Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Выявление, изучение структуры и иммунобиологических свойств S-слоя чумного микроба

Диссертация: Выявление, изучение структуры и иммунобиологических свойств S-слоя чумного микроба
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Исследователи, работающие в области микробиологии и инфекционной иммунологии, в последние два десятилетия интенсивно изучают поверхностные клеточные структуры бактерий в связи с их значительной ролью в патогенезе заболеваний и возможностью использования в качестве компонентов химических и комбинированных вакцин, а также диагностических средств. Наиболее пристальное внимание уделяется… Читать ещё >

Выявление, изучение структуры и иммунобиологических свойств S-слоя чумного микроба (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ СТРУКТУРЕ ПОВЕРХНОСТИ КЛЕТОК ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ
    • 1. Л.Структура и функции поверхностных белковых и гликопротеидных 8-слоев бактериальных клеток 1.2.Разнообразие, биохимическая структура и иммуно-генные свойства антигенов чумного микроба
  • ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
  • ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА И ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДОВ ПОЛУЧЕНИЯ И ДЕТЕКЦИИ МОЛЕКУЛ, ОТНОСЯЩИХСЯ К Э-СЛОЮ ЧУМНОГО МИКРОБА ЗЛ. Создание оптимальной схемы выделения и очистки белков 8-слоя возбудителя чумы
    • 3. 2. Разработка методов качественного и количественного определения компонентов 8-слоя чумного микроба
  • ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ПОВЕРХНОСТНЫХ СТРУКТУР КЛЕТОК ЧУМНОГО МИКРОБА, ОТНОСЯЩИХСЯ К 8-СЛОЮ
    • 4. 1. Структура, иммунохимические и биокинетические особенности молекул 8-слоя чумного микроба
    • 4. 2. Оценка некоторых иммунобиологических свойств белков 8-слоя чумного микроба
    • 4. 3. Влияние белков Э-слоя на функциональную структуру поверхности клеток возбудителя чумы
  • ГЛАВА 5. ПОЛИСАХАРИДНЫЙ АНТИГЕН Р-3 И ЕГО ВЗАИМООТНОШЕНИЕ С S-СЛОЕМ ЧУМНОГО МИКРОБА
    • 5. 1. Оптимизация способов получения и очистки антигена Р
    • 5. 2. Биохимический анализ структуры Р-3 антигена и его основные свойства
    • 5. 3. Иммунохимические и иммунобиологические свойства Р-3 антигена
    • 5. 4. Связь антигена Р-3 и S-слоя чумного микроба
    • 5. 5. Прикладные аспекты изучения S-слоя чумного микроба и его составляющих

Актуальность проблемы.

В настоящее время отмечается ухудшение эпидемиологической обстановки по чуме в мире, характеризующееся начавшимся в 1990 году ростом числа больных (Онищенко Г. Г. и др., 1998). Эпидемическая значимость чумы для России остается высокой из-за наличия на ее территории природных очагов, эндемичных по данной инфекции. В связи с этим традиционно большое внимание уделяется разработке и внедрению в практику иммунодиагностиче-ских и иммунопрофилактических препаратов, основанных на использовании протективных и видоспецифических антигенов этого возбудителя (Кокушкин A.M. и др., 1998; Кутырев В. В. и др., 1998). Чума остается модельной инфекцией, на возбудителе которой изучаются все универсальные и уникальные механизмы, обеспечивающие вирулентные свойства бактерий. (Кутырев В.В. 1997; Проценко O.A. и др., 1983; Perry R.D. 1997).

Исследователи, работающие в области микробиологии и инфекционной иммунологии, в последние два десятилетия интенсивно изучают поверхностные клеточные структуры бактерий в связи с их значительной ролью в патогенезе заболеваний и возможностью использования в качестве компонентов химических и комбинированных вакцин, а также диагностических средств. Наиболее пристальное внимание уделяется надоболочечным структурам — капсулам, пилям и фимбриям, а также мембранным белкам и молекулам с ярко выраженной специализированной функцией (ферментам, рецепторам, пермеа-зам, поринам и т. д.). В последнее десятилетие сформировались четкие представления о так называемых S-слоях микроорганизмов (от surface — поверхность), которые были найдены у абсолютного большинства грамположитель-ных и грамотрицательных эубактерий, архебактерий и представлют собой регулярное кристаллическое окружение клетки (Messner Р. et al., 1992, 1994; Sara М., 1994; Beveridge T.J., 1994; Farchaus J.W.et al., 1995; Hoiczyk E. 1995). Часто к белкам S-слоя относят разнообразные порины или так называемые 7 rOMP’s-белки (regular outer membrane proteins) (Kessel M., 1994; Cusumano V. et al., 1997; Caston J.R.et al., 1993) и некоторые другие белки и гликопротеиды с неясной специализацией. S-слой бывает представлен белковыми или глико-протеидными субъединицами, определенно ориентированными на поверхности клетки • (Altaian Е., 1995; Messner Р., 1995), молекулярная масса которых колеблется нескольких десятков до сотен килодальтон (Северина J1.0., 1995). Эти структуры обеспечивают регуляцию процесса адгезии клеток к поверхностям (Kotiranta A. et al., 1998; 1993; Owen P., 1992) или служат элементами стерического исключения адгезии in vivo (Sara M. 1994), обеспечивают устойчивость клеток к протеолитическим ферментам (Kostrzynska M. et al., 1992), несут сайты адгезии для собственных ферментов (Egelseer Е., 1994), участвуют в проявлении вирулентности (Mastrantonio Р., 1994; Garcia М.М., 1995), служат протективными антигенами (Ford L.A.1992; Sleytr U.B., 1997), защищают клетки от фагоцитоза, а соответствующие домены служат рецепторами или посредниками в связывании с лейкоцитами (Lounatmaa К. Et al., 1994). В связи с этими свойствами белков S-слоя, многие исследователи считают, что они обладают высоким вакцинным потенциалом и могут быть использованы также в диагностических целях. Сшивка белков S-слоя глютаровым альдегидом позволяет получать полупроницаемые мембраны, размеры пор которых соответствуют размерам овальных пор в продуктах самосборки S-слоя на поверхности клетки (Sara M., 1996). В связи с этим, подобные белки имеют существенное значение для биотехнологического применения, в частности, как элементы нанотехнологии при получении ультрафильтрационных мембран с очень точными пределами исключения молекул (Sleytr U.B., Sara M. 1997; Breitwieser A. et al., 1996). Четких признаков, по которым белки можно отнести к S-слоям не существует (Sleytr U.B., 1997), однако очевидно, что эти структуры расположены над оболочкой клетки, проявляют свойства биомембраны и несут ряд специфических функций, важных для жизнедеятельности клетки. 8.

В предварительных исследованиях, проведенных по выявлению Б-слоя у чумного микроба (Дятлов И.А. 1996, 1997) было показано, что данные бактерии обладают поверхностной надоболочечной структурой, которая достаточно легко смывается с поверхности клетки с помощью гидродинамического стресса в дистиллированной воде и способной к ресорбции на клетку в присутствии двухвалентных катионов. Было показано существенное влияние наличия этого специфического образования на формирование заряда оболочки, гидрофоб-ность и свободную энергию поверхности клетки. Сшивка данных белков, полученных с клеток, глютаровым альдегидом позволяла получать сетчатые структуры, не характерные для других белков, что явилось еще одним подтверждением их сходства с белками 8-слоя. Результаты биофизического анализа клеток чумного микроба свидетельствовали о присутствии на их поверхности структур, функционально и топохимически аналогичных 8-слоям. В 1992;93 гг. был описан (Дятлов И.А.) поверхностный полисахаридный антиген РЗ отличный от других известных антигенов чумного микроба, связанный, возможно, структурно или стерически с Э-слоем, углубленное изучение которого поможет глубже понять строение оболочки этого возбудителя.

В связи с вышеизложенным, представляет значительный теоретический и практический интерес вопрос о препаративном получении и всестороннем изучении в плане структурной организации, биохимических и биофизических свойств, антигенной специфичности, иммуногенности и протективности, надоболочечной структуры чумного микроба, обладающей выраженными свойствами 8-слоев прокариотических организмов.

Цель работы. Выявить у чумного микроба надоболочечные структуры, относящиеся к Б-слоям прокариот, изучить их строение, иммунохимические и биофизические свойства.

Задачи исследования:

1. Разработать методические подходы для экстракции, изолирования и очистки компонентов оболочки чумного микроба, относящихся к Э-слоям. 9.

2. Провести электронномикроскопическое изучение 8-слоев чумного микроба, определить их локализацию и взаимоотношения с другими поверхностными структурами с помощью иммунной метки.

3. Определить химический состав изолированных 8-слоев, размер молекулы и субъединиц, изучить антигенные свойства.

4. Разработать методы выявления и количественного определения компонентов 8-слоя чумного микроба с помощью иммуноферментных и иммуно-суспензионных реакций.

5. Изучить биокинетику синтеза 8-слоя, его влияние на биофизические свойства поверхности клетки, определить участие в защите живых бактерий от внешних воздействий.

6. Изучить влияние 8-слоя на выработку антител у лабораторных животных и участие в формировании иммунитета к чуме.

7. Определить взаимоотношения поверхностного полисахаридного антигена РЗ с 8-слоем чумного микроба.

Научная новизна исследования.

Впервые показано наличие надоболочечной структуры у чумного микроба, относящейся к 8-слоям прокариот по признакам поверхностного расположения в отсутствии капсулы, регулярности пористой структуры, прикреплении к оболочке нековалентно, а с помощью двухвалентных катионов, способного к ресорбции, несущего функции адгезии к поверхностям и биомолекулам, а также защиты клетки от внешних воздействий. Определена детерминированность синтеза молекулы 8-слоя хромосомными генами, выявлены особенности биокинетики и конститутивный характер синтеза, определена антигенная специфичность. Установлена структура 8-слоя: он состоит из белкового и углеводного компонентов в соотношении 3:1, белковых субъединиц размерами 58 и 23 к Да, углеводы представлены глюкозой, галактозой и рибозой. Установлено поверхностное расположение 8-слоя, наличие в его конгломератах, структурированных кальцием регулярных пор с размерами 6−7 нм. Показано влияние гли.

10 I копротеида на биофизические свойства поверхности клеток чумного микроба: увеличение в его присутствии заряда клетки, участие в адгезии к биомолекулам и клеткам макроорганизма, рецепция с фибриногеном, проявление лектинопо-добных свойств. 8-слой вызывает активную выработку антител к нему у животных, но слабо защищает их от чумы, снижает способность макрофагов к ¡-фагоцитированию бактерий. Показано, что гликопротеид защищает клетки от внешних воздействий протеолитическими ферментами, поверхностно-активными веществами и осмотическим давлением. Доказано, что ранее описанный полисахаридный антиген РЗ чумного микроба, является фрагментом молекулы гликопротеида Б-слоя, образующимся в процессе его выделения в изоточке при низком рН.

Практическая ценность. Разработана оригинальная методическая схема выделения и очистки гликопротеида 8-слоя чумного микроба, позволяющая с наименьшими затратами получать исследуемый антиген в лабораторных условиях. Предложен комплекс методов детекции и количественного определения гликопротеида Э-слоя и его полисахаридного фрагмента (РЗ антигена) в реакциях иммунодиффузии, агглютинации на стекле, с использованием микроносителей — эритроцитов и латексных частиц, Дот-ИФА анализе. Способ формирования полупроницаемых мембран из Б-слоя, предложенный в работе, может использоваться для изучения его селективности для биомолекул различной природы, что позволит определить биотехнологический потенциал и роль в жизнедеятельности клетки этой структуры. Методы определения антител могут быть использованы практическими работниками при обследовании очагов чумы для выявления животных, контактировавших с чумным микробом, так как антитела к 8-слою сохраняются длительное время. Определение термостабильного и кислотоустойчивого антигена РЗ может дать ориентировочную ретроспективную информацию о присутствии чумного микроба в исследуемом материале в прошлом (захоронения, старые субстраты нор грызунов и т. п.).

В соответствии с разработанными методами подготовлено методическое пособие «Выделение, очистка и количественное определение белков S-слоя возбудителя чумы». Методическое пособие одобрено Ученым Советом Рос-НИПЧИ «Микроб» (протокол № 7 от 02.10.98 г) и утверждено директором института. Полученные в результате работы новые данные о структуре и функциях S-слоев прокариот используются на курсах специализации и усовершенствования врачей и биологов в институте «Микроб» при чтении лекций по общей микробиологии в разделе «Надоболочные структуры бактериальных клеток». Методы определения гликопроида S-слоя были использованы в лаборатории прикладной генетики РосНИПЧИ «Микроб» для идентификации ряда поверхностных структур.

Апробация работы. Материалы, изложенные в диссертации, были представлены и обсуждались на: научной конференции, посвященной 100-летию противочумной службы России, Саратов, 1997; Российской научной конференции по электронной микроскопии, п. Черноголовка, 1998; Второй Всероссийской конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс», Саратов, 1998; Международной научно-практической конференции «Проблемы санитарно-эпидемиологической охраны территории стран СНГ», Саратов, 1998; 70 м Международном конгрессе по иерсиниозам, Нидерланды, Нижмеген [Nijmegen], 1998; Международной конференции «Оптическая микроскопия BIOS'98», Швеция, Стокгольм, 1998; научной конференции, посвященной 70-летию НИИ МО РФ, Киров, 1998 — Международной научной конференции посвященной 70-летию НПО «Питательные среды», Махачкала, 1998.

Публикации. Основное содержание диссертации отражено в 10 опубликованных работах.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Результаты обнаружения у чумного микроба поверхностных структур, относящихся к S-слоям прокариот и их электронномикроскопическая характери стика.

2. Разработанные оптимальные методы выделения, концентрирования и финальной очистки молекул 8-слоя чумного микроба.

3. Результаты изучения химического состава, антигенных свойств, биохимических, биофизических и физиологических функций гликопротеида 8-слоя чумного микроба.

4. Предложенный комплекс методов выявления и количественного определения молекул 8-слоя чумного микроба с помощью иммуноферментных и имму-носуспензионных реакций.

5. Новые данные о структуре полисахаридного антигена чумного микроба РЗ и его взаимоотношениях с 8-слоем чумного микроба.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов и списка использованных источников. Объем диссертации 160 страниц машинописного текста.

Список литературы

содержит 125 отечественных и 171 иностранных источников. Работа иллюстрирована 24 рисунками, 2 схемами и 8 таблицами.

выводы.

1. Впервые получены данные о наличии у чумного микроба поверхностного гликопротеидного S-слоя, формирующего над оболочкой регулярную пластинчатую структуру с однотипными порами, связанного двухвалентными катионами с внешней мембраной, способного к ресорбции, несущего функции адгезии к поверхностям и биомолекулам, защищающего клетки от внешних воздействий.

2. Синтез S-слоя детерминирован хромосомой, носит конститутивный характер, идентичен у Rи S-форм клеток, линейно связан с ростом бактерий, белок экскретируется в среду культивирования. S-слой — самостоятельный антиген чумного микроба, выявляемый также у бактерий Y. pseudotuberculosis I-VI сероваров, но не Y. enterocolitica и других видов бактерий семейства Enterobacteriacea.

3. Разработана схема выделения и очистки молекул S-слоя, включающая: гидродинамический смыв с поверхности клеток или осаждение из среды роста, многократную ресорбцию на отмытые клетки с помощью ионов Са2+, гель-хроматографическое отделение от других белков.

4. Белок S-слоя чумного микроба представляет собой гликопротеид с мол. массой полимера 240 кДа, с соотношением белковой и углеводной части 3:1, состоящий из двух белковых субъединиц с мол. массой 58 и 23 кДа и углеводов: глюкозы, галактозы и рибозы.

5. Электронномикроскопическое исследование с помощью трансмиссионной и сканирующей туннельной микроскопии показало, что S-слой, в отсутствии капсулы, составляет самый поверхностный регулярный компонент оболочки чумного микроба, а структурированные кальцием конгломераты гликопро-теида содержат регулярные поры размером 6−7 нм. Локализация антигена подтверждена иммуноэлектронной микроскопией с антителами, меченными коллоидным золотом.

6. Б-слой экранирует гидрофобные структуры клетки чумного микроба, повышает электрокинетический потенциал, обеспечивает адгезию, проявляя лек-тиноподобные свойства и являясь одним из рецепторов бактерий к фибриногену. 8-слой снижает способность макрофагов к фагоцитированию клеток, обеспечивает повышение устойчивости чумных бактерий к осмотическому давлению, действию протеаз и поверхностно-активных веществ.

7. Препараты гликопротеида, вакцинные и вирулентные штаммы чумного микроба индуцируют в организме лабораторных животных образование антител к 8-слою в высоких титрах. Антиген обладает слабой протективной активностью, продлевает срок жизни иммунных белых мышей при их заражении вирулентным штаммом, выявляет иммуноаллергическую перестройку организма, вызванную противочумной вакцинацией.

8. Предложен комплекс методов количественного определения и идентификации компонентов 8-слоя, а также антител к нему в реакциях Дот-ИФА, латекс-агглютинации, в 8Б8-ПААГ электрофорезе и иммуноблотинге. В Дот-ИФА по Б-слою минимально выявляется 104 клеток чумного микроба и 108 клеток бактерий псевдотуберкулеза.

9. Показано, что антиген Р-3 представляет собой полисахаридный фрагмент 8-слоя чумного микроба, образующийся при гидролизе полимерной молекулы в кислой среде при фракционировании культуральной жидкости методом изо-электрической преципитации. Антиген имеет размеры 45 кДа, содержит галактозу, глюкозу, ксилозу, рибозу и глюкуроновую кислоту, термостабилен и устойчив в кислой среде. В Дот-ИФА по Р-3 антигену минимально выявляется.

4 8.

10 клеток чумного микроба и 10 клеток псевдотуберкулезного микроба.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Данная работа была посвящена исследованиям по выявлению структур, относящихся к S-слоям, у бактерий чумы. Согласно литературным данным, многочисленные морфологическими, химическими и биофизическими исследованиями было показано, что S-слои микроорганизмов представляют собой наиболее простой тип биологической мембраны, сформировавшийся в процессе эволюции (Sleytr U.B., 1997). Функциональная роль этих структур разнообразна, у патогенных микроорганизмов S-слои могут являться факторами вирулентности (Beveridge T. J, 1997). Помимо своей важности для фундаментальных исследований структуры, синтеза, строения, функций и эволюционных отношений, S-слои имеют значительный биотехнологический потенциал. S-слои на практике используются как иммобилизирующие матриксы, как аффинные носители, как элементы фильтрационных систем и биосенсоров. Определение гомологичных последовательностей субъединиц S-слоя патогенных видов могло бы привести к разработке вакцин из пептидных субъединиц. Для понимания особенностей биосинтеза, структурной организации и функциональной роли S-слоев представляется необходимым более углубленное их изучение. В связи с вышеизложенным, очевидна актуальность исследований по выявлению и изучению структур, относящихся к S-слоям, у бактерий чумы.

В ходе наших исследований, наиболее четкие результаты были получены на бесплазмидных штаммах Y. pestis КМ 218 (R-форма ЛПС) и Y. pestis EV 1 IM (S-форма ЛПС), полученных на основе вакцинного штамма Г. pestis EV НИИ-ЭГ. Выбор штаммов был обусловлен необходимостью исключить на этапе скрининговых исследований влияние поверхностных белков, детерминируемых плазмидами, а также выяснить обладают ли белки S-слоя чумного микроба ЛПС-специфичностью, подобно S-слоям ряда грамотрицательных патогенных бактерий. В дальнейшем с использованием разработанной нами методики получения S-слоя чумного микроба, данная структура была выделена с поверхности клеток всей изогенной системы штаммов, полученных из EV. Бактериаль.

125 ную биомассу, полученную на стационарной фазе роста, щадяще отмывали от компонентов среды, затем клетки подвергали гидродинамическому стрессу дистиллированной водой с помощью вихревого смесителя. Преимущество нашего методического подхода по сравнению с методами выделения Б-слоев из ультразвуковых дезинтегратов клеток детергентами с последующей очисткой путем гель-хроматографии заключается в том, что с его помощью выделяются только поверхностные структуры, тогда как сами клетки остаются неразрушенными. Таким образом резко сокращается количество балластных веществ, что I значительно облегчает последующее выделение искомого антигена.

Основываясь на полученных данных о кинетике синтеза изучаемых белков, прежде всего о их наличии в культуральной жидкости, а также на биохимических данных об изоточке «8» белка при рН 4,0 и его способности преци-питировать в 50% растворе сульфата аммония, разработана методика выделения компонентов 8-слоя из культуральной жидкости при помощи осаждения сульфатом аммония и в изоточке. Для аффинной очистки белка 8-слоя предложено использовать его специфическую способность адсорбироваться на клетках собственных бактерий в присутствии двухвалентных катионов.

Учитывая поверхностное расположение изучаемого антигена, а также его достаточно высокую иммунохимическую активность, в ходе наших исследований были разработаны методы качественного и количественного учета данного антигена и антител к нему с помощью иммунохимических реакций, таких как дот-ИФА, рекция латекс-агглютинации, РА на стекле, РПГА.

Полученный нами «8» антиген является гликопротеидом, соотношение между углеводной и белковой частью которого -1:3 (по тесту с тимоловым реактивом). Синтез белка детерминируется хромосомными генами, поскольку его присутствие не зависит плазмидного состава клетки. 8Э8-Электрофорезом в ПААГ показано наличие в препарате двух субъединиц с мол. массой около 58 и 23 кДа. Иммуноблоттингом установлено, что независимо от температуры культивирования (28 и 37°С) обе эти субъединицы были иммунореактивны. При.

126 гель-хроматографии на сефадексе G-200 Superfine или сефакриле S-300 Superfine, с дистиллированной водой в качестве элюирующего буфера, препарат выходил за свободным объемом в первом пике, что свидетельствует о большой молекулярной массе цельного (нативного) препарата. Дальнейшие исследования позволили определить его молекулярную массу, которая составила около 240 кДа. Анализ моносахаридного состава «S» белка методом ТСХ позволил установить наличие в его углеводной части следующих Сахаров: глюкозы, галактозы и рибозы, в составе препарата изучаемого антигена, выделенного из культуральной жидкости, регистрировались также глюкуроновая кислота и ксилоза.

Электронномикроскопические исследования показали, что в присутствии.

2+ ионов Са белок формировал на поверхности клеток значительный наружный слой, кроме того, изолированный белок образовывал паракристаллические пластинчатые структуры с размером пор 6−7 нм. Сканирующей туннельной электронной микроскопией было показано значительное отличие клеточных поверхностей штамма Y. pestis EV и бесплазмидного производного — Y. pestis КМ 218. Иммуноэлектронным анализом было подтверждено присутствие «S» белка именно на поверхности клетки, как бесплазмидного, так и родительского штамма. В последнем случае, при культивировании Ypestis EV при 37 °C было показано отношение S-слоя и капсулы, а именно независимость этих структур и расположение S-слоя непосредственно между клеткой и капсулой, с частичным экранированием его капсульным веществом.

Установлена зависимость процесса ресорбции изучаемого гликопротеида на клетки собственных бактерий от присутствия в среде двухвалентных катионов, что также является функциональной характеристикой S-слоев. Изучение специфичности вторичного прикрепления гликопротеида на клетки показало, что тип ЛПС (Sили R-форма) не влияет на процесс ресорбции в отличие, например, от белка S-слоя клеток Campylobacter fetus (Yang L., 1992).

Показано влияние исследуемого гликопротеида на формирование заряда оболочки клеток, их гидрофобность и способность к адсорбции к стандартным поверхностям. Так, в процессе отмывки клеток от S-белка их поверхностный заряд понижался. «S» «- клетки проявляли большую гидрофобность по сравнению с «S+» — вариантами, что было показано в солевом агглютинационном тесте (с сульфатом аммония) и в тесте адгезии к углеводородам (с n-октаном). Исследуемый белок проявлял лектиноподобные свойства, агглютинируя нативные эритроциты кролика в концентрации 16−8 мкг/мл, причем эта агглютинация подавлялась рамнозой и дульцитом. «S+» — клетки имели индекс специфического связывания с фибриногеном в 3−4 раза выше, чем «S'''-клетки. Была установлена способность изучаемого гликопротеида защищать клетки от ряда протеаз и детергентов. Морфометрическим и турбидиметрическим анализом показано, что «S'''-клетки на много более чувствительны к действию разрушающих бактериальную оболочку веществ, чем исходные (интактные) и «S+» — клетки. Показано участие гликопротеида в защите клеток от фагоцитирующего действия макрофагов. В частности, индекс завершенности фагоцитоза «S'''-клеток был выше, чем «S+» и интактных клеток, как у бесплазмидного, так и у родительского штамма.

Иммунохимическим анализом установлено, что полученный белок не имеет общих антигенных детерминант с известными антигенами чумного микроба: капсульным, «мышиным» токсином, фибринолизином, пилями адгезии, основным соматическим. Перекрестную реакцию антисыворотка к исследуемому препарату давала с ЛПС чумного микроба, но после истощения сыворотки чистым ЛПС перекрестная реакция исчезала. При исследовании специфичности полученной к препарату сыворотки наблюдалась перекрестная реакция с клетками Yersinia pseudotuberculosis (серотипы I-VI), тогда как с клетками-Yersinia enterocolitica, а также с другими видами семейства Enterobacteriaceae {Klebsiella pneumoniae, Shigella sonnei, Sh. Flexneri, Salmonella typhi abdom, S. paratyphi, Esherichia coly) перекрестной реакции не наблюдалось. Полу.

128 ченные данные свидетельствуют о том, что белок S-слоя чумного микроба не является видоспецифичным антигеном. Перекрестная реакция с клетками возбудителя псевдотуберкулеза в значительно меньших концентрациях, чем с клетками чумного микроба, может свидетельствовать не только о значительном сходстве, но и о структурном отличие составляющих S-слоев этих микроорганизмов.

Дот-иммуноанализ с истощенной ЛПС антисывороткой (рабочий титр 1:10 000) выявлял белок S-слоя в концентрации 5 мкг/мл, клетки У. pestis всех штаммов изогенной по плазмидному составу системы в концентрации 104 м.к./мл, а клетки У. pseudotuberculosis в концентрации 108 м.к./мл.

Введение

гликопротеида S-слоя лабораторным животным вызывает появление антител, но слабо защищает белых мышей от последующего заражения вирулентным штаммом чумного микроба. У неиммунных (контрольных) белых мышей, погибших от чумы, регистрировались антитела к препарату S-слоя. Во всех исследованных нами чумных сыворотках экспериментальных и коммерческих серий (более 90 образцов) регистрировались антитела к полученному нами белку S-слоя. Было показано, что данный антиген выявляет в кожной пробе иммунологическую перестройку организма морских свинок.

Данные о структуре и функциях полученного гликопротеида позволяют отнести его к S-слою чумного микроба. Участие изучаемого антигена в связывании клеток У. pestis с клетками и белками макроорганизма, а также его способность защищать бактерии от неблагоприятных факторов среды позволяет предположить его значение в проявлении вирулентных свойств возбудителя и обеспечении устойчивости во внешней среде.

Были получены новые данные о природе и свойствах антигена Р-3 (пик 3 или полисахарид 3), который представляет собой полисахарид с изоэлектриче-ской точкой рН 1,8 и мол. массой около 45 кДа. Углеводы в его составе представлены глюкозой, глюкуроновой кислотой, рибозой, ксилозой, а также характерно большое количество галактозы. Антиген Р-3 является кислотоустойчевым и термостабильным. Показано, что длительное хранение Р-3 антигена в чистом виде, а также в виде общего преципитата из культуральной жидкости, полученной при масштабном культивировании вакцинного штамма в аппарате АКМ-Ш, при низкой температуре, также в течение месяца при комнатной температуре, не вызывало изменений в свойствах антигена. Р-3 антиген не дает перекрестных реакций с известными, в том числе углеводсодержащими, антигенами чумного микроба (ЛПС и ОСА), являясь иммунохимически самостоятельным антигеном. Хотя необходимо отметить наличие перекрестной реакции с относительно большими концентрациями белка S-слоя в дот-ИФА. В РДП с сывороткой к Р-3 антигену было выяснено, что все используемые в работе штаммы чумного микроба, независимо от плазмидного состава и температуры культивирования имели этот антиген. Штаммы Y. pseudotuberculosis I-VI cepo-типа давали перекрестную реакцию с Р-3 антигеном, контрольные энтеробактерии не давали положительных реакций с сывороткой к данному антигену. i.

Было установлено, что при постановке кожной пробы Р-3 антиген способен выявлять иммунологическую перестройку вакцинированного против чумы организма морских свинок.

Основываясь на полученных данных о биохимическом строении и имму-нохимических свойствах «S» белка и Р-3 антигена, было сделано предположение о том, что последний может представлять собой полисахаридную часть первого, либо быть с ней связанным. Идентичность моносахаридного состава обоих антигенов заставила нас провести их серологическую идентификацию. Для этого использовали Дот-ИФА с сыворотками, полученными к обоим антигенам. Результаты исследований позволили с большой долей уверенности говорить о том, что Р-3 антиген является составной частью гликопротеида S-слоя чумного микроба, а именно, углеводным его компонентом, образующимся в кислой среде при фракционировании культуральной жидкости в изоточке.

В работе также были показаны возможности прикладного использования белков Б-слоя чумного микроба, в частности, для формирования полупроницаемых мембран с определенными пределами исключения биомолекул.

Полученные в работе данные представляют научный и практический интерес, поскольку впервые было показано наличие у чумного микроба надо-болочечной структуры, которая обладает всеми основными свойствами 8-слоев микроорганизмов.

Показать весь текст

Список литературы

  1. О.Я., Темиралиева Г. А., Канатов Ю. В. и др. Получение и характеристика чумного антительного моноклонального эритроцитарного диагно-стикума // Механизмы формирования иммунитета к ООИ. Саратов. — 1986. -С.8−18.
  2. А.П., Маркова В. Ю. Феномен изменчивости антигенной специфичности капсулы Yersinia pestis II Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. Саратов. — 1997. — Т.2. — С.4−5.
  3. П.И., Можаров О. Т., Шведун Г. П., Савостина Е. П. Генетические элементы патогенности и молекулярные механизмы фенотипического выражения вирулентности иерсиний // Проблемы ООИ. Саратов. — 1993, № 1−2 (7172). — С.57−66.
  4. П.И., Попов Ю. А., Кокушкин A.M. Перспективы исследований в микробиологии чумного микроба с использованием методов генной инженерии // Миробиология, лаб. диагностика и специфич. профилактика карантинных инфекций. Саратов. — 1989. — С.3−12.
  5. П.И. Вклад исследований по генетике возбудителя чумы в разработку методов лабораторной диагностики // Лаб. диагностика и генетика вирулентности возбудителей ООИ. Саратов. — 1990. — С.3−7.
  6. Л.Е., Мишанькин М. Б., Гончаров Е. К., Шевченко Л. А. Некоторые особенности действия «мышиного» токсина и фракции I Yersinia pestis на клетки чувствительных к чуме животных // БЭБиМ. 1995. — N 2. — С. 193−195.
  7. H.A., Северина Л. О., Головачева P.C., Митюшина Л. Л. Поверхностные слои экстремально термоацидофильных архебактерий рода Sulfurococcus II Микробиология. 1990. — Т.60. — Вып.6. — С.90−94.
  8. Безопасность работы с микроорганизмами 1-Й групп патогенности: Санитарные правила СП 1.2.011 94. — М.: Информационно-издательский центр Госкоманэпиднадзора России. — 152 е.
  9. А.Г., Филиппов A.A., Проценко O.A., Кутырев В. В. Перестройки оперона капсулопродукции, приводящие к Рга^фенотипу // Материалы науч.134практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. Саратов. — 1997. — Т.2. — С.15.
  10. А.Г., Филиппов A.A. Структурный анализ плазмид калыдийзависи-мости возбудителей чумы и псевдотуберкулеза // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. Саратов. — 1997. — Т.2. -С.14.
  11. В.А. Физико-химические свойства клеточной поверхности бактерий рода Azospirillum: цитохимический и электрооптический анализ./ Авто-реф. дис.к.б.н., Саратов, 1995. 20 е.
  12. Е.Г., Кириллина O.A., Попов Ю. А. Экспрессия плазмиды пести-циногенности и ее Tn-производных в миниклетках кишечной палочки и в системе бесклеточного синтеза // Микробиология, иммунология и биохимия ООИ. -Саратов. 1987. — С. З 5−41.
  13. Е.Г., Ракин A.B., Хиземан Юрген. Структурно-функциональная организация Pst-области Yersinia pestis II Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. Саратов. — 1997. — Т.2. — С.18−19.
  14. Е.Г. Генетическая детерминированность гемолитической активности возбудителя чумы // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. Саратов. — 1997. — Т.2. — С. 17−18.
  15. A.A., Дармов И. В., Евстигнеев В. И. Антиген, защищающий морских свинок от экспериментальной чумы // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. Саратов. — 1997. — Т.1. — С. 192 193.
  16. A.A., Паутов В. Н., Чичерин Ю. П. и др. Эффективность ревакцинации павианов гамадрилов чумной живой сухой вакциной НИИС и фракцией 1 чумного микроба // ЖМЭИ. 1984. — N 4. — С. 74−76.
  17. Вакцина чумная живая сухая / Регламент производства № 702−97 Срок действия до 16.12.2002 г.135
  18. Г. И., Пустовалов В. Л., Тараиова В. Н. Оценка «латентной» вирулентности вакцинных штаммов чумного микроба по степени завершенности фагоцитоза // Проблемы ООН. Саратов. — 1979. — Вып.5. — С.52−55.
  19. Г. И., Пустовалов В. Л. Фагоцитарная активность макрофагов морских свинок, иммунизированных антигенами FIA, FIB, водно-солевым экстрактом и живой чумной вакциной EV // Проблемы ООП. Саратов. — 1977. -Вып.6(58). — С.34−40.
  20. В.И., Гусева Н. П., Ананьев В. В., Самыгин В. М. Липид препаратов капсульного антигена чумного микроба // Микробиология, лаб. диагностика и специфич. профилактика карантинных инфекций. Саратов. — 1989. — С.90−92.
  21. В.И., Лупикова Н. И., Ерохин Е. П., Лукин Ю. В. Латексный чумной антигенный фибриногеновый диагностикум // Актуальные проблемы и задачи биохимии, диагностики и иммунопрофилактики ООП. Саратов. — 1991. -С.33−37.
  22. В.И., Палагин А. Ю., Булгакова Е. Г., Попов Ю. А. Выделение и очистка фибринолизина возбудителя чумы // Микробиология, биохимия и специфич. профилактика карантинных инфекций. Саратов. — 1990. — С.44−48.
  23. В.И., Тараненко Т. М., Наумов A.B. Антигены возбудителя чумы: функция, выделение, структура // Актуаль. проблемы и задачи биохимии, диагностики и иммунопрофилактики ООН. Саратов. — 1991. — С.3−11.
  24. Л.Н., Белобородов P.A., Кокушкин A.M. К патогенезу и морфологии чумы при алиментарном заражении животных штаммом, лишенным pPst // Проблемы ООН. Саратов. — 1994, № 5 (75). С.75−84.
  25. H.A., Филиппов A.A., Кутырев В. В. и др. Экспрессия белков гибридными плазмидами, содержащими фрагменты pCad чумного микроба // Лаб. диагностика и генетика вирулентности возбудителей особо опасных инфекций.- Саратов. 1990. — С.84−91.
  26. С.О., Атарова Г. Т., Олейников И. П. и др. Фибронектин связывающая способность Yersiniapestis IIЖМЭИ. 1993. — N 3. — С. 6−12.
  27. С.О., Мишанькин Б. Н. Пили адгезии у Yersinia pestis II ЖМЭИ.- 1985.-N 6.-С. 13−17.
  28. С.О., Попова Г. О., Васильева Г. И., Мишанькин Б. Н. Феномен пилеобразования при взаимодействии Yersinia pestis с макрофагами экспериментальных животных // ЖМЭИ. 1990. — N 3. — С. 3−6.136
  29. A.JI. Плазмиды и мобильные генетические элементы патогенных бактерий рода Yersinia II Генетика. 1987. — T. XXIII, N 4. — С.581−595.
  30. Т.А., Степаншина В. Н., Негрий В. Ф. и др. Сравнительная характеристика препаратов капсульного антигена FI Yersinia pestis, полученных из штаммов-продуцентов с различной структурой липополисахаридов // ЖМЭИ. 1994, N 3. — С.10−14.
  31. A.B., Барабаш Г. П. «Основной» соматический антиген или антиген, полученный по методу Буавена-Месробеану из Yersinia pestis // ЖМЭИ. -1985.-N3.-С. 108−115.
  32. Н.П., Тараненко Т. М., Наумов A.B., Коннов Н. П. Эффективное включение основного соматического антигена чумного микроба в липосомы // Проблемы ООИ. Саратов. — 1994, N 5. — С.159−166.
  33. С.М., Белобородов P.A., Сероглазое В. В. и др. Чумная химическая вакцина // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. Саратов. — 1997. — Т.1. — С.201.
  34. З.Л., Федорова В. А., Терешкина Н. Е. и др. К характеристике соматических полисахаридсодержащих антигенов чумного микроба // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. -Саратов. 1997. — Т.2. — С.32−33.
  35. И.И. Действие противочумной сыворотки на чумной микроб в пробирке и в организме животного: Автореф. дис.. к.м.н.- Саратов. 1958. -21 е.
  36. Д. Применение методов физики поверхностей в иммунологии// В кн. «Иммунология. Методы исследований». Под ред. Лефковитса И., ПернисаБ. М.: Мир, 1983. — С. 122−159.
  37. И.В. Очерки патогенеза чумы. М.: Медицина, 1966. 272 с.
  38. И.В. Чума: современное состояние, гипотезы, проблемы. -Саратов: Саратовский мед. ин-тут. 1993. — 129 е.
  39. И.Г., Ежов И. Н., Самойлова С. В. и др. Оценка биологических свойств бескапсульных вариантов возбудителя чумы // Проблемы ООИ. Саратов. — 1993, № 1−2 (71−72). — С. 154−159.
  40. А.Г., Воронцов Е. Д., Сердобинцев Л. Н. и др. Некоторые особенности белок-белковых взаимодействий в молекулах капсульного антигена чумного микроба // Микробиология, иммунология и биохимия ООИ. Саратов. -1987. -С.41−45.
  41. А.Г., Сердобинцев Л. Н., Воронцов Е. Д. и др. Иследование процессов диссоциации-ассоциации капсульного антигена чумного микроба // Иммунология и специфич. профилактика карантинных инфекций. Саратов. -1986. -С.99−105.
  42. Л.А. Развитие методологии иммуноанализа почвенных ассоциативных бактерий с использованием препаратов коллоидного золота / Автореф. дис.. к.б.н. Саратов. — 1996. — 20 с.
  43. И.А. Разработка новых технологий экспериментального и производственного аппаратного культивирования чумного микроба : Автореф. дисс. доктора мед. наук.- Саратов, 1992, — 42 с.
  44. И.А. Поверхностные белковые S-слои Yersinia pestis и перспективы их практического использования// Тез. Докл. VII Съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, — Москва, 1997.- С. 195 196.
  45. И.А., Тараненко Т. М. Изучение структуры некоторых антигенов чумного микроба методом инфракрасной спектроскопии // Профилактика и меры борьбы с чумой. Тез. докл. науч. конф. посящ. 100-летию открытия возбудителя чумы.- Алматы. 1994. — С. 91−92.
  46. И.А., Филиппов А. Ф., Тараненко Т. М., Космаенко О. М. Иммуно-химические свойства полисахаридного антигена чумного микроба Р-3 // Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций. Саратов. — 1993. — С.25−26.
  47. И.А., Филиппов А. Ф., Терентьев С. А. Роль поверхностных клеточных структур чумного микроба в адгезии // Актуальные проблемы и задачи биохимии, диагностики и иммунопрофилактики ООИ. Саратов. — 1991 а). -С.12−18.
  48. И.А., Филиппов А. Ф. Взаимодействие чумного микроба с фибриногеном // Микробиология, биохимия и специфич. профилактика карантинных инфекций. Саратов. — 1990. — С.9−16.
  49. Е.П., Лукин Ю. В., Радченко О. В. и др. Метод пассивной агглютинации полимерных частиц для диагностики болезни легионеров // Современные направления создания медицинских диагностикумов. Под ред. Василова Р. Г.:М. 1990.-С.97.139
  50. Инструкция по применению диагностикума латексного для выявления Иер-синий псевдотуберкулеза иммуноглобулинового, жидкого. ВФС 42−345 ВС-92. — 1992.
  51. .М., Сулейменов Б. М. К вопросу об антибактериальных свойствах иммунных сывороток при чуме // Иммунология и специфич. профилактика ООИ Саратов. — 1986. — С.25−32.
  52. A.M. Трансформирующая активность плазмид чумного микроба: Дис.. канд. мед. наук. Саратов, 1983. — 183 с.
  53. A.M. и др. Зависимость интенсивности бактеримии животных от наличия плазмид у бактерий чумы // Проблемы ООИ. Саратов. — 1994, № 6 (76). — С.94−102.
  54. A.M. О способности чумного микроба реализовать различные механизмы передачи инфекции // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. Саратов. — 1997. — Т.2. — С.67−68.
  55. Н.П., Анисимов П. И., Синичкина A.A. Субмикроскопическая структура клеточной стенки возбудителя чумы // Пробл. ООИ. Саратов, 1975. — Вып. 1(41). — С.78−82.
  56. Н.П., Демченко Т. А., Венгеров Ю. Ю. и др. Иммуноэлектронно-микроскопическое исследование антигенов чумного микоба // Микробиология и биохимия ООИ. Саратов, 1988. — с.28−35.
  57. Н.П., Дятлов И. А., Антонова O.A., Волков Ю. П. Электронно-микроскопическое изучение S-слоев чумного микроба // Тез.докл. XVII Российской конф. по электронной микроскопии. Черноголовка. — 1998. — е.257.
  58. Н.П. Атлас ультраструктуры возбудителя чумы и его переносчика блохи Xenopsylla cheopis., Саратов. — 1989. — 134 е.
  59. Н.П. Ультраструктурно-функциональный анализ чумного микроба //Проблемы ООИ. Саратов. — 1995, № 1 (77). — С. 135−149.
  60. Е.И. К вопросу о действии противочумной сыворотки на чумной микроб. Саратов. — 1951. — Рукопись.140
  61. Н.П. Функции лектинов в клетках: Итоги науки и техники. М.:ВИНИТИ. — 1984. — Т.1. — 349 е.
  62. Л.М. Сравнительное изучение фагоцитарной активности перитонеальных и альвеолярных макрофагов в отношении штаммов чумного микроба // Механизмы формирования иммунитета к ООИ. Саратов. — 1986. — С.22−32.
  63. В.В., Попов Ю. А., Проценко O.A. Плазмиды патогенности чумного микроба // Мол. генетика, микробиология и вирусология. 1986, N 6. — С. З-11.
  64. В.В. Успехи и перспективы в изучении возбудителя чумы // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. -Саратов. 1997.-Т.2.-С.72.
  65. Лабораторное руководство по хроматографии и смежным методам / Под ред. О.Микеш. М.:Мир, 1982. 4.2. — 381 е.
  66. С.А. Генетические исследования возбудителей чумы и псевдотуберкулеза // Молек. биол. и микробиология природно-очаговых инфекций. -Саратов. 1986. — С.40−49.141
  67. М.Д., Панасюк E.H., Луцик А. Д. Лектины. Львов: Вища школа. — 1981. — 156 е.
  68. М.П., Базанова Л. П., Коннов Н. П. и др. Изменчивость Yersinia pestis в организме блохи // ЖМЭИ. 1994, N 3. — С. 16−21.
  69. Л.С., Тараненко Т. М., Девдариани З. Л., Исупов И. В. Морфологическая характеристика действия ЛПС чумного микроба на организм мышей // Проблемы ООИ. Саратов. — 1993, N 3 (73). — С.147−157.
  70. A.B., Борисова Н. П., Кирилличева Г. Б. Белки периплазмы чумного микроба, выделяемые с помощью осмотического шока // Лаб. диагностика, биохимия и специфич. профилактика чумы и холеры. Саратов. — 1986. — С. 1924.
  71. A.B., Ледванов М. Ю., Дроздов И. Г. Иммунология чумы. Саратов, 1992.-172 с.
  72. Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. -М.:Наука, 1985.-536с.142
  73. Ю.А., Куличенко А. Н., Анисимов П. И. Разработка молекулярно-генетических подходов для детекции и идентификации возбудителя чумы // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. Саратов. — 1997. — Т.2. — С.106−107.
  74. O.A., Анисимов П. И., Можаров О. Т. и др. Выявление и характеристика плазмид чумного микроба, детерминирующих синтез пестицина 1, антигена фракция 1 и экзотоксина «мышиного» токсина // Генетика. 1983. — Т. 19.-N7.-С. 1081−1090.
  75. O.A., Кузьмиченко И. А., Кутырев В. В. и др. Генетический контроль синтеза фосфолипазы D Yersinia pestis 11 Генетика. 1994. — Т. 30. — Приложение. — С. 128.
  76. И.Е., Трауб JI.A. Применение реакции агломерации на стекле для экспресс-анализа чумы // Биотехнология, иммунология и биохимия ООП. Саратов. — 1989. — С. 107−107.
  77. Пустовалов B. JL, Васильева Г. И., Киселева А. К., Дорошенко Е. П. Методические рекомендации по применению индекса завершенности фагоцитоза для оценки иммуногенности субкультур вакцинного штамма чумного микроба EV НИИЭГ. Ростов-на-Дону, 1986. — 7с.
  78. В.П., Семенов Б. Ф., Зезеров Е. Г. Стандартизация методов вирусолдогических исследований. М.: Медицина. — 1974. — 168 е.
  79. П.Ф. Биологическая статистика.- Минск: Высшая школа, 1973.320 с
  80. JI.B., Пионтковский С. А., Овсянников В. И. Значение температурного фактора в выявлении фракции I чумного микроба in vitro II Микробиология, лаб. диагностика и специфич. профилактика карантинных инфекций. -Саратов. 1989. — С.49−53.
  81. Сборник инструкций по общим методам контроля стерильности, физико-химических свойств, пирогенности, на отсутствие контаминирующих агентов и токсичности медицинских иммунобиологических препаратов. М. — 1983. — С.52−53.143
  82. JI.О., Сенюшкин А. А., Каравайко Г. И. Структура и химический состав представителей рода Sulfobacillus II Микробиология. 1995. — Т.64, N 3.-С. 336- 340.
  83. Л.О. Бактериальные S-слои // Микробиология. 1995. — Т.64, N 6. — С.725−733.
  84. Л.Н., Карпунина Л. В., Коннов Н. П. и др. Изучение гемагглю-тинирующей активности препаратов капсульного белка чумного микроба // Биотехнология, иммунология и биохимия ООИ. Саратов. — 1989. — С.25−31.
  85. Р. Методы очистки белков. М.:Мир, 1985. — С.337−350.
  86. К.К. Разработка средств измерения дзета-потенциала бактерий амплитудно-частотным методом // Физико-химические исследования патогенных энтеробактерий в процессе культивирования. -Иваново.- 1979.-С.81−98.
  87. Е. В., Кравцов Э. Г., Воробьев А. А. Рецепторы, обеспечивающие фиксацию Staphylococcus aureus на фибронектинсодержащих поверхностях // ЛПУЕ.-1989.-110.-N.17−21.
  88. В.Н., Гремякова Т. А., Потапов В. Д., Анисимов А. П. Физико-химическая и биологическая характеристика рНб-антигена Yersinia pestis выделенного иммуносорбционным методом // ЖМЭИ. 1993, № 3. — С. 12−17.
  89. Н.Ю., Емельянова Н. В., Дроздов И. Г. и др. Влияние штаммов и антигенов чумного микроба на кислородный метаболизм фагоцитирующих макрофагов и продукцию интерлейкина-1 // Проблемы ООП. Саратов. — 1993, № 1−2 (71−72). — С. 104−112.
  90. Т.М., Ермакова Г. В., Андреева И. П. и др. Структурно-функциональное изучение гликолипидного токсина чумных и псевдотуберкулезных иерсиний // Микробиология, биохимия и специфич. профилактика карантинных инфекций. Саратов. — 1990. — С.49−51.
  91. М.М., Новохатский A.C., Коссе JI.B. и др. Новые данные по характеристике препарата FIA капсульного антигена возбудителя чумы // Вестник Всесоюзного микробиологического общества (Ростовское отделение). -1989.-Вып. 1.-С. 118−123.
  92. В.И., Кравцов А. Н., Демидова Г. В., Зюзина В. П. Токсин чумного микроба и его структурно-функциональная организация (гипотеза) // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. Саратов. — 1997. — Т.2. — С.138.
  93. . Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир. -1975.-324 е.
  94. В.А., Девдариани З. Л., Солодовников Н. С. и др. Иммунохимиче-ская идентичность фибринолизина и плазмокоагулазы чумного микроба // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию образов. ПЧ службы России. -Саратов. 1997. — Т.2. — С. 139.
  95. Л.М., Зубов В. П., Терентьева Е. А., Мартьянов Б. М. Приготовление IgG диагностикума на основе окрашенных полиакролеиновых латексов для применения в реакции латексной агглютинации // ЖМЭИ. 1990, № 6. — С.84−88.145
  96. А.Ф., Николаев Н. И., Пономарев Н. Г., и др. Сравнительное изучение иммуногенности фракции I чумного микроба и чумной живой вакцины для морских свинок // Проблемы особо опасных инфекций. Вып. 4 (32). — Саратов, 1973.-С. 57−61.
  97. П.А., Михайлова Т. Г., Каримова Г. А. и др. Клонирование и детальное картирование FRA-YMT-области плазмиды pFra Y.pestis // Мол.генет., микробиол. и вирусол. 1991. — N.12. — С. 19−26).
  98. А.А. Мембранные белки чумного микроба: итоги и перспективы исследований// Матер, межгосударств, науч. конф. «Профилактика и меры борьбы с чумой» (6−7 сентября 1994, г. Алматы).- Алматы.- 1994.- С. 159.
  99. А.А., Дробышева Т. Н., Заднова С. П. и др. Значение 22кДа полипептида клеточной стенки в иммуногенезе к чумному микробу // Тез. докл. Всесоюз. симпозиума «Химия белков"(21−26 мая 1990 г., Тбилиси). Пущино. — 1990.-С.83.
  100. Anisimov A. P., Dyatlov I. A. A novel mechanism of antibiotic resistance in plague? // J. Med. Microbiol. 1997. — V. 46. — P. 887−889.
  101. Anisimov A.P. A novel mechanism of antigenic variation, which aids bacterial pathogens, including Yersinia pestis, to evade host defences // 4th Sohn Humphrey advanced summer programme in immunology. 1998. — Pushchino. — P.l.
  102. Austin J.W., Murray R.G.E. Isolation and in vitro assembly of the components of the outer S-layer of Lampropedia hyalina II J.Bacteriol. 1990. — Vol.172, N 7. -P.3681−3689.
  103. Austin J.W., Stewart M., Murray R.G.E. Structural and chemical characterization of the S-layer of a Pseudomonas-Yike bacterium // J.Bacteriol. -1990. Vol. 172, N2. -P.808−817.
  104. Awram P., Smit J. The Caulobacter crescentus paracrystalline S-layer protein is secreted by an ABC transporter (type I) secretion apparatus // J. Bacteriol. 1998. -Vol. 180, N 12. — P.3062−3069.
  105. Bah 1 H., Scholz H., Chami M. et al. Molecular biology of S-layers // FEMS Microbiol. Rev. 1995. — Vol.20, N 1−2. — P.47−98.
  106. Baumeister W., Peters J. Tetrabrachion a new archaebacterial S-layer protein complex // 7th Int. Congress of Bacteriol. and Applied Microbiol. Division.- Prague, Czech Republic, July 3rd-8th, 1994. — P.59.
  107. Beveridge T.J., Powels P.H., Sara H., Kotiranta A. et al. Functions of S-layers // FEMS Microbiol. Rev. 1997. — Vol. 20, N 1−2. — P.99−149.
  108. Beveridge T.J. Occurence of S-layers // 7th Int. Congress of Bacteriol. and Applied Microbiol. Division.- Prague, Czech Republic, July 3rd-8th, 1994, — P.58.
  109. Beveridge T.J. Surface arrays on the wall of Sporosarcina urea II J. Bacteriol. 1979. -Vol. 139, N 3. P. 1039−1048.
  110. Bichowski-Slomnicki L., Ben-Evraim S. Biologycal activities in extracts of Pasterella pestis and their relation to the „pH 6 antigen“ // J.Bacteriol. 1963. -Vol.86.-P.101−111.
  111. Blaser M.J. Role of the S-layer proteins of Campylobacter fetus in serumresistance and antigenic variation: a model of bacterial pathogenesis // Amer. J. Med. Sci. 1993. — Vol.306, N 5. — P.325−329.
  112. Blawas A.S., Reichert W.M. Protein patterning // Biomaterials. 1998. — Vol. 19, N7−9. -P. 595−609.
  113. Bliska J.B., Guan K., Dixon J.E., Falkov S. Tyrosine phosphate hydrolysis of host proteins by an essential Yersinia virulence determinant // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1991. — Vol.88. — P. 1187−1191.
  114. Boy den S.V. The adsorption of protein on erythrocytes treated with tannic acid and subsequent hemmaglutination by antiprotein sera // J. exp. med. 1951.- V.93, N 2. — P.107−120.
  115. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Anal.Biochem. -1976. V.72. — P.248−254.
  116. Breitwieser A., Kupcu S., Howorka S., Weigert S. et al. 2-D protein crystals as an immobilization matrix for producing reaction zones in dipstick-style immunoassays // Biotechniques. 1996. — Vol. 21, N 5. — P.918−925.
  117. Brubaker R. R. Factors promoting acute and chronic diseases caused by Yersinia II Clin. Microbiol. Rev. 1991. — V. 4. — P. 309−324.
  118. Brubaker R.R. The Genus Yersinia: Biochemistry and Genetics of virulence // Current Top. Microbiol. Immunol. Berlin-Heidelberg. 1972. — V. 57. — P. 111−158.
  119. Burrows T. W. Virulence of Pasteurella pestis and immunogenicity to plaque // Ergebn. Mikrobiol. 1963. — V. 37. — P. 59−113.
  120. Callegari M.L., Riboli B., Sanders J.W., et al. The S-layer gene of Lactobacillus helveticus CNRZ 892: cloning, sequence and heterologous expression // Microbiology. 1998. — Vol. 144, Pt. 3. — P.719−726.
  121. Carniel E. Chromosomal virulence factors of Yersinia an update // Contributions to microbiology and immynology. 1995. — Vol. 13. — P.218−225.
  122. J.R., Berenguer J., Kocsis E., Carrascosa J.L. 3-Dimensional structure of different aggregates built-up by the S-layer protein of Thermus thermophilus // J. Struct. Biology. 1994. Vol.113, N 2, — P. 164−176.148
  123. Cavanaugh D.C., Randall R. The role of multiplication of Pasteurella pestis in mononuclear phagocytes in the pathogenesis of fleaborne plague // J. Immunol. -1959. -V. 83. P. 348−371.
  124. Cavard D., Lazdunski CI. Colicin cleavage by Omp T protease during both entry into and release from Escherichia coli cells // J.Bacteriol. 1990. — Vol.172, N 2. -P.648−652.
  125. Charnetzky W.T., Shuford W.W. Survival and growth of Yersinia pestis within macrophages and on effect of the loss of the 47-megadalton plasmid on growth in macrophages // J. Infect. Immun. 1985. — V. 47. — P. 234−241.
  126. Cherepanov P., Rosqvist R., Forsberg A. Regulation of pH6 antigen expression in Yersinia pestis II Medische Microbiologie (Nederlands Tijdschrift voor). 1998. -V. 6 (Suppl. II). — P. S8.
  127. Cusumano V., Tufano M.A., Mancuso G., Carbone M. et al. Porins of Pseudomonas aeruginosa induce release of tumor necrosis factor alfa and interleukin-6 by hyman leykocytes // Infection and immunity. 1997. — Vol.65, N 5.- P.1683−1687.
  128. Davies E.A., Falahee M.B., Adams M.R. Involvement of the cell envelope of Listeria monocytogenes in the acquisition of nisin resistance // J.Appl.Bacteriol. -1996. Vol.81, N 2. -P.139−146.
  129. Doig P., Emody L., Trust T.J. Binding of laminin and fibronectin by the trypsin-resistant major structural domain of the crystalline virulence surface array protein of Aeromonas salmonicida II J.Biol.Chem. 1992. — Vol.267, N 1. — P.43−49.
  130. Drozdov I.G., Anisimov A.P., Samoilova S.V. et al. Virulent non-capsulate Yersinia pestis variants constructed by insertion mutagenesis // J. Med. Microbiol. -1995.-V. 42. P. 264−268.
  131. Du Y., Cherepanov P., Forsberg A. Murine toxin of Yersinia pestis shows phospholipase D activity // Medische Microbiologie (Nederlands Tijdschrift voor). -1998.-V. 6 (Suppl. II).-P. S9.
  132. Dworkin J., Tummuru M.K.R., Blaser M.J. Segmental conservation of Sapa sequences in type B Campylobacter fetus cells // J. Biologic. Chemistry. 1995. -Vol.270, N25,-P. 15 093−15 101.
  133. Egelseer E., Schocher I., Sara M., Sleytr U.B. S-layers from Bacillus strains as molecular sieves and adhesion sites for exoenzymes // 7th Int. Congress of Bacteriol. and Applied Microbiol. Division. Prague, Czech Republic, July 3rd-8th, 1994. -P.61.
  134. Egelseer E., Schocher I., Sara M., Sleytr U.B. S-layers from Bacillus stearothermophilus DSM 2358 funcctions as an adhesion site for a high-molecular-weight amylase//J. Bacteriol. 1995. — Vol.177, N 6. — P. 1444−1451.
  135. Engelhardt H, Peters J. Structural research on surface layers: A focus on stability, surface layer homology domains, and surface layer-cell wall interactions // J Struct Biol. 1998. — Vol. 15, N 124(2−3). — P.276−302.
  136. Etiennetoumelin I., Sirard J.C., Duflot E., Mock M., Fouet A. Characterization of the Bacillus anthracis S-layer-cloning and sequencing of the structural gene // J. Bacteriol.- 1995. Vol. 177, N 3. — P. 614−620.
  137. Faguy D.M., Koval S.F., Jarrell K.F. Physical characterization of the flagella and flagellins from Methanospirillum hungatei II J.Bacteriol. 1994. — Vol.176, N 24. — P.7491−7498.
  138. Farchaus J.W., Ribot W.J., Downs M.B., Ezzell J.W. Purification and characterization of the major surface array protein from the avirulent Bacillus anthracis Delta-Stern-1 //J. Bacteriol. 1995. — Vol. 177, N 9, — P.2481−2489.
  139. Ferber D.M., Brubaker R.R. Mode of action of pesticin: N-acetylglucosaminidase activity // J. Bacteriol. 1979. — V. 139. — P. 495−501.150
  140. Fernandez-Herrero L.A., Olabarria G., Caston J.R. et al. Horizontal transference of S-layer genes within Thermus thermophilics II J.Bacteriol. 1995. — Vol.177, N 19. — P.5460−5466.
  141. Fields A.K., Straley S.C. Intracellular delivery of Yersinia pestis V antigen // Medische Microbiologic (Nederlands Tijdschrift voor). 1998. — V. 6 (Suppl. II). — P. S6−7.
  142. Firtel M., Patel G.B., Beveridge T. S-layer regeneration in Methanococcus voltae protoplasts // Microbiology. 1995. — Vol.141, N 4. — P.817−824.
  143. Ford L.A., Thune R.L. Immunization of channel cattish with a crude acid-extracted preparation of motile Aeromonad S-layer protein // Biomed. Lett. 1992. -Vol.47,
  144. Fourel D., Hikita C., Bolla J.M. et ah. Characterization of Omp F domains involved in Escherichia coli K-12 sensitivity to colicins A and N // J.Bacteriol. -1990. Vol.172, N 7. — P.3675−3680.
  145. Fujita M., Amako K. Localization of the Sapa gene on a physical map of Campylobacter fetus chromosomal DNA // Arch. Microbiol. 1994. — Vol.162, N 6.-P.375−380.
  146. Fujita M., Fujimoto S., Mooroka T., Amako K. Analysis of strains of Campylobacter fetus by pulsed-field gel-electrophoresis // J. Clinic. Microbiol. -1995.-Vol. 133, N.6.-P. 1676−1678.
  147. Galyov E.E., Hakansson S., Forsberg A., Wolf-Watz H. A secreted protein kinase of Yersinia pseudotuberculosis is an indispensable virulence determinant // Nature. 1993. — V. 361. — 730−732.
  148. Garduno R.A., Phipps B.M., Kay W.W. Physical and functional S-layer reconstitution in Aeromonas salmonicida II J. Bacteriol. 1995. — Vol. 177, N 10. — P. 2684−2694.
  149. Gougen J., Yother J., Straley S. Genetic analysis of the low calcium responce in Yersinia pestis Mu dl (Ap lac) insertion mutants // J.Bacteriol. 1984. — Vol.160. -P.842 -848.
  150. Graham L.L., Harris R., Villiger W., Beveridge T.J. Freeze-substitution of gramnegative eubacteria: general cell morphology and evelope profiles // J. Bacterid. -1991. Vol.173, N 5. — P.1623−1633.
  151. Graham L.L., MacDonald K.L. The Campylobacter fetus S layer is not essential for initial interaction with HEp-2 cells // Can J Microbiol. 1998. — Vol. 44, N 3. — P. 244−250.
  152. Gremyakova T.A., Stepanshina V.N., Anisimov A.P., Potapov V.N. Characterization of native and modified Yersinia pestis pH antigen // 4th Sohn Humphrey advanced summer programme in immunology. 1998. — Pushchino. -P.24.
  153. Guan K., Dixon J.E. Protein tyrosine phosphatase activity of an essential virulence determinant in Yersinia II Science. 1990. — V. 249. — P. 553−556.
  154. Konig H., Hartmann E. Nucleotide activated oligosaccharides and peptides: a new biosynthetic principle of microbial cell wall polymers // 7th Int. Congress of Bacteriol. and Applied Microbiol. Division. Prague, Czech Republic, July 3rd-8th, 1994.-P.59.
  155. Kadurugamuwa J.L., Mayer A., Messner P. et ah. S-layered Aneurinibacillus and Bacillus spp. are susceptible to the lytic action of Pseudomonas aeruginosa membrane vesicles // J. Bacteriol. 1998. — Vol.180, N 9. — P. 2306−2311.
  156. Kahala M, Palva A. The expression signals of the Lactobacillus brevis sip A gene direct efficient heterologous protein production in lactic acid bacteria // Appl Microbiol Biotechnol. 1999. — Vol.51, N 1. — P.71−80.
  157. Kawai E., Akatsuka H., Idei A., et al. Serratia marcescens S-layer protein is secreted extracellularly via an ATP-binding cassette exporter, the Lip system // Mol Microbiol. 1998. — Vol. 27, N 5. — P.941−952.
  158. Kessel M. S-layers and crystalline porins: structure and function // 7th Int. Congress of Bacteriol. and Applied Microbiol. Division.- Prague, Czech Republic, July 3rd-8th, 1994. -P.58.
  159. Kireev M.N., Stukova N.Yu., Korovkin S.A. et al. The possibility of a Yersinia pestis protein to be used in the development of prophylactic preparations // Medische Microbiologic (Nederlands Tijdschrift voor). 1998. — V. 6 (Suppl. II). — P. S36.
  160. Kostrzynska M., Dooley J.S.G., Shimojo T., Sakata T., Trust T.J. Autogenic diversity of the S-layers protein from pathogenic strains of Aeromonas hydrophhyla and Aeromonas veronii biotype sobiria // J. Bacteriol. 1992. — Vol.174, N 1. — P.40−47.
  161. Kotiranta A., Haapasalo M., Lounatmaa K., Kari K. Crystalline surface protein of Peptostreptococcus anaerobius II Microbiology. 1995. — Vol.141, N 5. — P. 10 651 073.
  162. Kupcu S, Lohner K, Mader C, Sleytr U.B. Microcalorimetric study on the phase behaviour of S-layer coated liposomes // Mol Membr Biol. 1998. — Vol. 15, N 2. -P.69−74.
  163. Kupcu S., Sara M., Sleytr U.B. Liposomes coated with crystalline bacterial cell surface protein (S-layer) as immobilization structure for macromoiecules // Biochimica et biophysica acta-biomembranes. 1995. -Vol.1235, N 2. — P.263−269.153
  164. Kupcu S., Sleytr U.B., Sara M. Two-dimensional paracrystalline glycoprotein Slayers as a novel matrix for the immobilization of human IgG and their use as microparticles in immunoassays // J. Immunol. Methods. 1996. — Sep. 13. — 196(1). -P. 73−84.
  165. Miiller K., Burdack S., Rollinghoff M., Beuscher H.U. Recombinant YopB blocks TNF-a production though binding to murine macrophages // Medische Microbiologie (Nederlands Tijdschrift voor). 1998. — V. 6 (Suppl. II). — P. S25.
  166. Makoveichuk E., Cherepanov P., Forsberg A., Olivecrona G. Lipid-mediated interaction of Y. pestis pH6 antigen with plasma lipoproteins and macrophages in vitro II Medische Microbiologie (Nederlands Tijdschrift voor). 1998. — V. 6 (Suppl. II). — P. S20.
  167. Matuschek M., Sahm K., Bahl H. S-layer like domains in extracellular enzymes of Thermoanaerobacterium thermosulfrigenes EMI // 7th Int. Congress of Bacteriol. and Applied Microbiol. Division.- Prague, Czech Republic, July 3rd-8th, 1994. -P.60.
  168. Meghji S., Henderson B., Nair S., Tufano M.A. Bactrerial porins stimulate bone resorption // Infection and Immunity. 1997. — Vol.65, N 4. — P. 1313−1316.
  169. Mesnage S, Tosi-Couture E, Fouet A. Production and cell surface anchoring of functional fusions between the SLH motifs of the Bacillus anthracis S-layer proteins and the Bacillus subtilis levansucrase // Mol Microbiol. 1999. — Vol.31, N 3. — P. 927−936.
  170. Mesnage St., Tosi-Couture E., Gounon P. et al. The capsule and S-layer: two independent and yet compatible macromolecular structures in Bacillus anthracis II J.Bacteriol. 1998. — Vol.180, N 1. — P.52−58.
  171. Messner P., Allmaier G., Schaffer C., Wugeditsch T. et al. Biochemistry of Slayers // FEMS Microbiol. Rev. 1997. — Vol. 20, N 1−2. — P.25−46.
  172. Messner P., Bock K., Christian R., Schulz G., Sleytr U.B. Characterization of the surface layer glycoprotein of Clostridium symbiosum HB 25 // J.Bacteriol. -1990.-Vol.172, N 5. P.2576−2583.
  173. Messner P., Christian R., Neuniger C., Schulz G. Similarity of core structures in 2 different glycans of tyrosine-linked eubacterial S-layer glycoproteins // J.Bacteriol.-1995. Vol.177, N 8. — P.2188−2193.
  174. Messner P., Schaffer C., Neuniger C. Eubacterial S-layer glycoproteins structure and biosynthesis // 7th Int. Congress of Bacteriol. and Applied Microbiol. Division.-Prague, Czech Republic, July 3rd-8th, 1994. P.59.
  175. Messner P. Bacterial glycoproteins // Glycoconj J. 1997. — Vol.14, N 1. — P.311.
  176. Miyamoto M, Maeda H, Kitanaka M, et al. The S-layer protein from Campylobacter rectus: sequence determination and function of the recombinant protein//FEMS Microbiol Lett. -1998. Vol. 15, N166(2). — P. 275−281.
  177. Mozes N., Lortal S. X-Ray photoelectron spectroscopy and biochemical analysis of the surface of Lactobacillus helveticus ATCC-12 046 // Microbiology. 1995. -Vol.141, N 1, part 1. — P. l 1−19.
  178. Nakajima R., Brubaker R.R. Association between virulence of Yersinia pestis and suppression of gamma interferon and tumor necrosis factor alpha // Infect. Immun. 1993.-V. 61.-P. 23−31.
  179. Navarre WW, Schneewind O. Surface proteins of gram-positive bacteria and mechanisms of their targeting to the cell wall envelope // Microbiol Mol Biol Rev. -1999. Vol. 63, -N 1. — P. 174−229.
  180. Nedialkov Yu.A., Motin V.L., Brubaker R.R. Resistance to lipopolysaccharide mediated by the Yersinia pestis V antigen-polyhistidine fusion peptide: amplification of interleukin-10 // Infect. Immun. 1997. — V. 65. — P. 1196−1203.
  181. Neubauer H., Aleksic S., Meyer H., Splettstober W.D. Mapping of B-cell epitopes of the FI capsular antigen of Yersinia pestis II Medische Microbiologie (Nederlands Tijdschrift voor). 1998. — V. 6 (Suppl. II). — P. S10−11.
  182. Nitta H., Holt S.C., Ebersole J.L. Purification and characterization of Campylobacter rectus surface layer proteins // Infect Immun. 1997. — Vol.65, N 2. -P.478−483.
  183. Noonan B., Trust T.J. The synthesis, secretion and role in virulence of the paracrystalline surface protein layers of Aeromonas salmonicida and A. hydrophila I I FEMS Microbiol. Lett.- 1997.- Sep. l, N 154(1). P. 1−7.il1561
  184. Owen P. The gram-negative outer membrane: structure, biochemistry ahd vaccine potential // Biochem. Soc.Trans. 1992. — Vol.20, N 1. — P. 1−6.
  185. Pepe J.C., Miller V.L. The Yersinia enterocolitica inv gene product is an outer membrane protein that shares epitopes with Yersinia pseudotuberculosis invasin // J.Bacteriol. 1990. — Vol.172, N 7. — P.3780−3789.
  186. Perry R.D. Acquisition and storage of inorganic iron and hemin by the yersiniae II Trends Microbiol. 1993. — V. 1. — P. 142−147.
  187. Perry R.D., Fetherston J.D. Yersinia pestis etiologic agent of plague // Clin. Microbiol. Rev. — 1997. — V. 10. — P. 35−66.
  188. Peters J., Nitsch M., Kuhlmorgen B., Golbik R. et al. Tetrabrachion-A filamentous archaebacterial surface protein assembly of unusual structure and extreme stability // J. Molecular Biology. 1995. — Vol.245, N 4. — P.385−401.
  189. Polosmakov V., Shimanjuk N., Mishankin B. Yersinia pestis urease // Medische Microbiologic (Nederlands Tijdschrift voor). 1998. — V. 6 (Suppl. II). — P. S29.
  190. Porat R., McCabs W.R., Brabaker R.R. Lipopolisaccaride-associated resistence to killing of yersiniae by complement // J. Endotoxin Res. 1995. — N. 2. — P. 91−97.
  191. Rachel R., Pum D., Smarda J. et al. Fine structure of S-layers // FEMS Microbiol. Rev. 1997. — Vol.20, N 1−2. — P. 13−23.
  192. Rane L., Newhauser L.R. A method for the separation of protein fraction // Armed Forces med. J., 1954. V.5, N 3. — P.368−370.
  193. Reisner B.S., Straley S.C. Yersinia pestis YopM: thrombin binding and overexpression // Infect. Immun. 1992. — V. 60. — P. 5242−5252.
  194. Rockenmacher M. Relationship of catalase activity to virulence in Pasteurella pestis II Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1949. — V. 71. — P. 99−101.
  195. Rodrigues C.G., Carneiro C.M., Barbosa C.T., Nogueira R.A. Antigen F1 from Yersinia pestis forms aqueous channels in lipid bilayer membranes // Braz. J. Med. Biol. Res. 1992. — V. 25. — P. 75−79.
  196. Rosqvist R., Bolin I., Wolf-Watz H. Inhibition of phagocytosis in Yersinia pseudotuberculosis: a virulence plasmid-encoded ability involving the Yop2b protein // Infect. Immun. 1988. — V. 56. — P. 2139−2143.
  197. Rosqvist R., Forsberg A., Wolf-Watz H. Intracellular targeting of the Yersinia YopE cytotoxin in mammalian cells induces actin microfilament disruption // Infect. Immun. 1991. — V. 59. — P. 4562−4569.
  198. Rosqvist R., Forsberg A., Wolf-Watz H. The cytotoxic protein YopE of Yersinia obstructs the primary host defence // Mol. Microbiol. 1990. — V. 4. — P. 657−667.
  199. Samoilova S.V., Samoilova L.V., Yezhov I.N., et al. Virulence of pPst+ and pPst» strains of Yersinia pestis for guinea-pigs // J. Med. Microbiol. 1996. — V. 45. -p. 440−444.
  200. Samuelson P., Hansson M., Ahlborg N. et al. Cell surface display of recombinant proteins on Staphylococcus carnosus II J.Bacteriol. 1995. — Vol.177, N 6. -P.1470−1476.
  201. Sara M., Pum D., Sleytr U.B. General principles and application potential of Slayers // 7th Int. Congress of Bacteriol. and Applied Microbiol. Division. Prague, Czech Republic, July 3rd-8th, 1994. — P.60.
  202. Sara M., Pum D., Sleytr U.B. Permeability and charge-dependent adsorption properties of the S-layer lattice from Bacillus coagulans E 38−66 // J. Bacteriol. -1992.-Vol.174, N 11.- P.3487−3493.
  203. Sara M., Sleytr U.B. Biotechnology and biomimetic with crystalline bacterial cell surface layres (S-layers) // Micron. 1996. — Vol. 27, N 2. — 141−156.
  204. Schuster B., Pum D., Braha O., Bayley H., Sleytr U.B. Self-assembled alpha-hemolysin pores in an S-layer-supported lipid bilayer // Biochim Biophys Acta. -1998. -Vol. 13, N 1370 (2). P. 280−288.
  205. Shao W.L., Deblois S., Wiegel J. A high-molecular-weight, cell assotiated xylanase isolated from exponentially growing Thermoanaerobacterium sp. strane Jw/Sl -Ys 485 // Appl. and Enviroment. Microbiol. 1995. — Vol.61, N 3. — P.937−940.
  206. Shen N, Weiner R.M. Isolation and characterization of S-layer proteins from a vent prosthecate bacterium // Microbios. 1998 .- Vol. 93, N 374. — P. 7−16.
  207. Sikkema D.J., Brubaker R.R. Outer-membrane peptides of Yersinia pestis mediating siderophore-independent assimilation of iron // Biol.Metals. 1989. — N 2. — P.174−184.158
  208. Sleytr U.B., Bayley H., Sara M. et al. Applications of S-layers // FEMS Microbiol. Rev. 1997. — Vol.20, N1−2. — P.151−175.
  209. Sleytr U.B., Messner P. Crystalline surface layers in procariotes // J.Bacteriol. -1988,-Vol.170, N 7. P.2891−2897.
  210. Sleytr U.B., Pum D., Sara M. Advances in S-layer nanotechnology and biomimetics // Adv. Biophys. 1997. — Vol.34.- P. 71−79.
  211. Sleytr U.B., Sara M. Bacterial and archaeal S-layer proteins: structure-function relationships and their biotechnological applications // Trends Biotechnol. 1997.-Vol. 15, N 1. -P.20−26.
  212. Sleytr U.B. Basic and applied S-layer research: an overview // FEMS Microbiol. Rev. 1997. — Vol.20, N 1−2. — P.5−12.
  213. Smith R.H., Messner P., Lamontagne L.R. et al. Induction of T-cell immunity to oligosaccharide antigens immobilized on crystalline bacterial surface layers (Slayers) // Vaccine. 1993. — Vol.11, N 9. — P.919−924.
  214. Sodeinde O.A., Subrahmanyam Y.V., Stark K., et al. A surface protease and the invasive character of plague // Science. 1992. — V. 258. — P. 1004−1007.
  215. Starley S.C., Cibull M.L. Differential clearance and host-pathogen interactions of YopE" and YopK" Yersinia pestis in BALB/c mice // Infect.Immun. -1989.-Vol.57.-P.1200−1210.
  216. Thomas S.R., Trust T.J. A specific Pul D homolog is required for the secretion of paracrystalline surface subunits in Aeromonas hydrophyla II J.Bacteriol. 1995. -Vol.177, N 14. — P.3932−3939.
  217. Thomas S.R., Trust T.J. Tyrosine phosphorylation of the tetragonal paracrystalline array of Aeromonas hydrophila Molecular-cloning and high-level expression of the S-layer protein gene // J. Molecul. Biology. — 1995. — Vol.245, N 5. — P.568−581.
  218. Thompson SA, Shedd OL, Ray KC, et al. Campylobacter fetus surface layer proteins are transported by a type I secretion system // J Bacteriol. 1998. Vol. 180, N 24. — P.6450−6458.
  219. Towbin H., Stacbelin T., Gordon J.: Electrophoretic transfer of proteins from Polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc Natl Acad Sei USA 1979- 76: 4350−4354.
  220. Truppe M., Howorka St., Lubitz W., Kuen B. Characterisation of the sbsA gene encoding SbsA, an ordered surface-layer protein in Bacillus stearothermophilus159
  221. PV72 // 8th Int. Congress of Bacteriol. and Applied Microbiol. Division. -Jerusalem, Israel, August 18−23, 1996. P. 17.
  222. Van Asbeck B.S., Verhoef J. Iron and host defense // Eur.J.Clin.Microbiol.-1983.-V. 172.-P.3152−3162.
  223. Van der Mei H.C., Weerkamp A.H., Busscher H.J.: A comparison of various methods to determine hydrophobic properties of streptococcal cell surfaces. J Microbiol Meth 1987- 6: 277−287.
  224. Van Loosdrecht M.C.M., Lyklema J., Norde W. et al. The role of bacterial cell wall hydrophobicity in adhesion // Appl. and Enviromental Microbiol. 1987, V.53, N 8. — P.1893−1897.
  225. Vasilieva G.I., Verkina L.M., Kiseleva A.K. et al. Neutrophilokine-inducing activity of Yersinia pestis EV cells and its antigens // Medische Microbiologic (Nederlands Tijdschrift voor). 1998. — V. 6 (Suppl. II). — P. S33.
  226. Wang B., Kraig E., Kolodrubetz D. A new member of the S-layer protein family: characterization of the crs gene from Campylobacter rectus // Infect Immun. 1998. -Vol. 66, N4. — 1521−1526.
  227. Wang E., Garcia M.M., Blake M.S. et al. Shift in S-layer protein expression responsible for antigenic variation in Campylobacter fetus II J.Bacteriol. 1993.-Vol.l75,N 16.-P. 4979−4984.
  228. Welkos S., Friedlender A.M., McDowell D., et al. V antigen of Yersinia pestis inhibits neutrophil chemotaxis // Microb. Pathogen. 1998. — V. 24. — P. 185−196.
  229. Westphal O., Jann K. Bacterial lipopolisaccharides, extraction with phenol-water and futher applications of the procadure // Meth. Carbohydr. Chem. 1965. -V.5. — P.83−91.
  230. Wetzer B., Pum D., Sleytr B. S-layer stabilized solid support lipid bilayers // J.Struct.Biol. 1997. — Vol.119, N 2. — P. 123−128.
  231. Weygand M, Wetzer B, Pum D, et al. Bacterial S-layer protein coupling to lipids: x-ray reflectivity and grazing incidence diffraction studies // Biophys J. -1999. Vol.76, N 1, Pt 1. — P. 458−468.
  232. Yang L., Pei Z., Fujimoto S., Blaser M.J. Reattachment of surface array proteins to Campylobacter fetus cells // J. Bacteriol. 1992. — Vol.174, N 2. — P. 125 8−1267.160
  233. Zadnowa S.P., Scherbakov A.A., Dyatlov I.A. Hemagglutination activity and surface charge of Yersinia pestis EV 72 and its achromogenic derivatives // Medische Microbiologie (Nederlands Tijdschrift voor). 1998. — V. 6 (Suppl. II). — P. S29.
  234. Zav’yalov V.P., Abramov V.M., Cherepanov P.A., et al. pH6 antigen (PsaA protein) of Yersinia pestis, a novel bacterial Fc-receptor // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1996. — V. 14. — P. 53−57.
  235. Zhenya F., Xiang Zh., Yunheng L. et al. Studies on a new virulence determinant of Yersinia pestis II Medische Microbiologie (Nederlands Tijdschrift voor). 1998. -V. 6 (Suppl. II).-P. S18−19.
  236. Zillig W., Holz I., Janeckovic D. et al. Hyperthermus butylicus, a hyperthermophilic sulfur-reducing archaebacterium that ferments peptides // J.Bacteriol. 1990. — Vol.172, N7. — P.3959−3965.
  237. Сердечно благодарю своего научного руководителя доктора медицинских наук Ивана Алексеевича Дятлова за всестороннюю помощь, искреннее внимание и постоянную поддержку.
  238. Выражаю глубокую признательность всему коллективу отдела подготовки и усовершенствования специалистов по ООИ за внимание и помощь в проведении экспериментов.
  239. Благодарю дирекцию РосНИПЧИ «Микроб» за предоставленную возможность выполнить настоящую работу.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!