Фармацевтический анализ эпинефрина (адреналина)

Адреналин впервые выделен русским ученым Н. О. Цибульским в конце XIX в., а в 1903 г. установлена его химическая структура, которая была подтверждена синтезом. В последующие годы был выделен сопутствующий адреналину гормон норадреналин, его предшественник дофамин и осуществлен их синтез.

Известны различные способы их синтеза.

Исходным продуктом синтеза эпинефрина может быть пирокатехин:

Лекарственные вещества, являющиеся солями, легко растворимы в воде и практически нерастворимы в эфире и хлороформе. В этаноле дофамин, эпинефрина и норэпинефрина битартраты мало или очень мало растворимы. Являясь фенолами, все они растворяются в растворах щелочей с образованием фенолятов (феноксидов).

Подлинность эпинефрина подтверждают по ИК-спектрам, снятым в дисках с калия бромидом в области 2000;400 см^-1. Полосы поглощения должны полностью совпадать с прилагаемым к ФС рисунком спектра.

УФ-спектр раствора эпинефрина в 0,1 М хлороводородной кислоте имеют максимумы поглощения при 279 нм. ФС рекомендует для подтверждения подлинности устанавливать удельный показатель поглощения при длине волны 279 нм.

Эпинефрин, как и другие фенолы, вступают в реакции азосочетания, образуя окрашенные азосоединения, дают цветную реакцию снитрозо—нафтолом (красно-бурое окрашивание), с нингидрином (жёлтое). Для идентификации могут быть также использованы некоторые осадительные (общеалкалоидные) реактивы.

Подобно другим фенолам, катехоламины окисляются кислородом воздуха, образуя окрашенные продукты. Известны многочисленные химические реакции, основанные на их окислении. ФС рекомендует для испытания подлинности общую цветную реакцию с раствором хлорида железа (III). Эпинефрин, образует с этим реактивом изумрудно-зеленое окрашивание, переходящее от капли раствора аммиака в вишнево-красное, т.к. изменение рН среды вызывает изменение состава окрашенного комплекса.

При нагревании до 60 C эпинефрина с 1% -ным раствором иодата калия и разведённой ортофосфорной кислотой появляется стойкое красно-фиолетовое окрашивание. Реакция подтверждает наличие в молекуле двухатомного фенола.

Отличать друг от друга эпинефрин и норэпинефрин можно реакцией окисления 0,1 М раствором иода в двух буферных растворах, имеющих рН соответственно 3,56 и 6,5. Эпинефрин в растворах, имеющих как рН 3,56, так и рН 6,5, образует адренохром, придающий растворам темно-красное окрашивание:

Окраска сохраняется (при pH 3,56) и после добавления 0,1 м раствора тиосульфата натрия. Эпинефрин и норэпинефрин восстанавливают серебро из аммиачного раствора, дают положительную реакцию с реактивом Фелинга. Цветная реакция с 1,2-динитробензолом основана на окислении в щелочной среде с образованием орто-хинона:

Происходит восстановление 1,2-динитробензола до окрашенных в сине-фиолетовый цвет соединений о-хиноидной структуры:

Если к раствору эпинефрина прибавить небольшой объем щелочи, появляется желто-зеленая флуоресценция продуктов его окисления (адренолютин):

Специфичной для эпинефрина является реакция с реактивом, который готовят путем растирания желтого оксида ртути и тиоцианата калия в разведенной азотной кислоте. При нагревании до кипения реактива и эпинефрина появляется интенсивная красная или пурпурно-красная окраска. Цветная реакция с молибдатом аммония, нитритом натрия в присутствии диэтилентриаминпентауксусной кислоты использована для фотометрического определения эпинефрина при длине волны 465 нм.

Для обнаружения тартрат-иона в солях эпинефрина используют реакцию, основанную на дегидратации и последующем окислении при нагревании с концентрированной серной кислотой в присутствии резорцина. Происходит вначале образование глиоксаля и муравьиной кислоты:

Затем муравьиная кислота вступает в реакцию конденсации с тремя молекулами резорцина. В результате образуется ауриновый краситель, имеющий хиноидную структуру:

Основное испытание на чистоту эпинефрина — обнаружение допустимых пределов примесей промежуточных продуктов синтеза. В эпинефрине обнаруживают адреналон, устанавливая оптическую плотность растворов в 0,01 М хлороводородной кислоте при 310 нм.

В эпинефрине и его битартрате устанавливают также наличие примеси норэпинефрина. Для его обнаружения используют цветную реакцию с 1,2-нафтохинон-4-сульфонатом калия и метод ТСХ на пластинках Силуфол, а для количественного определения (допустимо не более 0,0018%) — метод ВЭЖХ в подвижной фазе: вода-метанол (85: 15).

Количественное определение эпинефрина (по ФС) выполняют методом неводного титрования в среде ледяной уксусной кислоты, титруя 0,1 М раствором хлорной кислоты (индикатор метиловый фиолетовый или кристаллический фиолетовый):

Для определения эпинефрина в лекарственных формах используют методы УФ-спектрофотометрии (в максимуме светопоглощения — 279 нм) и фотоколориметрии, основанные на цветных реакциях с железоцитратным и другими реактивами.

Лекарственные вещества катехоламинов хранят по списку Б. Поскольку они легко окисляются под действием света и кислорода воздуха, их следует хранить в защищенном от света месте в герметически укупоренной таре из оранжевого стекла или в запаянных ампулах. Для стабилизации к инъекционным растворам эпинефрина добавляют 0,1% натрия метабисульфита [пентаоксодисульфата (IV) натрия], обладающего восстановительными свойствами.

Эпинефрина применяют в качестве адреномиметических (сосудосуживающих) средств.