Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Интеграция и экспрессия экзогенов в молочной железе соматических трансгенных животных, полученных с использованием ретровирусных векторов

Диссертация: Интеграция и экспрессия экзогенов в молочной железе соматических трансгенных животных, полученных с использованием ретровирусных векторов
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Изучение динамики экспрессии рекомбинантных белков в течение лактации показало, что синтез рекомбинантного продукта в молоко носил периодический характер: периоды увеличения концентрации рекомбинантного белка сменялись периодами ее спада. Период активного синтеза белка продолжался 12−30 дней, после чего экспрессия чужеродного белка в молочной железе опытных животных падала. Максимальная… Читать ещё >

Интеграция и экспрессия экзогенов в молочной железе соматических трансгенных животных, полученных с использованием ретровирусных векторов (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Методы получения трансгенных животных
      • 1. 1. 1. Микроинъекция
      • 1. 1. 2. Эмбриональные стволовые клетки
      • 1. 1. 3. Ретровирусные векторы
      • 1. 1. 4. Аденовирусные векторы
      • 1. 1. 5. Аденоассоциированные векторы
      • 1. 1. 6. Липосомы
      • 1. 1. 7. Спермии
    • 1. 2. Ретровирусы как векторы для переноса экзогенных генов
      • 1. 1. 1. Молекулярно-генетическая организация ретровирусов
      • 1. 1. 2. Конструирование ретровирусных векторов
      • 1. 1. 3. Основные этапы переноса чужеродных генов с помощью ретровирусных векторов
      • 1. 1. 4. Использование ретровирусных векторов для направленного переноса генов
    • 1. 3. Использование молочной железы животных для синтеза рекомбинантных белков
      • 1. 3. 1. Получение белков фармакологического назначения
      • 1. 3. 2. Продукция рекомбинантных белков в молоко трансгенных животных
    • 1. 4. Эритропоэтин: биология, функции, методы получения
    • 1. 5. Биология, функции, получение и применение гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ)

Актуальность темы

.

Одним из направлений в биотехнологии, интенсивно развивающихся в последнее годы, является создание трансгенных животных — продуцентов рекомбинантных белков фармакологического назначения. Учитывая сложность получения лекарственных препаратов белков из органов и биологических жидкостей человека ввиду их низкой концентрации, а также ограниченного объема сырья и возможности переноса опасных инфекций, производство рекомбинантных белков с помощью трансгенных животных имеет в настоящее время огромный коммерческий интерес. При этом наиболее интересным представляется получение биологически активных протеинов с молоком сельскохозяйственных животных. Экспрессия чужеродных белков в молочной железе трансгенных животных может достигать 1 г/л. Причем, выделение данных белков из молока становится возможным уже при их концентрации от25нг/мл (121,47,129,119,49).

Однако, стоимость производства трансгенных животных на сегодняшний день остается высокой. Кроме того, экспрессируемые уровни трансгена у крупных животных не всегда коррелируют с теми, которые были получены у лабораторных животных (123). Отрицательным моментом также является и то, что у крупных животных только 1% эмбрионов, микроинъецированных экзогенной ДНК, развивается в трансгенное животное, причем около 40% из них не экспрессируют трансген (125,69).

В рамках данной проблемы актуальным является разработка методов получения трансгенных животных, характеризующихся высокой эффективностью трансгенеза и низкими материальными затратами. Как перспективный в данном отношении метод рассматривают использование ретровирусных векторов. По сравнению с другими типами векторов ретровирусы обладают уникальной способностью переносить чужеродные гены и стабильно интегрировать их в геном делящихся соматических клеток.

На этом основано использование ретровирусных векторов для получения соматических трансгенных животных, т. е. животных с трансформацией отдельных органов (3).

Введение

экзогенных генов в органы взрослых животных позволяет значительно сократить сроки с момента введения генных конструкций до получения первых данных об уровне экспрессии чужеродных белков, что особенно важно для животных, характеризующихся большим генерационным интервалом (крупный рогатый скот, козы, свиньи). В связи с этим интересным представляется проведение экспериментов по переносу экзогенной ДНК с помощью ретровирусных векторов в клетки молочной железы сельскохозяйственных животных с целью получения продуцентов рекомбинантных белков.

Цель и задачи исследования

.

Исходя из вышеизложенного, целью диссертационной работы явилось изучение интеграции и экспрессии экгогеной ДНК в молочной железе соматических трансгенных животных, полученных с использованием ретровирусных векторов.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Оценить используемые линии клеток-упаковщиц на наличие рекомбинантной вставки методом ПЦР;

2. Оценить эффективность использования ретровирусных векторов, содержащих гены гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и эритропоэтина человека, для осуществления переноса экзогенной ДНК в секреторные клетки вымени после введения клеток-упаковщиц в молочную железу крупного рогатого скота и свиней;

3. Изучить динамику экспрессии рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и эритропоэтина человека в молоке коров и свиноматок в течение лактации;

4. Выявить факторы, влияющие на уровень экспрессии рекомбинантных белков в молоко;

5. Провести анализ распространения ретровирусных векторов в других органах и тканях опытных животных.

Научная новизна.

В ходе выполнения диссертационной работы впервые подробно была изучена эффективность использования ретровирусных векторов, содержащих гены гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и эритропоэтина человека, для осуществления локальной трансформации отдельных органов, в частности молочной железы коров и свиней. Была исследована динамика экспрессии рекомбинантного эритропоэтина и гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека в молоке опытных животных в течение лактации.

Выявлено влияние лактации, времени введения генных конструкций в молочную железу, возраста и вида животных на уровень экспрессии рекомбинантного белка в молоко.

Практическая значимость работы.

— Показана возможность использования ретровирусных векторов для получения животных — продуцентов рекомбинантных белков.

— Изучены факторы, влияющие на уровень экспрессии рекомбинантного белка в молоко.

Основные положения, выносимые на защиту:

— Возможность доставки генных конструкций эритропоэтина и гранулоцитарного колониестимулирующего фактора в секреторные клетки вымени на основе использования ретровирусных векторных систем, вводимых в молочную железу.

— Синтез рекомбинантного белка в молоко в течение лактации носит периодический характер. 8.

— Распространение ретровирусных векторов наблюдается как в месте инъекции, так и в других органах и тканях.

Апробация работы.

Материалы диссертации были представлены на международной конференции «ДНК-технологии в клеточной инженерии и маркировании признаков сельскохозяйственных животных», ВИЖ, п. Дубровицы, 2001; конференции аспирантов и молодых ученых, ВИЖ, п. Дубровицы, 2001; международной научно-практической конференции «Повышение конкурентноспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения», Быково, 2002, научных отчетах ВИЖа за 2000;2002.

Публикация результатов исследований.

По материалам диссертации опубликовано 4 работы.

Структура и объём работы.

Диссертация изложена на 100 страницах, содержит 11 таблиц, 17 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений.

Список литературы

включает 130 источников.

5. ВЫВОДЫ.

1. Показана эффективность использования ретровирусных векторов для осуществления локального трансгенеза отдельных органов сельскохозяйственных животных, в частности молочной железы коров и свиней. Наличие генных конструкций эритропоэтина и Г-КСФ после введения ретровирусных векторов в молочную железу выявлено у всех исследованных животных.

2. Установлена экспрессия рекомбинантных белков в молочной железе опытных животных. Содержание эритропоэтина человека в молоке крупного рогатого скота достигало 400 нг/мл, свиней — 600 нг/мл. Рекомбинантный Г-КСФ экспрессировался у крупного рогатого скота в количестве до 200 нг/мл, у свиней — до 60 нг/мл.

3. Изучение динамики экспрессии рекомбинантных белков в течение лактации показало, что синтез рекомбинантного продукта в молоко носил периодический характер: периоды увеличения концентрации рекомбинантного белка сменялись периодами ее спада. Период активного синтеза белка продолжался 12−30 дней, после чего экспрессия чужеродного белка в молочной железе опытных животных падала. Максимальная концентрация эритропоэтина в молоке коров наблюдалась на 85−108, 120 130, 150−160 и 196−210 дни лактации и составила 400 нг/мл. Максимальный уровень рекомбинантного Г-КСФ отмечался в первую неделю и на 104−112,127 дни лактации — 100−200 нг/мл.

У свиноматок содержание рекомбинантного эритропоэтина в молоке достигало максимального значения на 21 и 35 дни лактации — 500−600 нг/мл.

4. Установлено влияние дня лактации, времени введения ретровирусных векторов в молочную железу, возраста и вида животных на уровень экспрессии рекомбинантного белка в молоко. Максимальное число пиков.

87 активного синтеза белка наблюдалось в первые 100 дней лактации. В последующие дни частота данных периодов снижалась. Более высокий уровень экспрессии рекомбинантного продукта в молоко отмечался при введении ретровирусных векторов в молочную железу опытных животных во второй половине беременности: у крупного рогатого скота — на 4−6 месяцах стельности, у свиней — на 3 месяце супоростности. При этом введение ретровирусных векторов в молочную железу нетелей оказалось более эффективным, чем у коров.

5. Исследование внутренних органов животных выявило, что распространение генных конструкций не носит локального характера. Так, после введения ретровирусных векторов в молочную железу коров и свиней ПЦР показал наличие рекомбинантной ДНК в слюнных железах, надпочечниках и поджелудочной железе.

Показать весь текст

Список литературы

  1. И.Г. Реализация генетической информации. М.: Наука, 1972.
  2. Е.В., Свиридов Ю. В., Московцев A.A. и др. Невирусный перенос генов in vivo в генной терапии //Вопросы медицинской химии. -2000. -№ 3.
  3. Г., Зиновьева Н., Эрнст JI.K. Генные фермы новый путь производства биологически активных протеинов трансгенными животными //Сельскохозяйственная биология.- 1993.- № 6.- С. 3−27.
  4. Г., Кройслих X., Штранцингер Г. Экспериментальная генетика в животноводстве. М.: РАСХН, 1995. — 326 с.
  5. Генная терапия//Еженедельник Аптека. № 6(227).
  6. В.И. Физиология сельскохозяйственных животных. М.: Агромромиздат, 1990. — 511с.
  7. Е.К. Генотерапия наследственных болезней //Вопросы медицинской химии.- 2000. № 3.
  8. И.И., Попов С. М., Скопичев В. Г. Цитофизиология секреции молока. JL: Наука, 1976. — 242 с.
  9. Р.И., Семенова Р. И., Арчаков А. И. Реальность и надежды генной терапии //Вопросы медицинской химии 2000. — № 3.
  10. Н. А., Попов А. Н., Эрнст JI. К. и др. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве. Дубровицы, 1998.- 47 с.
  11. H.A., Эрнст Л. К., Брем Г. Трансгенные животные и возможности их использования: молекулярно-генетические аспекты трансгенеза в животноводстве. ВИЖ, 2001.-128 с.
  12. Л.Б. Создание векторов для тканеспецифической экспрессии генов эритропоэтина и гранулоцит колониестимулирующего фактора человека в молочной железе животных //Автореф. дисс.канд. биол. наук. Боровск, 2002. — 23 с.
  13. На старт выходят генные инженеры // Наука и жизнь. № 8. — 2000. -с.71−72.
  14. Новое в клонировании ДНК. Методы. / Под ред. Д.Гловера. М.: Мир, 1989.-368 с.
  15. В.С. Ретровирусные векторы в генной терапии./УВопросы медицинской химии. 2000. — № 3
  16. В.С. Ретровирусные векторы—эффективная система переноса и экспрессии чужеродных генов в клетках млекопитающих // Молокулярная биология. 1989. — Т.23. — Вып.2. — С.8−12.
  17. М., Берг П. Гены и геномы. М.: Мир, 1998. — Т.2.- 362 с.
  18. Р.Е., Адаме Г. Д., Дж.Б.Гриффитс и др. Биотехнология клеток животных. М.: Агромпромиздат, 1989. — 520 с.
  19. В.Н. и др. Вирусные болезни животных. ВНИТИБП. М., 1998.-С.363−460.
  20. В. А. Молекулярно-генетические аспекты использования ретровирусных векторов для трасгенеза в животноводстве // Автореф. дисс. канд. биол. наук. Дубровицы. — 2001 — 22 с.
  21. С.Н. Генетическая инженерия. Новосибирск: Изд-во Новосиб. ун-та, 1997. — 4.2. — 400с.
  22. Л.К., Прокофьев М. И. Биотехнология сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 1995. — 192 с.
  23. Abad J.L. et al. Single-step, multiple retroviral transduction of human T cells 11 J: Gene Med. V.4(l). — 2002. — P.27−37.
  24. Anderson W. Human gene therapy: Scientific and ethical consideration // Recombinant DNA Tech. Bull. -V.8. 1985.-P.55−63.
  25. Anderson W.F. Human gene therapy //Nature. 1998. — V.8. — P.25−30.
  26. Archibald A.L. Molekular Biological Approaches and their Possible Aplications, in J.W. Owen and R.F.E. Axford (eds), Breeding for Disease Resistance in Farm Animals, C.A.B. International, UK. -1991. P.100−122.
  27. Ayuk F.A., Zander A.R., Fehse B. T lymphocytes as targets of gene transfer with Moloney-type retroviral vectors //Curr Gene Ther. V. l (4). — 2001. -P.325−337.
  28. Bachiller D. et al. Liposome-mediated DNA uptake by sperm cells.// Mol. Reprod. and Dev. -N30. 1991. — P. 194−200.
  29. Bayna E.M., Rosen J.M. Tissue-specific high level expression of the rat whey acidic protein gene in transgenic mice //Nucleis Acids Res. N 18. — 1990. -P.2977−2985.
  30. Bern N., Smith D., Goldwasser E. Evidance suggesting negative regulation of the erythropoietin gene by robonucleoprotein // J.Biol.Chem. 1990. — V.265. -P.14 100−14 104.
  31. Blake J., Salinas P. S., Hughes S.M. Beta geo, a combined selection and reporter gene for retroviral and transgenic studies //Biotechnigues. V.23(4). -1997. -P.690−695.
  32. Brem G. Transgenic animals In Biotechnology // N.-Y.:VCH Press.-1993.-P.745- 832.
  33. Brinster R.L. et al. No simple solution for making transgenic mice //Cell. -Y.59. 1989. -P.239−241.
  34. Brinster R.L., Avarbock M.R. Germline transmission of donor haplotype following spermatogonial transplantation // Proc. Natl. Acad. Sei., USA. -V.91.-1994.-P.l 1303−11 307.
  35. Brinster R.L., Zimmerman J.W. Spermatogenesis followin male gern- cell transplantation //Proc. Natl. Acad. Sei., USA. V.91. — 1994. — P. l 129 811 302.
  36. Carver A.S. etal. Transgenic liverstock as bioreactors: stable expression of human alfa-l-antitripsin by a flock of sheep //Biotechnology. V. l 1. — 1993. — P.1263−1270.
  37. Castro F.O. et al. Introduction of foreign DNA into the spermatozoa of farm animals //Theriogenology. -N 34. 1990. — P. 1099−1110.
  38. Castro F.O. et al. Secretion of human erythropoetin by mammory gland expiants from lactating transgenic rabbit //Theriogenology. V.34. — 1999.
  39. Chang L.G., Gay E.E. The molekular genetics of lentiviral vectors-current and future perspectives // Curr Gene Ther. V. 1(3). — 2001. — P.237−251.
  40. Clark A.J. et al. Expression of human antihemophilic factor IX in the milk of transgenic sheep //Bio/Technology. -N 7. 1989. — P.487−492.
  41. Colman A. Production of therapeutic protein in the milk of transgenic livestock//Biochem Soc. Symp. V.63. — P. 141−147.
  42. Colony stimulating factors receiving more attention and results./ Appl. Genet. News.- 1987.-N1.-P.1−2.
  43. Crystal R.G., MaElvaney N.G., Rosenfeld M. et al. //Nature Genet. 1994. -V.8. -P.42−51.
  44. Denman J., Hayes M., Day S. et al. //Biotechnology. 1991. — V.8. — P.839−843.
  45. Dillon N. Regulating gene expression in gene therapy // Trends Biotechnol. -1993. -V.ll. P. 167−172.
  46. DiTulio P., Ebert K., Pollock J. et al. //In: Trancgenic animals: Generation and Use. 1995.- P.465−467.
  47. Douglas J.J. Process development of viral vector //The Second Annual us Biotechnology Symposium Nov. 7−9. 1999.
  48. Ebert K.M. et al. Transgenic production of a variant of human tissue-type plasmingen activator in goat milk: generation of transgenic goats and analysis of expression //BioTechnology. N 9. — 1991. — P.835−838.
  49. Egrie J.C., Strickland T.W., Lane J. et al. Characterization and biological effects of recombinant human erythrioietin // Immunibiol. 1986. — V.172. -P.213−224.
  50. Emery D.W. et al. Development of a condensed locus control region cassette and testing in retrovirus vectors for a gamma-globin //Blood Cells Mol Dis. -V.24(3). 1998. -P.322−339.
  51. Erickson R.P. Minireview: creating animal models of genetic diseases //Amer. J. Hum. Genet. 1988. — V.43. -P.382−386.
  52. Evans M.G., Kaufman M. Establishment in culture of plurepotential cells from mouse embryos //Nature. 1982. — V.292. — P. 154−156.
  53. Fransolini M. et al. Evidence for nuclear internalization of exogenous DNA into mammalian sperm cells //Mol. Reprod. and Dev. -N 34. 1993. — P.133−139.
  54. Fried W. The liver as a sourse of extrarenal erythropoietin production // Blood. 1972. — V.30. — P.671−677.
  55. Gail D. Gene therapy likely to target cancer patients on large scale // Genet. Eng. News. -N 2. -1994. P. 14−15.
  56. Gao X., Huang L. Cationic liposome-mediate gene therapy //Gene Ther. V.2. — 1995. -P.710−722.
  57. Garcia J.F., Ebbe S.N., Hollander L. et al. Radioimmunoassay of erythropoietin: circulating levels in normal and polycythemic human being // J.Lab.Clin.Med. 1982. — V.99. — P.624−635.
  58. Gene therapy averts restenosis in pigs //Biotechnol. News 1994 — N 20- c.4−5.
  59. Gene therapy for cystic fibrosis // Biotechnol. News. 1994. — N 5. — c.7.
  60. Ghazizadeh S., Harington R., Taichmann L. In vivo transduction of mouse epidermis with recombinant retroviral vectors: implications for cutaneous gene therapy // Gene Ther. 1999. -N.7. — P. 1267−1275.
  61. Gordon K., Lee E., Vitale J.A., Smith A.E., Westphal H., Hennighausen L. Production of human plasminogen activator in transgenic mouse milk // BioTechnology. 1987. — V.5. — P. l 183−1187.
  62. Gottschalk S. Synthetic vehicles for effecient gene transfer and expression in mammalian cells // J. Cell Biochem. Suppl. 21a.- 1995. — P.393.
  63. Gruenbaum J. et al. Sperm cells as vector for generation of transgenic chickens //J.Cell Biochem. -1991. Suppl. 15 E. — P. 194.
  64. Haskell R.E., Bowen R.A. Efficient production of transgenic cottle by retroviral infection of early embryos // Mol. Reprod. Dev. V.3. — 1995. -P.386−390.
  65. Heinz R., Reisner R, Pittermann E. Erythropoietin for chemotherapy patients refusing blood transplantation // Lancet. 1990. — V.335. — P.542−543.
  66. L. //J. Cell. Biochem. 1992. — V.49. — P.325−332.
  67. Hicks G.C. et al. Retrovirus gene traps // Metods Enzumol. V.254. — 1995. -P.263−275.
  68. Hodgson C.P. The vector void in gene therapy //Biotechnology. 1995. -V.13.-P.222−225.
  69. Jacobson C.O., Goldwasser E., Fried W. et al. Role of kidney in erythropoiesis //Nature. 1957. — V.179. — P.633−634.
  70. James D.S. et al. N-Glycocylation of recombinant human interferon-gamma produced in different animal expression system //BioTechnology. V.13. -1995. -P.592−596.
  71. Yamada T., Kaneko H., Jizuko H. et al. Elewation of lymphocyte and hematopoetic stem cell numbers mice transgenic for human granulocyte CSF // Lab/ Invest. 1996. — V.74. — № 2. — P.384−394.
  72. Johnson L.G. Retroviral approaches to gene therepy of cistis fibrosis //Ann. Acad. Sci. V.953. — 2001. — P.43−52.
  73. Kasahara N. et al. Tissue-specific targeting of retroviral vectors through ligand-receptor interactions //Science. 1994. — V.266. — P.1373−1376.
  74. Kaufmann R.J. Advances toward gene therapy for hemophilia at the millenium// Hum. Gene Ther. V.10. — 1999. — P. 2097−2107.
  75. Khoo H.-W., Patil J., Chen E. Sperm-mediated gene transfer: a review// SEAMEO Jasper Fellowship Monograph 1993 Series 1. 1993.
  76. Ko J.H. et al. Production of biologically active human granocyte colony stimulating factor in the milk of transgenic goat // Transgenic Reseach. V. 9. — 2000.-P.215−222.
  77. Korhonen V.P., Tolvanen M., Hyttinen J.M. et al. Expression of bovine beta-lactoglobulin human erythropoietin fusion protein in the milk of transgenic mice and rabbits // Eur. J. Biochem. 1997. — V.15. — P.482−489.
  78. Kotani H. Improved methods of retroviral vector transduction and production for gene therapy //Hum Gene Ther. V.45. — 1994. — P. 19−28.
  79. Krystal G., Pancratz H., Farter N. et al. Purification of human erythropoietin to homogeneity by a rapid five-step procedure // Blood. 1986. — V.67. — P.71−80.
  80. P.A., Barlow D.P., Hogan B.L. //Development. 1994. — V.120. -P.3197−3204.
  81. Lai F.F., Everett R., Wang F. et al. Structural characterization of human erythropoietin// J.Biol.Chem. 1986. — V.261.- P.3116−3121.
  82. Lavitrano M. et al. Sperm cells as vectors for introducing foreign DNA into eggs: genetic transformation of mice // Cell. -1989. V.57. — P.717−723.
  83. Lee-Huang S. Cloning and expression of human erythropoietin cDNA in E.coli. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1984. — V.81. — P.2708−2712.
  84. Lin F.-K., Suggs S., Lin C.-H. et al. Cloning and expression of the human erythropoietin gene //Proc.Natl.Acad.Sci. 1985.- V.82. — P.7580−7584.
  85. Lu Y.F., Tian C., Deng J.X. et al. Cloning of human G-CSF genomic gene and its expression transgenic mice mammery gland // Chuan Nsueh Pao. -1999. V.26. — № 4. — P.281 -287.
  86. Lu J. Viral based gene therapy for prostate cancer //Curr Gene Ther. V. 1(2). -2001. -P.183−200.
  87. Lubon H. Transgenic animal bioreactors in biotechnology and production of blood proteins //Biotech. Annu Rev. V.4. — 1998. — P. 1−54.
  88. Maeda H., Hitomi Y., Hizata R. et al. Erythropoietin and autologous blood donation // Lancet. 1989. — V.334. — P.284−285.
  89. Massoud M., Attal J., Thepot D. et al. The deleterious effects of human erythropoietin gene driven by the rabbit whey acidic protein gene promoter in transgenic rabbits // Reprod. Nutr. Dev. 1996. — V.36. — P.555−563.
  90. Meade H.L. et al. Bovine aSi-casein gene seguences direct high level expression of active human urokinase in mouse milk //Biotechnology. V.8. -1990. -P.443−446.
  91. Mitani K. Delivering therapeutic genes matchung approach and application// Trends Biotechnol. — 1993. — V. 11. — P. 162−166.
  92. Moore M.A. The clinical use of G-CSF // ARI. 1991. -V.9. — P. 159−191.
  93. Nagano M. et al. Retrovirus-mediated gene deliveryinto male germ line sterm cells // FEBS Letters. V.475. — 2000. — P.7−10.
  94. Nagano M. et al. Transgenic mice produced by retroviral transduction of male germ line stem cell //PNAS. V.98. -2001. -P.13 090−13 095.
  95. Nagata S. et al. Molecular cloning and expression of cDNA for human granulocyte colony stimulating factor // Nature. 1986. — V.319. — P.415−418.
  96. Nagata S. Gene structure and function of G-CSF // BioEssays. -1989. -V.10. — P. 113−117.
  97. Niemann H. et al. Expression of human cattihg factor VIII cDNA construct in the mammary gland of transgenic sheep //Transgenic animals in Agriculture Conference, Tahol City, CA, USA. 1997. — P.48.
  98. Nilson B.H.K. et al. Targeting of retrovirae vectors through protease- substrate interactions //Gene Ther. 1996. — V.3. — P.280−286.
  99. Peng K-W. et al. Retroviral gene delivery system activatable by plasmin// Tumor Targeting. 1998. — V.3. — P. 112−120.
  100. Peng K-W. Strategies for targeting therapoutic gene delivery //Molec. Medicine today. 1999. — V.5. — P.448−453.
  101. Persuy M.A. et al. High expression of the caprine-casein gene in transgenic mice //Eur.J.Biochem. V.205. — 1992. — P.887−893.
  102. Platzer et al. Biological activities of a human granulocyte colony stimulating factor on normal and leukemic cells // JEM. 1985. -V.162. — P.1788−1801.
  103. Powell J.S., Berkner K.L., Lebo R.V. et al. Human erythropoietin gene: high level expression in stably transfected mammalian cells and chromosomal localization//Proc.Natl.Acad.Sci. 1986. — V.83. — P.6465−6469.
  104. Richard M. Comparison of anti-HIV-1 retroviral vectors and their use inan AIDS gene therapy trial in identical twins //J.Cell Biochem. Suppl. 21a. -1995.-P.397.
  105. Rubanyi G. The future of human gene therapy //Mol. aspects of Medicine. -2001.-V.22.- P.113−142.
  106. Russell S.J. Gene therapy: Science, medicine and the future //Br. Med. J. -1997. -V.315. -P.803−815.
  107. Seamon J.A. Inserting a nuclear targeting signal into a replication-competent Moloney murine leukemia virus affects viral export and is not sufficient for cell cycle-independent infection //J. Virol. V.76(16). — 2002. — P.8475−8484.
  108. Sheridan W. P/ et al. Granulocyte colony stimulating factor and neutrophil recovery after high-dose chemotherapy and autologous bone marrow transplantation //Lancet. -1989. V.2. — P.891−891.
  109. Sherwood J.B. The chemistry and physiology of erythropoietin // Vitam.Horm. 1984. — V.41. — P.161−211.
  110. Simons J.P. et al. Alteration of the guality of milk by expression of sheep P-lactoglobulin in transgenic mice //Nature. V.328. — 1987. — P.530−532.
  111. Snuder R.O. et al. Correction of hematophilia B in canine and murine models using recombinant adeno-associated viral vectors //Gene Ther. Res. 1999. -V.5. -P.64−70.
  112. Sommerfeit M.A. Retrovirus receptors //J. Gene Virol. 1999. — V.80. -P.3049−3064.
  113. Steward W.P. Granulocyte and granulocyte-macrophage colonystimulating factors // Lancet. -1993. Y.342. — P. 153−157.
  114. Tran N.D. et al. In utero transfer and expression of exsogenous genes in sheep // Exp. Hematol. V.l. — 2000. — P. 17−30.
  115. Uckert W., Walther W. Retro virus-mediated gene transfer in cancer therapy// Pharmac. Ther. V.63. — P.323−347.
  116. Van Cott K.E., Lubon H., Russel C. et al. //Transg. Res. 1997. — V.6. -P.203−212.
  117. Velande W.H. et al. Expression of human protein C in trancgenic swine // Harnessing biotechnology for the 21st century: Proc. 9th International Biotechnology Symposium and Exposition Virginia, August 16−21. 1997. -P.34−37.
  118. Velander W., Johnson J., Page R. et al. //Proc. Natl. Acad. Sei., USA. 1992. — V.89. — P. 12 003−12 007.
  119. Vilotte J.S. et al. Complete nucleotide seguence of bovine a-lactalbumin gene: comparison with its rat counterpart //Biochimie. V.69. -1987. — P.609−620.
  120. Wall R.J. High level synthesis of a heterologous milk protein in the mammary glands of transgenic swine //Proc. Natl. Acad. Sei. V.88. -1991. — P. 16 961 700.
  121. Wall R., Pussel V., Shamay A. et al. //Biotechnology. 1991. — V.8. — P.710−715.
  122. Wilmut I., Archibald A., McClenaghan M. et al. //Experientia. — 1991. — V.47. P.905−912.
  123. Wivel N.A. Regulatory considerations for gene therapy strategies and products // Trends Biotechnol. 1993. — V. 11. — P. 189−191.
  124. Wojchowski D.M., Orkin S.H., Sytkowski A.S. Active human erythropoietin expressed in insect cells using a baculovirus vector: a role for N-linked oligosacharide // BBA. 1987. — vol.910. — P.224−232.100
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!