Методы определения оплодотворяющей способности спермы сельскохозяйственных животных

Сперму от производителей получают в искусственную вагину и оценивают по активности движения спермиев, насыщенности (концентрации) в 1 мл спермы и продолжительности выживания. Кроме того, учитывают объем эякулята, общее число спермиев в нем, цвет и запах спермы. В некоторых случаях определяют также морфологический состав спермиев — процент нормальных и ненормальных по форме спермиев.

Исследование спермы начинают с определения ее объема с помощью мерной пипетки, градуированного цилиндра или мензурки. Можно определять массу эякулята взвешиванием на лабораторных весах с погрешностью не более 0.08 г.

Цвет нормальной спермы белый или белый с желтым оттенком. Сероватый или голубоватый оттенок — признак олигоспермии (недостаточное число спермиев). Интенсивный желтый цвет обычно указывает на примесь мочи. Розоватый или красноватый — признак примеси крови, как следствие свежей травмы. Буро-красный указывает на глубокую травму половых путей давнего происхождения. Зеленоватый оттенок сперма приобретает от примеси гноя. Хлопья в сперме наблюдаются при воспалении пузырьковидных желез.

Запаха нормальная сперма не имеет или обладает легким запахом жиропота. При хронических, гнойных процессах в семенниках или в придаточных половых железах сперма может иметь гнилостный запах.

Консистенция спермы быка сливкообразная, барана — сметанообразная, жеребца и хряка — сходная с молоком.

Густота спермиев. По густоте спермы ориентировочно устанавливают насыщенность ее спермиями, относя к густой (Г), средней © или редкой (Р). У быков оценка Г ставится, если все поле зрения микроскопа заполнено спермиями и в пространстве между ними не укладывается длина одного спермия. Средней считают сперму, когда между спермиями хорошо выражены промежутки, равные приблизительно длине спермиев. В редкой сперме расстояние между спермиями превышает их длину.

Сложнее определять густоту спермы производителей с маточным типом осеменения, так как у них секреты придаточных желез очень сильно разбавляют спермиев. У всех видов животных оценка по густоте не позволяет точно установить насыщенность спермы спермиями, поэтому с переходом на использование разбавленной спермы при оценке эякулята определяют концентрацию спермиев.

К использованию допускают сперму быков, хряков и жеребцов с оценкой Г и С, а у баранов — только Г.

Активность движения (подвижность) спермиев является выжным показателем в первоначальной оценке полученной спермы. Сперма, в которой отсутствуют спермии с активным поступательным движением, непригодна для оплодотворения.

Подвижность спермиев оценивают по 10-балльной системе. Каждый балл равен 10% спермиев, обладающих поступательным движением. Если спермии имеют манежное движение (по кругу) или только колеблются, качество спермы оценивают буквой К (колебательное движение). Сперму с неподвижными спермиями обозначают буквой Н (некроспермия).

Качественные показатели спермы

Подвижность неразбавленной спермы быка определяют при температуре 40⁰С. На теплое предметное стекло наносят каплю спермы и 2 — 4 капли3%-ного раствора цитрата натрия, перемешивают, накрывают покровным стеклом и просматривают не менее трех полей зрения. Поскольку оценка спермиев по подвижности достаточно субъективна, то для контроля в необходимых случаях можно определять количество живых и мертвых спермиев.

При оценке спермы на густоту и подвижность спермиев применяют комплексное обозначение, позволяющее удобно отражать ее качество. Например, Г -10 баллов означает, что исследуемая сперма густая и 100% спермиев обладают головным прямолинейным движением; Г -9 баллов означает 90%, 8 — 80, Г-7 -70% подвижных спермиев и т. д.

Концентрацию спермиев (количество в 1 мл эякулята) наиболее точно определяют в счетной камере Горяева или другого автора. Это один из основных показателей качества спермы, на который ориентируются при разбавлении эякулята.

Для определения концентрации спермиев жеребцов Г. В. Паршутин и Е. В. Румянцева сконструировали специальные стандарты. Они представляют собой запаянные пробирки, содержащие жидкость, имеющую цвет, соответствующий той или иной известной концентрации спермы. Для определения концентрации исследуемую сперму наливают в пробирку с диаметром стандартных пробирок, устанавливают рядом с ней пробирки стандарта и подбирают наиболее подходящий по виду стандарт, на котором отмечено количество спермиев в 1 мл спермы.

Концентрацию спермиев в эякулятах хряка удобно определять оптическим стандартом С. И. Сердюка.

В настоящее время станции искусственного осеменения пользуются фотоэлектроколориметрическим методом, основанным не на прямом подсчете спермиев, а на учете степени оптической плотности спермы, т. е. мутности. Этот метод позволяет быстро (2−3 мин) определить концентрацию спермиев в сперме, но так как фотоэлектроколориметр создан для анализа истинных растворов, а сперма является взвесью и в ней содержится большее или меньшее количество эпителиальных и других клеток, то результат нередко может быть неточным.

Для получения более точных результатов М. П. Рязанский разработал прямой метод подсчета числа спермиев в сперме на скоростном (за 37−40 с) автоматическом счетчике клеток — целлоскопе. С этой целью можно использовать и венгерский прибор «Пикоскель».

Определение количества мертвых спермиев. В. А. Морозов предложил использовать красители, которые окрашивают спермиев только мертвых и с колебательными движениями. Самый простой способ окраски спермы быков следующий. Исследуемая сперма должна иметь концентрацию спермиев 0,2−0,4 млрд/мл, при более высокой концентрации эякулят разбавляют 3%-ным раствором цитрата натрия до указанного показателя. Готовят 1−5%-ный раствор эозина водорастворимого на 3%- ном растворе лимoннoкиcлoгo натрия. На чистое обезжиренное теплое (35 ⁰С) предметное стекло наносят каплю спермы, добавляют 2−3 капли краски, подогретой до 30 ⁰С, смешивают 2−4 с и делают три тонких мазка, которые высушивают. В каждом препарате подсчитывают 100−150 спермиев, отдельно учитывая количество с окрашенными и неокрашенными головками.

Определение содержания патологических форм спермиев и включений спермы у быков проводят в мазках, окрашенных азур-эозином или другими красителями, где подсчитывают 100−200 спермиев и различные включения. Среди нормальных спермиев всегда находится более или менее значительное количество патологических форм. Чаще аномалии выявляются в хвостовой части спермиев, основании головки и шейки. С возрастом к моменту физиологической зрелости производителя количество аномальных спермиев уменьшается. Могут встречаться самые различные патологические формы спермиев: гигантского размера или карликовые, спермии с двумя-тремя головками, но общим хвостом, с двумя хвостами, с укороченным хвостом, его деформацией или отсутствием, с цитоплазматической капель кой, слишком большой или маленькой головкой и другие формы. Иногда встречаются спермии, лишенные головки, но способные двигаться.

При микроскопическом исследовании спермы выявляются следующие включения: клетки плоского, переходного эпителия, клетки семенных канальцев (зернистые); форменные элементы крови — эритроциты и лейкоциты; гиалиновые шары, круглые или овальные, иногда слоистые и напоминающие зерна крахмала, амилоидные тельца, сильно блестящие — лецитиновые зернышки, кристаллы спермина и др. Если примесей в сперме мало, это считается нормой. Если примесей много, необходимо выявить их источник и причину.

В результате исследования могут быть установлены следующие недостатки:

асперматизм (Азм) — отсутствие спермы;

олигосперматизм (Озм) — малый объем эякулята;

аспермия (А) — отсутствие в сперме спермиев;

олигоспермия (О) — недостаточное число спермиев в эякуляте;

некроспермия (Н) — мертвые спермии;

тератоспермия (Т) — патологические спермии и др.

Производителя можно использовать для естественного или искусственного осеменения, если его сперма отвечает требованиям действующей инструкции по осеменению животных.

Решающее значение для оценки спермы имеет определение оплодотворяющей способности спермиев. Установлено, что она может быть выявлена только в отношении определенной группы самок, находящихся при конкретных условиях существования и времени осеменения. Оплодотворение зависит от степени родства самки и производителя, состояния их здоровья, упитанности, качества кормления и др. Поэтому для определения оплодотворяющей способности спермы лучше всего использовать здоровых ремонтных телок. Правильно поставленная биологическая проба спермы на здоровых животных — самый надежный критерий ее оценки. Все другие методы являются только косвенными, т. е. они позволяют лишь условно судить об оплодотворяющей способности спермы. Сперма считается нормальной, если оплодотворяемость от первого осеменения составляет не менее 70−75%. Быки с пониженной оплодотворяющей способностью спермы дают маложизненное потомство, и их нельзя использовать ни при искусственном, ни при естественном осеменении.

Наблюдения показали, что даже всестороннее лабораторное исследование спермы иногда не отражает ее качеств. От некоторых жеребцов с прекрасными лабораторными показателями спермы оплодотворяемость кобыл оказывалась низкой, если интервалы между садками были больше 48 ч. Осеменение кобыл через 24−36 ч этими же производителями давало резкое повышение плодовитости. Этот факт Х. И. Животков объясняет неодинаковой выживаемостью спермиев отдельных производителей в половом аппарате матки и предлагает применять у ценных производителей «биологическую пробу», заключающуюся в осеменении кобыл через различные промежутки времени. На основании учета итогов этих осеменений устанавливают индивидуальную нагрузку.