Особенности диагностики оспы овец

Особенности диагностики оспы овец

Определение болезни и краткая характеристика возбудителя

оспа овца возбудитель диагностика

Задача На ферме болеют овцы всех возрастов. Особенно тяжело болеют ягнята до 5−6 месячного возраста, гибель среди них до 10%. У больных животных в ротовой полости можно обнаружить красные пятна различной величиной и эрозии, температура тела повышена на 1−2 С, в области губ, носового зеркала и крыльев носа видны везикулы, пустулы, корочки, а у овцематок и на вымени. У больных ягнят пенистые истечения из ротовой полости. У взрослых овец хромота (эрозия в области межкопытной щели). На вскрытии отмечают эрозии и язвы на слизистых оболочках ротовой полости. Погибшие ягнята истощены. У отдельных животных гнойно-некротические очаги в паренхиматозных органах.

На основании приведённых данных задачи я предполагаю, что это оспа овец, экзема, грибковый дерматит, чесотка или контагиозный пустулёзный дерматит.

На основании микроскопического исследования вируса определила, что это оспа овец.

Оспа овец — инфекционная контагиозная болезнь, характеризующаяся лихорадкой и папулезно-пустулезной сыпью на коже и слизистых оболочках.

Вирус оспы овец (Sheep pox virus) относится к Семейству Вирусов Оспы (Family Poxviridae), к роду Каприпоксвирусы (Capripoxvirus)

Первые сообщения об оспе овец в Европе (в Англии) появились в 1272 году. Вирусную этиологию установил в 1903 году французский исследователь А. Боррель.

Морфология и химический состав. По Е. И. Скалинскому (1966), размер вириона 194×115 нм, по Кохену и др (1971) — 310×240 нм.

В центре вириона находится электронноплотное, устойчивое к пепсину тельце — нуклеоид. В нём различают гранулярную и фибриллярную структуру (Кохен и др., 1971)

Устойчивость к физикохимическим воздействиям. В лимфе при температуре 2−4С вирус выживает не менее 2 лет. Быстро погибает он при высокой температуре (55С за 20 мин) и в гниющем материале. Долго выживает в сухих оспенных корочках, в лимфе при минус 5−10С в течение 4−5 лет. Вирус чувствителен к хлороформу и диэтиловому эфиру.

Антигенная структура не изучена. В РСК, РН, РДП в структуре вируса выявляют несколько антигенов.

Антигенная активность. Комплементсвязывающий антиген в оспенных корочках появляется через 8 дней после заражения. Преципитирующая активность вирусного антигена отмечалась в 63% исследованных образцов (Ромеро, Меркадо и др., 1973 г.) У переболевших и гипериммунных животных в сыворотке крови выявляются вируснейтрализующие антитела, специфический титр которых можно определить в культуре клеток со штаммом, адаптированным к этой системе.

Антигенная вариабельность и родство. Все выделенные в разных странах штаммы вируса оспы овец в антигеном отношении идентичны. Иммунологические варианты не найдены. Методами двойной диффузии в агаре и иммуноэлектрофореза обнаружена неоднородность и различная иммуноэлектрофоретическая подвижность компонентов растворимого антигена вирусов оспы овец и коз. Гемагглютинирующие свойства не изучены.

Спектр патогенной активности в естественных условиях. Вирус поражает только овец. Наиболее восприимчивы мериносы и менее — животные грубошерстных пород.

Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство, вирусовыделение. Вирус, попадающий в организм с вдыхаемым воздухом, размножается в клетках эпителия дыхательных путей, вызывая типичные изменения. Отсюда он током крови заносится в кожу и слизистые оболочки, в которых вызывает характерные изменения. У суягных овец вирус через плаценту проникает в плод и вызывает аборт или рождение больных, нежизнеспособных ягнят (Маннингер и Мочи, 1961). [4]

Патологоанатомические изменения, характерные данной болезни

Задача

На ферме болеют овцы всех возрастов. Особенно тяжело болеют ягнята до 5−6 месячного возраста, гибель среди них до 10%. У больных животных в ротовой полости можно обнаружить красные пятна различной величиной и эрозии, температура тела повышена на 1−2 С, в области губ, носового зеркала и крыльев носа видны везикулы, пустулы, корочки, а у овцематок и на вымени. У больных ягнят пенистые истечения из ротовой полости. У взрослых овец хромота (эрозия в области межкопытной щели). На вскрытии отмечают эрозии и язвы на слизистых оболочках ротовой полости. Погибшие ягнята истощены. У отдельных животных гнойно-некротические очаги в паренхиматозных органах.

Данные выделенные жирным шрифтом позволяют мне предположить, что это оспа овец. Для подтверждения болезни мною были проанализированы несколько литературных источников, но для точной постановки необходимо провести серологические реакции.

Данные из литературных источников:

1)Патологический процесс состоит из ряда последовательных стадий: а) розеолы —появление красных пятен в течение 1—2 дней; б) папулы — превращение пятен в узелки в течение 1 — 3 дней; в) везикулы — папулы в течение 5 — 6 дней превращаются в пузырьки, наполненные серо-желтоватой жидкостью, в этот период лихорадочные явления угасают; г) пустулы — содержимое везикул в течение трех дней мутнеет и становится гнойным;) крусты — на месте высохших пустул образуется бурый струп, эпителий восстанавливается, а при глубоком поражении возникает соединительнотканный рубец; струп отпадает через 5 — 6 дней.

Ягнята переболевают тяжелее, чем взрослые овцы.

Болезнь начинается угнетением, анорексией и лихорадкой (41— 42 °С). Оспенную сыпь чаще обнаруживают через 1—4 дня на коже головы, губах и крыльях носа, вокруг глаз, на внутренних поверхностях передних и задних конечностей, реже — в области живота, на покрытых тонкой кожей вымени и мошонке. [6]

2)Клиническая картина и течение. Угнетение, сильная лихорадка, с повышением температуры тела до 41−42 С. Слизистые оболочки гиперемированы. Общее состояние животного подавленное; аппетит уменьшен или отсутствует.

Через 1 — 4 дня от начала болезни появляется оспенная сыпь. Экзантему по преимуществу обнаруживают на бесшёрстных или слабо покрытых шерстью участках кожи, а именно: на голове, чаще на губах и крыльях носа, щеках, вокруг глаз; затем на внутренней поверхности передних и задних конечностей, на коже вымени, на крайней плоти самцов, мошонке, передней поверхности хвоста, на слизистых оболочках срамных губ и реже на груди и в области живота.

Вначале сыпь имеет вид круглых красных пятнышек, но вскоре (обычно на следующий день) в центре розеол образуются красные узелки 4 — 5 мм в диаметре, бледнеющие при надавливании. Папулы быстро увеличиваются в размере и превращаются в везикулы. Гнойный процесс бывает особенно ярко выраженным при поражениях ротовой и носовой полостей и глаз. [7]

3)Симптомы: кратковременное повышение температуры тела, вялость, снижение аппетита, экзантема на малошерстных участках кожи, розеолы, быстро переходящие в папулы, которые некротизируются; если некроз охватывает глубокие слои кожи — появляются толстые струпья, такие струпья отпадают на 5—6-е сутки.

Патологоанатомические изменения. Характерная сыпь на коже и слизистых оболочках. В паренхиматозных органах — участки некроза, селезенка и лимфатические узлы увеличены. [8]

4)Симптоматика. Слизистая оболочка и конъюнктива гиперемированы. Оспенную сыпь чаще обнаруживают на голове, губах и крыльях носа, коже вымени. Вначале сыпь имеет вид круглых розоватых пятнышек с незначительным отеком по периферии. Через 1−2 дня они превращаются в плотные круглые папулы. По мере формирования папулы бледнеют, становятся серобелыми или серожелтыми с розоватым ободком. В это время эпидермис легко отделяется в виде плёнки. При тяжелом течении оспы экзантема покрывает большие участки кожи. Овцы хромают. Болезнь сопровождается повышением температуры. Молодые животные и ягнята чаще болеют и тяжелее переносят инфекцию.

Патоморфологические изменения. Серо-беловатые плоские узелки в слизистой гортани, трахей, губ, языка. На их месте остаются эрозии и язвы. Оспенные узелки встречаются в печени, а также небольшие участки коагуляцинного некроза. В почках некоторые сосудистые клубочки находятся в состоянии некроза. 1]

Дополнительные сведения о признаках болезни, имеющие диагностическое значение Симптоматика. Проявление болезни начинается с опухания век и появления серознослизистого и серозногнойного истечения из глаз и носа. Дыхание затруднено и сопровождается сопящим шумом. При надавливании в области поясницы ощущается болезненность. Пульс учащен, дыхание ускорено. Выделение мочи и кала болезненны и иногда задерживаются. Иногда появляются очень большое количество папул, в этом случае они сливаются. Везикулы и пустулы обычно не формируются. В пораженных участках кожи под струпом образуются соединительнотканные рубцы, которые в зависимости от степени повреждения ткани слабо зарастают или совсем не зарастают волосом. Сливную форму чаще последнее время наблюдают у ягнят, у которых она протекает в осложнённой микрофлорой форме. Болезнь затягивается до 4 недель и животные погибают от сепсиса или истощения. При поражении оспой суягных овец происходит внутриутробное заражение плодов с последующими абортами или рождением мёртвых ягнят.

Патоморфологические изменения. Наиболее выражены в коже и слизистых оболочках дыхательных путей и желудочно-кишечного тракта. Характерной особенностью папул является ранее омертвение эпидермиса, который легко отделяется от подлежащей кожи и открывается серо-красная поверхность дермы. Встречаются образовавшиеся язвы. Из внутренних органов морфологические изменения наиболее часто обнаруживают в лёгких. Там находятся круглой или многоугольной формы, серо-белого цвета. Едва выступающие над общей поверхностью органа очаговые уплотнения от едва видимых глазом до 1 см в диаметре. Очень часто изменения обнаруживают в слизистой оболочке носа. Она гиперемирована, набухшая, на ней хорошо видны серовато-беловатые плоские узелки размером от 1 до 12 мм в диаметре. На слизистой оболочке рубца, сычуга, а иногда и кишечника находятся оспенные узелки круглой формы, возвышающиеся полушарообразно, плотные, серобелого цвета. При некрозе тканей в центре узелков находятся неглубокие изъязвления с серо-красноватой поверхностью. В местах заживления язв обнаруживают рубцы с утолщенными краями или рубцы звёздчатой формы. В миокарде находят зернистую и жировую дистрофию мышечных волокон и клеток проводящих путей. В головном и спинном мозге отмечают признаки расстройства кровообращения, набухание, хроматолиз, кариоцитолиз ганглиозных клеток, нейронофагию, очаговую пролиферацию клеток глии, васкулиты с образованием «муфт», состоящих из клеток типа лимфоцитов. Лимфатические узлы увеличены в объеме, покрасневшие, отечные. Поверхность разреза сочная, выбухает, красные полосы и пятна перемежаются с серыми. Эти изменения свидетельствуют о развитии геморрагического лимфаденита. 1]

Правила отбора и транспортировки пат. Материала Материал для исследования от больных, павших или вынужденно убитых животных следует брать как можно быстрее, после появления четких признаков болезни или не позже 2−4ч после клинической смерти или убоя, так как сразу же после заболевания барьерная роль кишечника значительно ослабевает, что наряду с повышенной проницаемостью кровеносных сосудов способствует диссиминации кишечной флоры. По мере углубления инфекционного процесса количество вируса может сниться в результате одновременного воздействия защитных механизмов организма. Кроме того, необходимо избегать посмертных изменений тканей. При вскрытии трупов отбор и обработка материала должна проводиться при строгом соблюдении всех правил асептика и антисептики, чтобы не внести посторонних возбудителей.

При оспе овец отбирают содержимое везикул, пустул, афт, а так же кожные поражения, а так же кусочки, изменённые внутренние органы. Для гистологического исследования острым ножом вырезают измененные участки органа на границе с неизмененными. Толщина кусочков не должна превышать 0,5- 1 см. Взятые материалы тотчас же с ножа помещают в фиксирующую жидкость (10% раствор формалина, 70% или 80% этиловый спирт, жидкости Карнуа, Ценкера и др.) Жидкости берут в 20−50 раз больше, чем материала. Фиксация при комнатной температуре продолжается 1−2 дня. Хорошо фиксированные кусочки грязносерого цвета. Взятый материал подписывают, снабжают сопроводительным документом и направляют в лабораторию с нарочным.(см.приложение) В практических условиях материал для транспортировки готовят следующим образом. Фиксированные кусочки заворачивают в вату или марлю, хорошо пропитанную раствором формалина, и помещают в целлофановую упаковку или стеклянную банку с притертой пробкой, чтобы исключить возможности испарения жидкости.

В лаборатории материал рекомендуется немедленно использовать для выделения вируса, в противном случае его консервируют и хранят в течении допустимого срока. Все методы сохранения вируссодержащего материала в условиях лаборатории можно разделить на 3 основные группы:

Консервирование в глицерине. Для консервирования материала применяют 50% раствор глицерина, который готовят следующим образом. Химически чистый глицерин смешивают с физиологическим раствором (1:1) и стерилизуют в автоклаве при 120С 30 минут. При температуре не выше 2−4 С⁰ активность вирусов в глицерине сохраняется от месяца до года.

Сохранение путём замораживания. При замораживании материала к нему необходимо добавить желатин (0,5−1,5%), стерильное обезжиренное молоко (20−50%), инактивированную сыворотку (10−30%), пептон (1−5%) и гидролазы животных белков (5−20%).При длительном хранении в замороженном состоянии (-20−70С⁰)вируссодержащие суспензии герметически упаковывают и помещают в холодильник. Размораживание можно проводить при комнатной температуре (18−25С⁰) или в воде (20−37С⁰)

Лиофильное высушивание. Это наиболее совершенный метод сохранения вирусов. Лиофилизированный препарат удобен для сохранения небольших количеств, не требует охлаждения, но должно храниться в холодильнике. 3]

Подготовка пат. материала для вирусологического исследования Выделение вируса из органов и тканей производят следующим образом. Присланный материал распаковывают, освобождают от консерванта и приступают к изготовлению вируссодержащей суспензии. Кусочки органов и тканей растирают в ступке со стерильным песком или стеклом и суспензируют в фосфотнобуферном растворе или растворе Хенса (1:10). Полученную суспензию центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10−15 мин, надосадочную жидкость отсасывают в стерильные флаконы и добавляют антибиотики (пенициллина- 1000ЕД., стрептомицина- 500 ЕД, нистатина- 30 ЕД, тетрациклина- 100 мкг на 1 мл) После 30−60 минут контакта с ними при комнатной температуре материал проверяют на стерильность путём посева на МПБ, МПА, среду Сабуро (выдерживают в термостате при 37С в случае выявления бактерий 2 суток, грибовдо 10 суток) и используют для заражения овец по методу Бореля и куриных эмбрионах.

Содержимое папул и пузырьков разводят раствором Хенкса 1:5 или 1:10 и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость обрабатывают антибиотиками из расчёта 500 ЕД пенициллина, 200ЕД стрептомицина, 30 ЕД нистатина и 100 мкг тетерациклина 1 мл и по истечении 30−60 мин, при комнатной температуре ее проверяют на стерильность и используют для заражения. 3]

Лабораторная диагностика возбудителя оспы овец Методы обнаружения возбудителя оспы овец.

Для обнаружения вируса используют вирусоскопию.

Приготовленные мазки окрашивают по М. А. Морозову для обнаружения элементарных телец оспы. Техника окрашивания заключается в следующем. Мазок покрывают жидкостью Руге, через минуту жидкость сливают, препарат промывают дистиллированной водой и протравливают реактивом, состоящим из тинина, дистиллированной воды и жидкой карболовой кислоты, до появления паров. После тщательного промывания водой мазок обрабатывают 1−2 мин раствором аммиачного серебра при лёгком подогревании, пока препарат не приобретет темнокоричневую окраску. Затем его вновь тщательно промывают дистиллированной водой и сушат на воздухе.

При рассмотрении под микроскопом при помощи иммерсионной системы элементарные тельца Бореля представляются в виде мелких (200- 300ммк) округлых образований темнокоричневого или черного цвета, расположенных поодиночке, парами, короткими цепочками в виде скоплений. Присутствие оспенного вируса считается подтвержденным только при обнаружении характерных телец в массовом количестве.

Достоинством метода вирусоскопии следует считать быстроту ответа, простоту и доступность. Однако этот метод имеет и некоторые недостатки. Наиболее чёткие результаты при вирусоскопии можно получить при использовании в качестве материала для мазков срезов от свежих везикул или везикулярной жидкости. При исследовании пустулезной жидкости и особенно корок возможность обнаружения элементарных телец и достоверность полученных результатов значительно снижаются. Вирусоскопические исследования могут быть проведены также с использованием техники фазово-контрастной микроскопии. [5]

Биомодели для выделения и накопления вируса оспы овец Если испытуемый материал непригоден для вирусоскопии, нужно поставить с ним биопробу на неиммунной молодой овце. Испытуемую суспензию, приготовленную общепринятым методом, инокулируют внутрикожно в бесшерстную поверхность хвоста в дозе 0,1- 0,15 мл. Наблюдение ведут в течение 10 дней. В положительных случаях на месте инъекции материала развивается местный оспенный процесс, специфичность которого удается подтвердить методом вирусоскопии мазков, приготовленных из срезанного эпителия розеолы на присутствие элементарных телец. Вирус в оспенных узелках кожи накапливается в титре до 10^6,5ИД_50/0,5 см³.

При использовании для выделения вируса культурой клеток, суспензию испытуемого пат. материала вводят на монослой клеток в пробирках или пенициллиновых флаконах в дозе 0,1 см³. зараженные клетки выдерживают при температуре 37−38С в течение 60 мин, затем инокулят сливают, монослой несколько кратно промывают раствором Хенкса, содержащим антибиотики, вносят поддерживающую среду и культивируют при температуре 37−38С в течение 10−12 суток. В течение указанного срока ежедневно проводят микроскопию монослоя с целью выявления признаков наличия оспенного вируса. О присутствии вируса свидетельствует цитопатогенное действие (ЦПД) которое проявляется в монослое клеток с 4−7 суток после инокуляции суспензии испытуемого пат. материала. ЦПД характеризуется округлением клеток, формированием ими гроздевидных образований в монослое, в последующемразрывов между клетками, приводящих к полной деструкции монослоя клеток. ЦПД вируса оспы овец примерно одинаково проявляется во всех чувствительных культурах клеток и накапливается в них от 10^5,0 до 10^7,5ТЦД_50/см³. При положительной биопробе и вирусоскопии необходимость в других методах лабораторной диагностики отпадает.

Культивирование вируса оспы овец, в зависимости от его биологических свойств и предназначения, проводят в организме овец и чувствительной культуре клеток. Патогенные штаммы вируса оспы овец культивируют в организме молодых интактных овец, а модифицированныев одной из чувствительных культур.

Вирулентные штаммы вируса оспы овец, предназначенные для проверки иммуногенности вакцинных препаратов, культивируют в организме овцы. Для этого, вирус вводят овцам внутрикожно в дозе 0,5 см³ и наблюдают за развитием кожного оспенного поражения. На 5−6 сутки на месте введения возбудителя формируется отёчность с покраснением, который в последующем приобретает темнокрасную окраску. За день до появления отека кожи у овцы повышается температура тела. Для получения биомассы вирулентного вируса на 6−7 сутки, в зависимости от развития местного воспаления и температуры тела, животное убивают, участок воспалённой кожи срезают, которую очищают от механических примесей, дезинфицируют этиловым спиртом и подвергают гомогенизации.

Модифицированные штаммы вируса, предназначенные для приготовления живых вакцин культивируют в культуре первичных клеток, полученных из почечной и тестикулярной клеток ягнят, а штамм «КазНИВИ» — в пересеваемой культуре клеток ТЯ-КК49 и линии ПО. Для этого готовят монослойную культуру клеток соответствующего вида, высевая клетки в концентрации 200−300 тыс. в клеток/см³ в матрасы и 600−800 тыс. клеток/см³— в круговые сосуды, заражают их модифицированными вакцинными штаммом вируса в дозе 0,05- 0,1 ТЦД_50/Кл, которые затем культивируют при температуре 37−38С в течение до развития ЦПД в 80% и более площади монослоя. ЦПД вируса в таких культурах клеток проявляется на 3−4 сутки, а на 6−7 сутки вирусному поражению подвергается максимальное количество клеток монослоя культуры. В сосудах с культурой клеток, в сроки заражения вирусом и проявления ЦПД, заменяют питательную среду поддерживающей. В момент максимального развития ЦПД, но без деструкции монослоя культуры клеток, сосуды с зараженной культурой клеток подвергают замораживанию. Культуральную суспензию после размораживания и определения в ней титра вируса используют в качестве вирусной массы для изготовления вакцинного препарата. 2]

Некоторые штаммы адаптировались к ХАО развивающегося куриного эмбриона. Причем в результате исчезали патогенные и иммуногенные свойства вируса. Однако, по данным китайских исследователей, выделенный ими полевой штамм вируса оспы овец даже после 90 серийных пассажей на ХАО куриных эмбрионов, утратив патогенность, сохранял иммунизирующие свойства. 1]

Серологические реакции для идентификации возбудителя оспы овец.

Реакция диффузионной преципитации

Метод основан на образовании в агаровом геле зон преципитации при взаимодействии оспенного антигена со специфической сывороткой.

Для получения сыворотки, годной ля использования в реакции диффузной преципитации, иммунизируют кроликов овинной, делают 2−4 внутривенной инъекции (объёме 2; 1; 0,5; и 0,25 мл) с интервалом в 5 дней. Через 7 дней после последней инъекции у кроликов берут кровь для получения сыворотки. Полученные кроличьи сыворотки необходимо истощить культурой фибробластов эмбриона овцы. [5]

Реакции диффузионной преципитации ставят общепринятыми методами.

Макропреципитация в агаре в чашках Петри сводится к следующему. Расплавленный агаровый гель в количестве 25 мл наливают в чашки Петри. В остывшей агаровой пластине выштамповывают пробойником или стеклянной трубочкой отверстия (диаметром 0,7 см), располагая их в форме шестиугольников. Все шесть отверстий размещают на расстоянии 0,4- 0,5 см друг от друга и от центрального и дно каждого заливают каплей расплавленного агарового геля. В периферические лунки заливают антиген, в центральнуюантитела. Чашки помещают во влажную камеру и оставляют при комнатной температуре или термостате (37С) на 14−16 часов или 3−4 дня при комнатной температуре. Учёт реакции проводят через 24−48 часов и в последующие 2 дня. Реакцию оценивают визуально, начиная с контрольной. Если исследуемые антигены специфичны антителам преципитирующей сыворотки, то между центральной луночкой и первыми четырьмя луночками образуются полосы преципитации. [3]

Для микропреципитации в агаре на предметных стёклах необходимы чистые, обезжиренные предметные стёкла. Их помещают горизонтально на стол, слегка подогретой пипеткой набирают нужное количество (3−5мл) расплавленного 1%-ного агарового геля и выливают на поверхность стекла. Агар застывает, образуя слой толщиной 1−1,5 мм. В агаре делают луночки в виде треугольника, куда пипеткой заливают антигены и антисыворотки. В центральную лунку наливают антисыворотки, а в периферические антигены. После заполнения луночек компонентами стёкла помещают во влажную камеру и оставляют при комнатной температуре. Первые результаты опыта можно регистрировать уже через 12 часов после постановки опыта. Однако агаровые пластинки обычно выдерживают до двух недель. Для исключения возможности неспецифической преципитации предусматривают контроли нормальных антигенов и нормальных сывороток. При диффузии антигенов против антисывороток в агаре образуются ограниченные зоны, в которых антигены и антисыворотки оказываются в оптимальных концентрациях. В этих зонах формируются линии преципитации. 3]

Реакция иммунофлуоресценции

Для исследования (прямой метод) антивирусный гаммаглобулин конъюгируют изотиоционатом флуоресцеина. Исследование проводят общепринятым методом. Сущность и техника прямого МФА заключается в том, что на предметное стекло с фиксированным на нём мазком, или мазкомотпечатком из вируссодержащего материала наносят 2−3 капли специфической подозреваемому антигену (вирусу) флуоресцирующей иммунной сыворотки, или иммуноглобулина и помещают в чашки Петри с комочком ваты, смоченным водой (влажная камера) и выдерживают в термостате в течение 30−40 минут при 36−37С, а затем промывают, высушивают на воздухе и просматривают под иммерсионной системой и люминесцентном микроскопе. Если антиген и антитела специфичны, образуется комплекс «Аг+Ат», который не смывается при промывании мазка, и при микроскопии препарата будет отчетливо видно яркое салатно-зеленое свечение антигена за счет адсорбированных на нем флуоресцирующих антител. Если же антитела были не специфичны антигену, находящемуся в мазке, или антигена в мазке вообще не было, то свечения антигена не будет, и поле зрения будет тёмным, потому что антитела не связались с фиксированным мазком и смылись при промывании мазка.

При наличии вируса оспы овец в клетках инфицированной культуры с 6−8 -го часа после заражения в отдельных участках цитоплазмы появляются светящиеся очаги. Позже начинают светиться обширные очаги. 3]

Дифференциальная диагностика В стадии образования папул и корок оспу можно ошибочно принять за экзему, грибковый дерматит, чесотку и контагиозный пустулёзный дерматит. Экзему исключают как незаразную болезнь (аллергического или токсического происхождения), а при чесотке в корках всегда обнаруживают клещей. При дерматитах гнойного и папулёзного характера для уточнения диагноза иногда ставят биопробу на козах, так как они восприимчивы и к вирусу контагиозного пустулёзного дерматита. Элементарные тельца возбудителя пустулёзного дерматита сравнительно крупнее оспенных. Пустулёзный дерматит овец обычно протекает более доброкачественно. Возбудитель этой болезни в отличие от оспы овец в основном поражает кожу в области губ и других частей лицевой части головы. Однако необходимо помнить, что оспа и контагиозный пустулёзный дерматит могут протекать одновременно. [5]

Дополнительные методы исследования В качестве дополнительного метода для постановки диагноза на вирус оспы используют гистологический.

При гистологическом исследовании в коже на третий день после экспериментального заражения отмечают полнокровие сосудов и скопление лимфоидных клеток, гистиоцитов и небольшое количество нейтрофильных лейкоцитов. На 5-й и 6-й дни роговой слой эпидермиса значительно утолщен. Многие эпителиальные клетки набухшие. В коже обнаруживают признаки воспалительной клеточной инфильтрации и сосудистой реакции. Именно на этих ранних стадиях формирования оспин во многих гистиоцитах дермы, а иногда и в некоторых эпителиальных клетках, обнаруживают цитоплазматические включения. По предложению Бореля (1903) их иногда называют клетками оспы овец. Это крупные клетки неодинаковой формы, ядро увеличено, его центр светлый в результате частичного растворения и краевого расположения хроматина, цитоплазма содержит гомогенные включения круглой или овальной формы, окрашивающиеся оксифильно, эозинофильно, а иногда базофильно.

На стадии розеол в период формирования папул воспалительные изменения наблюдаются обычно в эпидермисе. В цитоплазме и ядре имеются вакуоли, межклеточные пространства расширены. Между эпителиальными клетками и в полостях серозная жидкость, нейтрофильные лейкоциты, лимфоциты и обломки разрушенных клеточных элементов; в нижних рядах эпителиальные клетки имеют удлиненную форму, ядра в них вытянуты. В сформировавшихся папулах граница между эпидермисом и дермой во многих участках неразличима. Инфильтрат имеется во всей коже. Преобладают лимфоидные клетки, гистиоциты и полиморфноядерные лейкоциты. В центре папулы много гранулоцитов, тогда как в периферических участках больше лимфоидных клеток и макрофагов. Коллагеновые волокна в состоянии мукоидного, фибриноидного набухания, частично фибриноидного некроза. Мелкие кровеносные сосуды расширены. По ходу сосудов расположены пролиферирующие адвентициальные клетки. В утолщенном эпидермисе межклеточный и внутриклеточный отек и распад эпителиальных клеток. На месте их обнаруживают полости. Таких полостей может быть много.

Около некротического участка видна демаркационная зона. Она состоит из большого количества капилляров, полиморфноядерных гранулоцитов, лимфоидных клеток и макрофагов. Количество клеточных элементов и сосудов обусловлено реактивностью организма во время болезни. У ослабленных овец наблюдают ареактивный некроз, в котором демаркационная зона не выражена.

При гистологическом исследовании печени внутри долек и в междольковой ткани обнаруживают очаговые скопления гистиоцитов, лимфоидных клеток и полиморфноядерных лейкоцитов. Выявляют цитоплазматические оксифильные включения, свидетельствующие о специфическом характере этих изменений. В местах формирования узелков паренхиматозные клетки частично атрофированы. Встречаются также небольшие участки коагуляционного некроза. В целом морфологические изменения в печени сходны с наблюдаемыми в коже, легких и других органах. Их своеобразие обусловлено лишь особенностями структуры органа.

При гистологическом исследовании почек между канальцами и вокруг капсулы почечных клубочков обнаруживают клеточный инфильтрат, состоящий из гистиоцитов и лимфоидных элементов. Среди последних встречают макрофаги. В зоне инфильтрации эпителий канальцев и некоторые сосудистые клубочки в состоянии некроза. В более крупных оспинах, на месте атрофированных клубочков и канальцев, располагается обширный клеточный инфильтрат, который также имеет признаки дистрофии и некроза.

Специфическое воспаление развивающиеся при оспе овец характеризуется пролиферацией клеток соединительной ткани и эпителия, сочетающейся с сосудистой реакцией, проявляющейся в виде гиперемии, выхода из сосудов плазмы и форменных элементов крови, а также дистрофией и некрозом клеток паренхимы и стромы органа и инфильтрата. В цитоплазме макрофагов и эпителиальных клеток образуются специфические включения.

В срезах папул, окрашенных по Пашену и Романовскому, выявляют элементарные частицы вируса — вирионы возбудителя болезни. Обнаружение цитоплазматических включений и вирионов служит основанием для подтверждения диагноза. 1]

Биологические препараты для специфической профилактики и лечения оспы овец Для специфической профилактики овец используют живые вирусвакцины из аттенуированных штаммов, полученных в разных системах культур клеток (штамма РМ/65 в Ираке, 1972;1974гг., штаммов Перего и Фанар в Тунисе и Румынии, 1973 г., и др) В СССР во Всесоюзном государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов в 1970 г. тоже была начата работа по культивированию вируса оспы овец в культуре клеток с целью получения культуральной вирусвакцины из отечественного штамма. Получены культуральный штамм 61 и сухая вирусвакцина из него, изучены иммунобиологические свойства и налажено серийное производство ее на одной из биофабрик. Вакцина безвредна для всех возрастных групп, не вызывает поствакцинальных реакций, высокоиммуногенна, продолжительность иммунитета у привитых взрослых овец до 9 месяцев. Вакцина прошла широкое испытание с положительными результатами в неблагополучных и угрожаемых по оспе овцехозяйствах ряда областей и республик СССР и с 1978 г. внедрена в ветеринарную практику (авторы вакцины Н. В. Лихачёв и Л.А. Жидков) В СССР с 1944 года используют также ГОА — формолвакцину и поливалентную концентрированную вакцину против оспы овец, брадзота и энтеротоксемии.

Лечения симптоматическое. Специфическая гипериммунная сыворотка или сыворотка реконвалесцентов может быть эффективна при применении ее овцам лишь в инкубационном и продромальном периодах болезни. Во избежание осложнений применяют антибиотики. 1]

Ветеринарно-санитарная экспертиза и оценка продуктов убоя Санитарную оценку и использование мяса и других продуктов, получаемых при убое больных и подозрительных по заболеванию оспой овец, осуществляют согласно правилам осмотра убойных животных и ветеринарносанитарной экспертизы мяса и мясных продуктов.

При оспе туши и внутренние органы крупного рогатого скота,

овец, коз и свиней при доброкачественной форме оспы и заживлении пустул выпускают без ограничения после удаления (зачистки) патологически измененных, отечных тканей.

Туши, а также продукты убоя овец, коз и свиней при сливной

геморрагической и гангренозной формах оспы направляют на утилизацию.

Снимать шкуры и использовать шерсть с таких трупов запрещено. Шкуры от здоровых овец, убитых в период неблагополучия хозяйств по оспе, а также шерсть, полученную от здорового овцепоголовья в этих хозяйствах, дезинфицируют согласно действующему Наставления и предприятий по его заготовке, хранению и обработке и вывозят из хозяйств только после снятия карантина. 9]

1. Кадыров У. Г., Борисович Ю. Ф. Оспа животных.- М.: Колос, 1981. 168 с., ил.

2. Кутумбетова Л. Б. Методические указания по выделению, культивированию и поддержанию вирусов оспы овец, коз и птиц

3. С. Т. Рягин, В. Н. Зоценко, Н. Н. Куличин. Общая и частная вирусология: Метод. рекомендации для самостоятельной работы студентов ветеринарного факультета: Ч.1: Общая вирусология/ Белая церковь, 1989.-97с

4. Сюрин В. Н., Фомина Н. В. Частная ветеринарная вирусология: Справочная книга.- М.: Колос, 1979. 472с., ил.

5. Сюрин В. Н., Г. А. Иванова. Е. А. Краснобаев, Ю. В. Фомин. Лабораторная диагностика вирусных болезней животных.- М.:Колос, 1972.-416с., с ил.

6. http://www.webvet.ru

7. http://zoovet.in.ua

8. http://www.allvet.ru

9. http://www.fsvps.ru

Приложение