Методы предварительной оценки наличия бактерий в моче

Микроскопические методы исследования мочи

1. Нанести на предметное стекло 10 мкл хорошо перемешанной, но нецентрифугированной мочи. Обвести место расположения капли маркером и высушить на воздухе.

• 2. Окрасить препарат по Граму стандартным методом.
• 3. Микроскопировать препарат при увеличении Ч1000.

Учет результатов: 1 бактериальная клетка соответствует концентрации бактерий в моче, равной 105 клеток/мл .

Слайд-планшетный центрифужный метод Наиболее надежный метод предварительной оценки степени бактериурии: его чувствительность и специфичность при концентрации бактерий в моче 108КОЕ/мл составляют 98 и 90%, а при концентрации 106 КОЕ/мл — 63 и 91%, соответственно.

7. Минимальные идентификационные признаки бактерий, наиболее часто встречающихся в моче.

Для идентификации грамположительных и грамотрицательных бактерий, наиболее часто изолируемых из мочи людей, пользуются приведенными ниже идентификационными критериями. Их следует считать «минимальными», поскольку они являются основными, но не абсолютными: из-за вариабельности свойств для окончательной идентификации изолятов ряда видов бактерий требуются дополнительные тесты (биохимические, иммунологические и др.).

Грамположительные бактерии.

1. Стафилококки Грамположительные каталазопозитивные кокки, формирующие в мазках грозди.

• 1.1. S. Saprophyticus культуральные свойства: на CLED формирует желтые колонии, на кровяном агаре — колонии цвета слоновой кости;
• — наличие каталазы;
• — отсутствие ДНК-азы;
• — отсутствие коагулазы (тест проводят в пробирках с плазмой крови кролика в случаях, когда получены сомнительные результаты ДНК-азной пробы);
• -резистентность к новобиоцину (при использовании дисков с 5 мг антибиотика зона задержки роста не превышает 16 мм).
• 1.2. S. aureus
• — культуральные свойства: на CLED и кровяном агаре формирует желтые, крупные колонии (менее вариабельные по размеру, чем у коагалазонегативных стафилококков);
• -наличие коагулазы;
• -наличие ДНК-азы;
• -положительная реакция агглютинации со специфической антисывороткой (дополнительный тест).
• 1.3. Другие коагулазонегативные стафилококки:
  • -морфология колоний: на CLED и кровяном агаре белые или желтые;
  • -несоответствие идентификационным критериям S. saprophyticus и S. aureus.
• 2. Стрептококки

Грамположительные, каталозонегативные кокки, формирующие в мазках цепочки.

• 2.1. Энтерококки
• -морфология колоний: на кровяном агаре — серовато-белые без признаков гемолиза, с били в-гемолизом, на CLED — желтоватые;
• — способность расти в средах с высоким (? 6,5%) содержанием NaCl;
• — E. faecium в отличие от E. faecalis ферментирует арабинозу;
• — пониженная чувствительность к цефалоспоринам.
• 2.2. S. agalactiae
• — морфология колоний: на кровяном агаре — голубые или серовато-белые колонии, окруженные узкой зоной в-гемолиза, иногда вызывающие б-гемолиз или негемолитические; на CLED — мелкие, бесцветные колонии, иногда становящиеся заметными через 48 ч после посева;
• — положительная реакция агглютинации со специфической антисывороткой к

стрептококкам группы В или положительный CAMP-тест;

• — чувствительность к цефалоспоринам
• 2.3. Другие в-гемолитические стрептококки
• — морфология колоний: на кровяном агаре — в-гемолиз, на CLED плохо растут;
• — положительная реакция агглютинации со специфическими антисыворотками к соответствующим группам стрептококков .
• 2.4. б-стрептококки
• — морфология колоний: на кровяном агаре — б-гемолиз, на CLED не растут или формируют мелкие колонии;
• — зона задержки роста оптохином не превышает 14 мм.
• 3. Lactobacillus spp.

Грамположительные, каталазонегативные палочки с типичной морфологией.

• — морфология колоний: на кровяном агаре — б-гемолиз, на CLED не растут или формируют мелкие колонии, иногда ферментирующие лактозу (пожелтение среды);
• — отсутствие каталазы.
• 4. Bacillus spp.
• — культуральные свойства: на кровяном агаре формируют крупные сухие гемолитические колонии, сходные с колониями энтеробактерий и псевдомонад; морфология бактерий: крупные грамположительные палочки правильной формы, иногда содержат споры;
• — наличие каталазы;
• — наличие/отсутствие оксидазы.
• 1. Corynebacterium urealyticum
• — культуральные свойства: на кровяном агаре растут медленно, формируя мелкие блестящие колонии;
• — наличие каталазы;
• — наличие уреазы;
• — резистентны ко многим антимикробным препаратам.
• 6. «Дифтероидные» палочки
• — культуральные свойства: на CLED растут плохо;
• — морфология бактерий: часто конические, в мазках образуют скопления в форме буквы V или частокола;
• — наличие каталазы.

Перечисленные критерии не исключают, что отвечающий им изолят не является листерией.

Грамотрицательные бактерии.

1. Энтеробактерии Грамотрицательные, оксидазонегативные палочки, ферментирующие глюкозу, растущие на среде МакКонки.

A. Энтеробактерии, ферментирующие лактозу (в средах CLED или МакКонки).

• — индольный тест на кровяном агаре: положительный результат дает E. coli, отрицательный — другие энтеробактерии;
• — наличие в-глюкуронидазы (определяют биохимическими тестами или в хромогенных средах типа Uriselect) подтверждает принадлежность изолята к E. coli;
• — для дифференциации неэшерихиозных энтеробактерий проводят тест Фогес-Проскауера: положительный результат дают бактерии родов Klebsiella и Enterobacter, отрицательный — другие энтеробактерии;

Б. Энтеробактерии, не ферментирующие лактозу (в средах CLED или МакКонки).

• — при наличие феномена роения на кровяном агаре проводят только индольный тест: положительный результат дает Proteus vulgaris, отрицательный — Proteus mirabilis;
• — при отсутствии феномена роения на кровяном агаре проводят тесты Фогес-Проскауера, ONPG и индольный:
• — изоляты, давшие отрицательный результат в тесте Фогес-Проскауера и положительный — в индольном тесте и ONPG, идентифицируют как E. coli (дополнительным подтверждением этого служит наличие в-глюкуронидазы);
• — изоляты, давшие отрицательный результат в тестах Фогес-Проскауера и ONPG, идентифицируют на основании дополнительных биохимических исследований.
• 2. Неферментирующие глюкозу грамотрицательные палочки
• — культуральные свойства: хороший рост на агаре МакКонки;
• — наличие оксидазы, отсутствие способности ферментировать глюкозу.

Идентифицируют до рода/вида только изоляты Pseudomonas aeruginosa, Stenotrophomonas maltophilia и Acinetobater. Остальные изоляты данной группы обозначают как «грамотрицательные палочки, не относящиеся к сем. Enterobacteriaceae».

• 2.1. Pseudomonas aeruginosa
• — культуральные свойства: способна расти при 42 °C, колонии и среда окрашиваются в зелено-синий цвет и издают характерный запах (земляники, жасмина), часто проявляет феномен радужного лизиса;
• — наличие оксидазы;
• — наличие аргинин-дигидролазы;
• — отсутствие лизин-декарбоксилазы (тест проводят с положительным и отрицательным контролями).
• 2.2. Stenotrophomonas (Pseudomonas) maltophilia
• — особенности роста на питательных средах: колонии формируются в течение 2 дней, при росте на кровяном агаре издают запах аммиака;
• — отсутствие оксидазы;
• — наличие ДНК-азы;
• 2.3. Acinetobacter spp.
• — культуральные свойства: формируют выпуклые, круглые, гладкие, слизистые, полупрозрачные или мутные, непигментированные колонии; на кровяном агаре через 48 ч после посева может проявляться гемолиз;
• — морфология бактерий: кокковидные палочки.
• — отсутствие оксидазы;
• — отсутствие ДНК-азы.