Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Рекомбинантные полипептиды для терапии глазных заболеваний, сопровождающихся патологическим ангиогенезом

Диссертация: Рекомбинантные полипептиды для терапии глазных заболеваний, сопровождающихся патологическим ангиогенезом
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Не до конца изучены также последствия полного ингибирования всех изоформ УЕОБ, которое необходимо для достижения максимального эффекта от препаратов-блокаторов УЕОБ. Находится всё больше подтверждений тому, что УЕвЕ необходим для выживания фоторецепторных и Мюллеровских клеток, и системная нейтрализация этого ростового фактора может приводить к снижению функций сетчатки. Созданные нами… Читать ещё >

Рекомбинантные полипептиды для терапии глазных заболеваний, сопровождающихся патологическим ангиогенезом (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • Глава 1. Препараты на основе эндогенных ингибиторов ангиогенеза как альтернатива анти-УЕвР-направленной терапии неоваскулярных глазных заболеваний
    • 1. 1. Основные этапы развития ангиогенеза
    • 1. 2. AHTH-VEGF-направленная терапия
      • 1. 2. 1. VEGF как терапевтическая мишень
      • 1. 2. 2. Офтальмологические препараты, блокирующие действие VEGF
      • 1. 2. 3. Ограничения и побочные эффекты при терапии блокаторами VEGF
    • 1. 3. Эндогенные ингибиторы ангиогенеза и их терапевтический потенциал в офтальмологии
      • 1. 3. 1. Тромбоспондин
      • 1. 3. 2. Фактор дифференцировки пигментного эпителия (Pigment epithelium-derived factor, PEDF)
      • 1. 3. 3. Фрагменты коллагена IV — аррестен, канстатин, тумстатин
      • 1. 3. 4. Фрагмент коллагена XVIII — эндостатин
  • Глава 2. Материалы и методы
    • 2. 1. Реактивы
    • 2. 2. Ферменты
    • 2. 3. Штаммы и клеточные линии
    • 2. 4. Плазмидные вектора
    • 2. 5. Лабораторное оборудование
    • 2. 6. Растворы
    • 2. 7. Методы
  • Глава 3. Получение и свойства рекомбинантных полипептидных препаратов на основе эндогенных ингибиторов ангиогенеза
    • 3. 1. Получение рекомбинантного фрагмента тумстатина (L69K-95)
    • 3. 2. Получение рекомбинантного фрагмента PEDF (44−77)
    • 3. 3. Получение рекомбинантного фрагмента эндостатина (1−49)
    • 3. 4. Оценка биологической активности рекомбинантных антиангиогенных пептидов in vitro
    • 3. 5. Биологическая активность рекомбинантных антиангиогенных пептидов in vivo
      • 3. 5. 1. Оценка антиангиогенной активности пептидов на модели неоваскуляризации роговицы кролика
      • 3. 5. 2. Оценка аваскулогенной активности пептидов на модели щелочного ожога роговицы
  • Выводы

Неоваскуляризация является основной причиной снижения зрительных функций при возрастной макулярной дегенерации (ВМД), пролиферативной диабетической ретинопатии (ПДР), ретинопатии недоношенных, хронической хориоидальной неоваскуляризации при близорукости и др. Распространенность этих заболеваний неуклонно прогрессирует. По данным ВОЗ за 2008 г только количество заболевших ВМД превысило 8 млн. человек. Антиангиогенная терапия этих заболеваний признана перспективным методом лечения. Современная стратегия антиангиогенной терапии в офтальмологии основана на применении препарата (Луцентис), ингибирующего действие сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF), ключевого фактора неоангиогенеза. Узкая направленность ингибиторов VEGF и наличие обходных путей ангиогенеза с участием других проангиогенных молекул объясняют их неполноценный и непродолжительный клинический эффект. В этом аспекте представляет научный и практический интерес исследование природных биологически активных белков и их фрагментов, обладающих ангиостатическими свойствами, избирательно проявляющимися на разных этапах ангиогенеза, слабой иммуногенностью и токсичностью с целью создания на их основе инновационных лекарственных препаратов офтальмологического назначения.

Цель настоящего исследования: получение рекомбинантных аналогов функциональных фрагментов природных ингибиторов ангиогенеза, изучение их способности блокировать различные этапы ангиогенеза и исследование биологической активности полученных полипептидов ш vivo на моделях заболеваний глаз, сопровождающихся патологическим ангиогенезом.

Для создания рекомбинантных полипептидов были выбраны биологически активные фрагменты трёх эндогенных ингибиторов ангиогенеза: фактора дифференцировки пигментного эпителия (PEDF), тумстатина и эндостатина.

Основными задачами работы являлись:

1. Создание эффективных штаммов-продуцентов гибридных белков, содержащих фрагменты PEDF (44−77), тумстатина (L69K-95) и эндостатина (1−49);

2. Разработка эффективных схем выделения и очистки полипептидов, представляющих собой рекомбинантные аналоги фрагментов PEDF (44−77), тумстатина (69−95) и эндостатина (1−49);

3. Изучение биологических свойств полученных полипептидов на моделях различных этапов развития неоангиогенеза in vitro;

4. Исследование in vivo биологической активности пептидов на экспериментальных моделях неоваскуляризации роговицы.

В результате выполнения работы были разработаны новые эффективные способы получения рекомбинантных аналогов фрагментов эндогенных ингибиторов ангиогенеза (PEDF (44−77) тумстатина (69−95) и эндостатина (1−49)). Впервые исследована антиангиогенная активность фрагмента эндостатина (1−49) на моделях неоангиогенеза in vitro. Впервые исследована биологическая активность фрагментов тумстатина (L69K-95) и эндостатина (1−49) на экспериментальной модели патологической неоваскуляризации роговицы.

Предложен метод выделения целевых полипептидов, позволяющий исключить стадию ферментативного расщепления гибридного белка за счет использования мини-интеина в качестве белка-носителя, и таким образом снизить себестоимость получения полипептидов. Дана количественная оценка антиангиогенной активности рекомбинантных аналогов PEDF (44−77), тумстатина (L69K-95) и эндостатина (1−49). Экспериментально подобраны предполагаемые терапевтические дозы рекомбинантных полипептидов PEDF (44−77), эндостатина (1−49) и тумстатина (L69K-95).

Таким образом, полученные рекомбинантные аналоги фрагментов PEDF (44−77), тумстатина (69−95) и эндостатина (1−49) обладают антиангиогенной активностью на различных этапах неоангиогенеза: подавляют пролиферацию эндотелиальных клеток и образование трубочко-подобных структур in vitro и препятствуют развитию патологической неоваскуляризации in vivo.

Выводы:

1. Получены рекомбинантные аналоги функциональных фрагментов природных ингибиторов ангиогенеза, подавляющие различные этапы неоангиогенеза.

2. Получены высокоэффективные штаммы-продуценты, обеспечивающие суперэкспрессию (свыше 35% от суммарного белка клетки) гибридных белков, содержащих в своём составе фрагменты тумстатина, PEDF и эндостатина.

4. Разработаны эффективные схемы выделения и очистки рекомбинантных аналогов фрагментов тумстатина (L69K-95), PEDF (44−77), эндостатина (1−49). Получены целевые полипептиды чистотой более 99% для биологических испытаний. Применение интеиновой системы для биотехнологического синтеза PEDF (44−77) и эндостатина (1−49) позволило исключить стадии хроматографической очистки и энзиматического расщепления гибридного белка.

5. Продемонстрирована антиангиогенная активность фрагмента тумстатина (L69K-95), фрагмента PEDF (44−77) и фрагмента эндостатина (149) на разных этапах развития ангиогенеза на моделях in vitro: PEDF (44−77) оказывал цитостатический и антипролиферативный эффект на эндотелиальные клетки, тумстатин (L69K-95) подавлял пролиферацию, все три пептида ингибировали образование трубочко-подобных структур в пределах изученных концентраций (0,1 — 20 нМ).

6. Продемонстрирована in vivo эффективность аналогов тумстатина (L69K -95), PEDF (44−77) и эндостатина (1−49) в терапии заболеваний глаз, сопровождающихся ангиогенезом (на экспериментальной модели неоваскуляризации роговицы). При одновременном введении с индукторами ангиогенеза каждый из пептидов блокировал врастание сосудов (ранние этапы ангиогенеза). Рекомбинантный аналог тумстатина (L69K-95) продемонстрировал способность резорбировать новообразованные сосуды (поздние этапы ангиогенеза).

Заключение

.

По мере накопления данных по применению в клинической практике препаратов для подавления ангиогенеза (Луцентис) выявляются категории пациентов, для которых анти-УЕОР направленная терапия слабоэффективна или неэффективна [205]. Более того, ряд исследований подтверждает снижение лечебного эффекта от таких препаратов при повторных инъекциях.

В среднем, после пяти инъекций Луцентиса наблюдается значительное снижение лечебного эффекта [206]. Для таких пациентов необходимы альтернативные терапевтические стратегии, подавляющие ангиогенез с.

80 использованием УБвР-независимых механизмов. Существует гипотеза, согласно которой сочетанное действие таких препаратов с ингибиторами УЕОБ будет наиболее эффективно [207].

Рекомбинантные полипептиды, созданные на основе структур эндогенных ингибиторов ангиогенеза, могут стать альтернативой или дополнением к современной анти-УЕвЕ-направленной терапии. К преимуществам разработанных нами полипептидов можно отнести способность воздействовать одновременно на несколько компонентов патологического процесса: помимо антиангиогенного действия препараты обладали явным противовоспалительным эффектом. Кроме того, рекомбинантный фрагмент тумстатина был эффективен на стадиях созревания и стабилизации сосудов, что свидетельствует о УЕОЕ-независимом механизме его действия. Важно также отметить, что рекомбинантные препараты действовали в очень небольших дозах — менее 1 мкг. Для сравнения, доза Луцентиса составляет 0,3 мг. Низкие действующие концентрации препаратов предполагают минимальные системные побочные эффекты от их применения, а также существенно снижают стоимость терапии.

Не до конца изучены также последствия полного ингибирования всех изоформ УЕОБ, которое необходимо для достижения максимального эффекта от препаратов-блокаторов УЕОБ. Находится всё больше подтверждений тому, что УЕвЕ необходим для выживания фоторецепторных и Мюллеровских клеток, и системная нейтрализация этого ростового фактора может приводить к снижению функций сетчатки [208, 209]. Созданные нами рекомбинантные полипептиды несут в себе структуру фрагментов природных молекул-ингибиторов ангиогенеза, присутствующих в норме в организме человека. Более того, дозы рекомбинантных препаратов, показавшие эффективные результаты, близки к физиологическим.

81 концентрациям эндогенных ингибиторов. В этой связи можно предположить минимальные побочные эффекты таких препаратов на ткани глаза.

Ещё одним достоинством разработанных рекомбинантных полипептидов является их сравнительно небольшой молекулярный вес (около 4−5 кДа, что приблизительно в 10 раз меньше веса молекулы ЯашЫгшпаЬ (препарат Луцентис)). Небольшие размеры полипептидов позволяют им легко проникать в ткани глаза, в связи с чем становится эффективной субконъюнктивальная доставка этих препаратов. Преимущества такого введения по сравнению с интравитреальными инъекциями, используемыми для доставки препарата Луцентис, весьма значительны: процедура менее инвазивна и сопровождается существенно меньшим риском таких серьёзных осложнений, как эндофтальмит и отслойка сетчатки.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Folkman J., Ingber D. Inhibition of angiogenesis // Semin. Cancer Biol. 1992. V. 3.
  2. Cao Y. Endogenous angiogenesis inhibitors and their therapeutic implications // Int. J. Biochem. Cell. Biol. 2001. V. 33. № 4. P. 357−369.
  3. Gao G., Ma J. Tipping the balance for angiogenic disorders // Drug Discov. Today. 2002. V. 7. № 3. P. 171−172.
  4. Battegay E.J. Angiogenesis: mechanistic insights, neovascular diseases, and therapeutic prospects // J. Mol. Med. 1995. V. 73. № 7. P. 333−346.
  5. Ma J.X., Zhang S.X., Wang J.J. Down-regulation of angiogenic inhibitors: a potential pathogenic mechanism for diabetic complications // Curr. Diab. Rev. 2005. V. 1, № 2. P. 183−196.
  6. Zhang S.X., Ma J.X. Ocular neovascularization: Implication of endogenous angiogenic inhibitors and potential therapy // Prog. Retin. Eye Res. 2007. V. 26. № l.P. 1−37.
  7. Folkman J, Shing Y. Angiogenesis // J. Biol. Chem. 1992. V. 267 № 16. P. 10 931−10 934.
  8. Ferrara N., Houck K., Jakeman L., Leung D.W. Molecular and biological properties of the vascular endothelial growth factor family of proteins // Endocr. Rev. 1992. V. 13. № 1. P. 18−32.
  9. Dawson D.W., Volpert O.V., Gillis P., Crawford S.E., Xu H., Benedict W., Bouck N.P. Pigment epithelium-derived factor: a potent inhibitor of angiogenesis // Science. 1999. V. 285. № 5425. P. 245−248
  10. Tolsma S.S., Volpert O.V., Good D.J., Frazier W.A., Polverini P.J., Bouck N. Peptides derived from two separate domains of the matrix protein thrombospondin- 1 have anti-angiogenic activity// J. Cell. Biol. 1993. V. 122. № 2. P. 497−511.
  11. Sund M., Nyberg P., Eikesdal H.P. Endogenous Matrix-Derived Inhibitors of Angiogenesis // Pharmaceuticals. 2010. V. 3. № 10. P. 3021−3039.
  12. Carmeliet P., Jain R.K. Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis // Nature. 2011 V. 473. № 7347. P. 298−307.
  13. Senger D.R., Galli S.J., Dvorak A.M., Perruzzi C.A., Harvey V.S., Dvorak H.F. Tumor cells secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid // Science. 1983. V. 219. № 4587. P. 983−985.
  14. Robinson C.J., Stringer S.E. The splice variants of vascular endothelial growth factor (VEGF) and their receptors // J. Cell. Sci. 2001. V. 114. P. 853−865.
  15. Aiello L.P., Wong J.S. Role of vascular endothelial growth factor in diabetic vascular complications // Kidney Int. Suppl. 2000. V.77. SI 13—SI 19.
  16. Aiello L.P., Northrup J.M., Keyt B.A., Takagi H., Iwamoto M.A. Hypoxic regulation of vascular endothelial growth factor in retinal cells // Arch. Ophthalmol. 1995. V. 113. № 12. P. 1538−44.
  17. Famiglietti E.V., Stopa E.G., McGookin E.D., Song P., LeBlanc V., Streeten B.W. Immunocytochemical localization of vascular endothelial growth factor in neurons and glial cells of human retina // Brain Res. 2003. V. 969. № 1−2. P. 195−204.
  18. Kvanta A., Algvere P.V., Berglin L., Seregard S. Subfoveal fibrovascular membranes in age-related macular degeneration express vascularendothelial growth factor // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1996. V. 37. № 9. P. 1929−1934.
  19. Mulcahy M.F., Benson A.B. Bevacizumab in the treatment of colorectal cancer // Expert Opin. Biol. Ther. 2005. V. 5. № 7. P. 997−1005.
  20. Avery L., Pieramici J., Rabena D., Castellarin A.A., Nasir M.A., Giust M.J. Intravitreal bevacizumab (Avastin) for neovascular age-related macular degeneration // Ophthalmology. 2006. V. 113. № 3. P. 363−372
  21. Bashshur Z.F., Haddad Z.A., Schakal A., Jaafar R.F., Saab M., Noureddin B.N. Intravitreal bevacizumab for treatment of neovascular age-related macular degeneration: a one-year prospective study // Am. J. Ophthalmol. 2008. V. 145. № 2. P. 249−256.
  22. Kriechbaum K., Michels S., Prager F., Georgopoulos M., Funk M., Geitzenauer W., Schmidt-Erfurth U. Intravitreal Avastin for macular oedema secondary to retinal vein occlusion: a prospective study // Br. J. Ophthalmol. 2008. V. 92. № 4. P. 518−522.
  23. Byeon S.H., Kwon Y.A., Oh H.S., Kim M, Kwon O.W. Short-term results of intravitreal bevacizumab for macular edema with retinal vein obstruction and diabetic macular edema // J. Ocul. Pharmacol. Ther. 2007. V. 23. № 4. P. 387 394.
  24. European Public Assessment Report (EPAR) on Avastin, European Medicine Agency (EMEA), 2005.
  25. Kim K.J., Li B., Houck K., Winer J., Ferrara N. The vascular endothelial growth factor proteins: identification of biologically relevant regions by neutralizing monoclonal antibodies // Growth Factors. 1992. V. 7. № 1. P. 53−64.
  26. Kabat E.A., Wu T.T., Perry. H.M., Gottesmann. K.S., Foeller. C. Sequences of proteins of immunological interest. Ed. 5. Public Health Service. National Institutes of Health. Bethesda. MD, 1991.
  27. Ferrara N., Damico L., Shams N., Lowman H., Kim R. Development of ranibizumab, an anti-vascular endothelial growth factor antigen binding fragment, as therapy for neovascular age-related macular degeneration // Retina. 2006. V. 26. № 8. P. 859−870.
  28. Bainbridge J., Mistry A., Alwis M.D., Paleolog E., Baker A., Thrasher A.J., Ali R.R. Inhibition of retinal neovascularization by gene transfer of soluble VEGF receptor sFlt-1 // Gene Ther. 2002. V. 9. № 5. P. 320−326.
  29. Lai Y.K., Shen W.Y., Brankov M., Lai C.M., Constable I.J., Rakoczy P.E. Potential long-term inhibition of ocular neovascularization by recombinant adeno-associated virus-mediated secretion gene therapy // Gene Ther. 2002. V. 9. № 12. P. 804−813.
  30. Ferrara N., Chen H., Davis-Smyth T., Gerber H. P., Nguyen T. N., Peers D., Chisholm V., Hillan K.J., Schwall R.H. Vascular endothelial growth factor is essential for corpus luteum angiogenesis // Nat. Med. 1998. V. 4. № 3. P. 336−340.
  31. Gerber H.P., Vu T.H., Ryan A.M., Kowalski J., Werb Z., Ferrara N. VEGF couples hypertrophic cartilage remodeling, ossification and angiogenesis during endochondral bone formation // Nat. Med. 1999. V. 5. № 6. P. 623−628.
  32. Gragoudas E.S., Adamis A.P., Cunningham E.T. Jr, Feinsod M., Guyer D.R. Pegaptanib for neovascular age-related macular degeneration // N. Engl. J. Med. 2004. V. 351. № 27. P. 2805−2816.
  33. Eaton B. The joys of in vitro selection: chemically dressing oligonucleotides to satiate protein targets // Curr. Opin. Chem. Biol. 2005. V. 1. № l.P. 10−16.
  34. Pieken W.A., Olsen D.B., Benseier F., Aurup H., Eckstein F. Kinetic characterization of ribonucleaseresistant 2'-modified hammerhead ribozymes // Science. 1991. V.253. № 5017. P. 314−317.
  35. Healy J.M., Lewis S.D., Kurz M., Boomer R.M., Thompson K.M., Wilson C., McCauley T.G. Pharmacokinetics and biodistribution of novel aptamer compositions // Pharm. Res. 2004. V. 21. № 12. 2234−2246.
  36. Fairbrother W.J., Champe M.A., Christinger, H.W., Keyt, B.A., Starovasnik M.A. Solution structure of the heparin-binding domain of vascular endothelial growth factor // Structure. 1998. V. 6. № 5. P. 637−648.
  37. Ng E.W., Shima D.T., Calias P., Cunningham E.T. Jr, Guyer D.R., Adamis A.P. Pegaptanib, a targeted anti-VEGF aptamer for ocular vascular disease // Nat. Rev. Drug Discov. 2006. V. 5. № 2. P. 123−132.
  38. Gragoudas E.S., Adamis A.P., Cunningham E.T. Jr, Feinsod M., Guyer D.R. Pegaptanib for neovascular age-related macular degeneration // N. Engl. J. Med. 2004. V. 351. № 27. P. 2805−2816.
  39. Cunha-Vaz J., Faria de Abreu J.R., Campos A.J. Early breakdown of the bloodretinal barrier in diabetes // Br. J. Ophthalmol. 1975. V. 59. № 11. P. 649 656.
  40. Vinores S.A., Derevjanik N.L., Ozaki H., Okamoto N., Campochiaro P. A. Cellular mechanisms of blood-retinal barrier dysfunction in macular edema // Doc. Ophthalmol. 1999. V. 97. № 3−4. P. 217−228.
  41. Storkebaum E., Lambrechts D., Carmeliet P. VEGF: once regarded as a specific angiogenic factor, now implicated in neuroprotection // Bioessays. 2004. V. 26. № 9. P. 943−954.
  42. Csaky K. Anti-vascular endothelial growth factor therapy for neovascular agerelated macular degeneration: promises and pitfalls // Ophthalmology. 2003. V. 110. № 5. P. 879−881.
  43. Ratner M. Genentech discloses safety concerns over Avastin // Nat. Biotechnol. 2004. V. 22. № 10. P.1198.
  44. Wahl M.L., Moser T.L., Pizzo S.V. Angiostatin and antiangiogenic therapy in human disease // Rec. Prog. Horm. Res. 2004. V. 59. P. 73−104.
  45. Preis I., Langer R., Brem H., Folkman J. Inhibition of neovascularization by an extract derived from vitreous // Am. J. Ophthalmol. 1977. V. 84. № 3. P. 323−328.
  46. Cao Y. Endogenous angiogenesis inhibitors and their therapeutic implications // Int. J. Biochem. Cell. Biol. 2001. V. 33. № 4. P. 357−369.
  47. Bornstein P. Thrombospondins: structure and regulation of expression // FASEB J. 1992. V. 6. № 14. P. 3290−3299.
  48. Tucker R.P. The thrombospondin type 1 repeat superfamily // Int. J. Biochem. Cell Biol. 2004. V. 36. № 2. 969−974.
  49. Kvansakul M., Adams J.C., Hohenester E. Structure of a thrombospondin C-terminal fragment reveals a novel calcium core in the type 3 repeats // Embo. J. 2004. V. 23. № 6. P. 1223−1233.
  50. Hogg P.J. Thrombospondin 1 as an enzyme inhibitor // Thromb. Haemost. 1994. V. 72. №> 6. P. 787−792.
  51. Dawson D.W., Pearce S.F., Zhong R., Silverstein R.L., Frazier W.A., Bouck N.P. CD36 mediates the In vitro inhibitory effects of thrombospondin-1 on endothelial cells // J. Cell. Biol. 1997. V. 138. № 3. P. 707−717.
  52. Jimenez B., Volpert O.V., Crawford S.E., Febbraio M., Silverstein R.L., Bouck N. Signals leading to apoptosis-dependent inhibition of neovascularization by thrombospondin-1 // Nat. Med. 2000. V. 6. № 1. P. 418.
  53. Simantov R., Febbraio M., Crombie R., Asch A.S., Nachman R.L., Silverstein R.L. Histidine-rich glycoprotein inhibits the antiangiogenic effect of thrombospondin-1 // J. Clin. Invest. 2001. V. 107. № 1. P. 45−52.
  54. Taraboletti G., Belotti D., Borsotti P., Vergani V., Rusnati M., Presta M., Giavazzi R. The 140-kilodalton antiangiogenic fragment of thrombospondin-1 binds to basic fibroblast growth factor // Cell. Growth. Differ. 1997. V. 8. № 4. P. 471−479.
  55. Goicoechea S., Orr A.W., Pallero M.A., Eggleton P., Murphy-Ullrich J.E. Thrombospondin mediates focal adhesion disassembly through interactions with cell surface calreticulin // J. Biol. Chem. 2000. V. 275. № 46. P.36 358−36 368.
  56. Jimenez B., Volpert O.V., Crawford S.E., Febbraio M., Silverstein R.L., Bouck N. Signals leading to apoptosis-dependent inhibition of neovascularization by thrombospondin-1 // Nat. Med. 2000. V. 6. № 1. P. 41−48.
  57. Rusnati M., Urbinati C., Bonifacio S., Presta M., Taraboletti G. Thrombospondin-1 as a paradigm for the development of antiangiogenic agents endowed with multiple mechanisms of action // Pharmaceuticals. 2010. V. 3. № 4. P. 1241−1278.
  58. Tolsma S.S., Volpert O.V., Good D.J., Frazier W.A., Polverini P.J., Bouck N. Peptides derived from two separate domains of the matrix protein thrombospondin-1 have anti-angiogenic activity// J. Cell. Biol. 1993. V. 122. № 2. P. 497−511.
  59. Silverstein R.L. The face of TSR revealed: an extracellular signaling domain is exposed // J. Cell. Biol. 2002. V. 159. № 2. P. 203−206.
  60. Iruela-Arispe M.L., Luque A., Lee N. Thrombospondin modules and angiogenesis // Int. J. Biochem. Cell. Biol. 2004. V. 36. № 6. P. 1070−1078.
  61. Tan K., Duquette M., Liu J.H., Dong Y., Zhang R., Joachimiak A., Lawler J., Wang J.H. Crystal structure of the TSP-1 type 1 repeats: a novel layered fold and its biological implication // J. Cell. Biol. 2002. V. 159. № 2. P.373−382.
  62. Guo N.H., Krutzsch H.C., Inman J.K., Shannon C.S., Roberts D.D. Antiproliferative and antitumor activities of D-reverse peptides derived from the second type-1 repeat of thrombospondin-1 // J. Pept. Res. 1997. V. 50. № 3. P. 210−221.
  63. Coronella J., Li L., Johnson K., Pirie-Shepherd S., Roxas G., Levin N. Selective activity against proliferating tumor endothelial cells by CVX-22, a thrombospondin-1 mimetic CovXBody // Anticancer Res. 2009. V. 29. № 6. P. 2243−2252.
  64. Greenaway J., Henkin J., Lawler J., Moorehead R., Petrik J. ABT-510 induces tumor cell apoptosis and inhibits ovarian tumor growth in an orthotopic, syngeneic model of epithelial ovarian cancer // Mol. Cancer Ther. 2009. V. 8. № 1. P. 64−74.
  65. Becerra S.P., Sagasti A., Spinella P., Notario V. Pigment epitheliumderived factor behaves like a noninhibitory serpin. Neurotrophic activity does not require the serpin reactive loop // J. Biol. Chem. 1995. V. 270. № 43. P. 25 992−25 999.
  66. Tombran-Tink J., Johnson L.V. Neuronal differentiation of retinoblastoma cells induced by medium conditioned by human RPE cells // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1989. V. 30. № 8. P. 1700−1707.
  67. Cao W., Tombran-Tink J., Chen W., Mrazek D., Elias R., McGinnis J.F. Pigment epithelium-derived factor protects cultured retinal neurons against hydrogen peroxide-induced cell death // J. Neurosci. Res. 1999. V. 57. № 6. P. 789−800.
  68. DeCoster M.A., Schabelman E., Tombran-Tink J., Bazan N.G. Neuroprotection by pigment epithelial-derived factor against glutamate toxicity in developing primary hippocampal neurons // J. Neurosci. Res. 1999. V. 56. № 6. P. 604−610.
  69. Houenou L.J., D’Costa A.P., Li L., Turgeon V.L., Enyadike C., Alberdi E., Becerra S.P. Pigment epithelium-derived factor promotes the survival and differentiation of developing spinal motor neurons // J. Comp. Neurol. 1999. V. 412. № 3. P. 506−514.
  70. Bilak M.M., Corse A.M., Bilak S.R., Lehar M., Tombran-Tink J., Kuncl R.W. Pigment epithelium-derived factor (PEDF) protects motor neurons from chronic glutamate-mediated neurodegeneration // J. Neuropathol. Exp. Neurol. 1999. V. 58. № 7. p. 719−728.
  71. Barnstable C.J., Tombran-Tink J. Neuroprotective and antiangiogenic actions of PEDF in the eye: Molecular targets and therapeutic potential // Prog. Retin. Eye Res. 2004. V. 23. № 5. P. 561−577.
  72. Dawson D. W, Volpert O.V., Gillis P., Crawford S.E., Xu H, Benedict W., Bouck N.P. Pigment epithelium-derived factor: A potent inhibitor of angiogenesis // Science. 1999. V. 285. № 5425. P. 245−248.
  73. Ogata N., Nishikawa M., Nishimura T., Mitsuma Y., Matsumura M. Unbalanced vitreous levels of pigment epithelium-derived factor and vascularendothelial growth factor in diabetic retinopathy // Am. J. Ophthalmol. 2002. V. 134. № 3. P. 348−353.
  74. Aparicio S., Sawanta S., Lara N., Barnstable C.J. Expression of angiogenesis factors in human umbilical vein endothelial cells and their regulation by PEDF // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2005. V. 326. № 2. P. 387−394.
  75. Cai J., Jiang W.G., Grant M.B., Boulton M. Pigment Epithelium-derived Factor Inhibits Angiogenesis via Regulated Intracellular Proteolysis of Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 1 // J. Biol. Chem. 2006. V. 281. № 6. P. 3604−3613.
  76. Chen L., Zhang S.S., Barnstable C.J., Tombran-Tink J. PEDF induces apoptosis in human endothelial cells by activating p38 MAP kinase dependent cleavage of multiple caspases // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006 V. 348. № 4. P. 1288−1295.
  77. Zaichuk T.A., Shroff E.H., Emmanuel R., Filleur S., Nelius T., Volpert O.V. Nuclear Factor of Activated T Cells Balances Angiogenesis Activation and Inhibition// J. Exp. Med. 2004. V. 199, № 11. P. 1513−1522.
  78. Bernard A., Gao-Li J., Franco C.A., Bouceba T., Huet A., Li Z. Laminin Receptor Involvement in the Anti-angiogenic Activity of Pigment Epithelium-derived Factor // J. Biol. Chem. 2009. V. 284. № 16. P. 10 480−10 490.
  79. Thepparit C., Smith D. R. Serotype-Specific Entry of Dengue Virus into Liver Cells: Identification of the 37-Kilodalton/67-Kilodalton High-Affinity Laminin Receptor as a Dengue Virus Serotype 1 Receptor // J. Virol. 2004. V. 78. № 22. P. 12 647−12 656
  80. Akache B., Grimm D., Pandey K., Yant S.R., Xu H., Kay M.A. The 37/67-Kilodalton Laminin Receptor Is a Receptor for Adeno-Associated Virus Serotypes 8, 2, 3, and 9 // J. Virol. 2006. V. 80. № 19. P. 9831−9836.
  81. Nelson J., McFerran N.V., Pivato G., Chambers E., Doherty C., Steele D., Timson D.J. The 67 kDa laminin receptor: structure, function and role in disease // Biosci. Rep. 2008. V. 28. № 1. P. 33−48.
  82. Alberdi E., Aymerich M.S., Becerra S.P. Binding of pigment epithelium- derived factor (PEDF) to retinoblastoma cells and cerebellar granule neurons: evidence for a PEDF receptor // J. Biol. Chem. 1999. V. 274. № 44. P. 31 605−31 612.
  83. Li H., Tran V.V., Hu Y., Mark Saltzman W., Barnstable C.J., Tombran-Tink J. A PEDF N-terminal peptide protects the retina from ischemic injury when delivered in PLGA nanospheres // Exp. Eye Res. 2006. V. 83. № 4. P. 824−833.
  84. Amaral J., Becerra S. P. Effects of Human Recombinant PEDF Protein and PEDFDerived Peptide 34-mer on Choroidal Neovascularization // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2010. V. 51. № 3. P. 1318−1326.
  85. Longeras R., Farjo K., Ihnat M., Ma J.-X. A PEDF-Derived Peptide Inhibits Retinal Neovascularization and BlocksMobilization of Bone Marrow-Derived Endothelial Progenitor Cells // Exp. Diabetes Res. 2012. V. 2012. P. 518 426.
  86. Gong Q, Yang X, Cai W, Gao G, Yang Z. Expression and purification of functional epitope of pigment epithelium-derived factor in E. coli with inhibiting effect on endothelial cells // Protein J. 2010. V. 29. № 3. P. 167−173.
  87. Sudhakar A., Boosani C.S. Inhibition of tumor angiogenesis bytumstatin: insights into signaling mechanisms and implications in cancer regression // Pharm. Res. 2008. V. 25. № 12. P. 2731−2739.
  88. Sundaramoorthy M., Meiyappan M., Todd P., Hudson B.G. Crystal structure of NCI domains. Structural basis for type IV collagen assembly in basement membranes // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. № 34. P. 31 142−31 153.
  89. Hudson B.G., Reeders S.T., Tryggvason K. Type IV collagen: structure, gene organization, and role in human diseases. Molecular basis of Goodpasture and Alport syndromes and diffuse leiomyomatosis // J. Biol. Chem. 1993. V. 268. № 35. P. 26 033−26 036.
  90. Maeshima Y., Sudhakar A., Lively J.C., Ueki K., Kharbanda S., Kahn C.R., Sonenberg N., Hynes R.O., Kalluri R. Tumstatin, an endothelial cell-specific inhibitor of protein synthesis // Science. 2002. V. 295. № 5552. P. 140−143.
  91. Han J., Ohno N., Pasco S., Monboisse J.C., Borel J.P., Kefalides N.A. A cell binding domain from the alpha3 chain of type IV collagen inhibits proliferation of melanoma cells // J. Biol. Chem. 1997. V. 272. № 33. P. 2 039 520 401.
  92. Boosani C.S., Mannam A.P., Cosgrove D., Silva R., Hodivala-Dilke K.M., Keshamouni V.G., Sudhakar A. Regulation of COX-2 mediated signaling by {alpha} 3 type IV noncollagenous domain in tumor angiogenesis // Blood. 2007. V. 110. № 4. P. l 168−1177.
  93. Church R.D., Fleshman J.W., McLeod H.L. Cyclo-oxygenase 2 inhibition in colorectal cancer therapy // Br. J. Surg. 2003. V. 90. № 9. P. 10 551 067.
  94. Zeisberg M., Khurana M., Rao V.H., Cosgrove D., Rougier J.P., Werner M.C., Shield C.F. 3rd, Werb Z,. Kalluri R. Stage-specific action of matrix metalloproteinases influences progressive hereditary kidney disease // PLoS Med. 2006. V. 3.№ 4. P. el00.
  95. Gunda V., Wang S., Sheibani N., Sudhakar, A. Inhibitory Effect of Tumstatin on Corneal Neovascularization Both In-vitro and In-vivo // J. Clinic. Experiment. Ophthalmol. 2011. V.2. P. 132.
  96. Dhanabal M., Ramchandran R., Volk R., Stillman I. E., Lombardo M., Iruela-Arispe M. L., Simons M., Sukhatme V.P. Endostatin: yeast production, mutants, and antitumor effect in renal cell carcinoma // Cancer Res. 1999. V. 59. № l.P. 189−197.
  97. O’Reilly M.S., Boehm T., Shing Y., Fukai N., Vasios G., Lane W.S., Flynn E., Birkhead J.R., Olsen B.R., Folkman, J. Endostatin: an endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor growth // Cell. 1997. V. 88. № 2. P. 277−285.
  98. Boehm T., Folkman J., Browder T., O’Reilly M.S. Antiangiogenic therapy of experimental cancer does not induce acquired drug resistance // Nature. 1997. V. 390. № 6658. P. 404−407.
  99. Abdollahi A., Hahnfeldt P., Maercker C., Grone H.J., Debus J., Ansorge W., Folkman J., Hlatky L., Huber P.E. Endostatin’s antiangiogenic signaling network // Mol. Cell. 2004. V. 13. № 5. P. 649−663.
  100. Hohenester E., Sasaki T., Olsen B.R., Timpl R. Crystal structure of the angiogenesis inhibitor endostatin at 1.5 A resolution // EMBO J. 1998. V. 17. № 6. P. 1656−1664.
  101. Han Q., Fu Y., Zhou H., He Y., Luo Y. Contributions of Zn (II)-binding to the structural stability of endostatin // FEBS Lett. 2007. V. 581. № 16. P. 30 273 032.
  102. Fu Y., Tang H., Huang Y., Song N., Luo Y. Unraveling the mysteries of endostatin // IUBMB Life. 2009. V. 61. № 6. P. 613−626.
  103. Shi H., Huang Y., Zhou H., Song X., Yuan S., Fu Y., Luo Y. Nucleolin is a receptor that mediates antiangiogenic and antitumor activity of endostatin // Blood. 2007. V. 110. № 8. P. 2899−2906.
  104. Javaherian K., Park S.Y., Pickl W.F., LaMontagne K.R., Sjin R.T., Gillies S., Lo K.M. Laminin modulates morphogenic properties of the collagen XVIII endostatin domain // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. № 47. P. 45 211—45 218.
  105. Lee S.J., Jang J.W., Kim Y.M., Lee H.I., Jeon J.Y., Kwon Y.G., Lee
  106. T. Endostatin binds to the catalytic domain of matrix metalloproteinase-2 // FEBS Lett. 2002. V. 519. № 1−3. P. 147−152.
  107. Ginisty H., Sicard H., Roger B., Bouvet P. Structure and functions of nucleolin // J. Cell Sci. 1999. V. 112, № 6. P. 761−772.
  108. Erard M.S., Belenguer P., Caizergues-Ferrer M., Pantaloni A., Amalric, F. A major nucleolar protein, nucleolin, induces chromatin decondensation by binding to histone HI // Eur. J. Biochem. 1988. V. 175. № 3. p. 525−530.
  109. Kharrat A., Derancourt J., Doree M., Amalric F., Erard M. Synergistic effect of histone HI and nucleolin on chromatin condensation in mitosis: role of a phosphorylated heteromer. Biochemistry. 1991.V. 30. № 42. P. 10 329−10 336.
  110. Christian S., Pilch J., Akerman M.E., Porkka K., Laakkonen P., Ruoslahti E. Nucleolin expressed at the cell surface is a marker of endothelial cells in angiogenic blood vessels // J. Cell Biol. 2003. V. 163. № 4. P. 871−878.
  111. Huang Y., Shi H., Zhou H., Song X., Yuan S., Luo Y. The angiogenic function of nucleolin is mediated by vascular endothelial growth factor and nonmuscle myosin // Blood. 2006. V. 107. № 9. P. 3564−3571.
  112. Cattaneo M.G., Pola S., Francescato P., Chillemi F., Vicentini L.M., Human endostatin-derived synthetic peptides possess potent antiangiogenic properties in vitro and in vivo // Exp. Cell Res. 2003. V. 283. № 2. P. 230−236.
  113. Morbidelli L., Donnini S., Chillemi F., Giachetti A., Ziche M., Angiosuppressive and angiostimulatory effects exerted by synthetic partial sequences of endostatin // Clin. Cancer Res. 2003. V. 9. № 14. P. 5358−5369.
  114. Wickstrom S.A., Alitalo K., Keski-Oja J. An endostatinderived peptide interacts with integrins and regulates actin cytoskeleton and migration of endothelial cells // J. Biol. Chem. 2004.V. 279. № 19. P. 20 178−20 185.
  115. Pieraccini S., Sironi M., Francescato P., Speranza G., Vicentini L.M., Manitto P. A molecular dynamics study of human endostatin and its synthetic fragments with antiangiogenic properties // Phys. Chem. Chem. Phys. 2006. V. 8. № 26. P. 3066−3071.
  116. Walter-Yohrling J., Morgenbesser S., Rouleau C., Bagley R., Callahan M., Weber W., Teicher B.A. Murine endothelial cell lines as models of tumor endothelial cells // Clin. Cancer Res. 2004. V. 10. № 6. P. 2179−2189.
  117. Laemmli U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4 // Nature. 1970. V. 227. № 5259. P. 680−685.
  118. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951. V. 193. № 1. P. 265−275.
  119. Hamano Y., Kalluri R. Tumstatin, the NCI domain of alpha3 chain of type IV collagen, is an endogenous inhibitor of pathological angiogenesis and suppresses tumor growth // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2005. V. 333. № 2. P. 292−298.
  120. Maeshima Y., Colorado P.C., Kalluri R. Two RGD-independent alphavbeta3 integrin binding sites on tumstatin regulate distinct antitumor properties // J. Biol. Chem. 2000. V. 275. № 31. P. 23 745−23 750.
  121. Maeshima Y., Colorado P.C., Torre A. Distinct antitumor properties of a type IV collagen domain derived from basement membrane // Biol. Chem. 2000. V. 275. № 28. P. 21 340−21 348.
  122. Walker J.R., Altman R.K., Warren J. W, Altman E. Using protein-based motifs to stabilize peptides // J. Peptide. Res. 2003. V. 62. P. 214−226.
  123. Esipov R.S., Stepanenko V.N., Beyrakhova K.A., Muravjeva T.I., Miroshnikov A.I. Production of thymosin alpha 1 via non-enzymatic acetylation of the recombinant precursor // Biotechnol. Appl. Biochem. 2010. V. 56. № 1. P. 1725.
  124. Tombran-Tink J., Chader G.G., Johnson L.V. PEDF: a pigment epithelium-derived factor with potent neuronal differentiative activity // Exp. Eye Res. 1991. V. 53. № 3. P. 411−414.
  125. Filleur S., Nelius T., de Riese W., Kennedy R.C. Characterization of PEDF: a multi-functional serpin family protein // J. Cell. Biochem. 2009. V. 106. № 5. P. 769−775.
  126. Dawson D.W., Volpert O.V., Gillis P., Crawford S.E., Xu H., Benedict W., Bouck N.P. Pigment epithelium-derived factor: a potent inhibitor of angiogenesis // Science. 1999. V. 285. № 5425. P. 245−248.
  127. Fong B.A., Wu W.Y., Wood D.W. The potential role of self-cleaving purification tags in commercial-scale processes //Trends Biotechnol. 2010 V. 28. № 5. P. 272−279.
  128. Arnau J., Lauritzen C., Petersen G.E., Pedersen J. Current strategies for the use of affinity tags and tag removal for the purification of recombinant proteins // Protein Expr. Purif. 2006, V. 48. № 1. P. 1−13.
  129. Esipov R.S., Stepanenko V.N., Gurevich A.I., Chupova L.A., Miroshnikov A.I. Production and purification of recombinant human glucagon overexpressed as intein fusion protein in Escherichia coli // Protein Pept. Lett. 2006. V. 13. № 4. P. 343−347.
  130. Esipov R.S., Stepanenko V.N., Chupova L.A., Boyarskikh U.A., Filipenko M.L., Miroshnikov A.I. Production of recombinant human epidermal growth factor using Ssp dnaB mini-intein system // Protein Expr. Purif. 2008. V. 61. № l.P. 1−6.
  131. Stepannenko V.N., Esipov R.S., Gurevich A.I., Chupova L.A., Miroshnikov A.I. Recombinant oxyntomodulin// Bioorg. Khim. 2007. V. 33. № 2. P. 245−250.
  132. А.И., Лихванцева В. Г., Степанова Е. В., Арутюнян Е. В., Осипов Р. А., Бейрахова К. А., Степаненко В. Н., Белоус О. В. // Офтальмохирургия. 2011. № 1. С. 76−82.
  133. O’Connel К., Edidin М. A mouse lymphoid endothelial cell line immortalized by simian virus 40 binds lymphocytes and retains functional characteristics of normal endothelial cells // J. Immunol. 1990. V. 144. № 2. P. 521−525.
  134. Apte R.S., Barreiro R.A., Duh E., Volpert O., Ferguson T.A. Stimulation of neovascularization by the anti-angiogenic factor PEDF // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2004. V. 45. № 12. P. 4491^1497.
  135. Montezuma S.R., Vawas D., Miller J.W. Review of the ocular angiogenesis animal models // Semin. Ophthalmol. 2009. V. 24. № 2. P. 52−61.
  136. Gunda V., Wang S., Sheibani N., Sudhakar, A. Inhibitory Effect of Tumstatin on Corneal Neovascularization Both In-vitro and In-vivo // J. Clinic. Experiment. Ophthalmol. 2011. V.2. P. 132.
  137. Rosenfeld P.J., Brown D.M., Heier J.S., Boyer D.S., Kaiser P.K., Chung C.Y., Kim R.Y., MARINA Study Group. Ranibizumab for neovascular age-related macular degeneration // N. Engl. J. Med. 2006. V. 355. № 14. P. 14 191 431.
  138. Schaal S., Kaplan H., Tezel T. Is there tachyphylaxis to intravitreal anti-vascular endothelial growth factor pharmacotherapy in age-related macular degeneration? // Ophthalmology. 2008. V. 115. № 12. P. 2199−2205.
  139. Bradley J., Ju M., Robinson G.S. Combination therapy for the treatment of ocular neovascularization // Angiogenesis. 2007. V. 10. № 2. P. 141−148.
  140. Brar V.S., Sharma R.K., Murthy R.K., Chalam K.V. Bevacizumab neutralizes the protective effect of vascular endothelial growth factor on retinal ganglion cells // Mol Vis. 2010. V. 16. P. 1848−1853.1. Благодарности
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!