4].

Новым направлением в изучении патогенеза ишемического инсульта является исследование значения системы врожденного иммунитета. Было показано, что активация клеток врожденной иммунной системы происходит через особые рецепторы — То11-подобные рецепторы (ТЬЯ), принадлежащие к семейству трансмембранных рецепторов, в результате чего происходит выработка разнообразных эффекторных молекул (цитокинов и других медиаторов иммунного ответа, воспаления и регенерации). Намодели экспериментального инсульта получены убедительные данные, подтверждающие участие ТЬЯ4 в формировании очага ишемии, а также возможность активации этих рецепторов эндогенными лигандами — белками теплового шока 70 (БТ1И70) [56,165]. При этом БТШ70 могут как активировать синтез провоспалительных медиаторов посредством активации ТЪЯ4, так и выступать в качестве нейропротекторов и защищать клетки от апоптоза [17].

В результате исследований FasL-индуцированного апоптоза, произведенных на модели ишемического инсульта Н. Mehmet и MartinVillalba-и соавт., было показано, что нейтрализация FasL приводит к уменьшению объема очага ишемии у экспериментальных животных, [122,127].

Последние десятилетия активно изучается роль ФНО-а и ИЛ 10 в ишемическом повреждении головного мозга. Ряд основополагающих работ был проведен на кафедре фундаментальной и клинической" неврологиии нейрохирургии РГМУ. Был выявлен дисбаланс цитокинового статуса с дефицитом защитных противовоспалительных интерлейкинов и трофических факторов [23*24], определена теснаякорреляция ' выраженности иммунобиохимических изменений с тяжестью и клиническим исходом инсульта. При этом установлена неодназначная роль при ишемическом инсульте некоторых регулирующих молекул, в том числе ФНО-а, которому свойствены как нейропротективные, так и агрессивные свойства. Аналогично ФНО-а, ряд работ выявили признаки разнонаправленного действия «противовоспалительного цитокина» ИЛ 10 [85, 97].

Интересна роль матриксных металлопротеиназ (ММП) в ишемическом повреждении головного мозга. В работе Рамазанова Г. Р. с соавт. была установлена роль ММП-9 в формировании осложнений после проведения тромболитической терапии у пациентов' с ишемическим инсультом [19]. Ряд исследований описывают повреждающее воздействие высоких концентраций ММП при экспериментальном ишемическом инсульте [153,154].

Несмотря на большой объем исследований иммунно-воспалительного статуса пациентов с ишемическим инсультом, многие вопросы остаются открытыми. Так, экспрессия TLR4 не изучена в клинических условиях у пациентов с ишемическим инсультом. Требует исследования комплексное взаимодействие системы врожденного иммунитета и индуцированных в ответ на ишемию воспалительных реакций и апоптоза при ишемическом инсульте. Все это определяет актуальность настоящей работы, ее цель и задачи.

Цель: Исследование иммунных, воспалительных процессов и параметров апоптоза у больных в остром периоде атеротромботического ишемического инсульта в зависимости" от особенностей клинического течения заболевания.

Задачи исследования,.

1. Оценка уровня экспрессии поверхностных ТОМ клеток периферической крови (моноцитов и гранулоцитов), ее динамики и клинической значимости у больных с ишемическим атеротромботическим инсультом и в контрольной группе.

2. Определение содержания и динамики изменений внутриклеточных БТШ70 мононуклеаров и нейтрофилов периферической крови у больных с ишемическим инсультом, определение взаимосвязи их концентраций с клиническими особенностями заболевания и размерами очага поражения головного мозга.

3. Определение уровня и динамики сывороточного вРавЬ, ФНО-а и ИЛ 10 у больных в остром периоде атеротромботического ишемического инсульта в зависимости от его клинических особенностей и размеров очага поражения головного мозга.

4. Изучение активности спонтанного апоптоза клеток периферической крови у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом в первый день заболевания и в динамике острого периода в зависимости от клинических особенностей течения заболевания, а также от уровня таких регуляторов, как БТШ70, ББазЬ, ФНО-а.

5. Определение динамики концентрации циркулирующей ММП-9 у пациентов в остром периоде атеротромботического ишемического инсульта и оценка ее клинической значимости, сопоставление с размерами очага ишемического повреждения головного мозга.

Научная новизна.

1. Впервые был изучен уровень экспрессии ТЬЯ4, отражающих состояние системы врожденного иммунитета, на моноцитах и гранулоцитах периферической крови пациентов с атеротромботическим ишемическим-инсультом. Показано, что уровень экспрессии поверхностных ТЪЯ4 на моноцитах больных с изучаемой патологией коррелирует со степенью тяжести состояния пациентов в остром периоде заболевания (г=0,79, р=0,03'), что, возможно, свидетельствует о клинической значимости активации экспрессии ТЬЯ4 моноцитов периферической крови в патогенезе ишемического инсульта.

2. Впервые исследован уровень активности спонтанного апоптоза клеток периферической крови у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом, выявлено его достоверное повышение по сравнению с контрольными значениями (р<0,05) и максимальное нарастание к 7-м суткам заболевания.

3. Впервые исследовано содержание и динамика изменений внутриклеточных БТШ70 мононуклеаров и нейтрофилов периферической крови у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом. Определена обратная зависимость интенсивности спонтанного апоптоза клеток периферической крови пациентов с ишемическим инсультом и уровня внутриклеточного БТШ70, что отражает антиапоптотическую направленность этого шаперонного белка.

4. Впервые проведена комплексная оценка иммунных, воспалительных маркеров и параметров апоптоза, изучено их клиническое значение у больных в остром периоде атеротромботического ишемического инсульта. Определена временная взаимосвязь между развитием воспалительной реакции и активацией системы апоптоза при атеротромботическом ишемическом инсульте, нарастающая к 7-м суткам заболевания и формирущая единый пул «отдаленных последствий ишемии».

Научно-практическая значимость работы.

1. Лейкоцитоз в 1-е сутки атеротромботического ишемического инсульта, следует рассматривать как предиктор тяжести заболевания (г=0,47- р<0,01), при отсутствии сопутствующей патологии, влияющей на данный показатель.

2. Достоверное различие концентрации сывороточной ММП-9 на 1-е и 7-е сутки заболевания у тяжелых и среднетяжелых пациентов, по-сравнению с легкобольными (р<0,006 ир<0,01), а также наличие статистически значимой, корреляционной зависимости между уровнем сывороточной ММП-9 и тяжестью инсульта на 1-е сутки (г=0,436- р<0,03) позволяют рассматривать ММП-9 как показатель тяжести ишемического инсульта.

3. Связь экспрессии ТЬЯ4 на моноцитах периферической крови и уровня циркулирующей ММП-9 с тяжестью атеротромботического ишемического инсультаа также подтверждение в клинических условиях антиапоптотических свойств внутриклеточного БТШ70 свидетельствуют о возможности разработки новых нейропротекторов, действие которых будет направлено на представленные молекулярные мишени.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Установлена клиническая значимость активации экспрессии рецептора врожденного иммунитета — ТЫ14 моноцитов периферической крови в патогенезе ишемического инсульта, что выражается повышением уровня экспрессии поверхностных ТЪЫ4 на моноцитах больных с атеротромботическим ишемическим инсультом, по сравнению с контрольными значениями, и его корреляцией со степенью тяжести состояния пациентов в остром периоде заболевания (г=0,79- р=0,03).

2. Показано, что уровень активности спонтанного апоптоза клеток периферической крови у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом достоверно выше контрольных значений (р<0,05) в остром периоде заболевания, максимально нарастая к 7-м суткам и снижаясь до исходного уровня к 14-м суткам. Содержание индуктора апоптоза зРаэЬ в сыворотке крови также достоверно нарастает к 7-м суткам (р<0,05) у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом вне зависимости от тяжести заболевания.

3. Выявлено повышение уровня внутриклеточных белков теплового шока 70 в остром периоде атеротромботического ишемического инсульта, по сравнению с контрольными значениями (р<0,05), и отрицательные корреляции их уровня с активностью спонтанного апоптоза периферических клеток крови (г=-0,75- р<0,01), что, возможно, отражает антиапоптотические свойства этого шаперонного белка.

4. Показано, что уровень сывороточной ММП-9, обладающей деградирующими свойствами в отношении соединительнотканных структур, отражает тяжесть течения атеротромботического ишемического инсульта: достоверно повышается на 1-е (р<0,01) и 3-е (р<0,03) сутки заболевания, по сравнению с контрольными значениями, коррелируя со степенью тяжести заболевания по №Н (г=0,44- р<0,03).

5. Проведенное комплексное клиническое и иммуннобиохимическое исследование маркеров развития атеротромботического ишемического инсульта установило временные взаимосвязи между инициацией и развертыванием процессов, участвующих в формировании отдаленных последствий ишемии (реакция системы врожденного иммунитета — ТЫ14, локальный воспалительный ответ — ФНО-а, апоптоз на примере спонтанного апоптоза клеток периферической крови и исследования индуктора апоптоза БраэЬ) и активацией компенсаторных защитных механизмов (синтез внутриклеточных БТШ70, регуляторных цитокиновИЛ 10).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, из них 4 в отечественной центральной печати.

Апробация диссертационной работы.

Апробация диссертации состоялась на конференции кафедры фундаментальной и клинической неврологии и нейрохирургии и НИИ инсульта ГОУ ВПО РГМУ Росздрава (протокол № 12 от 04 июня 2010 года).

Основные результаты исследования были доложены на научных конференциях кафедры фундаментальной и клинической неврологии и нейрохирургии ГОУ ВПО РГМУ, И Российском международном конгрессе «Цереброваскулярная патология и инсульт» 17 сентября 2007 года, Российской научно-практической конференции «Нарушения мозгового кровообращения: диагностика, профилактика, лечение», Пятигорск,.

20 мая 2010 года.

Внедрение результатов исследования.

Основные положения диссертации внедрены в лечебную работу отделений неврологии инейрореанимации ГКБ № 31 Департамента здравоохранения г. Москвы, научно-исследовательскую работу НИИ цереброваскулярной патологии и инсульта ГОУ ВПО РГМУ Росздрава.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста, включает 20 таблиц, 16 рисунков, 3 клинических случая. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания применяемых методов, 2 глав собственных результатов исследований, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Список цитируемой литературы состоит из 187 источника, включая 31 отечественных и 156 зарубежных.

ВЫВОДЫ:

1. Уровень экспрессии маркеров врожденного иммунитета — поверхностных ТЫ14 на моноцитах периферической крови достоверно повышается у больных с ишемическим атеротромботическим инсультом, начиная с 1-х суток заболевания (р<0,05), по сравнению с контролем, и к 14-м суткам коррелирует с тяжестью состояния больных (г=0,8- р<0,03).

2. Уровень спонтанного апоптоза клеток периферической крови (моноцитов и гранулоцитов) статистически значимо повышается у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом, начиная с 1-х суток (р<0,01), по сравнению с контролем, достигая своего максимума к 7-м суткам заболевания (р<0,002).

3. Содержание одного из индукторов апоптоза эРаэЬ в сыворотке крови достоверно нарастает к 7-м суткам ишемического инсульта (р<0,05), при этом концентрация зРаэЬ значимо не отличается у пациентов в зависимости от тяжести состояния, что, вероятно, отражает равную степень реализации РавЬ-индуцированного апоптоза при ишемическом инсульте разной степени тяжести.

4. Содержание внутриклеточных белков теплового шока 70 в клетках периферической крови в конце 1-х суток ишемического инсульта достоверно превышает контрольные значения (р<0,05). Уровень белков теплового шока 70 на 1-е, 7-е и 14-е сутки инсульта обратно коррелирует с уровнем спонтанного апоптоза периферических клеток крови (г~0,75- р<0,01), что подтверждает антиапоптотические свойства внутриклеточного БТШ70.

5. Уровень ФНО-а у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом достоверно выше, чем в контроле, в течение всего острого периода заболевания. К 7-м суткам заболевания происходит достоверное нарастание концентрации сывороточного ФНО-а (р<0,05) по сравнению с 1 ми сутками только в группе тяжелых инсультов, что отражает роль локального воспаления в патогенезе церебральной ишемии.

6. Сывороточный ИЛ10 у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом нарастает на 3-й сутки заболевания (р<0,02), по сравнению с контрольными значениями, и проявляет модуляторные функции при ишемическом процессе в головном мозге: с одной стороны, положительно коррелируя с концентрацией индуктора апоптоза — БРаэЬ (г=0,04- р<0,05), а, с другой — повышаясь у пациентов с более выраженной положительной динамикой восстановления неврологического статуса.

7. Уровень сывороточной ММП-9 у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом достоверно повышается на 1-е (р<0,01) и 3-е (р<0,03) сутки заболевания, по сравнению с контрольными значениями, и отражает тяжесть течения инсульта, значимо преобладая у пациентов с тяжелым и среднетяжелым состоянием, по сравнению с легкобольными (р<0,006 и р<0,01), и коррелируя со степенью тяжести заболевания по N111 (г=0,44- р<0,03).

8. Уровень лейкоцитов на 1-е сутки заболевания статистически значимо коррелирует с объемом очага ишемии на 6−7-е сутки (г—0,47- р<0,01) и, тяжестью состояния в остром периоде заболевания (г=0,41- р<0,01), что позволяет расценивать лейкоцитоз в периферической крови в 1-е сутки ишемического инсульта как предиктор тяжести заболевания при отсутствии сопутствующей патологии, влияющей на данный показатель.

9. Проведенное комплексное клиническое и иммуннобиохимическое исследование маркеров развития атеротромботического ишемического инсульта установило временные взаимосвязи между инициацией и развертыванием процессов, участвующих в формировании отдаленных последствий ишемии (реакция системы врожденного иммунитета, воспалительный ответ, апоптоз) и активацией компенсаторных защитных механизмов (синтез внутриклеточных БТШ70, регуляторных цитокинов).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Проблема церебрального ишемического инсульта является одной из наиболее актуальных проблем социальной и медицинской значимости в связи с высокой частотой развития заболевания, постоянным омоложением контингента заболевших, большим процентом инвалидности и смертности [4]. Изучение роли иммунного ответа, воспалительной реакции в развитии ишемического инсульта, влиянии на тяжесть заболевания и его исходов имеет важное значение с целью открытия новых подходов к диагностике, прогнозированию заболевания и поиску новых молекулярных мишеней для терапевтического воздействия.

Большое количество исследований, проведенных, в том числе, на кафедре фундаментальной и клинической неврологии и нейрохирургии РГМУ, расширили представления об участии иммунновоспалительных процессов, генетических и молекулярных механизмов апопотза в патогенезе ишемического инсульта. Было показано, что при формировании инфарктных изменений в ткани мозга человека, имеется дисбаланс цитокинового статуса с дефицитом защитных противовоспалительных интерлейкинов и трофических факторов [8,9,23,24]. Была также выявлена тесная корреляция выраженности иммунобиохимических изменений с тяжестью и клиническим исходом инсульта [9], определена значимая роль аутоиммунных процессов в ишемическом повреждении головного мозга [3,6]. Изучено влияние ММП-9 на развитие осложнений после проведения тромболитической терапии [19]. Были проведены исследования, доказывающее влияние полиморфизма различных генов, в том числе индуктора апоптоза — гена Fas, на формирование очага ишемии при ишемическом инсульте [22].

В то же время, появляются новые сведения о роли врожденного иммунитета в формировании ответа головного мозга на ишемию. Так, продемонстрировано участие рецепторов врожденного иммунитета — Toll-подобных рецепторов 4 (TLR4), в развитии экспериментального церебрального инфаркта [167,180]. Результаты многих клинических исследований, например, по роли цитокинового статуса в патогенезе инсульта противоречивы. Исследования последних лет установили, что разнонаправленность эффектов ФНО-альфа может быть в частности связана с наличием двух типов рецепторов к данному цитокину [93]. Активно исследуются значение различных медиаторов апоптоза, в том числе Fas-лиганда (FasL), в патогенезе ишемического инсульта, возможное нейропротекторное действие белков теплового шока 70 (БТШ70), а также роль металлопротеиназ в развитии инфаркта головного мозга. [107,122]. Требуют дальнейшего изучения причины разного течения заболевания у пациентов с ишемическим инсультом при изначально одинаковых степени тяжести и локализации сосудистого поражения, что обуславливает поиск новых методов диагностики и прогнозирования течения ишемического инсульта. Все это определяет актуальность настоящей работы, ее цель и задачи.

В соответствии с целью и задачами, было обследовано 107 пациентов с церебральным ишемическим инсультом, из которых в исследование были включены 58 пациентов с атеротромботическим патогенетическим вариантом инсульта по критериям TOAST. Контрольную группу составили 20 пациентов без эпизодов ишемии в анамнезе, сопоставимые по половозрастным признакам и сопутствующим заболеваниям с основной группой.

В основную группу были включены пациенты с впервые возникшим атеротромботическим ишемическим инсультом, определяемым по критериям TOAST, поступившие в клинику в течение 24 часов от начала развития заболевания. Средний возраст составил 68,55±11,2 лет. Мужчин было 35 (60,3%), женщин — 23 (39,7%).

Для объективизации тяжести состояния, выраженности очагового неврологического дефицита и оценки динамики клинических показателей использовали шкалу инсульта NIH и оригинальную шкалу оценки неврологического статуса Е. И. Гусева, В. И. Скворцовой. Клинические исходы заболевания оценивали по модифицированной шкале Рэнкина на 14 сутки.

Лабораторные исследования включали в себя выполнение следующих анализов: общий анализ крови, общий анализ мочи, биохимический анализ крови, коагулограмму (АЧТВ, ПВ, ПТИ, MHO, фибриноген, тромбоциты).

Специальные методы исследования включали твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) с использованием коммерческих имму, но ферментных наборов и тест-систем для определения содержания ММП-9, ИЛ 10, ФНО-а, sFasL в сыворотке крови и метод проточной цитофлоуриметрии для определения внутриклеточного БТШ70 и поверхностных TLR4 на клетках периферической крови, анализа интенсивности спонтанной программированной внутриклеточной гибели.

Компьютерно-томографическое исследование головного мозга проводили при поступлении пациента в стационар и на 6−7-и сутки инсульта. На томограммах определяли локализацию, характер и объем очага поражения головного мозга.

С целью верификации патогенетического варианта ишемического инсульта всем пациентам выполняли ультразвуковое исследование: дуплексное сканирование магистральных артерий головы, транскраниальную допплерографию и Эхо-КГ. Эхо-КГ исследование выполняли с целью исключения возможной кардиоэмболии.

Оценка неврологического статуса пациентов в первые сутки заболевания выявила ведущие неврологические синдромы, к которым относились пирамидная недостаточность (93,1%), речевые расстройства (37,8% по типу афазии и 53,4% по типу дизартрии) и нарушение чувствительности (48,3%). У 10 (17,2%) пациентов имелись расстройства уровня сознания.

Средний бал по шкале инсульта NTH на первые сутки заболевания составил 11,4±6,2, по оригинальной шкале оценки неврологического статуса 37,7±5,8. Инсульт с легким неврологическим дефицитом наблюдался у 17.

29,3%) пациентов, у 20 (34,5%) пациентов — средней степени тяжести и у 21 (36,2%) тяжелый инсульт. Средний возраст и пол пациентов статистически достоверно не различались в зависимости от тяжести инсульта. Более значимая положительная динамика на 14-е сутки наблюдения была у пациентов с инсультом средней тяжести и тяжелым.

При оценке восстановления неврологических функций по. модифицированной шкале Рэнкина на 14-е сутки заболевания благоприятные исходы чаще наблюдались у пациентов с инсультом с легким неврологическим дефицитом, по сравнению с пациентами, у которых состояние при поступлении в клинику оценивалось как среднетяжелое и тяжелое (р<0,001).

По результатам КТ головного мозга все инсульты были полушарными: правополушарная локализация ишемического очага повреждения была выявлена у 27 (46,5%) пациентов, левополушарная — у 31 (53,4%) пациентов. При проведении КТ на 6−7-е сутки инсульта, чаще всего ишемический очаг локализовался в теменно-височной области (41,7%) и в подкорковых структурах головного мозга (19,2%).

Наблюдалась закономерная прямая достоверная корреляция между объемом очага и степенью тяжести пациентов (г=0,73- р<0,05) и статистически значимые различия между объемом очага у легкобольных по сравнению со среднетяжелыми и тяжелыми пациентами (р<0,01). Была выявлена прямая корреляция высокой степени достоверности между уровнем лейкоцитов в периферической крови на 1-е сутки заболевания и объемом очага ишемии (г—0,47- р<0,01), что указывает на отрицательное значение бессимптомного лейкоцитоза на 1-е сутки ишемического инсульта и соответствует литературным данным [182]. В исследовании, посвященном изучению предикторов развития осложнений при проведении тромболитической терапии, также было указано на увеличение риска развития летального исхода у пациентов с ишемическим инсультом при повышенном содержании сегментоядерных нейтрофилов, вне зависимости от проведения тромболитической терапии [19].

Ультразвуковое исследование магистральных артерий головы у всех пациентов основной группы выявляло гемодинамически значимые стенозы (более 50% согласно критериям TOAST) причинных сосудов на стороне поражения. Не было выявлено достоверной разницы между степенью стеноза в зависимости от тяжести состояния пациентов, их пола и возраста.

Важным компонентом врожденной иммунной системы являются эволюционно законсервированные TLR, которые распознают как высоко консервативные структурные мотивы, экспрессируемые на патогенных микроорганизмах, так и эндогенные лиганды, к которым относят БТШ70, домен, А фибронектина, гиалурон [34,170]. В то время как физиологические концентрации эндогенных лигандов не вызывают активации клеток иммунной системы, при повреждении тканей их концентрация значительно возрастает, активируя TLR [68], что приводит к экспрессии широкого спектра генов провоспалительных молекул [18].

Результаты работ на экспериментальной модели ишемического инсульта показали, что TLR4 вовлечен в становление воспалительного ответа и влияет на формирование очага ишемического повреждения. S. Tang и соавт. выявили, что нейрональные TLR4 играют ведущую роль в индуцировании нейрональной смерти в течение первых нескольких часов после инсульта, а активация TLR4 микроглии поддерживает воспаление в зоне пенумбры [167]. Повышение уровня TLR4 ассоциировалось с нейрональной гибелью, инфильтрацией ткани мозга лейкоцитами [180].

Полученные экспериментальные данные определили необходимость исследования рецептора врожденного иммуннитета TLR4 в клинических условиях.

Известно, что TLR4 имеют практически повсеместную распространенность в организме человека, экспрессируются на клетках, осуществляющих первую линию защиты (нейтрофилы, макрофаги, дендритные клетки), на эндотелиальных и эпителиальных клетках слизистых тканей и др. [34].

Так же их эндогенные лиганды могут циркулировать в периферической крови, что делает возможным исследование экспрессии ТЬЯ4 в клетках периферической крови при ишемическом инсульте.

При исследование экспрессии Т1П4 на моноцитах и гранулоцитах у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом было выявлено, что экспрессия ТЬЯ4 на моноцитах основной группы была достоверно выше уровня экспрессии ТЬЯ4 на моноцитах группы контроля на 1-е сутки (р<0,05) заболевания.

Экспрессия гранулоцитарного ТЬЯ4 у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом на 1-е, 7-е и 14-е сутки достоверно не отличалась от таковой в группе контроля.

Таким образом, мы впервые выявили, что у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом экспрессия ТЬЯ4 на моноцитах периферической крови превышает экспрессию рецептора на гранулоцитах в острый период заболевания.

Было получено 2 типа экспрессии ТЬЯ4 на моноцитах в образцах крови, взятых у одних и тех же пациентов: достоверно высокая за весь наблюдаемый период ((р<0,000) и достоверно низкая (р<0,001) по сравнению с контрольными значениями.

Возможно, данное различие экспрессии ТЬЯ4 на моноцитах у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом объясняется наличием цикличности процесса экспрессии рецептора, при котором у части моноцитов уже запущены генетически-молекулярные программы, направленные на максимальную экспрессию рецептора, в то время как другая часть моноцитов еще не активирована. Кроме того, это может быть связано с естественным циклом синтеза/распада рецептора на поверхности моноцитов. Учитывая небольшую группу наблюдения, включенную в наше исследование, полученные данные требуют дальнейшего изучения.

Было показано, что стимуляция ТЬЯ4 приводит к усугублению патологического процесса, увеличению размера инфаркта головного мозга [92]. В работе ХЯ. СаБО с соавт. было обнаружено достоверное уменьшение зоны, инфаркта у мышей нокаутных по ТЬЯ4, по сравнению с диким типом [56].

В настоящей работе корреляционный анализ выявил статистически значимую достоверную прямую взаимосвязь между экспрессей ТЫ14 на моноцитах на 14-е сутки и степенью тяжести состояния пациентов по N11188 на.

1-е (г=0,74- р=0,03), 7-е (г=0,75- р=0,05) и 14-е (г=0,79, р=0,03) сутки заболевания, что указывает на клиническую значимость ТЬЯ4 в патогенезе атеротромботического ишемического инсульта.

Таким образом, нами впервые показано, что у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом экспрессия ТЬЯ4 на моноцитах достоверно повышается на 1-е сутки по сравнению с группой контроля, в то время как экспрессия ТЬЯ4 на гранулоцитах достоверно не превосходит контрольные значения. Полученные прямые достоверные корреляции уровня экспрессии ТЬЯ4 на моноцитах на 14-е сутки с тяжестью состояния пациентов, на 1-е, 7-е и 14-е сутки, позволяет говорить о вовлечении ТЬЯ4 в патогенез атеротромботического ишемического инсульта.

Установлено, что при развитии инфаркта мозга наряду с некротической гибелью клеток, в очаге ишемии происходит активация апоптоза. Механизмы апоптоза включаются позже быстрых реакций некротических каскадов и начинают проявлять себя в полной мере через 12 часов, достигая максимума на.

2−3-и сутки инсульта, участвуя в «доформировании» очага ишемии [4].

Вследствие ишемии тканей, возникает каскад сигнальных взаимодействий, вызывающих программированную клеточную гибель не только в тканях, но и в циркулирующих клетках иммунной системы [132], что объясняет интерес к изучению уровня спонтанного апоптоза клеток периферической крови при ишемическом инсульте.

Исследование уровня спонтанного апоптоза моноцитов и гранулоцитов периферической крови у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом выявило достоверное повышение его уровня по сравнению с контрольными значениями на 1-е (р<0,003), 7-е (р<0,003) и 14-е (р<0,01) сутки" заболевания для моноцитов и на 1-е (р<0,01) и 7-е сутки (р<0,002) для гранулоцитов. К 7-м суткам уровень спонтанного апоптоза у пациентов с ишемическим инсультом достоверно повышался (р<0,01), достигая максимальные значения за весь период наблюдения. К 14-му дню регистрируемый уровень спонтанного апоптоза моноцитов и гранулоцитов пациентов основной группы достоверно снижался (р<0,05).

Универсальным регулятором апоптоза, играющим мультифункциональную роль в патогенезе ишемического инсульта, является sFasL. Fas-L реагирует с тремя молекулами Fas, вызывает активацию апоптоза каспазным путем и без участия каспаз [27].

Проводимые исследования доказали положительный эффект от нейтрализации FasL на модели ишемического инсульта, проявляющийся уменьшением размера очага ишемии и улучшением исходов заболевания у экспериментальных животных [122]. Ряд работ выявил повышение экспрессии FasL на клетках микроглии при ишемически-гипоксическом воздействии на нее, и определил, что микроглия и периферические иммунные клетки могут выполнять свои функции в доформировании очага ишемии только при наличии sFasL [127, 176].

Исследование sFasL у пациентов с ишемическим инсультом выявило достоверное увеличение его уровня на 7-е (р<0,000) сутки по сравнению с группой контроля. На 1-е и 3-й сутки уровень sFasL достоверно не отличался от контрольного, что подтверждает отсроченное действие факторов апоптоза в патогенезе ишемического инсульта.

На 1-е сутки заболевания у тяжелых пациентов отмечалось незначимое повышение концентрации сывороточного sFasL, по сравнению с пациентами средней тяжести и легкими (р>0,05). В динамике у всех пациентов основной' группы происходило увеличение концентрации sFasL к 7-м (р<0,05) суткам^ заболевания, без значимых различий в зависимости от тяжести состояния, что отражает равную степень реализации FasL — индуцированного апоптоза у пациентов с ишемическим инсультом не зависимо от степени тяжести.

Сравнительный анализ спонтанного апоптоза клеток периферической крови и изучение уровня sFasL, как апоптозмодифицирующего фактора, показал, что концентрация sFasL в сыворотке крови у пациентов с ишемическим инсультом, также как и уровень спонтанного апоптоза моноцитов и гранулоцитов, нарастает к 7-му дню заболевания, по сравнению с 1 -ми сутками.

В задачи нашего исследования не входило изучение механизмов реализации спонтанного апоптоза клеток периферичексой крови у пациентов основной группы. Известно, что кроме sFasL в качестве индукторов апоптоза могли выступать другие физиологические индукторы, как напрмер TNFb (лимфотоксин), TRAIL (Apo2L), CD40L, CD27L, CD30L, OX40L. Кроме того существую другие пути передачи сигнала апоптоза: с участием эндоплазматического ретикулума и митохондрий [27,29].

Однако, оценивая результаты проведенного исследования можно сделать вывод, что, несмотря на различные сигнальные пути индукции апоптоза в том или ином случае, апоптотические системы реализуют свое действие практически одновременно.

Таким образом, за наблюдаемый нами период, уровень sFasL достоверно не отличался у пациентов разной степени тяжести и к 7-м суткам статистически значимо нарастал у всех пациентов с атеротромботическим инсультом, одновременно с уровнем спонтанного апоптоза клеток периферической крови, что предполагает универсальное участие sFasL-индуцированного апоптоза и различных апоптозмодифицирующих систем в формировании ишемического повреждения головного мозга.

Учитывая, что- «доформирование» очага ишемического повреждения достигается путем апоптоза и апо-некроза, возникает необходимость поиска новых нейропротекторных веществ, обладающих, в. том числе,-антиапоптотической активностью. Известно, что под воздействием внешних стрессовых факторов и при развитии многих заболеваний (в том числе и ишемических повреждениях) в организме повышается уровень БТШ, что защищает клетку, стабилизируя денатурированные или неправильно свернутые пептиды. Ряд исследований выявили, что среди представителей семейств БТШ наиболее мощным протективным эффектом обладают БТШ70 [112, 135, 141]. На модели экспериментального инсульта Z.H.Lee и соавт. подтвердили нейропротекторную роль БТШ70: они обнаружили у мышей, нокаутных по БТШ70, больший объем зоны инфаркта по сравнению с диким типом [107].

Последние годы резко возросло число исследований, нацеленных оценку терапевтических приложений протективных свойств БТШ70. Применение БТШ70 в терапии ишемического инсультана экспериметальной модели заболевания, показало положительные результаты и улучшило исходы инсульта [178]. Авторы полагают, что антиишемический эффект БТШ70 связан с вовлечением его в антиапоптозный, антинекротический и антиагрегационный механизмы [79,80].

У' пациентов с ишемическим инсультом X. Jin и соавт. исследовали зависимость тяжести заболевания от уровня лимфоцитарного БТШ70 [96]. Были получены отрицательные статистически значимые корреляции между уровнем БТШ70 и тяжестью неврологического дефицита, что косвенно доказывало нейропротекторные свойства БТШ70 в клинических условиях.

Исследование уровня внутриклеточных БТШ70 моноцитов и гранулоцитов периферической крови в сравнении со степенью активности спонтанного апоптоза тех же клеток у пациентов с атеротромботическим инсультом, позволит непосредственно изучить их возможные цитопротекторные свойства.

Содержание внутриклеточного БТШ70 в гранулоцитах на 1-е (р<0,05), 7-е (р<0,05) и 14-е (р<0,005) сутки ишемического инсульта было достоверно выше, содержания БТШ70 в гранулоцитах контрольной группы. Уровень БТШ70 в моноцитах на 1-е (р<0,001) и 14-е (р<0,01) сутки заболевания был достоверно выше контрольных значений.

В динамике уровень внутриклеточного БТШ70 на моноцитах и гранулоцитах достоверно снижался к 7-м суткам заболевания (р<0,05) и достоверно повышался к 14-м (р<0,05) суткам.

Наблюдаемая динамика уровня внутриклеточного БТШ70 может быть связана с истощением его содержания в клетке вследствие реализации им определенных функций при развитии ишемического повреждения, а так же с выбросом БТШ70 во внеклеточное пространство, и последующим его ресинтезом.

Исследование взаимосвязи экспрессии БТШ70 в моноцитах и гранулоцитах пациентов с ишемическим инсультом и уровня спонтанного апоптоза в соответствующих клетках выявило, что статистически значимое снижение уровня БТШ70 (р<0,05) сопровождалось достоверным повышением процентного содержания апоптозных клеток в анализируемых образцах крови в динамике к 7-м суткам (р<0,01). Достоверное повышение уровня БТШ70 в моноцитах и гранулоцитах, происходящее на 14-ый день заболевания (р<0,01), сопровождалось достоверным снижением спонтанного апоптоза соответствующих клеток периферической крови (р<0,05).

Корреляционный анализ выявил наличие статистически значимых отрицательных корреляций между уровнем спонтанного апоптоза моноцитов и уровнем моноцитарного внутриклеточного БТШ70 на 14-е сутки заболевания (г=-0,81- р=0,02б) а также отрицательные корреляции высокой степени достоверности между уровнем спонтанного апоптоза гранулоцитов и уровнем внутриклеточного БТШ70 на 1-е (г=-0,75- р=0,012) и 7-е (г=-0,73-р=0,023) сутки заболевания.

В результате проведенного нами исследования, была выявлена обратная зависимость интенсивности спонтанного апоптоза моноцитов и гранулоцитов периферической крови у пациентов с ишемическим инсультом от уровня экспрессии этими клетками внутриклеточного БТШ70, что свидетельствует в пользу антиапоптотических свойств БТШ70 и согласуется с данными литературы.

Полученные результаты имеют большое значение для разработки новых стратегий цитопротекции — защиты головного мозга от повреждающих факторов ишемии в остром периоде ишемического инсульта.

В условиях ишемии микроглиальные клетки индуцируют синтез не только нейротоксичных веществ, но и сигнальных молекул, клеточных регуляторов, трофических факторов [42]. Вещества, обусловливающие в очаге ишемии как повреждение, так и систему поддержки жизнеспособности клеток, представлены широким спектром регуляторных пептидов, включающих цитокины [103]. В течение острой фазы инсульта повышается количество моноцитов и мононуклеарных клеткок, секретируемых ФНО-а, ИЛ12, ИЛ6 и ИЛ 10, по сравнению с их количеством у здоровых людей.

До настоящего времени остается неясным вопрос о взаимоотношении нейротоксичности и нейропротективных свойств ФНО-а. Аналогично ФНО-а, ряд работ выявили признаки разнонаправленного действия «противовоспалительного цитокина» ИЛ 10.

Эксперименты in vitro показали, что ФНО-а может способствовать регенерации поврежденных аксонов и защищает культивированные нейроны [50]. С другой стороны, имеются данные, что при внутрижелудочковом введении ФНО-а крысам с окклюзией СМА, отмечалось увеличение объема инфаркта, а при введение антител к ФНО-а наблюдался меньший очаг ишемического повреждения [38]. Дуализм в свойствах ФНО-а может быть обусловлен тем, что активация специализированного рецептора ФНО-а р55 может передавать сигналы как на апоптоз так и на выживание клетки [93].

Ряд исследований выявлили нейропротективные свойства ИЛ 10. Было показано, что при ишемическом инсульте происходит снижение уровня ИЛ 10 по сравнениюс группой контроля, а нарастание уровня ИЛ 10 в первые сутки может служить предиктором благоприятного течения и исхода заболевания [10, 134, 143, 174, 175].

С другой стороны, некоторые авторы не выявили достоверных изменений уровня ИЛ 10 в плазме крови у пациентов с ишемическим инсультом [85], а при геморрагическом инсульте уровень ИЛ 10 в сыворотке крови достоверно повышался у пациентов с неблагоприятными исходами заболевания[97].

В работе, выполненной ранее на кафедре фундаментальной и клинической неврологии, и нейрохирургии РГМУ, был выявлен дисбаланс про-и противовоспалительных цитокинов в сторону повышения уровня провоспалительных агентов по сравнению с контролем (ФНО-а 22,8±4,7 и 11±0,9 пг/млр<0,05). Было выявлено достоверное нарастание уровня ФНО-а в спинномозговой жидкости через 6−12 часов после развития ишемического повреждения [24]. Отмечлось так же повышение уровня ИЛ10 на 3-й" сутки заболевания, однако, была получена отрицательная корреляция ИЛ 10 с СРБ, что косвенно свидетельствовало о противовоспалительном характере данного цитокина.

Таким образом, несмотря на наличие множества исследований, посвященных изучению роли цитокинов в формировании ишемического повреждения головного мозга, остается неразрешенным ряд вопросов о направленности действия цитокинов, их взаимодействии друг с другом, с медиаторами апоптоза, возможных механизмах реализации вызываемых ими эффектов, что делает интересным и актуальным их дальнейшее изучение.

Исследование уровня ФНО-а у пациентов с ишемическим инсультом по сравнению с группой контроля выявило достоверное повышение уровня ФНО-а в течение всего периода наблюдения (р<0,05). При этом в динамике отмечалось достоверное нарастание уровня ФНО-а на 7-е сутки заболевания (р<0,05), по сравнению с 1-ми и 3-ми сутками.

На 3-й сутки заболевания отмечалось достоверное повышение уровня ФНО-а у тяжелых пациентов по сравнению со среднетяжелыми (р<0,01). В динамике отмечалось достоверное увеличение уровня ФНО-а у тяжелых, пациентов к 7-м суткам заболевания (р<0,05).

В результате проведенного исследования, не было выявлено достоверных корреляций уровня сывороточного ФНО-а у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом со степенью тяжести состояния, объемом очага поражения и степенью восстановления неврологических функций по шкале МШР на 14-е сутки заболевания. Однако, значимое повышение уровня сывороточного ФНО-а у пациентов основной группы по сравнению с группой контроля с 1-х суток заболевания и достоверное нарастание его к 7-м суткам за счет группы тяжелых пациентов, свидетельствуют, скорее, в пользу провоспалительного характера данного цитокина.

При проведении сравнительного анализа динамики уровня сывороточного ФНО-а, эБавЬ и степени спонтанного апоптоза моноцитов и гранулоцитов периферической крови у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультом, было выявлено, что максимальное нарастание уровня ФНО-а совпадает с максимальной концентрацией зБаэЬ в сыворотке крови и степенью спонтанного апоптоза клеток периферической крови. При этом повышение уровня ФНО-а опережает повышение сывороточного уровня ББазЬ. Это подтверждает литературные данные о том, что ФНО-а способен выступать в качестве апоптозиндуцирующего фактора при атеротромботическом ишемическом инсульте [13].

Исследование уровня ИЛ 10 у пациентов с ишемическим инсультом на 1-е, 3-й и 7-е сутки заболевания по сравнению с группой контроля выявило достоверное повышение уровня ИЛ 10 у пациентов с ишемическим инсультом на 3-й (р<0,002) и 7-е (р<0,05) сутки заболевания.

В динамике уровень ИЛ 10 достоверно повышался с 1-х по 3-й сутки (р<0,001), что соответствует данным исследований, ранее проведенных на нашей кафедре, и не зависил от степени тяжести пациентов.

При этом было выявлено 2 типа реакции ИЛ 10 на возникновение ишемического повреждения головного мозга: в первом случае значение сывороточного ИЛ 10 было на уровне контрольных цифр и достоверно от них не отличалсь, во втором отмечалось достоверное повышение уровня сывороточного ИЛ 10 по сравнению с контрольными значениями на 1-ф<0,000), 3-й (р<0,000) и 7-е (р<0,000) сутки. Высокие значения сывороточного ИЛ10 отмечались только у пациентов средней тяжести и тяжелых, и не были определены ни в одном случае у легкобольных, тогда как низкие значения ИЛ 10 встречались у пациентов независимо от степени тяжести состояния. Кроме того, у пациентов с высоким уровнем ИЛ 10 отмечалась более выраженная положительная динамика по шкале МН (р<0,0б) к 14-м суткам заболевания.

В настоящей работе при проведении сравнительного анализа сывоторочных уровней ИЛ 10 с ФНО-а и РаэЬ было выявлено однонаправленное измениение их концентрации — постепенное нарастание их сывороточного уровня от 1-х к 7-м суткам. Кроме того были установлены прямые статистически значимые корреляции между уровнем ИЛ 10 на 1-е (г=0,45- р<0,028), 3-й О''=0,43- р<0,041) и 7-е (г=0г043- р<0,046) сутки и уровнем сывороточного БрайЬ на 1-е сутки заболевания у пациентов с атеротромботическим ишемическим инсультомю.

Однако, в отличие от ФНО-а, концентрация ИЛ 10 достоверно нарастала к 3-м суткам заболевания и статистически значимо не отличалась у пациентов разной степени тяжести, и у пациентов с высокими значениями ИЛ 10 в сыворотке крови имела место более выраженная положительная динамика в неврологическом статусе к 14-м суткам заболевания.

Таким образом, результаты исследования взаимодействия прои противовоспалительных цитокинов, а также индукторов апоптоза на примере ФНО-а, ИЛ 10 и эБазЬ показали однонаправленную динамику изучаемых маркеров. При этом повышение уровня ФНО-а с 1-х суток заболевания, опрережающее нарастание уровня БравЬ, а также достоверный рост концентрации ФНО-а у тяжелобольных пациентов к 7-м суткам указывает на провоспалительную и проапоптотическую роль данного цитокина в патогенезе атеротромботического ишемического инсульта. Динамика уровня ИЛ 10 и соотношение его концентраций со степенью восстановления неврологического дефицита выявляет модуляторные функции ИЛ 10 при ишемическом процессе в головном мозге: с одной стороны, активация экспрессии ИЛ 10 в ответ на развитие фокальной ишемии, с другой стороны, активация регенераторно-репаративных процессов.

Наряду с компелесным изучением прои противовоспалительных факторов, индукторов апоптоза и анти-апоптозных систем, элементов врожденного иммунитета, был исследован уровень фермента семейства цинковых металлопротеиназ — ММП-9. ММП-9 играют центральную роль в процессах морфогенеза, ремоделирования и резорбции тканей, их функция связана с обменом соединительнотканного матрикса [25]. На культуре макрофагов, полученных из человеческих моноцитов, было показано, что разрушение фиброзной покрышки атеросклеротической бляшки связано с повышенной активностью интерстициальной коллагеназы и желатиназы [81].

При острой ишемии головного мозга продемонстрирована роль ММП в частности ММП-9, в повреждении гемато-энцефалического барьера, разрушении и перестройке нейроваскулярного матрикса, ассоциации уровня ММП-9 с риском отека мозга и геморрагической трансформации очага ишемического повреждения [74].

Имеются морфологические данные, 4 что именно в очаге ишемического повреждения головного мозга наблюдается рост концентрации ММП-9 [60]. Результаты исследований показали, что ингибирование экспрессии ММП-9 приводит к уменьшению размеров очага ишемии в головном мозге [154, 36]. Была выявлена взаимосвязь тяжести заболевания с экспрессией ММП-9 в раннем периоде ишемического инсульта у человека [99], что делает актуальным исследование ММП-9 как диагностического маркера и возможную мишень для терапевтического воздействия.

Исследование концентрации сывороточной ММП-9 в остром периоде атеротромботического ишемического инсульта выявило достоверное повышение ее значений на 1-е (р<0,01) и на 3-е (р<0,03) сутки заболевания по сравнению с группой контроля. На 1-е сутки заболевания было выявлено максимальное значение ММП-9 у пациентов основной группы, затем происходило достоверное снижение уровня к 7-м (р<0,01) суткам.

Было выявлено, что на 1-е (р<0,006) и 7-е (р<0,01) сутки заболевания концентрация ММП-9 была достоверно выше у пациентов средней тяжести и тяжелых по сравнению с пациентами с минимальным неврологическим дефицитом.

Следует отметить, что на 3-й сутки заболевания значения сывороточной ММП-9 были на одном уровне у пациентов с инсультом разной степени тяжести. Но на 7-е сутки, как и на 1-е, уровень ММП-9 вновь был достоверно выше у пациентов средней тяжести и тяжелых по сравнению с легкобольными. Возможно, это связано с вторичным повреждением вещества головного мозга вследствие развития вазогенного и цитотоксического отека или с большей активацией коллагеназ с целью резорбции некротических тканей у тяжелых и среднетяжелых пациентов.

Корреляционный анализ выявил статистически значимую прямую зависимость между уровнем ММП-9 и тяжестью состояния пациентов по шкале инсульта №Н (г=0,436- р<0,03) на 1-е сутки заболевания, что согласуется с литературными данными [99].

Показать весь текст

Список литературы

  1. Л.И., Бойкова А. А., Никифорова Д. В., Маргулис Б.А. Proceedings of the III Congress of Pharmacology Russia, Saint-Petersburg. Psychopharmacol Biol Narcol 2007- 7: 1584−1585
  2. .С. Инсульт. СПб: Медицинское информационное агентство, 1995−288
  3. Е.И., Скворцова В. И. Ишемия головного мозга.- М., 2001- 7, 164
  4. Е.И., Скворцова В. И., Киликовский В. В., Стаховская Л. В., Айриян Н. Ю. «Проблема инсульта в Российской Федерации" — Качество жизни, № 2 2006- 13:10−14
  5. Е.И., Скворцова В. И., Насонова Е.Л и др. Сосудистые заболевания головного мозга СПб, 1998: 187−198
  6. Л.В., Ерохина Л. Г., Вавилов С. Б. Рентгеновская компьютерная томография в неврологии. -М.: РГМУ, 1994- 72
  7. И.И., Константинова Н. А., Скворцова В. И., и соавт. Использование статистических методов в прогнозировании состояния больных с острой церебральной и коронарной ишемией. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2006- 142(11): 594−597
  8. Ю.Жданов Г. Н. Клиническое значение противовоспалительных цитокинов в динамике острого периода ишемического инсульта. Неврологический вестник 2006-XXXVIII (1−2): 92−93
  9. П.Журавлева Е. Ю. Роль пептидергических нейротрансмиттерных системв патогенезе и нейропротективной терапии острого ишемичского инсульта (клинико-биохимическое исследование): Дисс. канд мед наук. -М., 1998- 190
  10. Информационный бюллетень N310. ВОЗ. 2008
  11. Л.В., Хорева М.В, Варивода A.C. и соавт. Роль рецепторов врожденного иммунитета в развитии острого инфаркта миокарда. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии 2008−4: 64−68
  12. А.Н., Верещагин Н. В., Людковская И. Г. Патологическая анатомия нарушений мозгового кровообращения. М: Медгиз 1975−253
  13. B.C., Кобалава Ж. Д. Артериальная гипертония у лиц старших возрастных групп. Монография. -М.: «Медицинское информационное агентство», 2002−448
  14. О.О., Ким М.В., Гусев Н. Б. структура и свойства малых белков теплового шока. Успехи биологической химии. 2003- 43: 59−98
  15. Ю.Ф. В, Екимова И.В. Молекулярные, клеточные и системные механизмы протективной функции белка теплового шока 70кДа. Нейронауки. 2005- 2(2): 3−26
  16. Рабсон А.,. Ройт А, Делвз П. Основы мед. Иммунологии Москва Издательство мир 2006:11
  17. Г. Р. Клинические, компьютерно-томоглафические и биохимические предикторы исходов тромболитической терапии у пациентов с ишемическим инсультом. Дисс канд мед наук. М.-2009: 200
  18. В.И., Константинова H.A., Зеленкина Л. И. и соавт. Криоглобулинемия и ее коррекция при остром ишемическом инсульте. Журнал неврологии и психиатрии имени С. С. Корсакова. 2004- 10: 47−51.
  19. В.И., Мясоедов Н. Ф., Клюшник Т. П. и соавт. Изучение содержания фактора роста нервов и антител к нему у больных с острой церебральной ишемией. Современные подходы к диагностике и лечению нервных и психических заболеваний. СПб 2000- 332−333
  20. В.И., Насонов Л. Е., Журавлева Е. Ю. с соавт. Клинико-иммунобиохимический мониторинг факторов локального воспаления в остром периоде полушарного ишемического инсульта. Журнал неврологии и психиатрии имени С. С. Корсакова. 1999−5: 27−31
  21. Н.И. Матриксные металлопротеиназы и их биологические функции. Ж. Биоорганической химии. 1998- 24:217−226
  22. Хама-Мурад А. X., Мокрушин А. А., Павлинова Л. И. исследование протективных антиотечных свойств белка теплового шока 70 в модели геморрагического инсульта in vitro. Молекулярная медицина № 6 2009 46−50
  23. Е. П., Клименко М. Н. Иммунная уязвимость мозга Журнал неврологии и психиатрии им. Корсакова 2007- 1: 68−77
  24. Хельсингборгская декларация о европейских стратегиях в отношении инсульта, 2006
  25. Е.Ф. Апоптоз клеток иммунной системы и его значение в клинике. Монограф — Институт фтизиатрии и пульмонологии им. Ф.ГЛновского АМН Украины, Киев, 2006: 12
  26. О.П., Праскурничий Е. А. Распространенность инсульта в популяции. Значение артериальной гипертензии. Вторичная профилактика инсульта у больных с артериальной гипертензией. Результаты MOSES, 2005
  27. Е.В. Стеноз и тромбоз сонных артерий и нарушения мозгового кровообращения. М: Медгиз 1963- 128
  28. Adams Н, Bendixen В, Kappelle J et al. Classification of subtype of acute ischemic stroke. Definitions for use in a multicenter clinical trial. Stroke 1993−24- 1:35−40
  29. Arenas IA, Xu Y, Lopez-Jaramillo P, Davidge ST: Angiotensin Il-induced MMP-2 release from endothelial cells is mediated by TNF-a. Am J Physiol Cell Physiol 2004- 286: 779−784
  30. Armant M.A., Fenton M.J. Toll-like receptor signaling.-Natur Rev.Immunol.2004, 4:499−511
  31. Asahi M, Asahi K, Jung JC, del Zoppo GJ, Fini ME, Lo EH. Role for matrix metalloproteinase 9 after focal cerebral ischemia: effects of genenockout and enzyme inhibition with BB-94. J Cereb Blood Flow Metab. 2000- 20: 1681−1689
  32. Asea A., Kraeft S.K., Kurt-Jones E.A. et al. HSP70 stimulatescytokine production through a CD14-dependent pathway, demonstratingits dual role as a chaperone and cytokine. Nat. Med. 2000- 6: 435—442
  33. Asea A., Rehli M., Kabingu E. et al. Novel signal transductionpathway utilized by extracellular hsp70: role of toll-like receptor (TLR)2 and TLR4. J. Biol. Chem. 2002- 277:15 028—15 034
  34. Barone F.C., Feurstein G.Z. Inflammatory mediators and stroke: new opportunities for novel therapeutics. J Cereb Blood Flow Metab 1999- 19: 8: 819 834
  35. Bassan M. et al. The identification of secreted heat shock 60-like protein from rat glial cells and a human neuroblastoma cell line. Neurosci Lett. 1998- 250: 37—40
  36. Basu S., Binder R.J., Suto R. et al. Necrotic but not apoptotic cell death releases heat shock proteins, which deliver a partial maturation signal to dendritic cells and activate the NF-kappa B pathway. Int. Immunol. 2000- 12:1539—1546
  37. Benjamin I.J., McMillan D.R. Stress (Heart shock) proteins. Molecular chaperons in cardiovascular biology and disease. Circ. Res. 1998. — Vol. 83. — P. 117−132
  38. Bennemann D.E., Schultzberg M., Bartafai T., J. Neurochem 1992- 58:454−460
  39. Benveniste E.N. Inflammatory cytokines within the central nervous system: sources, function, and mechanism of action. Am J Phisiolol 1992- 236:1−16
  40. Blake MJ, Udelsman R, Feulner GJ, Norton DD, Holbrook NJ. Stress-induced heat shock protein 70 expression in adrenal cortex: an adrenocorticotropic hormone-sensitive, age-dependent response. Proc Natl Acad Sci USA. 1991- 88: 9873−9877
  41. Bonita R, Beaglehole R. Modification of Rankin Scale: Recovery of motor function after Stroke. Stroke.1988. Dec. 19 (12):1497−1500
  42. Bowman CC, Rasley A, Tranguch SL, Marriott I. Cultured astrocytes express tolllike receptors for bacterial products. Glia. 2003- 43: 281−291
  43. Brosnan C F- Cannella B- Battistini L- Raine C SCytokine localization in multiple sclerosis lesions: correlation with adhesion molecule expression and reactive nitrogen species. Neurology 1995 -45(6): 16−21
  44. Brott T.G., Adams H.P. Jr, Olinger C.P., Marler J.R., Barsan W.G., Biller J., Spilker J. Measurement of acute cerebral infarction: a clinical examination scale. Stroke. 1998−20:964−970
  45. Bruemmer-Smith S., Stuber F., Schroeder S. Protective functions of intracellular heat-shock protein (HSP) 70-expression in patients with severe sepsis. Intensive Care Med. 2001- 27:1835—1841
  46. Bruce AJ, Boling W, Kindy MS, Peschon J et al. Altered neuronal and microglial' responses to excitotoxic and ischemic brain injury in mice lacking TNF receptors. Nat. Med. 1996- 2: 788 794
  47. Campisi J., Leem T.H., Fleshner M. Acute stress decreases inflammation at the site of infection: a role for nitric oxide. Physiol. Behav.2002- 77: 291—299
  48. Campisi J., Leem T.H., Fleshner M. Stress-induced extracellular HSP72 is a functionally significant danger signal to the immune system // Cell Stress Chaperones. 2003−8: 272—286
  49. Campisi J., Leem T.H., Greenwood B.N. et al. Habitual physicalactivity facilitates stress-induced intracellular HSP72 induction inbrain, peripheral and immune tissues in rats. Am. J. Physiol. 2003- 94:43—52
  50. Carpentier P.A., Duncan D.S., Miller S.D. Glial Toll-like Receptor Signaling in Central Nervous System Infection and Autoimmunity. Brain Behav Immun. 2008- 22(2): 140−147.
  51. Caso J. R, Jesus M. P, Olivia H et al. Toll-Like Receptor 4 Is Involved in Subacute Stress-Induced Neuroinflammation and in the Worsening of Experimental Stroke Javier
  52. Caso J.R., Pradillo J.M., Hurtado O. et al. Toll-like receptor 4 is involved in brain damage and inflammation after experimental stroke. Circulation 2007- 115: 15 991 608
  53. Choi C., Benveniste E. Fas ligand/Fas system in the brain: regulator of immune and apoptotic responses. Brain Res Rev 2004- 44: 1: 65−81
  54. Clark AW, Krekoski CA, Bou SS, Chapman KR, Edwards DR. Increased gelatinase A (MMP-2) and gelatinase B (MMP-9) activities in human brain after focal ischemia. Neurosci Lett. 1997- 238: 53−56
  55. Cornelisse R.F., Savelcoul H.F., Mulder P.H. et al. J Infect Dis 1996- 173(6):1498−1502
  56. Corradin S.B., Nicolas F., Yolande B. et al. Induction of macrophage nitric oxide production by interferon-T and tumor necrosis factor- Gt is enhanced by interleukin-10. Eur J Immunol 1993- 23(8):2045−2048
  57. Csermely P, Schnaider T, Soti C, Prohaszka Z, Nardai G. The 90-kDa molecular chaperone family: structure, function, and clinical applications. A comprehensive review. Pharmacol Ther. 1998 Aug-79(2): 129−168
  58. Cummings CJ, Sun Y, Opal P, Antalffy B, Mestril R. et al. Over-expression of inducible HSP70 chaperone suppresses neuropathology and improves motor function in SCA1 mice. Human Molecular Genetics 2001- 10(14): 1511−1518
  59. Dybdahl B, Wahba A, Lien E et al. Inflammatory response after open heart surgery: release of heat-shock protein 70 and signaling through toll-like receptor-4. Circulation. 2002 Feb 12−105(6):685−90
  60. Elneihoum A.M., Falke P., Axelsson L., Lundberg E., Lindgrade F., Ohlsson K. Leukocyte activation detected by increased plasma levels of inflammatory mediators in patients with ischemic cerebrovascular diseases. Stroke. 1996−27:1734−1738
  61. Ensor J.E., Wiener S.M., McCrea K.A. et al. Differential effect of hyperthermia on macrophage interleukin-6 and tumor necrosis factor- a expression. Am. J. Physiol. Cell Physiol 1994- 266:967—974
  62. Erickson B., Sperber K., Frishman W.H. Toll-like receptors. New Therapeutic targets for the treatment of Atherosclerosis, Acute Coronary Syndromes, and Myocardial Failure. Cardiol Rev 2008- 16(6): 273−279
  63. Fang H., Ko W., Lin C. Inducible heat shock protein 70, interleukin-18, and tumor necrosis factor alpha con-elate with outcomes in spontaneous intracerebralhemorrhage J of Clinical Neuroscience2007: 14(5) — 435−441
  64. Feuerstein G. Z., Liu T., Barone F.C. Cytokines, inflammation and brain injury: the role of tumor necrosis factor a Brain Metab Rev 1994- 6: 341−360
  65. Fleshner M., Campisi J., Amiric L. et al. Cat exposure inducesboth intra- and extracellular Hsp72: the role of adrenal hormones. Psychoneuroendocrin. 2004- 29:1142—1152
  66. Frantz S., Kobzik L., Kim Y.D. et al. Toll4 (TLR4) expression in cardiac myocytes in normal and failing myocardium. J Clin Invest 1999- 104: 271−280
  67. Fujimura M., Gasche Y, Morita-Fujimura Y, Massengale J, Kawase M, Chan PH. Early appearance of activated matrix metalloproteinase-9 and blood-brain barrier disruption in mice after focal cerebral ischemia and reperfusion. Brain Res. 1999- 842: 92−100
  68. Fuster V., Badimon J J., Cheserbo J.N. Atherotrombosis mechanisms and clinical therapeutic approaches. Vosc Med, 1998- 3: 231−23
  69. Fuster V. Epidemic of cardiovascular disease and stroke: the three main challenges. Presented at the 71 scientific sessions of the American heart Association. Dallas, Texas. Circulation 1999- 99: 1132−1137
  70. Ganten D, Lang RE, Lehmann E, Unger T: Brain angiotensin: on the way to becoming a well-studied neuropeptide system. Biochem Pharmacol 1984- 33: 3523−3528
  71. Geetanjali B, Uma S, Bansal MP. Changes in heat shock protein 70 localization and its content in rabbit aorta at various stages of experimental atherosclerosis. Cardiovasc Pathol. 2002- 11(2):97−103
  72. Giffard R.G., Xu L., Zhao H. et al. Chaperones, protein aggregation, and brain protection from hypoxic/ischemic injury. J. Exper.Biol. 2004−207: 3213—3220
  73. Giffard R.G., Yenari M.A. Many mechanisms for hsp70 protectionfrom cerebral ischemia. J. Neurosurg. Anesthesiol. 2004- 16:53—61
  74. Gladov S., Zarins C., Giddens D.P. et al. Hemodynamics and atherosclerosis. Insight and perspectives gained from studies of human arteries. Arch Pathol Lab Med. 1988- 112: 1018−1031.
  75. Gupta M, Vavasis C, Frishman WH. Heat shock proteins in cardiovascular disease a new therapeutic target. Cardiol Rev. 2004 Jan-Feb-12(l):26−30
  76. Ha T, Sunamoto M, Kitazaki T, et al. Therapeutic effects of TAK-242, a novel selective toll-like receptor 4 signal transduction inhibitor, in mouse endotoxin shock. Eur J Pharmacol. 2007−571:231−239
  77. Hashimoto C., Hudson K.L., Anderson K.V. the Toll gene of Drosophila, required for dorsal-ventral embryonic polarity, appears to encode a transmembrane protein. Cell. 1988, 52:269−279
  78. Hedley C.A., Craig J.S., Carole M.G. et al. Clinical outcome following acute ischemic stroke relates to both activation and autoregulatory inhibition of cytokine production. BMC Neurology 2007
  79. M., Gozdz A., 2004. Role of extracellular signal regulated kinases 1 and 2 in neuronal survival. Eur J Biochem. 271, 2050−2055
  80. Hidekazu T., Shinji T., Denan J. Inhibition of Matrix Metalloproteinase-9. Activity by Trandolapril after Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats Hypertens Res. 2007- 30(5):469−475
  81. Hightower L.E., Guidon P.T. Selective release from cultured mammalian cells of heat-shock (stress) proteins that resemble glia-axon transfer proteins. J. Cell Physiol 1989−138: 257—266
  82. Holloway J.W., Yang I.A., Ye S. Variation in the toll-like receptor 4 gene and susceptibility to myocardial infarction. Pharmacogenet Genomics. 2005−15:15−21
  83. Howard G., Howard VJ. Stroke incidence, mortality, and prevalence/The prevention of stroke/edited by Philip B. Gorelick and Milton Alter. The Parthenon Publishing Group 2002- 1:1−10
  84. V.J. Howard G., «Nonmodifiable» risk factors for stroke: age, race, sex, and geography/The prevention of stroke/edited by Philip B. Gorelick and Milton Alter. The Parthenon Publishing Group, 2002- (2): 11−20
  85. Hua F., Ma J., Ha T., Jim L. K. et al. Differential roles of TLR2 and TLR4 in acute focal cerebral ischemia/reperfusion injury in mice. Brainresearch 2009- 1262:100−108
  86. Hsu H, Shu HB, Pan MG, Goeddel DV. TRADD-TRAF2 and TRADD-FADD interactions define two distinct TNF receptor 1 signal transduction pathways. Cell. 1996 Jan 26−84(2):299−308
  87. Hunter-Lavin C., Davies C., Bacelar E.L. et al. Hsp70 release from peripheral blood mononuclear cells. Biochemical and biophysical research communications 2004- 324: 511−517
  88. Jack CS, Arbour N, Manusow J, Montgrain V, Blain M, McCrea E, Shapiro A, Antel JP. TLR signaling tailors innate immune responses in human microglia and astrocytes. J Immunol. 2005 Oct l-175(7):4320−30
  89. Jin X., Xiao C., Tanguay R. M. Correlation of Lymphocyte Heat Shock Protein 70 Levels with Neurologic Deficits in Elderly Patients with Cerebral Infarction. THE AMERICAN JOURNAL OF MEDICINE 2004- 117:406−411
  90. Jun O., Atsuhiko S., — Daisuke I. et al. Plazma proinflammatory and antiinflammatory cytokine and catecholamine concentrations as predictor of neurolodical outcome in acute stroke patient. J Anesth 2008- 22:207−212
  91. Kakimura J., Kitamura Y., Takata K. et al. Microglial activation and amyloidclearance induced by exogenous heat-shock proteins. FASEB J. 2002- 16: 601—603
  92. Kelli P.G., Moitov J.D., Ning M.M. Oxidant stress and MMP-9 in acute ischemic stroke. Stroke 2008−3: 24−26
  93. Kiechl S., Reindl M., Wiedermann C.J. et al. Toll-like receptor 4 polymorphisms and atherogenesis. N Engl J Med 2002- 347: 185−192
  94. Kim BS, Lim SW, Li C et al Ischemia-reperfusion injury activates innate immunity in rat kidneys. Transplantation. 2005 May 27−79(10):1370−7
  95. Kocsis J, Veres A, Vatay A, Duba J, Karadi I, Fust G, Prohaszka Z. Antibodies against the human heat shock protein hsp70 in patients with severe coronary artery disease. Immunol Invest. 2002 Aug-Nov-31(3−4):219−31
  96. Kreutzberg G. W. Microglia: A sensor for pathological events in the CNS Trands Neurosi 1996−19(8):312−318
  97. Lafon M., Megret F., Lafage M. The innate immune facet of brain Journal of Molecular Neuroscience 2006- 29(3): 185−194
  98. Lamb DJ, El-Sankary W, Ferns GA. Molecular mimicry in atherosclerosis: a role for heat shock proteins in immunisation. Atherosclerosis. 2003 Apr- 167(2): 177−85
  99. Lavine SD, Hofman FM, Zlokovic BV. Circulating antibody against tumor necrosis factor-alpha protects rat brain from reperfusion injury. J Cereb Blood Flow Metab. 1998 Jan-18(l):52−8
  100. Lee Z.H., Kim M., Yoon B. et al. Targeted hsp70.1 Disruption Increases Infarction Volume After Focal Cerebral Ischemia in Mice. Stroke. 2001−32:2905−2912
  101. Lehnardt S., Massillon L., Follett P., Jensen F.E. et al. Activation of innate immunity in the CNS triggers neurodegeneration through a Toll-like receptor 4-dependent pathway. 216−227
  102. Lewthwaite J., Owen N., Coates A. et al. Circulating human heat shock protein 60 in the plasma of British civil servants: relationship to physiological and psychosocial stress. Circulation. 2002- 106: 196−201
  103. Li L. Regulation of innate immunity signaling and its connection with human diseases. Current drag target-Inflammation and Allergy. 2004, 3:394−397
  104. Lin Y.C., Chang Y.M., Yu J. M et al. Toll-like receptor 4 gene CI 19A but not Asp299Gly polymorphism is associated with ischemic stroke among ethnic Chinese in Taiwan. Atherosclerosis. 2005−180(2):305−9
  105. Lindquist S. The heat-shock response. Ann. Rev. Biochem. 1986- 55: 1151— 1191
  106. Lindquist S., Craig E.A. Genetic evidence for a functional relationship between' Hspl04 and Hsp70. Annu. Rev. Genet., 1988: 22, 631−677
  107. Lindquist S., Kim G. Heat-shock protein 104 expression is sufficient for thermotolerance in yeast. Proc Natl Acad Sei USA. 1996−93(11):5301−5306
  108. Liu L., Kim Y.- Koike M. A. et al. FasL shedding is reduced by hypothermia in experimental stroke. Journal ofNeurochemistry, 2008- 106:541−550
  109. Liu T., Clerk R.R., Pantoni L., Sarti K., Lintary D. Arterioscler Thromb Vase Biol 1998- 18:530−513
  110. Lynn M., Rossignol D.P., Wheeler J.L. et al. Blocking of responses to endotoxin by E5564 in healthy volunteers with experimental endotoxemia. J Infect Dis. 2003−187:631−639
  111. Ma Y., Li J., Chiu I., Toll-like receptor 8 functions as a negative regulator of neurite outgrowth and inducer of neuronal apoptosis. J Cell Biol 2006−175:209−215
  112. Mabuchi T., Kitagawa K., Ohtsuki T., et a/: Contribution of microglia/macrophages to expansion of infarction and response of oligodendrocytes after focal cerebral ischemia in rats. Stroke 2000- 31: 1735−1743
  113. Marino, M. W., A. Dunn, D. Grail, M. Inglese, Y. Noguchi, E. Richards, A. Jungbluth, H. Wada, M. Moore, B. Williamson, S. Basu, and L. Old. Characterization of tumor necrosis factor-deficient mice. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 1997- 94: 8093−8098
  114. Martin-Ventura J.L., Blanco-Colio L.M., Munoz-Garcia B., Gomez-Hernandez A. et al. NF-kB Activation and Fas Ligand Overexpression in Blood and Plaques of Patients With Carotid Atherosclerosis Stroke. 2004−35:458−463
  115. Martin-Villalba A., Hahne M., Kleber S. et al. Therapeutic neutralization of CD95-ligand and TNF attenuates brain damage in stroke. Cell Death. Differ. 2001−8:679−68
  116. Massa S.M., Swanson R.A. Shaip F.R. The stress gene responsein brain. Cerebrovasc. BrainMetab. Rev. l996−8: 95—158
  117. Medzhitov R. Toll-like receptors and innate immunity. Nat Rev Immunol. 2001−1:135−145
  118. Medzhitov R., Janeway C. Innate immunity. The New England Journal of Medicine 2000- 8: 338−344
  119. Medzhitov R, Preston-Hurlburt P., Janeway C.A. A human homologue of the Drosophila Toll protein signals activation of adaptive immunity. Nature 1997−388: 394−397
  120. Mehmet H. Stroke treatment enters the Fas lane. Cell Death and Differentiation. 2001- 8(7): 659−661
  121. Methe H., Kim J.O., Kofler S., et al. Statins decrease toll-like receptor 4 expression and downstream signaling in human CD 14+ monocytes. Arterioscler Thromb Vase Biol. 2005−25:1439−1445
  122. Metzler B., Abia R., Ahmad M., Wernig F. et al. Activation of heat shock transcription factor 1 in atherosclerosis. Am J Pathol. 2003 May- 162(5): 1669−76
  123. Michelsen K.S., Wong M.H., Shah P.K. et al. Lack of toll-like receptor 4 or myeloid differentiation factor 88 reduces atherosclerosis and alters plaque phenotype in mice deficient in apolipoprotein E. Proc Natl Acad Sci USA. 2007−101:10 679−10 684
  124. Morimoto R.I., Tissieres A. and Georgopoulos C. ColdSpring Harbor Laboratory Press, 1994. — P. 457—494.
  125. Nakajima H., Yanase N., Oshima K. et al. Enhanced expression of the apoptosis inducing ligand TRAIL in mononuclear cells after myocardial infarction. Jpn Heart J 2003- 44: 833−844.
  126. Nawashiro H., Tasaki K., Ruetzler C.A. TNF-alpha pretreatment induces protective effects against focal cerebral ischemia in mice.J. Cereb. Blood Flow Metab. 1997- 17: 483−490
  127. Nayak A .R., Kashyap R.S., Purohit H.J. et al. Evaluation of the inflammatory response in sera from acute ischemic stroke patient of IL-2 and IE-10. Inflamm Res, 2009- 58(10): 687−91
  128. Netzer W.J., Hartl F.U. Protein folding in the cytosol: chaperonin-dependent and -independent mechanisms. Trends Biochem Sci. 1998 Feb-23(2):68−73
  129. Nguyen M.D., Julien J.P., Rivest S. Innate immunity: the missing link in neuroprotection and neurodegeneration? Nat Rev Nenrosci. 2002- 3
  130. Ohashi K., Burkart V., Flohe S, Kolb H. Cutting edge: heat shock protein 60 is a putative endogenous ligand of the toll-like receptor-4 complex. J Immunol. 2000- 164: 558−561
  131. Ojaniemi M., Glumoff, V., Harju, K et al. Phosphatidylinositol 3-kinase is involved in Toll-like receptor 4-mediated cytokine expression in mouse macrophages. Eur. J. Immunol. 2003−33: 597−605
  132. Okamoto K., Takai S., Sasaki S., Miyazaki M: Trandolaprilreduces infarction area after middle cerebral artery occlusionin rats. Hypertens Res 2002- 25: 583 588
  133. Parsell D.A., Kowal A.S., Lindquist S. S. cerevisiae Hspl04 protein. Purification and characterization of ATP-induced structural changes. J. Biol. Chem. 1994−269: 4480−4487
  134. Parsell D.A., Lindquist S. The function of heat-shock proteins in stress tolerance: degradation and reactivation of damaged proteins. Ann Rev Genet 1993- 27: 437−496
  135. Perini F, Morra M, Alecci M et al. Temporal profile of serum antiinflammatory and proinflammatory interleukins in acute ischemic stroke. Neurol Sci 2001−111:360−365
  136. Pockley A.G. Heat shock proteins in health and disease: therapeutic targets or therapeutic agents? Exp. Rev. Mol. Med.2001- 1—21
  137. Pockley AG, Georgiades A, Thulin T et al. Serum heat hock shock protein 70 predict the development of atheroclerosis in subjects with established hypertension. Hypertenion.2003 -42:235−23 8
  138. Ponferrada A, Caso JR, Alou L et al. The role of PPARy on restoration of colonic homeostasis after experimental stress-induced inflammation and dysfunction. Gastroenterology. 2007- 132: 1791—1803
  139. Prohaszka Z., Singh M., Nagy K. et al. Heat shock protein 70 kDa is a potentjactivator of the human complement system. Cell Stress Chaperones. 2002−7: 17— 22
  140. Pulsinelli W.A. Krage R.P. Hyperglyc, cerebral acidosis and istcemic brain damage emiaAm Sci Med 1995- 2:16−25
  141. Qing W., Xian N., Midori A. Yenari, The inflammatory response in stroke. J Neuroimmunol. 2007- 184(1−2): 53−68
  142. Riad A., Jager S., Sobirey M. et al. Toll-like receptor-4 modulates survival by induction of left ventricular remodeling after myocardial infarction in mice. J Immunol 2008- 180: 6954−6961
  143. Ridker P.M., Rifai N., Pfefer M.A. et al. Inflammation, pravastatin and risk of coronary events after myocardial infarction in patients with average cholesterol level. Circulation 1998- 98: 839−844
  144. Romanic A.M., White R.F., Arleth A.J., Ohlstein EH, Barone FC: Matrix metalloproteinase expression increases after cerebral focal ischemia in rats: inhibition of matrix metallo-proteinase-9 reduces infarct size. Stroke 1998- 29: 1020−1030
  145. Rosel A., Arantxa O., Israel F., Marc R., Carlos A. Molina. Increased Brain Expression of Matrix Metalloproteinase-9 After Ischemic and Hemorrhagic. Stroke. 2006- 37:1399−1406
  146. Rouet-Benzineb P, Gontero B, Dreyfus P, Lafuma C: Angiotensin II induces nuclear factor-a activation in cultured neonatal rat cardiomyocytes through protein kinase С signaling pathway. J Mol Cell Cardiol 2000- 32: 1767- 1778
  147. Rouvier E.- Luciani M. F.- Golstein P. Fas involvement in Ca (2+)-independent T cell-mediated cytotoxicity. The Journal of experimentalmedicine. 1993−177(l):195−200
  148. Saito K., Suyama K., Nishida K., Sei Y., Basile A.S. Early increases in TNF-a, IL-6 and IL-ip levels following transient cerebral ischemia in gerbil brain. Neurosci Lett 1996- 206: 149−152
  149. Sandor F., Buc.M. Toll-like receptors. I. Structure, function and their ligands. Folia Biologica (Praha) 2005- 51:148−156
  150. Schoneveld A.H., Hoefer I., Sluijter J.P. et al. Atherosclerotic lesion development and Toll like receptor 2 stimulation induces intimal hyperplasia and atherosclerotic lesion development. Cardiovasc Res 2005- 66(1): 162−169
  151. Shi Y., Mosser D.D., Morimoto R.I. Molecular chaperones as HSF1-specific transcriptional repressor. Genes Devel. l998−12: 654—666
  152. Shishido T., Nozaki N., Yamaguchi S. et al. Toll-like receptor-2 modulates ventricular remodeling after myocardial infarction. Circulation 2003- 108: 29 052 910
  153. Sorbi D., Fadly M., Hicks R., Alexander S., Arbeit L: Captopril inhibits the 72 kDa and 92 kDa matrix metalloproteinases. Kidney Int 1993- 44: 1266−1272
  154. Suda T., Nagata S. Purification and characterization of the Fas-ligand that induces apoptosis. J. Exptl Medl 1994- 179: 873
  155. Takeda K., Akira S. Toll-like receptors in innate immunity. International Immunology. 2005- 17 (1): 1−14
  156. Takeda K., Kaisho T., Akira S. Toll-like receptors. Annu.Rev.Immunol. 2003- 21: 335−376
  157. Tang S.C., Arumugam T.V., Xu X., Cheng A. et al. Pivotal role for neuronal Toll-like receptors in ischemic brain injury and functional deficits. Proc Natl Acad Sci USA. 2007 August 21- 104(34): 13 7 98−13 8 03
  158. Thorsten R.D., Florian N., Gunnar P.H. et al. TAT-Hsp70-mediated neuroprotection and increased survival of neuronal precursor cells after focal cerebral ischemia in mice Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 2009- 29:1187−1196
  159. Tissieres A., Mitchell H.K., Tracy U.M. Protein synthesis in salivary glands of Drosophila melanogaster. J. Mol. Biol. 1974- 84: 389—398
  160. Tsan M, Gao B. Endogenous ligands of Toll-like receptors. J. Leukos. Biol.2004,76: 1−6
  161. Tytell M., Greenberg S.G., Lasek R.J. Heat shock-like protein is transferred from glia to axon. Brain Res. 1986−363:161—164
  162. Van Exel E, Gussekloo J, de Craen A. et al. Inflammation and stroke: the Leiden 85-Plus Study. Stroke. 2002- 33: 1135−1138
  163. Vanags D., Williams B., Johnson B. et al. Therapeutic efficacy and safety of chaperonin 10 in patients with rheumatoid arthritis: a double-blind randomised trial. Lancet. 2006−368:855−863
  164. Yanja B. K., Simundic A.M., Nikolac N. et al. Pro-inflammatory and antiinflammatory cytokines in acute ischemic stroke and their relation to early neurological deficit and stroke outcome. Clinical Biochem 2008- 41: 1330−1334
  165. Vila N., Castillo J., Davalos A. et al Levels of Anti-Inflammatory Cytokines and Neurological Worsening in Acute Ischemic Stroke. Stroke 2003−34:671−675
  166. Vogt M, Bauer MK, Ferrari D, Schulze-Osthoff K. Oxidative stress and hypoxia/reoxygenation trigger CD95 (APO-l/Fas) ligand expression in microglial cells. FEBS Lett. 1998−429(l):67−72
  167. Welch WJ. How cells respond to stress. Sci Am. 1993 May-268(5):56−64
  168. Welsh F.A., Moyer D.J., Harris V. A1. Regional expression of heat shock protein-70 mRNA and c-fos mRNA following focal ischemia in rat brain. J. Cereb. Blood Flow Metab. 1992- 12:204—212
  169. Wilde GJ, Pringle AK, Sundstrom LE et al. Attenuation and augmentation of ischaemia-related neuronal death by tumour necrosis factor-alpha in vitro.Eur. J. Neurosci. 12
  170. Xia Y., Yamagata K., Teresa L. Krukoff Differential expression of the CD14/TLR4 complex and inflammatory signaling molecules following i.e.v. administration of LPS. Brain Research 2006- 1095(1): 85−95
  171. Yanamoto H, Hong SC, Soleau S, Kassell NF, Lee KS. Mild* postischemic hypothermia limits cerebral injury following transient focal ischemia in rat neocortex. Brain Res. 1996- 718: 207−211
  172. Yoon S. S, Zheng Z.-J. Elevated total white blood cell count with high blood glucose is associated with poor outcome after ischemic stroke J. Stroke and Cerebrovasc. Diseasess 2005- (14) 2: 88−93
  173. Yosuke W., Katsuya U., Tokio S., Kazuro T. Heat Shock Protein 70 mRNA Levels in Mononuclear Blood Cells from Patients with Dementia of the Alzheimer Type. Dementia 1995−6:301−305
  174. Zheng Z., Qiao Y., Dunphy N, Ma J. et al. HSP70 protects against experimental stroke through the inhibition of postischemic inflammatory reaction. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism 2005- 25:96
  175. Zhu W.M., Roma P., Pirillo A., Pellegatta F., Catapano A.L. Oxidized LDL induce hsp70 expression in human smooth muscle cells. FEBS Lett. 1995 Sep 18−372(l):l-5
  176. Zou J., Salminen W.F., Roberts S.M., Voellmy R. Correlation between glutathione oxidation and trimerization of heat shock factor 1, an early step in stress induction of the Hsp response. Cell Stress Chaperones. 1998- 3: 130— 141
  177. Zuany-Amorim C, Hastewell J, Walker C. Toll-like receptors as potential therapeutic targets for multiple diseases. Nat Rev Drug Discov. 2002- 1: 797−807
Заполнить форму текущей работой