Получение биоаналитических реагентов на основе полимерно-капсулированных полупроводниковых (CdSe) ZnS нанокристаллов

Интенсивное развитие широкого класса методов анализа, основанных на использовании различных флуоресцентных меток, сделало их одними из важнейших экспериментальных методов во многих научных дисциплинах. В частности, их применение в биотехнологии и медицине привело к появлению и развитию методов, облегчающих изучение живых клеток и клеточных структур, фундаментальных клеточных процессов и методов регистрации биоспецифических взаимодействий, находящих применение в медицинской диагностике и разнообразных биологических анализах.

В последние годы интенсивно разрабатываются подходы к визуализации процессов на уровне клеток, тканей и целых организмов, основанные на введении специализированных флуоресцентных меток. Одними из наиболее перспективных меток нового поколения являются флуоресцентные полупроводниковые нанокристаллы (НК), состоящие из элементов групп II-VI, III-V и имеющие структуру ядро/оболочка.

Полупроводниковым НК присущи два основных достоинства, отличающие их от органических флуорофоров: 1) широкий набор узких полос флуоресценции, положение которых зависит от диаметра НК и является управляемым параметром при возможности возбуждения излучением с одной длиной волныпри этом длина волны возбуждения может варьироваться для получения максимального отношения сигнал/шум с учетом конкретного изучаемого объекта- 2) высокая фотостабильность НК, в 100−4000 раз превышающая фотостабильность лучших органических флуорофоров. Такие свойства делают НК идеальными флуоресцентными биомаркерами в анализах, основанных на биоспецифическом взаимодействии «лиганд-рецептор» в разнообразных in vitro и in vivo биоаналитических системах, в которых использование традиционных органических флуорофоров ограничено недостаточной фотостабильностью и невозможностью одновременной регистрации в многопараметрических (многоцветных) системах. Кроме того, такие НК весьма перспективны для создания новых флуоресцентных сенсоров, действие которых основано на использовании эффекта резонансной передачи энергии (БКЕТ-эффект). Химический анализ многокомпонентных смесей, в частности, детектирование наличия в смеси определенных ионов металлов, биологических соединений и т. д., и анализ ряда физических параметров, таких как рН, электрохимический потенциал, температура в наномасштабных областях также является потенциальной областью применения данных сенсоров.

НК состава Сс18е/7п8 с диаметром 2−6 нм, используемые в данной работе, являются альтернативой органическим флуоресцентным меткам, традиционно применяемым в биотехнологии и медицине благодаря высокой яркости, возможности получения флуоресценции по всему оптическому диапазону и доступности. Оболочка из широкозонного полупроводника предохраняет флуоресцирующее ядро от влияния окружения и позволяет получить НК с квантовым выходом до 70%.

Одной из основных проблем использования таких флуоресцентных НК является трудность получения биосовместимых, легко конъюгируемых с биологическими молекулами флуоресцентных комплексов на их основе, что ограничивает их применение в медицине и биотехнологии в качестве эффективных флуоресцентных биомаркеров и сенсоров. Для решения указанной проблемы в настоящей работе разработан ряд способов модификации и функционализации поверхности НК для создания высокоэффективных и специфичных флуоресцентных биомаркеров и продемонстрированы примеры их использования в таких видах биоанализа, как реакция латексной агглютинации (РЛА), визуализация клеток и клеточных рецепторов, цитофлуориметрия.

1. 1. Олейников В. А., Суханова A.B., Набиев И. Р. Флуоресцентные полупроводниковые НК в биологии и медицине // Российские нанотехнологии. — 2007. Т.2. № 1−2. С. 160−173.

2. Bruchez, M.Jr., Moronne, М., Gin, P., Weiss, S., Alivisatos. A.P. Semiconductor Nanociystals as Fluorescent Biological Labels // Science, — 1998. V. 281. p. 20 132 016.

3. Haugland, R.P. The Handbook A Guide to Fluorescent Probes and Labeling TechnologiesTenth Edition. Invitrogen Corporation // San Diego.- 2005.

4. A.L. Efros, A.L. Efros. «Interband Absorption of Light in a Semiconductor Sphere // Sov. Phys. Semicond.- 1982. № 16. p. 772.

5. Екимов А. И., Онущенко A.A. Квантовый размерный эффект в оптических спектрах полупроводниковых микрокристаллов. Физика и техника полупроводников//ФШ/- 1982.-Т. 16.-С. 1215−1219.

6. Murray С.В., Norris DJ., Bawendi. M.G. Synthesis and Characterization of Nearly Monodisperse CdE (E = Sulfur, Selenium, Tellurium). Semiconductor Nanociystallites. II J. Am.Chem. Soc.-1993.-V.l 15. p. 8706−8715.

7. Peng X., Schlamp M.C., Kadavanich A.V., Alivisatos A.P. Epitaxial Growth of Highly Luminescent CdSe/CdS Core/Shell Nanocrystals with Photostability and Electronic Accessibility. II J. Am. Chem. Soc. -1997.V. 119. P. 7019−7029.

8. Murray C.B., Kagan C.R., Bawendi M.G. Synthesis and Characterization of Monodisperse Nanocrystals and Close-Packed Nanociystal Assemblies.//^"". Rev. Mater. Sci.- 2000.-V. 30. P. 545−610.

9. Hines M.A., Guyot-Sionnest. Synthesis and Characterization of Strongly Luminescing ZnS-Capped CdSe Nanociystals HP. J. Phys. Chem. B.- 1996.-V. 100.-P. 468.

10. Baranov A.V., Rakovich Yu.P., Donegan J.F., Perova T.S., Moore R.A., Talapin D.V., Rogach A.L., Masumoto, Y., Nabiev Effect of ZnS shell thickness on the phonon spectra in CdSe quantum dots///. Phys. Rev. B 2003. V. 68. P. 165 306.

11. Sukhanova A., Devy J., Venteo L., Kaplan H., Artemyev M., Oleinikov V., • Klinov D., Pluot M., Cohen J.H.M., Nabiev I. Biocompatible fluorescent nanocrystalsfor immunolabeling of membrane proteins and cellsIIAnal. Biochem.- 2004. V. 324, P. 60 67.

12. Henglein A. Small-particle research: physicochemical properties of extremely small colloidal metal and semiconductor particles //Chem. Rev.- 1989. V. 89. P. 1861.

13. Alivisatos A.P. Semiconductor clusters, nanocrystals, and quantum dots// Science.- 1996. V. 271. P. 933.

14. Nirmal M., Brus L.E. Luminescence photophysics in semiconductor nanocrystals HAcc. Chem. Res. 1999. V. 32. P. 407 — 414.

15. Dubertret B., Calame M., Libchaber A.J. Single-mismatch detection using gold-quenched fluorescent oligonucleotides//Nat. Biotechnol- 2001. V. 19. P. 365.

16. Elghanian R., Storhoff J .J., Mucic R.C., Letsinger R.L., Mirkin C.A. Selective Colorimetric Detection of Polynucleotides Based on the DistanceDependent Optical Properties of Gold Nanoparticles //Science.- 1991. V. 277. P. 1078.

17. De Smet Y., Deriemaeker L., Parloo E., Finsy R. On the Determination of Ostwald Ripening Rates from Dynamic Light Scattering Measurements // Langmuir.1999.-V. 15.-P. 2327.

18. C.W. Chan, S. Nie, Quantum dot bioconjugates for ultrasensitive nonisotopic detection. Science.- 281. 1998. P. 2016;2018.

19. Koberling F., Kolb U., Philipp G., Potapova I., Basche T., Mews A. Fluorescence Anisotropy and Crystal Structure of Individual Semiconductor Nanocrystals // J. Phys. Chem. B.- 2003.-V. 107. N. 30. p. 7463.

20. T. Kundu, J. Bereiter-Hahn, and I. Karl. Cell Property Determination from the Acoustic Microscope Generated Voltage Versus Frequency Curves UBiophys. J.2000. V. 78. P. 2270.

21. Dahan M., Laurence T., Pinaud F., Chemla D.S., Alivisatos A.P., Sauer M., Weiss S. Time-gated" biological imaging by use of colloidal quantum dots. // Opt. Lett.2001. V. 26.-P. 825.

22. Lounis B., Bachtel H.A., Gerion D., Alivisatos P., Moerner W.E. Photon antibunching in single CdSe/ZnS quantum dot fluorescence //Chem. Phys. Lett.-2000. V. 329. P. 399 404.

23. Micic O.I., Cheong H.M., Fu H., Zunger A., Sprague J.R., Mascarenhas A., Nozik A J. Size-dependent spectroscopy of InP quantum dots///. Phys. Chem. B.- 1997. V. 101. P. 4904.

24. Prieto J: A., Armelles G., Groenen J., Cales R. Size and strain effects in the E-l-like optical transitions of InAs/InP self-assembled quantum dot structures. //Appl. Phys. Lett. 1999. V. 74. P. 99.

25. Hu J.T., Li L., Yang W., Manna L., Wang L., Alivisatos A.P. Linearly polarized emission from colloidal semiconductor quantum rods. //Science.- 2001. Y. 292. P. 2060.

26. Efros A.L. Luminescence polarization of CdSe microciystals//Phys. Rev. B.-1992. V. 46. P. 7448.

27. Empedocles S.A., Neuhauser R., Bawendi M.G. Three-dimensional orientation measurements of symmetric single chromophores using polarization microscopy //Nature, 1999, v. 399, p. 126.

28. J. Aldana, Y.A. Wang, X. Peng, Photochemical instability of CdSe nanocrystalls coated by hydrophilic thiols //J. Am. Chem. Soc. -2001. V. 123. P. 8844−8850.

29. S.F. Wuister, I. Swart, F. van Driel, S.G. Hickey, C. de Mello Donega, Highly luminescent water-soluble CdTe quantum dots //Nano Lett.- 2003. V.3. P. 503−507.

30. S. Pathak, S.K. Choi, N. Arnheim, M.E. Thompson, Hydroxylated quantum dots as luminescent probes, for in situ hybridization //J. Am. Chem. Soc.- 2001.-V. 123. P. 4103−4104.

31. H.M. Mattoussi J. M, E. Goodman, G.P. Anderson, V.C. Sundar, F.V. Mikulec, M.G. Bawendi, Self-assembly of CdSe-ZnS quantum dot bioconjugates using an engineered recombinant protein // J. Am. Chem. Soc.- 2000. V. 122. P. 12 142.

32. S. Kim, M.G. Bawendi, Oligomeric ligands for luminescent and stable nanocrystal quantum dots IIJ. Am. Chem. Soc.-2003. V. 125. P. 14 652−14 653.

33. Sukhanova A., Artemyev M., Sharapov O., Baranov A., Jardillier J.C., Nabiev I. Ultrasensitive non-isotopic water-soluble nanocrystals // European, Eurasian and USA patents EP1366347- US2004105973- W002073155. 09/03/2001.

34. Mitchell G.P., Mirkin C.A., Letsinger R.L. Programmed Assembly of DNA Functionalized Quantum Dots HJ. Am. Chem. Soc.- 1999. V. 121. P. 8122.

35. Willard D.M., Carillo L.L., Jung J. Van Orden A. CdSe-ZnS Quantum Dots as Resonance Energy Transfer Donors in a Model Protein-Protein Binding Assay IINano Lett.- 2001.-V. 9. P. 469.

36. Hong R., Fischer N.O., Verma A., Goodman C.M., Emrick T., Rotello V.M. J. Control of Protein Structure and Function through Surface Recognition by Tailored Nanoparticle Scaffolds I/Am. Chem. Soc.- 2004. V. 126. P. 739.

37. Guo W., Li J.J., Wang Y.A., Peng X. Conjugation chemistry and bioapplications of semiconductor box nanocrystals prepared via dendrimer bridging.//C/2em. Mater.-2003.-V. 15.-P. 3125.

38. Kim S., Bawendi M.G. Oligomeric Ligands for luminescent and stable nanocrystal quantum dots HJ. Am. Chem. Soc.- 2003.-V. 125. P. 146−52.

39. Sukhanova A., Devy J., Venteo L., Artemyev M., Oleinikov V. Biocompatible fluorescent nanocrystals for immunolabeling of membrane proteins and cells // Analytical Biochemistry.- 2004. V. 324. P. 60−67.

40. Pellegrino T., Manna L., Kudera S., Koktish D., Rogach A.L., Natile G., Parak W.J. Hydrophobic Nanocrystals Coated with an Amphiphilic Polymer Shell: A General Route to Water Soluble Nanociystals // Nano Lett.- 2004. V. 4. P. 703.

41. X. Wu, H. Liu, J. Liu, K.N. Haley, J.A. Treadway, J.P. Larson, N. Ge, F. Peale, M.P. Bruchez. Immunofluorescent labeling of cancer marker Her2 and other cellular targets with semiconductor quantum dots //Nat. Biotechnol.- 2003.-V.21. P. 41−46.

42. Zhivko Zhelev, Hideki Ohba, and Rumiana Bakalova, Single Quantum Dot-Micelles Coated with Silica Shell as Potentially Non-Cytotoxic Fluorescent Cell Tracers, // J. Am. Chem. Soc.-2006.-V.128. P. 6324−6325.

43. Han M., Gao X., Su J. Z., Nie S. Quantum-Dot-Tagged Microbeads for Multiplexed Optical Coding of Biomolecules //Nat. Biotechnol.- 2001.-V. 19. P.631.

44. Radtchenko I. L., Sukhorukov G. B., Gaponik N., Kornowski A., Rogach A. L., Mohwald H. Uniform Complete Shells in One Step //Adv. Mater.-2001. V.13.-P.1684.

45. Hirai T., Saito T., Komasawa I. Stabilization of CdS nanoparticles immobilized on thiol-modified polystyrene particles by encapsulation with polythiourethane HJ. Phys. Chem. 5.-2001. V.105.-P. 9711.

46. Yang X., Zhang Y. Encapsulation of Quantum Nanodots in Polystyrene and Silica Micro-/Nanoparticles // Langmuir.-2004.-V.-20. P. 6071.

47. Paul O’Brien, Siobhan S. Cummins, Dan Darcy, Angela Dearden, Ombretta Masala, Nigel L. Pickett, Steve Ryley and Andrew J. Sutherland, Quantum dot-labelled polymer beads by suspension polymerization HChem. Commww.-2003.-P. 2532−2533.

48. D. Wang, A. Rogach, F. Caruso, Semiconductor quantum dotlabeled microsphere bioconjugates prepared by stepwise selfassembly // Nano Lett. -2002.-V.2.-P. 857 -861.

49. Miiller F, Gotzinger S, Gaponik N, Weller H, Mlynek J, Benson Article Investigation of Energy Transfer between CdTe Nanocrystals on Polystyrene Beads and Dye Molecules for FRET-SNOM Applications// J Phys Chem Д-2004.-У.108.-P. 14 527.

50. J. Riegler. O. Ehlert. T. Nann, A facile method for coding and labeling assays on polystyrene beads with differently colored luminescent nanocrystals. IIAnal Bioanal Chem.-2006.-V. 384. P. 645−650.

51. Gao X., Nie S. Quantum dot-encoded mesoporous beads with high brightness and uniformity: rapid readout using flow cytomQtryIIAnal. Chem.-2004. V. 76. P. 24 062 410.

52. JoumaaN., Lansalot M., Thretz A., Elaissari A., Sukhanova A., Artemyev M., Nabiev Г-, Cohen J.H.M. Synthesis of Quantum Dot-Tagged Submicrometer Polystyrene Particles by Miniemulsion Polymerization //Langmuir.-2006, — V. 22. P. 1810.

53. Сизова C.B., Гонцова M.C., Генералова A.H., Зубов В. П., Артемьев М: В., Набиев И. Р., Баранов А. В., Мочалов К. Е., Олейников В. А. // Материалы VI Межд. Конф. «Лазерная физика и оптические технологии».- Гродно.-2006. -Ч. 1.-C. 278:

54. Slomkowski S. Polyacrolein containing microspheres: synthesis, properties and possible medical applications //Prog. Polym. Science.-1998.-V. 231- P. 815 874.

55. Bo C., Ping Z. A New Determining Method of Copper (III) Ions at ng ml (-l) Levels Based on Quenching of the Water-Soluble Nanocrystals Fluorescence. I I Anal. Bioanal: Chem. -2005. V. 381.тР. 986−992.

56. Chan P.M., Yuen Г., Ruf F., Gonzalez-Maeso J., Seal fon S.С. Method for Multiplex Cellular Detection: of mRNAs Using Quantum Dot Fluorescent In Situ Hybridization. I/Nucleic Acids Research 2005.-V. 33.-P. 161.

57. Zhang C.Y., Ma I I., Nie S.M., Ding Y., Jin L., Chen D.Y. Quantum Dot-Labeled Trichosanthin. //Analyst.- 2000.-V. 125.-P. 1029−1031.

58. Berti L., Xie J, Medintz I.L., Glazer A. N, Mathies R.A. Energy Transfer Cassettes for Facile Labeling of Sequencing and PGR Primers. //Anal. Biochem.-2001 V. 292. P. 188−197.

59. Ozkan M. Quantum Dots and Other Nanoparticles: What Can They Offer to Drug Discovery //Drug Discovery Today.—2004. V. 9. P. 1065−1071.

60. Goldman E.R., Medintz I.L., Mattoussi H. Luminescent Quantum Dots in Immunoassays. //Anal. Bioanal. Chem. -2006. V. 384. P. 560−563.

61. Zhang, P. Investigation of Novel Quantum Dots/Proteins/Cellulose Bioconjugate using NSOM and Fluorescence. HJ. Fluorescence.-2006. V. 1, — P. 349−353.

62. Slocik J.M., Moore J.T., Wright D.W. Monoclonal Antibody Recognition of Histidine-Rich Peptide Encapsulated Nanoclusters. //NanoLett.-2002. V. 2. P. 169 173.

63. Sandros M.G., Gao D., Benson D.E. A Modular, Nanoparticle-Based System for Reagentless Small Molecule Biosensing. HJ. Am. Chem. Soc-2005.-V. 127. P. 12 198−12 199.

64. Sandros M.G., Gao D., Gokdemir C., Benson D.E. General. High-Affinity Approach for the Synthesis of Fluorophore Appended Protein Nanoparticle Assemblies. //Chem. Comm. -2005.-V. 22. P. 2832−2834.

65. Sandros, M.G., Shete V., Benson D.E. Selective, Reversible, Reagentless Maltose Biosensing with Core-Shell Semiconducting Nanoparticles. //The Analyst- 2006.-V.131. P. 229−235.

66. Medintz I.L., Clapp A.R., Mattoussi H., Goldman E.R., Fisher B, Mauro J.M. Self-Assembled Nanoscale Biosensors Based on Quantum Dot FRET Donors //Nature Materials.- 2003. V. 2.-P. 630−638.

67. Ding S.Y., Jones M., Tucker M.P., Nedeljkovic J.M., Wall J., Simon M.N., Rumbles G., Himmel M.E. Quantum Dot Molecules Assembled with Genetically Engineered ProteinsIINanoLetters.- 2003.-V. 3. P. 1581−1585.

68. Pinaud F., King D., Moore H.P., Weiss S. Bioactivation and Cell Targeting of Semiconductor CdSe/ZnS Nanocrystals with Phytochelatin-Related Peptides HJ. Am. Chem. Soc.-2004. 126.-P. 6115- 6123.

69. Tsay J.M., Doose S., Weiss S. Rotational and Translational Diffusion of Peptide-Coated CdSe/CdS/ZnS Nanorods Studied by Fluorescence Correlation Spectroscopy II J. Am. Chem. Soc.-2006.-V. 128.-P. 1639−1647.

70. Tsay, J.M., Doose S., Pinaud F., Weiss S. Enhancing the Photoluminescence of Peptide-Coated Nanocrystals with Shell Composition and UV Irradiation. HJ. Phys. Chem. B.-2005. V. 109.-P. 1669−1674.

71. Ji X.J., Zheng J.Y., Xu J.M., Rastogi V.K., Cheng T.C., DeFrank J.J., Leblanc R.M. (CdSe)ZnS Quantum Dots and Organophosphorus Hydrolase Bioconjugate as Biosensors for Detection of Paraoxon. HJ. Phys. Chem. J5.-2005.-V.109.-P. 37 933 799.

72. Constantine C.A., Gattas-Asfura K.M., Mello S.V., Crespo G., Rastogi V., Cheng T.-C., DeFrank J.J., Leblanc R.M. Layer-by-Layer Biosensor Assembly Incorporating Functionalized Quantum Dots // Langmuir.-2003. V. 19.-P. 9863−9867.

73. Goldman E.R., Mattoussi H.M., Anderson G.P., Medintz I.L., Mauro J.M. Fluoroimmunoassays Using Antibody-Conjugated Quantum Dots //Methods Molecular Biology.-2005. V. 303.-P. 19−34.

74. Goldman E.R., Balighian E.D., Kuno M.K., Labrenz S., Tran P.T., Anderson G.P., Mauro J.M., Mattoussi H. Luminescent Quantum Dot-Adaptor Protein-Antibody Conjugates for Use in Fluoroimmunoassays HPhys. Stat. Sol. B.-2002.-V.229. P. 407−414.

75. Goldman E.R., Balighian E.D., Mattoussi H., Kuno M.K., Mauro J.M., Tran P.T., Anderson G.P. Avidin: A Natural Bridge for Quantum Dot-Antibody Conjugates HJ. Am. Chem. 5oc.-2002.-V. 124.-P. 6378−6382.

76. Li J., Zhao K., Hong X., Yuan H., Ma L., Li J.H., Bai Y.B., Li T.J. Prototype of Immunochromatographic Assay Strips Using Colloidal CdTe Nanocrystals as Biological Luminescent Label IIColloids and Surfaces B-Biointerfaces.-2005.-V. 40,-P. 179−182.

77. Jaiswal J.K., Mattoussi H., Simon S.M. Use of Quantum Dots for Live Cell Imaging //Nature Methods.- 2004.-V. 1. P. 73−78.

78. Ornberg R.L., Harper T.F., Hongjian L. Western Blot Analysis with Quantum Dot Fluorescence Technology: a Sensitive and Quantitative Method for Multiplexed Proteomics //Nature Methods.-2005. V. 2. -P. 79−81.

79. Makrides S.C., Gasbarro C., Bello J.M. Bioconjugation of Quantum Dot Luminescent Probes for Western Blot Analysis HBiotechniques.- 2005. V.39. P. 501−506.

80. Bakalova R., Zhelev Z., Ohba H., Baba Y. Quantum Dot-Based Western Blot Technology for Ultrasensitive Detection of Tracer Proteins HJ. Am. Chem. Soc. -2005.-V. 127. -P. 3928−9329.

81. Zhelev Z" Bakalova R., Ohba H., Jose R., Imai Y., Baba Y. Uncoated, Broad Fluorescent, and Size-Homogeneous CdSe Quantum Dots for Bioanalyses HAnal. Chem. -2006.-V. 78. P. 321−330.

82. Goldman E.R., Clapp A.R., Anderson G.P., Uyeda H.T., Mauro J.M., Medintz LL., Mattoussi H. Multiplexed Toxin Analysis Using Four Colors of Quantum Dot FluororeagentsIIAnal. Chem-2004.-V.76.-P. 684−688.

83. Heyduk T. Measuring protein conformational changes by FRET/ LRET l/Curr Opin Biotechnol.- 2002.-V.13. P. 292−6.

84. Day R.N., Periasamy A., Schaufele F. Fluorescence resonance energy transfer microscopy of localized protein interactions in the living cell nucleus /I Methods.-2001.-V. 25.-P. 4−18.

85. Riegler J., Nann T. Application of luminescent nanocrystals as labels for biological molecules IIAnal Bioanal Chem.- 2004. V.379. P. 913−9.

86. Hohng S., Ha T. Single-molecule quantum-dot fluorescence resonance energy transfer /IChemphyschem.-2005.-Y. 6. P. 956−60.

87. Pathak S., Choi S.K., Arnheim N., Thompson M.E. Hydroxylated quantum dots as luminescent probes for in situ hybridization ///. Am. Chem.Soc.- 2001.-V.123.-P. 4103−4.

88. Gerion D., Parak W.J., Williams S.C., Zanchet D., Micheel C.M., Alivisatos A.P. Sorting fluorescent nanocrystals with DNA IIJ. Am. Chem. Soc- 2002. V.124.-P.7070−4.

89. Xiao Y., Barker P.E. Semiconductor nanocrystal probes for human metaphase chromosomes // Nucleic Acids Res 2004.-V. 32.

90. Mansson A., Sundberg M., Balaz M., Bunk R., Nicholls I.A., Omling P., et al. In vitro sliding of actin filaments labelled with single quantum dots UBiochem. Biophys. Res. Commun.- 2004.-V. 314.-P. 529−34.

91. Wu X.Y., Liu H.J., Liu J.Q., Haley K.N., Treadway J.A., Larson J.P., et al. Immunofluorescent labeling of cancer marker Her2 and other cellular targets with semiconductor quantum dots II Nat. Biotechnol. 2003.-V. 21.-P.41−6.

92. Hanaki K., Momo A., Oku T., Komoto A., Maenosono S., Yamaguchi Y. et al. Semiconductor quantum dot/albumin complex is a long-life and highly photostable endosome marker // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 2003.-V. 302.-P. 496−501.

93. Hoshino A., Fujioka K., Oku T., Nakamura S., Suga M., Yamaguchi Y. et al. Quantum dots targeted to the assigned organelle in living cell // Microbiol. Immunol.-2004. V.48. P. 985−94.

94. Dahan M., Levi S., Luccardini C., Rostaing P., Riveau B., Triller A. Diffusion dynamics of glycine receptors revealed by single-quantum dot tracking HScience-2003. V.302.-P. 442−5.

95. Howarth M, Takao K, Hayashi Y, Ting AY. Targeting quantum dots to surface proteins in living cells with biotin ligase // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2005.-V. 102.-P. 7583−7588.

96. Raj an SS, Vu TQ. Quantum dots monitor TrkA receptor dynamics in the interior of neural PC12 cells IINano. Lett.- 2006.-V.6.-P. 2049 2059.

97. Sukhanova A., Venteo L., Cohen J.H.M., Pluot M., Nabiev I. Nano-biocaptures for research and diagnostics in inflammation diseases and cancer I? Ann. Acad. Pharm. Franc.-2006.-V. 64.-P. 125.

98. Wang L.-Y., Kan X.-W., Zhang M.-C., Zhu C.-Q., Wang L. Fluorescence for the determination of protein with fiinctionalized nano-ZnS// Analyst.-2002. V. 127.-P. 1531 1534.

99. Goldman E.R., Medintz I.L., Whitley J.L. Avidin: A Natural Bridge for Quantum Dot-Antibody Conjugates// J. Amer. Chem.Soc.-2005.-N. 127. P. 6744 -6751.

100. Riu J., Maroto A., Rius F.X. Nanosensors in environmental analysisIITalanta.-2006.-V. 69. P. 288−301.

101. Goldman E.R., Clapp A.R., Anderson G.P., Yueda H.T., MauroJ.M., Medintz I.L., Mattoussi H. IIAn Multiplexed Toxin Analysis Using Four Colors of Quantum Dot Fluor or eagentsal. Chem.-2004.-V. 76.-P. 684 688.

102. Willard D.M., Van Orden A. Quantum dots: Resonant energy-transfer sensor IINat. Mater.-2003.-V. 2, P. 575 576.

103. Pohl D. W., Denk W. and Lanz M. Optical stethoscopy: Image recording with resolution lambda/20 //Appl. Phys. Lett.-1984. V.44. P. 651 653.

104. Lewis A, Isaacson M. Harootunian A and Murray A. Development of a 500 A spatial resolution light microscope. I. Light is efficiently transmitted through A/16 diameter apertures HUltramicroscopy- 1984. V.13. P. 227.

105. Betzig E., Trautman J.K., Harris T.D., Weiner J.S., Kostelak R.L., Breaking the Diffraction Barrier: Optical Microscopy on a Nanometer Scale I I Science-1991. V. 251.-P. 1468- 1470.

106. Specht M., Pedarning J.D., Heckl W.M., Hansch T.W., Scanning plasmon near-field microscope II Phys.Rev.Lett .-1992.-V. 68.-P. 476 479.

107. Inouye Y., Kavata S., Near-field scanning optical microscope with a metallic probe tip // Opt.Lett.993.-V. 19. P. 159 161.

108. Hollander R.B.G., Hilst N.F., Kooyman R.P.H., Near-field plasmon and force microscopy HUltramicroscopy.-1995. V. 57. P. 263 269.

109. Bachelot R., Gleyzes P., Boccara A.C., Near-field optical microscopy by local perturbation of differaction spot, Microscopy Microanalysis Microstructures, 1994, 5 (4−6), p. 389 397.

110. Zenhausern F., O’Boyle M.P., Wickramasinghe H.K., Apertureless near-field optical microscop II Appl.Phys.Lett.- 1994.-V. 65.-P. 1623 1625.

111. Гигантское комбинационное рассеяние. Под ред. Р. Ченга, Т. Фуртака.-1984. М.- Мир.

112. Gerton J.M., Wade L.A., Lessard G.A., Ma Z., Quake S.R., Tip-Enhanced Fluorescence Microscopy ar 10 Nanometer Resolution // Physical Review Letters.-2004.-V. 9. P. 18 001.

113. Yang T.J., Lessad G.A., Quake S.R., An apertureless near-field microscope for fluorescence imagin I/Applied Physics letters- 2000.-V. 76. P. 378 380.

114. Anderson N., Hartschuh A., Novotny L., Near-field Raman microscopy //Materials Today.-2005.-?. 50 54.

115. Novotny L. The history of near-field optics // Progress in optics.- 2007.-V. 50.-P. 137- 184.

116. Sekatskii S.K., Letkhov V.S., Single fluorescence centers on the tips of crystal needles: First observation and prospects for application in scanning one-atom fluorescence microscopy IIAppl. Phys.-996.-~4. 63. P. 525 530.

117. Секацкий С. К., Летохов B.C., Сканирующая оптическая микроскопия нанометрового разрешения с резонансным возбуждением флуоресценции образцов от одноатомного возбуждающего центра //Письма в ЖЭТФ,-1996.-636. С. 311 -315.

118. Michaelis J., Hettich С., Mlynek J., Sandoghdar V., Optical microscopy using a single-molecule light source H Nature.-2000, — V. 405. P. 325 328.

119. Vickery S.A., Dunn R. C., Scanning near-field fluorescence resonance energy transfer microscopy //Biophysical Journal -1999. V. 76.-P.1812 1818.

120. Vickery S.A., Dunn R. C., Combining AFM and FRET for high resolution fluorescence microscopy HJournal of Microscopy.-2000. -V. 202. P.408 — 412.

121. Aigouy L., De Wilde Y., Mortier M., Gierak J., Bourhis E., Fabrication and Characterization of Fluorescent Rare-Earth-Doped Glass-Particle-Based Tips for Near-Field Optical Imaging Applications HApplied Optics.-2007. V. 43. P. 3829 -3837.

122. N. Chevalier, M. J. Nasse, J .C. Woehl, P. Reiss, J. Bleuse, F. Chandezon, S. Huant, CdSe-single-nanoparticle based active tips for near-field optical microscopy HNanotechnology.-2005.-V. 16. P. 613−618.

123. United States Patent, 4,636,479, MartinFrancis J., KungViola T. Enhanced agglutination method and kit. January 13,1987.

124. L. Spernarth, S. Magdassi. Preparation of ethyl cellulose nanoparticles from nano-emulsion obtained by inversion at constant temperature //Micro and Nano Letters.-2№ 1 2. V.4. P. 90 95.

125. Konigsberg, W. Reduction of disulfide bonds in proteins with miioXbreitoV/Methods Enzymol.- 1972. V.25. P. 185.

126. В. И. Елисеева, Т. Р. Асламазова. Эмульсионная полимеризация в отсутствие эмульгатора и латексы на ее основе //Успехи химии.- 1991.-Т.60. № 4.-С. 398 -429.

127. Kondo A., Kawano T., Higashitani К. Immunological agglutination kinetics of latex particles with covalently immobilized antigens HJ. of Fermentation & Bioengin.- 1992.-V. 73.-N 6. P. 435 439.

128. Okubo M., Yamamoto Y., Uno M. Immunoassay tests // J. ColloidPolym. Sci-1987.-V.265.-P. 1061.

129. Schmelz, O., Mews, A., Basche, Th., Herrmann, A., Mullen, K. Supramolecular complexes from CdSe nanocrystals and organic fluorophors. Langmuir, 2001, 17, 2861 -2865.

130. Leatherdale, C.A., Woo W.-K., Mikulec F.V., Bawendi M.G. On the absorption cross section of CdSe nanocrystal quantum dots. J. Phys. Chem. B, 2002, 106(31), 7619−7622.

131. Yu, W. W., Qu, L., Guo, W., Peng, X. Experimental determination of the extinction coefficient of CdTe, CdSe, and CdS nanocrystals. Chem. Mater., 2003, 15, 2854 — 2860.

132. Nazzal, A.Y., Wang, X., Qu, L., Yu, W., Wang, Y., Peng, X., Xiao, M. Environmental effects on photoluminescence of highly luminescent CdSe and CdSe/ZnS core/shell nanocrystals in polymer thin films. J. Phys. Chem. B, 2004, 108(18), 5507−5515.f).

133. Gattas-Asfura, K.M., Constantine, C.A., Lynn, M.J., Thimann, D.A., Ji, X., Leblanc, M.L. Characterization and 2D self-assembly of CdSe quantum dots at the air-water interface. J. Am. Chem. Soc.- 2005; 127(42), 14 640 — 14 646.

134. Рейхсфельд B.O., Еркова JI.H., Рубан B.JI. Лабораторный практикум по синтетическим каучукам.- М.: Химия.-1976, — С. 226.

135. Б. Э. Геллер, А. А. Геллер, В. Г. Чиртулов //Практическое руководство по физикохимии волокнообразующих полимеров. М.- Химия, — 1996, — С. 243.

136. J. Hearn, М.С. Wilkinson, A.R. Goodall Polymer latices as model colloids // Colloid Interface 5a.-1981;V.14. P.173.

137. Margel S., Rembaum A., Synthesis and characterization of poly (glutaraldehyde), a potential reagent for protein immobilization and cell separation // Macromol. Chem. Suppl.-9%0.-N 13.-p. 19 24.

138. Kumakura V., Kaetsu I. Polymeric microspheres by reaction copolymerization of acrolein and various monomers at low temperature I/Coll. Polym. SW.-1984.-V. 262.-P. 450 454.