Парамиксовирусы. 
Вирусные болезни рептилий

Представители подсемейства Paramyxovirinae поражают разные виды позвоночных. Вирионы — плеоморфные частицы диаметром 150−300нм, имеют нуклеокапсид спиральной симметрии и липопротеиновую оболочку, на поверхности которой имеются выступы длиной 8−12нм. Геном представлен односпиральной линейной молекулой минус-РНК. Подсемейство включает 3 рода.

Характеристика возбудителя Впервые вирус был выделен во время эпизоотической вспышки в группе ямкоголовых гадюк Bothrops atrox, начавшейся в серпентарии (Швейцария) в 1973 г. У змей внезапно развилась атония мышц и ступорозное состояние, после чего через несколько дней проявились симптомы острого респираторного заболевания (уже в терминальной стадии). На вскрытии у павших животных обнаружили большое количество кровянистого экссудата в легких и полости тела (Folsch, Leloup, 1976). Вначале болезнь посчитали обусловленной синегнойной палочкой, P.aerugenosa. Затем гомогенат легочной ткани ввели в полость аллантоиса яиц ложной водяной кобры C. gigas, что вызвало их гибель в течение 7 дней. Суспензия из яиц вызвала ЦПД в культуре клеток фибромы гремучей змеи при температуре 300С. Выделенный вирус, исследованный с помощью НЭМ, был определен как парамиксовирус (Clark, et al, 1979) и получил название FDLV (Fer-de-lance virus). После этого в 1980 г. болезнь была описана Элиотом Якобсоном в США, и затем эпизоотические вспышки наблюдали во многих зоопарках США и Европы, включая Московский зоопарк (Кудрявцев и др., 2000). Вирус получил номенклатурное название OPMV (Ophidian paramyxovirus). В последние годы вирус был выделен у нескольких видов ящериц, как клинически здоровых (игуан, ксенозавров, аллигаторовых ящериц, смарагдового варана, тегу), так и имевших заболевание легких (Boyer, et al, 2005). Несколько эпизоотических вспышек за 2-летний период зарегистрировали в группе каймановых ящериц Dracaena guianensis (Jacobson, et al, 2000).

Клинические признаки и патологоанатомические изменения К вирусу чувствительны настоящие и ямкоголовые гадюки, ложноногие змеи и, возможно, некоторые виды ужеобразных змей. На пике эпизоотической вспышки заболевание протекает остро (2−3 недели) или даже молниеносно (сутки), к концу эпизоотического процесса и у менее чувствительных видов принимая скорее подострое или хроническое течение (1−6 месяцев). При острой инфекции, особенно у гремучих змей, наблюдают экссудативную пневмонию, часто с геморрагическим экссудатом или открытым кровотечением из трахеи. Могут отмечаться острые неврологические расстройства: волнообразные движения, односторонние спастические явления, потеря установочного рефлекса. На вскрытии отмечают сильный интерстициальный отек и обильный экссудат в легком и полости тела. Гистологически отмечают пролиферацию выстилающих альвеолярных клеток II типа в легких, инфильтрацию гетерофилами, утолщение альвеолярных стенок. Воспалительные инфильтраты и кровоизлияния могут заполнять воздухоносные пространства. Кроме того, наблюдается интерстициальный отек и обширные очаги фиброза в поджелудочной железе. Наиболее характерные изменения — некроз эпителия протоков с преобладанием реактивной гиперплазии и синцитиальных клеток. При подостром и хроническом течении, характерном для старых гремучих змей, наблюдают ступорозное состояние, кахексию, периферические параличи, слизь в ротовой полости. Перед появлением клинических симптомов змеи могут пропускать 1−2 кормления. Смерть обычно наступает от сопутствующей бактериальной или грибковой пневмонии. У павших животных типичные макроскопические изменения, за исключением «пролиферативной» пневмонии, могут отсутствовать. Характерны очаги интерстициального фиброза, сконцентрированные вокруг протоков поджелудочной железы. Похожие изменения могут встречаться в желчных протоках, слюнных и ядовитых железах. В гистологических препаратах иногда можно наблюдать амфофильные внутриядерные и внутрицитоплазматические включения. В цитологическом материале, полученном из легких, специфические включения обычно не выявляются.

Антигенная вариабельность и родство Для разработки генетических и серологических тестов было выделено 3 штамма OPMV: Fer-de-lance virus, Bush-viper virus и Neotropical virus. Результаты использования этих штаммов в нескольких лабораториях США показали, что между ними существует достоверный антигенный полиморфизм. Секвенирование 16 штаммов OPMV и сравнение по L и HN вирус-специфическим генам показало, что HN-ген имеет почти одинаковую длину во всех образцах, тогда как L-ген в некоторых случаях вообще не обнаруживается (Kik, et al, 2004). При парамиксовирусной инфекции ящериц позитивные серологические реакции на антиген OPMV выявляются только в редких случаях. При парамиксовирозе, подверженном с помощью НЭМ у водяной агамы не смогли выявить ни вирусной ДНК, ни матричной РНК, проводя ПЦР на праймерах для выявления OPMV (Boyer, et al, 2005). Вероятно, генетический и антигенный полиморфизм характерен и для вирусов, поражающих различные семейства змей.

Экспериментальная инфекция Постулаты Коха при OPMV были выполнены Элиотом Якобсоном с соавторами (Jacobson, et al, 2000) на экспериментальной группе гремучников острова Аруба Crotalus unicolor. Через 4 дня после интратрахеальной инокуляции штамма OPMV («Aruba rattlesnake virus») отметили инфильтрацию гетерофилами интерстиция легких. Через 9 дней начались процессы гиперплазии эпителия, в инфильтрате появились лимфоциты и макрофаги в краниальном отделе легкого. Через 15 дней выраженные изменения захватывали все отделы легкого, а к 19−22 дню последовала гибель всех зараженных змей. К этому моменту в краниальном отделе легкого был выражен коагуляционный некроз, вакуализация альвеолярного эпителия в среднем отделе, наблюдались многочисленные эозинофильные тельца включений в цитоплазме альвеоцитов. С 4-го дня после заражения вирусный антген выявили в легком с помощью окраски ИФА. ТЭМ выявила гиперплазию альвеоцитов II типа и деструкцию клеток I типа. Выделение вируса в просвет альвеол наблюдали с 9 по 19 день после заражения. Ни у одного из животных за этот срок не выявили сероконверсию с помощью РТГА. Антитела в определяемом титре появляются у переболевших животных через 6−9 недель после инокуляции вируса. Постулаты Коха также были частично выполнены во время эпизоотической вспышки в группе каймановых ящериц (Jacobson, et al, 2000). Вирус выдели в культуре клеток VH-1, и затем супернатантом инокулировали клетки Vero, где вирус был выделен повторно.

Диагностика Диагностируют все подозрительные случаи, касающиеся острых пневмоний пролиферативного характера или неврологических нарушений у чувствительных видов змей. Ставят диагноз на основании макроскопических изменений, гистологического исследования и НЭМ легочного экссудата. Вирус изолируют в культуре клеток VH-1, Vero или на куриных эмбрионах. Для уточнения диагноза применяют РИФ, для чего образцы тканей необходимо замораживать при -20 — 700С. Для выявления серопозитивных животных применяют РТГА, разработанную Элиотом Якобсоном (Jacobson, et al, 1981), который использовал первый изолированный штамм «Fer-de-lance virus». В дальнейшем была разработана РТГА на основе штамма «Neotropical». В настоящее время в США РТГА проводят только 3 лаборатории, каждая на основе собственного штамма. При этом перекрестные реакции к различным штаммам вируса могут заметно отличаться. Позитивным считается титр от 1:20. Змеи, перенесшие OPMV, могут иметь чрезвычайно высокие титры, более, более 10 240. Для определения активной инфекции повторную пробу берут через 2−4 недели. Повышение титра более чем на одно разведение, указывает на активную инфекцию. Плазму для анализа берут с литиевым гепарином и транспортируют на сухом льду; требуется 0,2 мл плазмы.

В Европе в последние годы стали применять ПЦР, разработанную Ahne, et al (1999). Праймеры для ПЦР были получены секвенированием L-гена из всех 3-х штаммов вируса.

Дифференциальная диагностика У удавов и питонов OPMV необходимо дифференцировать с IBD, особенно при наличии неврологических симптомов. У гадюк и ямкоголовых гадюк дифференциальный диагноз включает острые и хронические пневмонии иной этиологии, а также септицемию с геморрагическим синдромом.

Терапия Необходим карантин для вновь поступающих змей не менее 90 дней и серологический контроль при поступлении и через 2−3 месяца. Серопозитивных змей и животных, имеющих подозрительную симптоматику, необходимо строго изолировать. Неспецифическая терапия включает профилактику вторичной инфекции с помощью антибиотиков, назначение витаминов и иммуномодуляторов. Во время эпизоотической вспышки OPMV, начавшейся в июле 1999 г. в Московском зоопарке, животным назначали деринат, гаммаплант и для купания змей использовали сильный вирулицидный дезинфектант — септабик в 0,025% концентрации (Кудрявцев и др., 2000).

Иммунитет и специфическая профилактика Исследования по созданию убитой вакцины для профилактики OPMV проводились в начале 90-х годов в США (Jacobson, et al, 1992), но затем были прекращены в связи с недостаточным финансированием.