Проведение ПЦР с целью получения коротких ампликонов

Для проведения ПЦР использовали амплификатор роторного типа «Rotor Gene». Программа амплификации, которая задавалась на приборе, включала в себя следующее (таблица 4):

Таблица 4 — Параметры проведения ПЦР с помощью Rotor Gene

На первом этапе происходит расплетение вторичной структуры ДНК (плавление) в течение 30 минут. На втором этапе к определенным участкам ДНК присоединяются праймеры (отжиг праймеров). На заключительном этапе с помощью находящейся в растворе полимеразы происходит накопление участков ДНК, ограниченных праймерами.

Схема установки и режим облучения образцов

Для обработки ДНК раствора и раствора белка ЭМП низких частот, было использовано специальное оборудование, блок-схема которой представлена на рисунке 9. Она состоит из генератора ГЗ-118, катушки индуктивности, имеющей 1200 витков и экранированной камеры. Вектор магнитной индукции ЭМП, создаваемого катушкой, составляет 30 млТл, удельное сопротивление катушки 320 Ом, и напряжение на катушке равно 14 В.

1 — генератор ГЗ-118, 2 — экранированная камера, 3 — катушка индуктивности, 4 — исследуемый образец.

Рисунок 9 — Блок-схема установки для воздействия ЭМП НЧ на ДНК и белки.

Нужная частота выставлялась на панели генератора низкочастотных сигналов ГЗ-118, который передавал сигнал, с необходимыми характеристиками, на катушку. Экранированная камера была необходима для локализации магнитного поля, создаваемого катушкой внутри камеры, и ослабления его характеристик за пределами камеры. Эппендорфы с исследуемыми образцами (ДНК раствор, белковый раствор), помещались в экранированную камеру, в которой располагалась катушка индуктивности, и подвергались воздействию ЭМП НЧ. Температура, при которой производили облучение, составляла 23 — 25 0С. По истечению данного времени содержимое эппендорфа моментально было перемещено в кювету хемилюминометра для регистрации воздействия электромагнитного поля данной частоты, вызвавшего стимуляцию к протеканию экзотермических реакций окисления с выделением энергии в виде потока фотонов, что и представляет из себя явление хемилюминесценции.

Устройство хемилюминометра

Хемилюминометр — аппаратно-программный комплекс, предназначенный для регистрации и анализа сверхслабых световых потоков, сопровождающих химические и биологические процессы, протекавшие с образованием свободных радикалов. Блок-схема приведена на рисунке 10.

Рисунок 10 — Блок-схема основных функциональных элементов хемилюминометра Lum-5773

Хемилюминометр состоит из следующих функциональных блоков:

• 1 Кюветное отделение — предназначенное для размещения в приборе исследуемых образцов.
• 2 Миксер — выполняет функцию светоизоляции исследуемых образцов от внешней среды, а так же перемешивание исследуемых образцов с помощью встроенного электромотора.
• 3 Термостат — предназначен для поддержания постоянной температуры исследуемых образцов.
• 4 Фотоэлектронный умножитель — предназначен для измерения интенсивности свечения исследуемых образцов.
• 5 Блок электроники — предназначен для управления всеми компонентами прибора и передачи результатов измерений на компьютер.