Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Экспрессия генов белков NS5B и NS5A вируса гепатита C, ингибиторный анализ и белок-белковое взаимодействие

Диссертация: Экспрессия генов белков NS5B и NS5A вируса гепатита C, ингибиторный анализ и белок-белковое взаимодействие
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

В настоящей работе использовали следующие материалы: вектор pET-21d и Ni-NTA-агароза («Novagen», США), поли (и)-сефароза CL-6B («Amersham», Англия), вектор pTZ18R («Promega», США), бактотриптон, дрожжевой экстракт и бактоагар («Difco», США), Трис и 2-меркаптоэтанол («Мегск», Германия), глицерин, дитиотреитол, имидазол, тритон Х-100, нонидет Р-40, персульфат аммония, фенилметилсульфонилфторид… Читать ещё >

Экспрессия генов белков NS5B и NS5A вируса гепатита C, ингибиторный анализ и белок-белковое взаимодействие (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
  • 1. ВВЕДЕНИЕ
    • 2. 1. СТРУКТУРА ГЕНОМА ВГС
    • 2. 2. БЕЛКИ ВГС
      • 2. 2. 1. БЕЛОК КАПСИДА
      • 2. 2. 2. ГЛИКОПРОТЕИНЫ ОБОЛОЧКИ Е1 И Е
      • 2. 2. 3. БЕЛОК Р
      • 2. 2. 4. БЕЛКИ NS2, NS3 И NS4A
      • 2. 2. 5. БЕЛОК NS4B
      • 2. 2. 6. БЕЛОК NS5A
      • 2. 2. 7. РНК-ЗАВИСИМАЯ РНК-ПОЛИМЕРАЗА (NS5B)
        • 2. 2. 7. 1. Структура белка
        • 2. 2. 7. 2. Биохимические свойства Р-РНКП
        • 2. 2. 7. 3. Синтез вирусной РНК de novo
        • 2. 2. 7. 4. Состав и функционирование репликационного комплекса ВГС. Белок-белковые взаимодействия
        • 2. 2. 7. 5. Ингибиторы Р-РНКП ВГС
    • 2. 3. ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ ВГС
      • 2. 3. 1. ПРОНИКНОВЕНИЕ ВИРУСНЫХ ЧАСТИЦ В КЛЕТКУ
      • 2. 3. 2. РЕПЛИКАЦИЯ ВГС
      • 2. 3. 3. ТРАНСЛЯЦИЯ РНК ВГС
      • 2. 3. 4. ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЙ ПРОЦЕССИНГ И СБОРКА ВИРУСНОЙ ЧАСТИЦЫ

Гепатит С представляет собой одно из опаснейших заболеваний человека. В настоящее время по оценкам ВОЗ около 3% мирового населения мира (170 млн) инфицировано вирусом гепатита С (ВГС) [1]. У 3−10% инфицированных в течение примерно 20 лет развивается цирроз печени с возможным последующим развитием гепатоцеллюлярной карциномы [2]. Кроме того, с данным вирусом ассоциировано большое количество других заболеваний, непосредственно не связанных с печенью, затрагивающих кровь (например, криоглобулинемия), почки (например, гломерулонефрит) и.т.п. [3].

Терапия вируса в настоящее время весьма ограничена по своим возможностям и почти исключительно основана на использовании интерферона ос, а также его комбинации с нуклеозидным аналогом рибавирином (I) [2]. Следует отметить крайне низкую эффективность такой терапии, особенно в отношении вируса первого генотипа (к терапии чувствительно менее 30% пациентов). Поиск новых противовирусных препаратов затруднен из-за отсутствия доступных экспериментальных систем. Кроме того, последнее осложняет изучение молекулярно-биологических аспектов функционирования ВГС.

Основными задачами данной работы были разработка системы высокоэффективной экспрессии для получения двух неструктурных белков ВГС (РНК-зависимой РНК-полимеразы и ее регуляторного белка NS5A), являющихся основными компонентами репликационного комплекса вируса, поиск низкомолекулярных ингибиторов репликации ВГС, а также изучение некоторых аспектов посттрансляционной модификации белка NS5A.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Настоящий обзор посвящен молекулярной биологии ВГС. В нем рассматриваются структура вириона, проникновение вируса в клетку, репликация, трансляция и протеолитический процессинг, сборка новых вирусных частиц, а также известные к настоящему времени функции вирусных белков. Особое внимание уделено двум из них, а именно PHIC-зависимой РНК-полимеразе (Р-РНКП) и ее регулятору NS5A. Кроме того, проведен анализ известных низкомолекулярных ингибиторов активности Р-РНКП.

4. ВЫВОДЫ.

1. Разработана эффективная система экспрессии генов неструктурных белков NS5B и NS5A вируса гепатита С (ВГС). Показана возможность ее использования для получения таких мутантных форм Р-РНКП вируса, как NS5BA21, NS5BA55 и NS5B-BLA8 генотипа lb, не экспрессируемых в стандартной рЕТ-системе. Продемонстрировано, что повышение выхода белков обусловливлено усилением инициации трансляции соответствующих мРНК и не сопровождается изменением уровня последних.

2. Оптимизированы условия определения полимеразной активности белка NS5B в различных системах. Показана возможность использования данных систем для изучения ненуклеозидных ингибиторов, а также модифицированных нуклеозид-5'-трифосфосфатов как аналогов субстратов фермента.

3. Впервые обнаружено, что пирогаллол и ряд его производных являются обратимыми неконкурентными ингибиторами Р-РНКП ВГС. Данные соединения подавляют элонгацию РНК-праймера, но не влияют на связывание фермента с праймер-матричным комплексом. Максимальной активностью обладают вещества, содержащие электроноакцепторный заместитель в а-положении или электронодонорный заместитель в-положении по отношению к полифенольной системе.

4. Белок NS5A фосфорилируется in vitro под действием казеинкиназ I и II, а также лизата гепатоцитов. В случае казеинкиназы II модификации подвергаются четыре аминокислотных остатка, расположенные в С-концевой области белка, в том числе S408. При этом фосфорилирование не влияет на РНК-связывающую активность NS5A белка, но сопровождается снижением его ингибирующей активности по отношению к Р-РНКП ВГС.

2.4.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Хотя с момента определения структуры генома ВГС прошло всего лишь немногим более десяти лет, за это время наши представления о функционировании этого вируса и вызываемого им опаснейшего заболевания существенно расширились. Тем не менее, многие детали протекающих процессов остаются по-прежнему невыясненными. Предстоят еще значительные усилия по определению структуры вириона, изучению ранних и, в особенности, поздних стадий жизненного цикла ВГС, установления механизма и регуляции репликации вирусного генома и процессинга полипептида-предшественника. Такого рода исследования, безусловно, приведут к принципиально новым стратегиям предотвращения инфекции и к усовершенствованию терапии гепатита С. Уже сейчас проходят испытания или активно обсуждаются новые потенциальные антивирусные агенты. Среди них блокаторы связывания вируса с рецептором, ингибиторы трансляции, направленные на связывание с IRES, ингибиторы протеиназной и хеликазной активностей белка NS3 и, пожалуй, в первую очередь, ингибиторы Р-РНКП. Продолжаются также попытки создания анти-ВГС вакцин разных типов. К сожалению, все эти исследования по-прежнему сдерживаются отсутствием адекватных систем тестирования. Не вызывает сомнений, что создание эффективной стратегии борьбы с гепатитом С зависит прежде всего от решения этих задач.

Целью данной диссертационной работы является разработка системы для получения неструктурных белков NS5A и NS5B ВГС в препаративных количествах, оптимизация условий определения Р-РНКП активности и поиск ее низкомолекулярных ингибиторов. Кроме того, были предприняты исследования по картированию некоторых сайтов фосфо-рилирования казеинкиназой II в составе белка NS5A, поиска других протеинкиназ, осуществляющих его посттрансляционную модификацию, и оценки влияния базального фосфорилирования на способность NS5A регулировать активность Р-РНКП ВГС.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

В настоящей работе использовали следующие материалы: вектор pET-21d и Ni-NTA-агароза («Novagen», США), поли (и)-сефароза CL-6B («Amersham», Англия), вектор pTZ18R («Promega», США), бактотриптон, дрожжевой экстракт и бактоагар («Difco», США), Трис и 2-меркаптоэтанол («Мегск», Германия), глицерин, дитиотреитол, имидазол, тритон Х-100, нонидет Р-40, персульфат аммония, фенилметилсульфонилфторид (ФМСФ) и лейпептин («Sigma», США), акриламид и метилен-бис-акриламид («Roth», Германия), ЭДТА и пепстатин («Serva», Германия), твин-20 и кумасси бриллиантовый синий R-250 («Bio-Rad», США), тетраметилэтилендиамин и ИПТГ («Reanal», Венгрия). Остальные реактивы были производства «Реахим» (Россия) квалификации ос.ч. или х.ч. В генно-инженерных экспериментах использовали ферменты фирм «Promega» (США) и «Сибэнзим» (Россия). Трифосфаты 4'-азидоцитидина (XXII) и 3-(р-Б-рибофуранозил)-6-гексил-2,3-дигидрофуро[2,3^]пиримидин-2-она (XXIII) были любезно предоставлены Л. А. Александровой (ИМБ РАН). Производные дии тригидроксибензола (XXIV-XXVIII) были синтезированы М. В. Козловым (ИМБ РАН). Соответствующие казеинкиназе 1а и а-субъединице казеинкиназы II человека кДНК были любезно предоставлены Н. Г. Гурской (ИБХ РАН). Плазмиды pET-21d-5BA21 и pET-21d-5BA55-BLA8 были сконструированы Д. А. Костюком (ИМБ РАН).

Для наработки плазмидной ДНК и рекомбинантных белков использовали следующие штаммы Escherichia coli: XL-1 Blue (recAl endAl gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 relAl lac [F proAB lacIqZ. M15 TnlO (TetR)] («Promega», США), BL-21CodonPlus® (DE3)-RIL («Stratagene», США), BL-21 {F' ompT hsdSB (rbmB-) gal dcm}, BL-21(DE3) {F' ompT hsdSB (rbmB-) gal dcm (DE3)}, Rosetta {F' ompT hsdSB (rbmB-) gal dcm lacYl pRARE6 (CmR)} and Rosetta (DE3) {F' ompT hsdSB (rbmB-) gal dcm lacYl (DE3) pRARE6 (CmR)} («Novagen», США).

Олигонуклеотиды, использовавшиеся в работе, представлены в Таблице 5.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Global surveillance and control of hepatitis C. Report of a WHO Consultation organized in collaboration with the Viral Hepatitis Prevention Board, Antwerp, Belgium. // J. Viral. Hepat. 1999. V. 6. P. 35−47.
  2. Rosen H.R., Gretch D.R. Hepatitis С virus: current understanding and prospects for future therapies. // Mol. Med. Today 1999. V. 5. P. 393−399.
  3. Nocente R., Ceccanti M., Bertazzoni G., Cammarota G., Silveri N.G., Gasbcirrini G. HCV infection and extrahepatic manifestations. // Hepatogastroenterology 2003. V. 50. P. 11 491 154.
  4. Lindenbach B.D., Rice C.M. Flaviviridae: the viruses and their replication. // In: Fundamental virology, Knipe D. M. and Howley P. M./SE Straus Lappincott Williams and Wilkins: Philadelphia. 2001. P. 589−639.
  5. Bukh J., Purcell R.H., Miller R.H. Sequence analysis of the 5' noncoding region of hepatitis С virus. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1992. V. 89. P. 4942−4946.
  6. Brown E.A., Zhang H., Ping L.H., Lemon S.M. Secondary structure of the 5' nontranslated regions of hepatitis С virus and pestivirus genomic RNAs. 11 Nucleic Acids Res. 1992. V. 20. P. 5041−5045.
  7. Pestova T.V., Kolupaeva KG., Lomakin I.В., Pilipenko E.V., Shatsky I.N., Agol V.I., Hellen C. U. Molecular mechanisms of translation initiation in eukaryotes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001. V. 98. P. 7029−7036.
  8. Ito Т., Lai M.M. Determination of the secondary structure of and cellular protein binding to the 3'-untranslated region of the hepatitis С virus RNA genome. // J. Virol. 1997. V. 71. P. 8698−8706.
  9. Fukushi S., Katayama K., Kurihara C., Ishiyama N., Hoshino F.B., Ando Т., Oya A. Complete 5' noncoding region is necessary for the efficient internal initiation of hepatitis С virus RNA. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994. V. 199. P. 425−432.
  10. Kolykhalov A.A., Mihalik K., Feinstone S.M., Rice C.M. Hepatitis С virus-encoded enzymatic activities and conserved RNA elements in the 3' nontranslated region are essential for virus replication in vivo. II J. Virol. 2000. V. 74. P. 2046−2051.
  11. Zein N.N. Clinical significance of hepatitis С virus genotypes. // Clin. Microbiol. Rev. 2000. V. 13. P. 223−235.
  12. Kalinina O., Norder H., Mukomolov S., Magnius L.O. A natural intergenotypic recombinant of hepatitis С virus identified in St. Petersburg. // J. Virol. 2002. V. 76. P. 4034−4043.
  13. Choi J., Xu Z., Ou J.H. Triple decoding of hepatitis С virus RNA by programmed translation^ frameshifting. IIMol. Cell. Biol. 2003. V. 23. P. 1489−1497.
  14. Kunkel M., Lorinczi M., Rijnbrand R., Lemon S.M., Watowich S.J. Self-assembly of nucleocapsid-like particles from recombinant hepatitis С virus core protein. // J. Virol. 2001. V. 75. P.2119−2129.
  15. Baumert T.F., Ito S., Wong D.T., Liang T.J. Hepatitis С virus structural proteins assemble into viruslike particles in insect cells. // J. Virol. 1998. V. 72. P. 3827−3836.
  16. Lo S.Y., Selby M.J., Ou J.H. Interaction between hepatitis С virus core protein and El envelope protein. II J. Virol. 1996. V. 70. P. 5177−5182.
  17. Uchida M., Hino N., Yamanaka Т., Fukushima LI., Imanishi Т., Uchiyama Y., Kodama Т., Doi T. Hepatitis С virus core protein binds to a C-terminal region of NS5B RNA polymerase. // Hepatol. Res. 2002. V. 22. P. 297−306.
  18. Goh P.Y., Tan Y.J., Lim S.P., Lim S.G., Tan Y.H., Hong W.J. The hepatitis С virus core protein interacts with NS5A and activates its caspase-mediated proteolytic cleavage. // Virology 2001. V. 290. P. 224−236.
  19. Mamiya N., Worman H.J. Hepatitis С virus core protein binds to a DEAD box RNA helicase. II J. Biol. Chem. 1999. V. 274. P. 15 751−15 756.
  20. Owsianka A.M., Palel A.H. Hepatitis С virus core protein interacts with a human DEAD box protein DDX3. // Virology 1999. V. 257. P. 330−340.
  21. You L.R., Chen CM, Yeh T.S., Tsai T.Y., Mai R.T., Lin C.H., Lee Y. H Hepatitis С virus core protein interacts with cellular putative RNA helicase. // J. Virol. 1999. V. 73. P. 28 412 853.
  22. Hsieh T.Y., Matsumoto M., Chou H.C., Schneider R" Hwang S.B., Lee A.S., Lai M.M. Hepatitis С virus core protein interacts with heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K. // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. P. 17 651−17 659.
  23. Alisi A., Giambartolomei S., Cupelli F., Merlo P., Fontemaggi G., Spaziani A., Balsano C. Physical and functional interaction between HCV core protein and the different p73 isoforms. // Oncogene 2003. V. 22. P. 2573−2580.
  24. Kao C.F., Chen S.Y., Chen J.Y., Wu Lee Y.H. Modulation of p53 transcription regulatory activity and post-translational modification by hepatitis С virus core protein. // Oncogene 2004. V. 23. P. 2472−2483. •
  25. Nguyen Ы, Mudryj M, Guadalupe M., Dandekar S. Hepatitis С virus core protein expression leads to biphasic regulation of the p21 cdk inhibitor and modulation of hepatocyte cell cycle. // Virology 2003. V. 312. P. 245−253.
  26. Ruggieri A., Harada Т., Malsuura Y., Miyamura T. Sensitization to Fas-mediated apoptosis by hepatitis С virus core protein. // Virology 1997. V. 229. P. 68−76.
  27. Marusawa Я, Hijikatci M., Chiba Т., Shimotohno К. Hepatitis С virus core protein inhibits Fas- and tumor necrosis factor alpha-mediated apoptosis via NF-kappaB activation. // J. Virol. 1999. V. 73. P. 4713−4720.
  28. Bergqvisl A., Rice C.M. Transcriptional activation of the interleukin-2 promoter by hepatitis С virus core protein. // J. Virol. 2001. V. 75. P. 772−781.
  29. Dansako H., Naganuma A., Nakamura Т., Ikeda F., Nozaki A., Kato N. Differential activation of interferon-inducible genes by hepatitis С virus core protein mediated by the interferon stimulated response element. // Virus Res. 2003. V. 97. P. 17−30.
  30. Kao C.F., Chen S.Y., Lee Y.H. Activation of RNA polymerase I transcription by hepatitis С virus core protein. // J. Biomed. Sci. 2004. V. 11. P. 72−94.
  31. Dubuisson J., Rice C.M. Hepatitis С virus glycoprotein folding: disulfide bond formation and association with calnexin. // J. Virol. 1996. V. 70. P. 778−786.
  32. Voissel C., Dubuisson J. Functional hepatitis С virus envelope glycoproteins. // Biol. Cell 2004. V. 96. P. 413−420.
  33. Ciccaglione A.R., Marcanlonio C., Tritarelli E., Equestre M., Magurano F., Coslanlino A., Nicoletti L., Rapicettci M. The transmembrane domain of hepatitis С virus El glycoprotein induces cell death. // Virus Res. 2004. V. 104. P. 1−9.
  34. Liberman E., Fong Y.L., Selby M.J., Choo Q.L., Cousens L., Houghton M, Yen T.S. Activation of the grp78 and grp94 promoters by hepatitis С virus E2 envelope protein. // J. Virol. 1999. V. 73. P. 3718−3722.
  35. Taylor D.R., Shi S.T., Romano P.R., Barber G.N., Lai M.M. Inhibition of the interferon-inducible protein kinase PKR by HCV E2 protein. // Science 1999. V. 285. P. 107−110.
  36. Grakoui A., Wychowski C., Lin C., Feinstone S.M., Rice C.M. Expression and identification of hepatitis С virus polyprotein cleavage products. // J. Virol. 1993. V. 67. P. 1385−1395.
  37. Lin C., Lindenbach B.D., Pragai B.M., McCourt D.W., Rice C.M. Processing in the hepatitis С virus E2-NS2 region: identification of p7 and two distinct E2-specific products with different С termini. II J. Virol. 1994. V. 68. P. 5063−5073.
  38. Carrere-Kremer S., Montpellier-Pala C., Cocquerel L., Wychowski C., Penin F., Dubuisson J. Subcellular localization and topology of the p7 polypeptide of hepatitis С virus. // J. Virol. 2002. V. 76. P. 3720−3730.
  39. Griffin S.D., Beetles LP., Clarke D.S., Worsfold O., Evans S.D., Jaeger J., Harris M.P., Rowlands D.J. The p7'protein of hepatitis С virus forms an ion channel that is blocked by the antiviral drug, Amantadine. IIFEBSLett. 2003. V. 535. P. 34−38.
  40. Thibeault D., Maurice R., Pilote L., Lamarre D., Pause A. In vitro characterization of a purified NS2/3 protease variant of hepatitis С virus. 11 J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P. 4 667 846 684.
  41. Liu Q., Bhal R.A., Prince A.M., Zhang P. The hepatitis С virus NS2 protein generated by NS2−3 autocleavage is required for NS5A phosphorylation. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. V. 254. P. 572−577.
  42. Erdtmann L., Franck N., Lerat H., Le Seyec J., Gilot D., Cannie I., Gripon P., Hibner U., Guguen-Gidllouzo C. The hepatitis С virus NS2 protein is an inhibitor of CIDE-B-induced apoptosis. // /. Biol. Chem. 2003. V. 278. P. 18 256−18 264.
  43. Franck N., Le Seyec J., Guguen-Guillouzo C., Erdtmann L. Hepatitis С virus NS2 protein is phosphorylated by the protein kinase CK2 and targeted for degradation to the proteasome. // J. Virol. 2005. V. 79. P. 2700−2708.
  44. De Francesco R., Pessi A., Steinkuhler C. The hepatitis С virus NS3 proteinase: structure and function of a zinc-containing serine proteinase. // Antivir. Ther. 1998. V. 3. P. 99−109.
  45. Han D.S., Hahm В., Rho H.M., Jang S.K. Identification of the protease domain in NS3 of hepatitis С virus. // J. Gen. Virol. 1995. V. 76 (Pt 4). P. 985−993.
  46. Kim S.Y., Park K.W., Lee Y.J., Back S.H., Goo J.H., Park O.K., Jang S.K., Park W.J. In vivo determination of substrate specificity of hepatitis С virus NS3 protease: genetic assay for site-specific proteolysis. II Anal. Biochem. 2000. V. 284. P. 42−48.
  47. Failla C., Tomei L., De Francesco R. An amino-terminal domain of the hepatitis С virus NS3 protease is essential for interaction withNS4A. // J. Virol. 1995. V. 69. P. 1769−1777.
  48. Neddermann P., Clementi A., De Francesco R. Hyperphosphorylation of the hepatitis С virus NS5A protein requires an active NS3 protease, NS4A, NS4B, and NS5A encoded on the same polyprotein. // J. Virol. 1999. V. 73. P. 9984−9991.
  49. Kim D. W., Kim J., Gy>ack Y., Han J.H., Choe J. Mutational analysis of the hepatitis С virus RNA helicase. II J. Virol. 1997. V. 71. P. 9400−9409.
  50. Tai C.L., Chi W. K, Chen D.S., HwangL.H. The helicase activity associated with hepatitis С virus nonstructural protein 3 (NS3). // J. Virol. 1996. V. 70. P. 8477−8484.
  51. Gwack Y., Kim D.W., Han J.H., Choe J. DNA helicase activity of the hepatitis С virus nonstructural protein 3. II Eur. J. Biochem. 1997. V. 250. P. 47−54.
  52. Kucing W.F., Lin Y.C., Jean F" Huang Y.W., Tai C.L., Chen D.S., Chen P.J., Hwang L.H. Hepatitis С virus NS3 RNA helicase activity is modulated by the two domains of NS3 and NS4A. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004. V. 317. P. 211−217.
  53. Heilek G.M., Peterson M.G. A point mutation abolishes the helicase but not the nucleoside triphosphatase activity of hepatitis С virus NS3 protein. П J. Virol. 1997. V. 71. P. 6264−6266.
  54. Borowski P., Oehlmann K., Heiland M., Laufs R. Nonstructural protein 3 of hepatitis С virus blocks the distribution of the free catalytic subunit of cyclic AMP-dependent protein kinase. II J. Virol. 1997. V. 71. P. 2838−2843.
  55. Kwun H.J., Jung E.Y., Ahn J.Y., Lee M.N., Jang K.L. p53-dependent transcriptional repression ofp21(wafl) by hepatitis С virus NS3.// J. Gen. Virol. 2001. V. 82. P. 2235−2241.
  56. Muramalsu S., Ishido S., Fujita Т., lloh M., Hotta H. Nuclear localization of the NS3 protein of hepatitis С virus and factors affecting the localization. // J. Virol. 1997. V. 71. P. 4954−4961.
  57. Feng D., Cheng R., Ouyang X., Zheng LI., Tsutomu T. Hepatitis С virus nonstructural protein NS (3) and telomerase activity. // Chin. Med. J. (Engl.) 2002. V. 115. P. 597−602.
  58. Prikhod’ko E.A., Prikhod’ko G.G., Siegel R.M., Thompson P., Major M.E., Cohen J.I. The NS3 protein of hepatitis С virus induces caspase-8-mediated apoptosis independent of its protease or helicase activities. // Virology 2004. V. 329. P. 53−67.
  59. Khu Y.L., Tan Y.J., Lim S.G., Hong W., Goh P.Y. Hepatitis С virus non-structural protein NS3 interacts with LMP7, a component of the immunoproteasome, and affects its proteasome activity. IIBiochem. J. 2004. V. 384. P. 401−409.
  60. Hugle Т., Fehrmann F., Bieck E., Kohara M., Krausslich H.G., Rice C.M., Blum H.E., Moradpour D. The hepatitis С virus nonstructural protein 4B is an integral endoplasmic reticulum membrane protein. // Virology 2001. V. 284. P. 70−81.
  61. Lundin M, Monne М., Widell A., Von Heijne G., Persson M.A. Topology of the membrane-associated hepatitis С virus protein NS4B. // J. Virol. 2003. V. 77. P. 5428−5438.
  62. Lin C., Wu J. W., Hsiao K., Su M.S. The hepatitis С virus NS4A protein: interactions with the NS4B and NS5A proteins. II J. Virol. 1997. V. 71. P. 6465−6471.
  63. War is G., Sarker S., Siddiqui A. Two-step affinity purification of the hepatitis С virus ribonucleoprotein complex. I/RNA 2004. V. 10. P. 321−329.
  64. Park J.S., Yang J.M., Min M.K. Hepatitis С virus nonstructural protein NS4B transforms NIH3T3 cells in cooperation with the Ha-ras oncogene. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. V. 267. P. 581−587.
  65. Florese R.H., Nagano-Fujii M., Iwanaga Y., Hidajat R., Hotta H. Inhibition of protein synthesis by the nonstructural proteins NS4A and NS4B of hepatitis С virus. // Virus Res. 2002. V. 90. P. 119−131.
  66. Konan К. V., Giddings Т.Н., Jr., Ikeda M., Li K., Lemon S.M., Kirkegaard K. Nonstructural protein precursor NS4A/B from hepatitis С virus alters function and ultrastructure of host secretory apparatus. II J. Virol. 2003. V. 77. P. 7843−7855.
  67. Tellinghuisen T.L., Marcotrigiano J., Gorbalenya A.E., Rice C.M. The NS5A protein of hepatitis С virus is a zinc metalloprotein. // J. Biol. Chem. 2004. V. 279. P. 48 576−48 587.
  68. Hirota M., Satoh S., Asabe S., Kohara M., Tsukiyama-Kohara K., Kato N., Hijikata M., Shimotohno K. Phosphorylation of nonstructural 5A protein of hepatitis С virus: HCV group-specific hyperphosphorylation. // Virology 1999. V. 257. P. 130−137.
  69. Reed K.E., Xu J., Rice C.M. Phosphorylation of the hepatitis С virus NS5A protein in vitro and in vivo: properties of the NS5A-associated kinase. // J. Virol. 1997. V. 71. P. 7187−7197.
  70. Tanji Y, Капеко Т., Satoh S., Shimotohno K. Phosphorylation of hepatitis С virus-encoded nonstructural protein NS5A. // J. Virol. 1995. V. 69. P. 3980−3986.
  71. Reed K.E., Rice C.M. Identification of the major phosphorylation site of the hepatitis С virus H strain NS5A protein as serine 2321. // J. Biol. Chem. 1999. V. 274. P. 28 011−28 018.
  72. Katze M.G., Kwieciszewski В., Goodlett D.R., Blakely C.M., Neddermann P., Tan S.L., Aebersold R. Ser (2194) is a highly conserved major phosphorylation site of the hepatitis С virus nonstructural protein NS5A. // Virology 2000. V. 278. P. 501−513.
  73. Kim J., Lee D., Choe J. Hepatitis С virus NS5A protein is phosphorylated by casein kinase II. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. V. 257. P. 777−781.
  74. Ide Y, Tanimolo A., Sasaguri Y, Padmanabhan R. Hepatitis С virus NS5A protein is phosphorylated in vitro by a stably bound protein kinase from HeLa cells and by cAMP-dependent protein kinase A-alpha catalytic subunit. // Gene 1997. V. 201. P. 151−158.
  75. Huang L., Sineva E. V., Hargittai M.R., Sharma S.D., Suthar M., Raney K.D., Cameron C.E. Purification and characterization of hepatitis С virus non-structural protein 5A expressed in Escherichia coli. IIProtein. Expr. Purif. 2004. V. 37. P. 144−153.
  76. Satoh S., Hirota M" Noguchi Т., Hijikata M., Handa H., Shimotohno K. Cleavage of hepatitis С virus nonstructural protein 5A by a caspase-like protease (s) in mammalian cells. // Virology 2000. V. 270. P. 476−487.
  77. Kalamvoki M., Mavromara P. Calcium-dependent calpain proteases are implicated in processing of the hepatitis С virus NS5A protein. // J. Virol. 2004. V. 78. P. 11 865−11 878.
  78. Shirola Y, Luo H., Qin W" Kaneko S., Yamashita Т., Kobayashi K, Murakami S. Hepatitis С virus (HCV) NS5A binds RNA-dependent RNA polymerase (RdRP) NS5B and modulates RNA-dependent RNA polymerase activity. // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. P. 11 149−11 155.
  79. Gao L., Aizaki H, He J. W., Lai M.M. Interactions between viral nonstructural proteins and host protein hVAP-33 mediate the formation of hepatitis С virus RNA replication complex on lipid raft. II J. Virol. 2004. V. 78. P. 3480−3488.
  80. Evans M.J., Rice C.M., GoffS.P. Phosphorylation of hepatitis С virus nonstructural protein 5A modulates its protein interactions and viral RNA replication. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2004. V. 101. P. 13 038−13 043.
  81. Macdonald A., Crowder K., Street A., McCormick C., Harris M. The hepatitis С virus NS5A protein binds to members of the Src family of tyrosine kinases and regulates kinase activity. II J. Gen. Virol. 2004. V. 85. P. 721−729.
  82. Pawson T. Protein modules and signalling networks. //Nature 1995. V. 373. P. 573−580.
  83. Macdonald A., Crowder K., Street A., McCormick C., Saksela K., Harris M. The hepatitis С virus non-structural NS5A protein inhibits activating protein-1 function by perturbing ras-ERK pathway signaling. II J. Biol. Chem. 2003. V. 278. P. 17 775−17 784.
  84. Samuel C.E. Antiviral actions of interferons. // Clin. Microbiol. Rev. 2001. V. 14. P. 778 809, table of contents.
  85. Clemens M.J., Elia A. The double-stranded RNA-dependent protein kinase PKR: structure and function. II J. Interferon Cytokine Res. 1997. V. 17. P. 503−524.
  86. Gale M., Jr., Kwieciszewski В., Dossett M., Nakao H, Katze M.G. Antiapoptotic and oncogenic potentials of hepatitis С virus are linked to interferon resistance by viral repression of the PKR protein kinase. // J. Virol. 1999. V. 73. P. 6506−6516.
  87. Majumder M., Ghosh A.K., Steele R., ZhouX.Y., Phillips N.J., Ray R" Ray R.B. Hepatitis С virus NS5A protein impairs TNF-mediated hepatic apoptosis, but not by an anti-FAS antibody, in transgenic mice. // Virology 2002. V. 294. P. 94−105.
  88. Street A., Macdonald A., Crowder K, Harris M. The Hepatitis С virus NS5A protein activates a phosphoinositide 3-kinase-dependent survival signaling cascade. // J. Biol. Chem. 2004. V. 279. P. 12 232−12 241.
  89. Park K.J., Choi S.H., Lee S.Y., Hwang S.B., Lai MM Nonstructural 5A protein of hepatitis С virus modulates tumor necrosis factor alpha-stimulated nuclear factor kappa В activation. II J. Biol. Chem. 2002. V. 277. P. 13 122−13 128.
  90. Ghosh A.K., Majumder M, Steele R., Meyer K, Ray R" Ray R.B. Hepatitis С virus NS5A protein protects against TNF-alpha mediated apoptotic cell death. // Virus Res. 2000. V. 67. P. 173−178.
  91. Qadri I., Iwahashi M., Simon F. Hepatitis С virus NS5A protein binds TBP and p53, inhibiting their DNA binding and p53 interactions with TBP and ERCC3. // Biochim. Biophys. Acta 2002. V. 1592. P. 193−204.
  92. Ghosh A.K., Steele R" Meyer K, Ray R" Ray R.B. Hepatitis С virus NS5A protein modulates cell cycle regulatory genes and promotes cell growth. // J. Gen. Virol. 1999. V. 80 (Pt 5). P. 1179−1183.
  93. Lcin K.H., Sheu M.L., HM’cing S.J., Yen S.H., Chen S.Y., Wu J.C., Wang Y.J., Kato N. Omata M., Chang F.Y., Lee S.D. HCV NS5A interacts with p53 and inhibits p53-mediated apoptosis. // Oncogene 2002. V. 21. P. 4801−4811.
  94. Kato N. Lan КН., Ono-Nita S. K, Shiratori Y., Omata M. Hepatitis С virus nonstructural region 5A protein is a potent transcriptional activator. // J. Virol. 1997. V. 71. P. 8856−8859.
  95. Ghosh A. K, Majumder M" Steele R., YaciukP., Chrivia J., Ray R., Ray R.B. Hepatitis С virus NS5A protein modulates transcription through a novel cellular transcription factor SRCAP. II J. Biol. Chem. 2000. V. 275. P. 7184−7188.
  96. Chung KM., Lee J., Kim J.E., Song O.K., Cho S., Lim J., SeedorfM., Hahm В., Jang S.K. Nonstructural protein 5A of hepatitis С virus inhibits the function of karyopherin beta3. // J. Virol. 2000. V. 74. P. 5233−5241.
  97. Fukuma Т., Enomoto N., Marumo F., Sato C. Mutations in the interferon-sensitivity determining region of hepatitis С virus and transcriptional activity of the nonstructural region 5A protein. // Hepatology 1998. V. 28. P. 1147−1153.
  98. Gerotto M., Dal Pew F., Pontisso P., Noventa F., Gatta A., Alberti A. Two PKR inhibitor HCV proteins correlate with early but not sustained response to interferon. // Gastroenterology 2000. V. 119. P. 1649−1655.
  99. Polyak S.J., Khabar K.S., Rezeiq M., Gretch D.R. Elevated levels of interleukin-8 in serum are associated with hepatitis С virus infection and resistance to interferon therapy. // J. Virol. 2001.V. 75.P. 6209−6211.
  100. Bressanelli S., Tomei L., Roussel A., Incitti I., Vitale R.L., Mathieu M., De Francesco R., Rey F.A. Crystal structure of the RNA-dependent RNA polymerase of hepatitis С virus. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999. V. 96. P. 13 034−13 039.
  101. Leveque V.J., Johnson R.B., Parsons S., Ren J., Xie C., Zhang F., Wang Q.M. Identification of a C-terminal regulatory motif in hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase: structural and biochemical analysis. // J. Virol. 2003. V. 77. P. 9020−9028.
  102. Bressanelli S., Tomei L., Rey F.A., De Francesco R. Structural analysis of the hepatitis С virus RNA polymerase in complex with ribonucleotides. // J. Virol. 2002. V. 76. P. 3482−3492.
  103. Ivashkina N. Wo Ik В., Lohmann V., Bartenschlager R., Blum HE., Penin F., Moradpour D. The hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase membrane insertion sequence is a transmembrane segment. II J. Virol. 2002. V. 76. P. 13 088−13 093.
  104. OFarrell D., Trowbridge R., Rowlands D., Jager J. Substrate complexes of hepatitis С virus RNA polymerase (HC-J4): structural evidence for nucleotide import and de-novo initiation. // /. Mol. Biol. 2003. V. 326. P. 1025−1035.
  105. Lohmann V., Roos A., Korner F., Koch J.O., Barlenschlager R. Biochemical and kinetic analyses of NS5B RNA-dependent RNA polymerase of the hepatitis С virus. // Virology 1998. V. 249. P. 108−118.
  106. Cramer J., Jaeger J., Restle T. Biochemical and Pre-Steady-State Kinetic Characterization of the Hepatitis С Virus RNA Polymerase (NS5BDelta21, HC-J4). II Biochemistry 2006. V. 45. P. 3610−3619.
  107. Maag D., Castro C., Hong Z., Cameron C.E. Hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase (NS5B) as a mediator of the antiviral activity of ribavirin. // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P. 46 094−46 098.
  108. Wang Q.M., Hockmcin M.A., Staschke K., Johnson R.B., Case K.A., Lu J., Parsons S., Zhang F., Rathnachalam R., Kirkegaard K., Colacino J.M. Oligomerization and cooperative
  109. RNA synthesis activity of hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase. // J. Virol. 2002. V. 76. P.3865−3872.
  110. Qin W., Luo H., Nomura THayashi N" Yamashita Т., Murakami S. Oligomeric interaction of hepatitis С virus NS5B is critical for catalytic activity of RNA-dependent RNA polymerase. II J. Biol. Chem. 2002. V. 277. P. 2132−2137.
  111. Choi H.B., Kim Y.G., Oh J.W. Biochemical properties of full-length hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase expressed in insect cells. // Exp. Mol. Med. 2003. V. 35. P. 475−485.
  112. Kim M., Kim H, Cho S.P., Min M. K Template requirements for de novo RNA synthesis by hepatitis С virus nonstructural protein 5B polymerase on the viral X RNA. // J. Virol. 2002. V. 76. P. 6944−6956.
  113. Oh J.W., Sheu G.T., Lai MM. Template requirement and initiation site selection by hepatitis С virus polymerase on a minimal viral RNA template. // J. Biol. Chem. 2000. V. 275. P. 17 710−17 717.
  114. Shim J.H., Larson G., Wu J.Z., Hong Z. Selection of З'-template bases and initiating nucleotides by hepatitis С virus NS5B RNA-dependent RNA polymerase. // J. Virol. 2002. V. 76. P. 7030−7039.
  115. Kao C.C., YangX., Kline A., Wang Q.M., Barket D., Heinz B.A. Template requirements for RNA synthesis by a recombinant hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase. // J. Virol. 2000. V. 74. P. 11 121−11 128.
  116. Ranjith-Kumar C.T., Gutshall L., Sarisky R.T., Kao C.C. Multiple interactions within the hepatitis С virus RNA polymerase repress primer-dependent RNA synthesis. // J. Mol. Biol. 2003. V. 330. P. 675−685.
  117. Luo G., Hamatake R.K., Mathis D.M., Racela J., Rigal K.L., Lemm J., Colonno R.J. De novo initiation of RNA synthesis by the RNA-dependent RNA polymerase (NS5B) of hepatitis С virus. // Virol. 2000. V. 74. P. 851−863.
  118. Kim S.J., Kim J.H., Kim Y.G., Lim H.S., Oh J.W. Protein kinase C-related kinase 2 regulates hepatitis С virus RNA polymerase function by phosphorylation. // J. Biol. Chem. 2004. V. 279. P. 50 031−50 041.
  119. Ishido S., Fujita Т., Holta H. Complex formation of NS5B with NS3 and NS4A proteins of hepatitis С virus. II Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. V. 244. P. 35−40.
  120. Kyono K, Miyashiro M., Taguchi I. Human eukaryotic initiation factor 4AII associates with hepatitis С virus NS5B protein in vitro. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. V. 292. P. 659−666.
  121. Llirano M., Kaneko S., Yamashita Т., Luo H., Qin W., Shirota Y., Nomura Т., Kobayashi K, Murakami S. Direct interaction between nucleolin and hepatitis С virus NS5B. // J. Biol. Chem. 2003. V. 278. P. 5109−5115.
  122. Shimakami Т., Honda M., Kuscikawa Т., Murata Т., Shimotohno K, Kaneko S., Murakami S. Effect of hepatitis С virus (HCV) NS5B-nucleolin interaction on HCV replication with HCV subgenomic replicon. II J. Virol. 2006. V. 80. P. 3332−3340.
  123. Lan S., Wang H., Jiang H., Мао Д, Liu X., Zhang X., Ни Y., Xiang L., Yuan Z. Direct interaction between alpha-actinin and hepatitis С virus NS5B. // FEBS Lett. 2003. V. 554. P. 289−294.
  124. Gcio L., Tu Я, Shi S.T., Lee K.J., Asanaka M., Hwang S.B., Lai M.M. Interaction with a ubiquitin-like protein enhances the ubiquitination and degradation of hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase. II J. Virol, 2003. V. 77. P. 4149−4159.
  125. Johnston V.K., Maley D., Gagnon R.C., Grassmann C.W., Behrens S.E., Sarisky R.T. Kinetic profile of a heterocyclic HCV replicon RNA synthesis inhibitor. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003. V. 311. P. 672−677.
  126. Nguyen T.T., Gates A.T., Gutshall L.L., Johnston V.K., Gu В., Duffy K.J., Sarisky R.T. Resistance profile of a hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase benzothiadiazine inhibitor. // Antimicrob. Agents Chemother. 2003. V. 47. P. 3525−3530.
  127. Расе P., Nizi E., Pacini В., Pesci S., Matassa V., De Francesco R., Altamura S., Summa V. The monoethyl ester of meconic acid is an active site inhibitor of HCV NS5B RNA-dependent RNA polymerase. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004. V. 14. P. 3257−3261.
  128. Dixit N.M., Perelson A.S. The metabolism, pharmacokinetics and mechanisms of antiviral activity of ribavirin against hepatitis С virus. // Cell. Mol. Life Sci. 2006. V. 63. P. 832−842.
  129. Shim J., Larson G., Lai V., Nairn S., Wu J.Z. Canonical З'-deoxyribonucleotides as a chain terminator for HCV NS5B RNA-dependent RNA polymerase. II Antiviral Res. 2003. V. 58. P. 243−251.
  130. Olsen D.B., Eldrup A.B., Bartholomew L., Bhat В., Bosserman M.R., Ceccacci A., Colwell L.F., Fay J.F., Flores O.A., Getty K.L., Grobler J.A., LaFemina R.L., Markel E.J., Migliaccio
  131. Koh Y.H., Shim J.H., Wu J.Z., Zhong W., Hong Z., Girardet J.L. Design, synthesis, and antiviral activity of adenosine 5'-phosphonate analogues as chain terminators against hepatitis С virus. // J. Med. Chem. 2005. V. 48. P. 2867−2875.
  132. Bartenschlager R" Lohmann V. Novel cell culture systems for the hepatitis С virus. // Antiviral Res. 2001. V. 52. P. 1−17.
  133. Xie Z.C., Riezu-Boj J.I., Lasarte J.J., Guillen J., Su J.H., Civeira M.P., Prieto J. Transmission of hepatitis С virus infection to tree shrews. // Virology 1998. V. 244. P. 513−520.
  134. Wunschmann S., MedhJ.D., Klinzmann D., Schmidt W.N., Stapleton J.T. Characterization of hepatitis С virus (HCV) and HCV E2 interactions with CD81 and the low-density lipoprotein receptor. II J. Virol. 2000. V. 74. P. 10 055−10 062.
  135. Bartosch В., Dubuisson J., Cosset F.L. Infectious hepatitis С virus pseudo-particles containing functional E1-E2 envelope protein complexes. // J. Exp. Med. 2003. V. 197. P. 633 642.
  136. Cormier E.G., Tsamis F., Kajumo F., Durso R.J., Gardner J.P., Dragic T. CD81 is an entry coreceptor for hepatitis С virus. II Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2004. V. 101. P. 72 707 274.
  137. Germi R., Crance J.M., Garin D., Guimet J., Lortat-Jcicob H, Ruigrok R.W., Zarski J.P., Drouet E. Cellular glycosaminoglycans and low density lipoprotein receptor are involved in hepatitis С virus adsorption. II J. Med. Virol. 2002. V. 68. P. 206−215.
  138. Wang Q.C., Feng Z.H., Nie Q.H., Zhou Y.X. DC-SIGN: binding receptors for hepatitis С virus. // Chin. Med. J. (Engl.) 2004. V. 117. P. 1395−1400.
  139. Zuckerman E., Kessel A., Slobodin G., Sabo E., Yeshurun D., Toubi E. Antiviral treatment down-regulates peripheral B-cell CD81 expression and CD5 expansion in chronic hepatitis С virus infection. II J. Virol. 2003. V. 77. P. 10 432−10 436.
  140. Kronenberger В., Ruster В., Elez R., Weber S., Piiper A., Lee J.H., Roth W.K., Zeuzem S. Interferon alfa down-regulates CD81 in patients with chronic hepatitis C. // Hepatology 2001. V, 33. P.1518−1526.
  141. Т., Нага К, Kohara M., Iwahashi J., Hamada N., Honda-Yoshino H., Toyoda T. Promoter/origin structure of the complementary strand of hepatitis С vims genome. // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. P. 28 700−28 705.
  142. Domitrovich A.M., Diebel K.W., Ali N. Sarker S., Siddiqui A. Role of La autoantigen and polypyrimidine tract-binding protein in HCV replication. // Virology 2005. V. 335. P. 72−86.
  143. Ivanyi-Nagy R., Kanevsky /., Gctbus C" Lavergne J.P., Ficheux D., Penin F., Fosse P., Darlix J.L. Analysis of hepatitis С virus RNA dimerization and core-RNA interactions. // Nucleic Acids Res. 2006. V. 34. P. 2618−2633.
  144. Barterjee R., Dasgupta A. Specific interaction of hepatitis С virus protease/helicase NS3 with the З'-terminal sequences of viral positive- and negative-strand RNA. // J. Virol. 2001. V. 75. P. 1708−1721.
  145. Huang L., Hwang J., Sharma S.D., Hargittai M.R., Chen Y, Arnold J.J., Raney K.D., Cameron C.E. Hepatitis С virus nonstructural protein 5A (NS5A) is an RNA-binding protein. // J. Biol. Chem. 2005. V. 280. P. 36 417−36 428.
  146. Ji H., Fraser C.S., Yu Y, Leary J., Doudna J.A. Coordinated assembly of human translation initiation complexes by the hepatitis С virus internal ribosome entry site RNA, // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2004. V. 101. P. 16 990−16 995.
  147. Ito Т., Lai MM An internal polypyrimidine-tract-binding protein-binding site in the hepatitis С virus RNA attenuates translation, which is relieved by the 3'-untranslated sequence. // Virology 1999. V. 254. P. 288−296.
  148. Fukushi S., Okada M., Stahl J., Kageyamci Т., Hoshino F.B., Kalaycima K. Ribosomal protein S5 interacts with the internal ribosomal entry site of hepatitis С virus. // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P. 20 824−20 826.
  149. Izumi R.E., Valdez В., Banerjee R., Srivastava M, Dasgupta A. Nucleolin stimulates viral internal ribosome entry site-mediated translation. // Virus Res. 2001. V. 76. P. 17−29.
  150. Murakami K, Abe M., Kageyamci Т., Kamoshitci N., Nomoto A. Down-regulation of translation driven by hepatitis С virus internal ribosomal entry site by the 3' untranslated region of RNA. II Arch. Virol. 2001. V. 146. P. 729−741.
  151. Venkatesan A., Sharma R., Dasgupta A. Cell cycle regulation of hepatitis С and encephalomyocarditis virus internal ribosome entry site-mediated translation in human embryonic kidney 293 cells. // Virus Res. 2003. V. 94. P. 85−95.
  152. Liu Q., Tackney C., Bhat R.A., Prince A.M., Zhang P. Regulated processing of hepatitis С virus core protein is linked to subcellular localization. // J. Virol. 1997. V. 71. P. 657−662.
  153. Lohmann V., Koch J.O., Bcirtenschlager R. Processing pathways of the hepatitis С virus proteins. // J. Hepatol. 1996. V. 24. P. 11−19.
  154. Yang S.H., Lee C.G., Song M.K., Sung Y.C. Internal cleavage of hepatitis С virus NS3 protein is dependent on the activity of NS34A protease. // Virology 2000. V. 268. P. 132−140.
  155. Brodsky L.I., Vasiliev A.V., Kalaidzidis Y.L., Osipov Y.S., Tatuzov R.L., Feranchuk S.I. GeneBee: the program package for biopolymer structure analysis. II Dimaks 1992. V. 8. P. 127 139.
  156. Kim J.H., Lee J., Oh В., Kimm K, Koh I. Prediction of phosphorylation sites using SVMs. // Bioinformatics 2004. V. 20. P. 3179−3184.
  157. Blom N., Sicherilz-Ponten Т., Gupta R., Gammelloft S., Brunak S. Prediction of postradiational glycosylation and phosphorylation of proteins from the amino acid sequence. // Proteomics 2004. V. 4. P. 1633−1649.
  158. Zhou F.F., Xue' Y., Chen G.L., Yao X. GPS: a novel group-based phosphorylation predicting and scoring method. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004. V. 325. P. 14 431 448.
  159. Ferrari E., Wright-Minogue J., Fang J.W., Baroudy B.M., Lau J.Y., Hong Z. Characterization of soluble hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase expressed in Escherichia coli. // J. Virol. 1999. V. 73. P. 1649−1654.
  160. Oh J.W., Ito Т., Lai MM A recombinant hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase capable of copying the full-length viral RNA. // J. Virol. 1999. V. 73. P. 76 947 702.
  161. Adachi Т., Ago LI., Iiabuka N., Okuda K., Komcitsu M., Ikeda S., Yatsunami K. The essential role of C-terminal residues in regulating the activity of hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase. // Biochim. Biophys. Acta 2002. V. 1601. P. 38−48.
  162. Makrides S.C. Strategies for achieving high-level expression of genes in Escherichia coli. II Microbiol. Rev. 1996. V. 60. P. 512−538.
  163. Viitanen M.I., Vasala A., Neubauer P., Alatossava T. Cheese whey-induced high-cell-density production of recombinant proteins in Escherichia coli. // Microb. Cell. Fact. 2003. V. 2. P. 2.
  164. С.В. Оптимизация экспрессии гетерологичных генов в клетках Е. coli. II Биотехнология 1998. V. Р. 3−23.
  165. Вапеух F. Recombinant protein expression in Escherichia coli. // Curr. Opin. Biotechnol. 1999. V. 10. P. 411−421.
  166. Uhlenbeck O.C., Bailer J., Doty P. Complementary oligonucleotide binding to the anticodon loop of fMet-transfer RNA. II Nature 1970. V. 225. P. 508−510.
  167. Schoner B.E., Belagaje R.M., Schoner R.G. Translation of a synthetic two-cistron mRNA in Escherichia coli. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1986. V. 83. P. 8506−8510.
  168. Oppenheim D.S., Yanofsky C. Translational coupling during expression of the tryptophan operon of Escherichia coli. // Genetics 1980. V. 95. P. 785−795.
  169. Mukhopadhyay U.K., Sahni G. An insight into the possible mechanism of working of two-cistronic gene expression systems and rational designing of newer systems. // J. Biosci. 2002. V. 27. P.219−231.
  170. Svensson J., Andersson C., Reseland J.E., Lyngsladcias P., Bulow L. Histidine tag fusion increases expression levels of active recombinant amelogenin in Escherichia coli. // Protein. Expr. Purif. 2006. V. 48. P. 134−141.
  171. Pinna L.A. Casein kinase 2: an 'eminence grise' in cellular regulation? // Biochim. Biophys. Acta 1990. V. 1054. P. 267−284.
  172. Bustos V.H., Marin O., Meggio F., Cesaro L., Allende C.C., Allende J.E., Pinna L.A. Generation of protein kinase Ckl alpha mutants which discriminate between canonical and non-canonical substrates. // Biochem. J. 2005. V. 391. P. 417−424.
  173. Caizergues-Ferrer M., Belenguer P., Lcipeyre В., Amalric F., Wallace M.O., Olson M.O. Phosphorylation of nucleolin by a nucleolar type N11 protein kinase. // Biochemistry 1987. V. 26. P. 7876−7883.
  174. Romero-Oliva F., Jacob G., Allende J.E. Dual effect of lysine-rich polypeptides on the activity of protein kinase CK2. // J. Cell. Biochem. 2003. V. 89. P. 348−355.
  175. Rcimcidoss C.S., Steczko J., Uhlig J.W., Axelrod B. Effect of albumin on binding and recovery of enzymes in affinity chromatography on Cibacron Blue. II Anal. Biochem. 1983. V, 130. P. 481−484.1. БЛАГОДАРНОСТИ
  176. Мне хотелось бы поблагодарить всех сотрудников Лаборатории химического и биологического анализа биополимеров и клеток и Лаборатории этимологии транскрипции за неоценимую помощь при выполнении данной работы.
  177. Выражаю благодарность сотрудникам Института молекулярной биологии им. В. А. Энгельгардта РАН Александровой Л. А. и Козлову М. В. за предоставленные для исследования соединения, и Костюку Д. А. за сконструированную плазмиду.
  178. Выражаю благодарность сотруднице Института биоорганической химии им. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН за клонирование генов казеинкиназ человека.
  179. Наконец, хочу поблагодарить своего научного руководителя Куханову М. К. и научного консультанта Кочеткова С. Н. за постоянное внимание и помощь в работе.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!