Цель исследования. 
Сравнительный анализ накопления ацетата свинца в плазме крови, моче и гомогенатах твердых тканей зубов крыс

Проведение сравнительного анализа количественного наличия ацетата свинца в плазме крови, моче и гомогенатах твердых тканей зубов крыс с целью изучения информативности показателей для оценки состояния аккумуляции и метаболизма ацетата свинца в зависимости от степени его накопления.

Материалы и методы исследования

Для изучения степени количественного накопления соединений свинца в гомогенатах твердых тканей зубов в эксперименте на крысах проведено комплексное исследование плазмы крови, мочи и гомогенатов твердых тканей зубов у 36 белых беспородных крыс-самцов массой тела 200−250 г. Условия содержания: групповое в помещении вивария Харьковской медицинской академии последипломного образования при температуре воздуха 25−27 °С (лето), влажности более 40%, световом режиме день/ ночь. Животных использовали в исследованиях после окончания карантина, то есть через 30 дней после поступления в виварий. Крыс взвешивали и осматривали перед началом проведения эксперимента. Использовали животных одинакового возраста с интактными зубными рядами. Животные в течение эксперимента находились на стандартном водно-пищевом рационе вивария, со свободным доступом к воде и пище, дышали городским воздухом, поступающим из приточно-вытяжной вентиляции вивария.

В эксперименте использовали ацетат свинца производства «Макрохим» (Украина).

Животные были разделены на 2 группы: 1-я — контрольная (12 крыс), получавшая обычную воду на протяжении 1 месяца, до забора проб на исследование, 2-я (24 крысы) — опытная, животные получали ацетат свинца в дозе 10 мг/кг массы тела животного в виде 1% раствора интрагастрально с питьевой водой ежедневно в течение 1, 2 и 3 месяцев. В опытной группе выделено три подгруппы по продолжительности затравки животных ацетатом свинца.

Исследования на животных проводили с соблюдением Международных принципов Европейской конвенции о защите позвоночных животных и в соответствии «Общих этических правил экспериментов над животными», утвержденных I Национальным конгрессом по биоэтике 20.10.2001 (г. Киев) и закона Украины «Про захист тварин від жорстокого поводження» № 3477- IV от 21.02.2006 г.

Забор мочи производили в течение дня с помощью эксикатора, собранная моча замораживалась. По окончании срока наблюдения производили эвтаназию животных под хлороформным рауш-наркозом. Из сердечной артерии брали кровь, её центрифугировали и замораживали. Затем из нижней челюсти вычленяли гомогенат твердых тканей зубов, их отделяли от остатков костной ткани и затем фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина.

Измерения выполнялись на атомно-абсорбционном спектрометре iCE 3500 (Thermo Scientiific, США). Спектрометр укомплектован двумя блоками атомизации — пламенным и электротермическим. Технические характеристики:

• — диапазон длин волн — 180. .900 нм;
• — двухлучевая оптическая схема Стокдейла в пламенном варианте;
• — однолучевая оптическая схема в электротермическом варианте;
• — Эшелле монохроматор;
• — коррекция фонового поглощения — Зеемановская либо при помощи дейтериевой лампы, в отделе аналитической химии функциональных материалов и объектов окружающей среды (зав. отделом, канд. хим. наук Беликов К. Н.) Государственного научного учреждения «Научно-технологический комплекс «Институт монокристаллов» НАН Украины.

Определение количественного содержания ацетата свинца в образцах плазмы крови крыс измеряли в электротермическом варианте атомно-абсорбционной спектрометрии с предварительным разложением плазмы крови при помощи микроволновой установки MDS-2000 (CEM Corporation, США). Встроенный компьютер позволял программировать пятистадийный процесс обработки проб, каждая стадия которого не превышала 60 минут при максимальных значениях давления и температуры. Способ градуировки — метод стандартных добавок. Анализируемые растворы, добавки раствора с известным содержанием свинца и раствор химического модификатора дозировались в графитовую кювету при помощи автосамплера. Регистрация сигналов, построение градуировочного графика и расчет концентрации ацетата свинца в анализируемых растворах осуществляли программным обеспечением спектрометра.

Образцы мочи крыс (0,5 мл) помещали в стеклянные химические стаканы объемом 50 мл, прибавляли по 2,5 мл концентрированной HNO3 (65%) и по 2,5 мл деионизированной воды. Растворы нагревали на электроплитке до кипения и выдерживали в течение 5 мин. Полученные растворы охлаждали до комнатной температуры, количественно переносили в мерные колбы объемом 10 мл и доводили до метки деионизированной водой. Выполняли измерения количественного содержания ацетата свинца в электротермическом варианте атомно-абсорбционной спектрометрии с регистрацией сигналов, построением градуировочного графика и расчетом концентрации ацетата свинца, которое осуществлялось программным обеспечением спектрометра.

Для определения количественного содержания ацетата свинца в гомогенатах твердых тканей зубов крыс изготавливали навески зубов массой 0,04−0,25 мг, помещали их в стеклянные химические стаканы объемом 50 мл, добавляли по 3 мл концентрированной HNO3 (65%) и по 2 мл деионизированной воды, нагревали до полного растворения образцов, не допуская сильного вскипания и разбрызгивания растворов, охлаждали до комнатной температуры и количественно переносили в мерные колбы объемом 10 мл, доводили до метки деионизированной водой и перемешивали. Градуировку выполняли по методу градуировочного графика. Для чего готовили градуированные растворы, содержащие азотную кислоту в количестве, эквивалентном пробам и добавки стандартного раствора свинца. Концентрация свинца в градуированных растворах (мг/л): 0,1; 0,2; 0,4 и 0,6. Для приготовления использовали стандартный раствор свинца с концентрацией 1 мг/мл. Измерения производили в пламени ацетилен-воздух при длине волны 217,0 нм. Регистрация сигналов, построение градуировочного графика и расчет концентрации свинца в анализируемых растворах осуществлялись программным обеспечением спектрометра.

Полученные количественные показатели наличия ацетата свинца в плазме крови, моче и гомогенатах твердых тканей зубов обрабатывали статистически с помощью программы STATISTICA 6.1 для оценки погрешности и достоверности полученных результатов. Для определения степени отличий тех или иных выборок был использован t-критерий Стьюдента.