Результаты исследований. 
Детекция провирусной ДНК BLVВ иксодовых клещах

В Республике Калмыкия отмечается увеличение площади естественных пастбищ для животных, и поэтому в значительной степени места обитания иксодид расширены. Видовой состав обследованных клещей составлял: Hyalomma marginatum (61%), Hyalomma anatol^um (24%), Hyalomma scupense (11%). Dermacenter marginatus (3%), Rhipicehalus pumilio (0,8%). Видовой состав иксодид на территории Калмыкии не отличается большим разнообразием. Клещи Н. marginatum, Н. scupense, D. marginatus встречаются повсеместно; а клещи Н. anatolicum обнаружены в пунктах, прибрежной зоны Каспийского моря, расположенных до 100 км. от морского побережья. Сезонная динамика паразитирования клещей на животных приведена в таблице 1.

Таблица 1. Сезонная динамика численности клещей (сбор с 10 животных)

Самым многочисленным и наиболее распространенным видом на территории Калмыкии, расположенной к востоку от Элисты, являются клещи Hyalomma marginatum. Они регистрируются повсеместно. Сезон паразитирования Н. marginatum начинается со второй — третьей декады марта и продолжается до ноября с максимумом в третьей декаде апреля — первой декаде июня. По средним многолетним данным первые клещи этого вида в Лаганском и Черноземельском районах обнаруживались на крупном рогатом скоте во второй декаде марта, а к концу месяца их численность в среднем на одно животное составила 1,3 экземпляра. С повышением температуры воздуха количество клещей постепенно нарастало и во второй декаде апреля составило 14,3 экземпляра на животное. В мае — начале июня кривая паразитирования достигала вершины — 17,5 экземпляров, а, начиная со второй декады июня, отмечается резкое снижение количества паразитирующих клещей до 1 — 0,5 экземпляра на голову в июле — августе. В сентябре — октябре численность продолжает убывать. В ноябре на скоте удавалось обнаружить только самцов.

Районы черноземья характеризуются значительно меньшим количеством клещей в связи с обеднённостью их животного и растительного мира. По мере продвижения на запад из зоны полупустыни в степную зону (Яшкульский, Целинный районы) плотность популяции Н. plumbeum на крупном рогатом скоте увеличивалась. Значительное увеличение клещей на животных отмечено повсеместно в последние 3−4 года. Вероятно, этот всплеск активности связан со значительным изменением климатических условий (общее потепление, увеличение количества осадков, увеличение нагрузки на пастбища и другие факторы) [15].

Вторым видом, имеющим широкое распространение на территории Калмыкии, являются клещи Hyalomma scupense. Сезон паразитирования их начинается в октябре, ноябре одного года и завершается в мае следующего.

Первые нимфы Н. scupense обнаружены нами на крупном рогатом скоте в октябре, а первые имаго в конце ноября — начале декабря. Максимальное количество нимф отмечено в декабре-январе. Во второй половине февраля в основном встречаются половозрелые клещи. В этот же период появляются первые напитавшиеся самки. Массовое насыщение кровью и отпадение сытых самок происходит во второй половине марта — первой декаде апреля. В середине апреля заклещёванность скота этим видом резко снижается. В мае клещи обнаруживались крайне редко. Замечено, что плотность популяций Н. scupense возрастает по мере продвижения с востока на запад вглубь республики. Если на Каспийском побережье заклещёванность крупного рогатого скота равнялась 70−80%, то в Целинном районе клещей обнаруживали на 90−100% обследованных животных.

Лейкоз крупного рогатого скота распространен во всех субъектах Российской Федерации и, по официальным данным, насчитывается более 3 тысяч неблагополучных пунктов. Уровень инфицирован-ности составляет от 12 до 15% (в отдельных регионах значительно выше), а уровень заболеваемости 3−4%. Продолжительность неблагополучия сохраняется уже в течение более 20 лет. Не менее сложной является эпизоотическая ситуация в племенных хозяйствах. С 1997 года в структуре инфекционной патологии лейкоз крупного рогатого скота занимает первое место [8, 21].

На территории Республики Калмыкия наибольшее распространение лейкоз крупного рогатого скота имеет в Городовиковском, Лаганском и Целинном районах — 28,2%, 6,9% и 1,4%, соответственно [7].

Учеными определены причины длительного неблагополучия по лейкозу крупного рогатого скота в скотоводстве и выявлены причины их обуславливающие. К их числу относят: использование репродуктивного потенциала животных, инфицированных вирусом лейкоза, а в некоторых случаях и коров с клинико-гематологической формой проявления болезни; пренатальное и раннее постнатальное инфицирование потомства коров с различным уровнем копрометации по лейкозу и другим инфекциям с генитальной формой проявления; хозяйственное использование потомства инфицированных и больных лейкозом животных; иммунологическая толерантность (ареактивность), которая формируется в организме в фетальный период при трансплацентарном переходе вируса, или на ранних этапах постнатального онтогенеза [8, 9, 10, 12, 18]. Однако выявление циркуляции вируса в природных очагах проводится впервые. Для обнаружения провирусной ДНК лейкоза крупного рогатого скота (BLV-провирус) нами были проведены исследования клещей, как естественных резервуаров инфекционных возбудителей с применением ПЦР с гибридизационно-флюоресцент-ной детекцией. Исследованию подвергались клещи вида Hyalomma marginatum (январь, февраль) и Hyalomma scupense (апрель, май). Определена частота встречаемости провируса в клещах и количество коров, реагирующих в ПЦР на вирус лейкоза крупного рогатого скота (табл. 2).

Таблица 2. Частота встречаемости провирусной ДНК (FRT BLV-провирус) в клещах

Анализ данных таблиц показывает, что среди видового состава клещей снятых с крупного рогатого скота разных районов республики провирусные ДНК (BLV-провирус) присутствуют у Hyalomma marginatum, Hyalomma scupense, что доказывает присутствие возбудителя инфекции в одном из природных резервуаров — в иксодовых клещах. При этом частота встречаемости BLV-провируса в клещах, снятых со скота, в разных районах отличается. Так, наибольшая частота встречаемости BLV-провируса (0,60) отмечается в клещах Hyalomma marginatum, собранных с животных Городовиковского района в феврале. С частотой 0,20 встречается провирус в клещах этого же вида в п. Торячи Малодербетовского района и с. Приютное Приютненского района. В трех населенных пунктах: КФХ «Баина» Ла-ганского района, КФХ «АлтнГасн» Лаганского района и в п. Торячи Малодербетовского района частота встречаемости составляет 0,10. Ни одного случая обнаружения провируса BLV в клещах не зарегистрировано в четырех населенных пунктах — хозяйства населения г. Лагань Лаганского района, с. Северное Лаганского района, п. Гашун Бургуста Кетченеровский район, п. Ачинеры Черноземельского района. В клещах вида Hyalomma scupense, снятых с коров п. Дружба Городови-ковский район, п. Торячи Малодербетовского района, также найден BLV-провирус. Таким образом, впервые методом ПЦР с гибридиза-ционно-флюоресцентной детекцией выявлен BLV-провирус в клещах Hyalomma marginatum и Hyalomma scupense.

Проведены исследования методом ПЦР на лейкоз крупного рогатого скота 187 проб крови животных, с которых сняли клещей. Среди 20 исследованных животных Городовиковского района методом ПЦР обнаружено положительно реагирующих 7 голов. При исследовании 22 голов коров п. Торячи Малодербетовского района, 20 голов с. Приютное Приютненский район, 20 голов КФХ Алтн Гасн Лаганского района, молекулярный (ПЦР) анализ выявил по одному положительному случаю BLV-провируса. Следует отметить сопоставимость данных частоты встречаемости провирусной ДНК в клещах и носителей инфекции животных в населенных пунктах районов республики. Так, в Городовиковском районе инфицированность среди исследованных коров наибольшая и составляет 30−35% [6].

ПЦР-анализ крови коров из этих же хозяйств на наличие вируса лейкоза крупного рогатого скота показал, что имеется связь между частотой встречаемости провируса и количеством коров, положительно реагирующих на вирус. Самая большая частота встречаемости провируса в клещах обнаружена в п. Дружба Городовиковского района, где наблюдается наибольшая инфицированность крупного рогатого скота вирусом лейкоза в Республике Калмыкия.