Исследование химических свойств ликвора

Химический состав спинномозговой жидкости многообразен. Известно, что ликвор состоит из водной части и сухого остатка, который включает неорганические и органические вещества, а также 15 микроэлементов, имеющих физиологическое значение.

Наибольшую диагностическую ценность имеет определение белка в ликворе, так как при различных патологических процессах концентрация его изменяется. В роли ориентировочного теста используют реакцию Панди. Для приготовления реактива Панди 80−100г кристаллического фенола растворяют в 1л дист. воды и помещают в термостат при 37 С на 1 сутки, периодически взбалтывая. После его выдерживают 2−3 суток при комнатной температуре, надосадочную жидкость сливают и используют для анализа.

Реакция Панди: на предметное стекло, помещенное на лист черной бумаги, наливают 1−2 капли реактива Панди и сразу приливают по краю 1−2 капли ликвора. В зависимости от содержания белка развивается различной степени помутнение, степень которого оценивают от + до ++++. Едва уловимая глазом муть по краям капли оценивается как +, в этом случае разведение ликвора производят в 10−15 раз. Ясно заметная, беловатая, тонкая рыхлая кайма — ++, в этом случае разводят в 15- 25 раз. При выраженной, плотной, белой кайме — реакцию обозначают как +++ и ликвор разводят в 25−30 раз. Образование интенсивной диффузной мути по всему реактиву оценивается как ++++, разведение при этом — от 35 до 70 раз.

Количественное определение белка производят с использованием 6% сульфосалициловой кислоты и 14% раствора безводного сульфата натрия (1:1). К 5 мл этой смеси прибавляют 0,5 мл ликвора и тщательно перемешивают. Через 10 мин раствор фотометрируют в кювете (1 см) при длине волны 410 — 480 нм. В качестве контроля используют физ.раствор.

Нормальные величины концентрации белка: при люмбальной пункции 0,22−0,33 г/л, при вентрикулярной и цистернальной пункции — 0,12−0,2 г/л, у новорожденных — 0,6−0,9 г/л.

Изменение концентрации общего белка при различных патологических состояниях представлено в таблице 1.

Таблица 1.

Изучение белков ликвора позволяет не только уточнить характер патологического процесса, но и оценить состояние гемато-энцефалического барьера. Индикатором для этих целей может служить альбумин при условии, что его уровень в ликворе определяется иммунохимическими методами. Определение альбумина проводится в связи с тем, что он, являясь белком крови, не синтезируется местно и поэтому может являться «маркёром» иммуноглобулинов, проникших из кровотока вследствие нарушенной проницаемости барьеров. Одновременное определение альбумина в сыворотке (плазме) крови и спинномозговой жидкости позволяет вычислить альбуминовый индекс:

При интактном гемато-энцефалическом барьере этот индекс менее 9, при его умеренном повреждении — 9−14, при заметном — 14−30, при тяжелом повреждении — 30−100, а увеличение более 100 указывает на полное поражение барьера.

Также большое значение в диагностике заболеваний центральной нервной системы имеет соотношение белковых фракций: альбумина и глобулинов. Для определения глобулиновой фракции используют реакцию Ноне-Апельта, сущность которой заключается в осаждении глобулинов насыщенным раствором сернокислого аммония рН 7,0−7,1.

Реакцию проводят в пробирке: на 0,5−1 мл реактива наслаивают 0,5−1мл СМЖ. Регистрацию результата проводят на темном фоне на 3-ей мин. после внесения ликвора.

Оценивают: едва заметное кольцо и слабая опалесценция — +, ясное кольцо и ясная опалесценция — ++, плотное кольцо и среднее помутнение — +++, плотное широкое кольцо и сильная муть — ++++.

Также для косвенной оценки белковых фракций ликвора используют коллоидную пробу Ланге с хлорным золотом.

Но наиболее точным и информативным методом определения соотношения белковых фракций в спинномозговой жидкости является электрофорез на различных носителях: ацетатцеллюлозные пленки, агар, агароза, полиакриламидный гель.

Электрофоретическая картина ликвора представлена 7 фракциями: преальбумины, альбумины, б₁-, б₂-, в-, г-, фглобулины.

Преальбумины являются белками преимущественно мозгового происхождения. Уменьшение их содержания характерно для компрессии спинного мозга, некоторых опухолей, менингитов.

В норме альбумины составляют значительную часть белков ликвора — 56%-76%. Уменьшение фракции альбумина наблюдается при атеросклерозе, интрамедуллярной опухоли, спинальной менингиоме.

б₁— глобулины имеют плазматическое происхождение и состоят из б₁-антитрипсина, б₁— липопротеинов и орозомукоида. Увеличение их фракции бывает при метастазах опухолей желудочно-кишечного тракта, инфаркте мозга и др. заболеваниях.

б₂-глобулины представлены б₂-макроглобулином, церулоплазмином, гаптоглобинами, которые также имеют плазматическое происхождение.

Увеличение б₂-глобулинов наблюдается у больных с атеросклерозом, медуллярными менингиомами, при некоторых злокачественных опухолях.

Снижение этой фракции бывает при рассеянном склерозе, нейросифилисе, мозговом инфаркте.

в-глобулины включают в себя трансферрин, гемопексин, С3- и С4- компоненты комплемента и имеют плазматическое происхождение. Изменения в этой фракции встречаются достаточно редко.

ф-глобулины являются белками мозга. Значительное увеличение их количества наблюдается при болезнях Альцгеймера и Пика. Уменьшение данной фракции отмечается при церебральных и спинальных менингиомах.

гглобулины могут быть плазматического и мозгового происхождения. Увеличение уровня г-глобулинов характерно для рассеянного склероза, нейросифилиса, миеломы, менингитов и др. воспалительных заболеваний центральной нервной системы.

Уровень глюкозы в цереброспинальной жидкости является одним из важных индикаторов функции гемато-энцефалического барьера и широко используется для его оценки. Изменения в гемато-энцефалическом барьере вызывают нарушения активного транспорта глюкозы. Определение глюкозы в ликворе нужно проводить одновременно с исследованием ее в крови. Нормальные величины для спинномозговой жидкости — 2,8−3,9 ммоль/л, для крови — 3,3−5,5ммоль/л.

При некоторых заболеваниях центральной нервной системы уровень глюкозы меняется.

Таблица 2.

Определение лактата и пирувата в цереброспинальной жидкости имеет большое диагностическое значение при дифференциации бактериального менингита от вирусного. Источником лактата в ликворе является мозговая ткань, лейкоциты и бактерии. При бактериальном менингите, ишемическом инсульте, карциноматозе оболочек мозга, после эпилептических припадков концентрация лактата и пирувата значительно повышается. В норме содержание лактата составляет — 1,1−2,8 ммоль/л, а пирувата — 0,06−0,15 ммоль/л. Отношение лактат/пируват обычно 20:1.

Также в ликворе определяют мочевину, ее нормальные значения — 1,0−5,5 ммоль/л. Но при уремии, острых азотемических менингоэнцефалитах концентрация мочевины меняется.

Количество мочевой кислоты увеличивается по сравнению с нормой (5,9−17,5 мкмоль/л) при атрофии мозга, тяжелой форме бактериального менингита, подагре, уремии, заболеваниях печени.

Нормальное содержание креатинина в спинномозговой жидкости составляет 44,2−94,5 мкмоль/л, но может увеличиваться при почечной недостаточности, нервно-мышечных заболеваниях.

Аммиак является достаточно токсичным соединением для центральной нервной системы. Поэтому его увеличение в ликворе по сравнению с нормой (11,8−19,9 мкмоль/л) служит неблагоприятным признаком и наблюдается при печеночной коме, эпилепсии, печеночной энцефалопатии.