Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Закономерности проявления триацилглицероллипазной активности у холерных вибрионов

Диссертация: Закономерности проявления триацилглицероллипазной активности у холерных вибрионов
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на 13 научных конференциях: Проблемная комиссия «Холера и патогенные для человека вибрионы», (Ростов-на-Дону, 2004;2008гг.) — Всероссийская научно-практическая конференция «Медицинская микробиология — XXI век», (Сара-, тов, 2004 г.) — IV Межвузовская международная конференция «Обмен веществ при адаптации и повреждении», (Ростов-на-Дону… Читать ещё >

Закономерности проявления триацилглицероллипазной активности у холерных вибрионов (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • ВВЕДЕНИЕ. Актуальность проблемы
  • ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Липазы. Классификация, распространение липаз в природе
    • 1. 2. Механизм действия, субстратная специфичность и некоторые физико-химические свойства липаз микроорганизмов
    • 1. 3. Методические подходы изучения липазной активности микроорганизмов
    • 1. 4. Гемолитическая и липазная активность холерных вибрионов
  • СОБСТЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
  • ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
    • 2. 1. Микроорганизмы, используемые в работе
    • 2. 2. Коммерческие препараты, химические реактивы
    • 2. 3. Питательные среды
    • 2. 4. Сыворотки
    • 2. 5. Методы
      • 2. 5. 1. Бактериологические методы
        • 2. 5. 1. 1. Метод определения гемолитической активности
        • 2. 5. 1. 2. Метод выявления триациглицероллипазной и гидролазной активностей
      • 2. 5. 2. Серологические методы
        • 2. 5. 2. 1. Реакция агглютинации
        • 2. 5. 2. 2. Реакция агломерации объёмная (РАО)
    • 2. 6. Получение иммунных сывороток к липазе Pseudomonas spp., их характеристика
      • 2. 6. 1. Количественное определение белка в сыворотках и иммуноглобулинах.50,
      • 2. 6. 2. Диффузная иммуно-преципитация по Оухтерлони
      • 2. 6. 3. Метод постановки иммуноблотинга
      • 2. 6. 4. Метод выделения иммуноглобулинов из сывороток
      • 2. 6. 5. Конструирование иммуноглобулиновых диагностических антилипазных препаратов
    • 2. 7. Статистическая обработка результатов
  • ГЛАВА 3. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ИММУННЫХ СЫВОРОТОК К ЛИПАЗЕ Pseudomonas spp., ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИМЕРНОГО АНТИЛИПАЗНОГО ДИАГНОСТИКУМА ПРИ ИЗУЧЕНИИ ПРОДУКЦИИ ЛИПАЗЫ У ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ В РАО
    • 3. 1. Получение иммунных сывороток к липазе Pseudomonas spp., схемы иммунизации животных
    • 3. 2. Характеристика сывороток по белку
    • 3. 3. Изучение специфичности сывороток в реакции преципитации
    • 3. 4. Изучение чувствительности сывороток в иммуноблотинге
    • 3. 5. Изучение чувствительности диагностических препаратов, сконструированных на основе иммуноглобулинов к липазе Pseudomonas spp
    • 3. 6. Лиофилизация диагностических препаратов
  • ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ СПОСОБНОСТИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ РАЗНЫХ БИОВАРОВ И СЕРОГРУПП ПРОДУЦИРОВАТЬ ЛИПАЗУ, ВЫЯВЛЯЕМУЮ В РЕАКЦИИ АГЛОМЕРАЦИИ (РАО)
    • 4. 1. Выявление продукции липазы у штаммов холерных вибрионов
    • 01. серогруппы биовара эльтор
      • 4. 2. Изучение способности к продукции липазы у штаммов холерных вибрионов классического биова ра.7(
      • 4. 3. Выявление продукции липазы у штаммов холерных вибрионов 0139 серогруппы различного происхождения
      • 4. 4. Выявление липазы у штаммов холерных вибрионов не Ol/не 0139 серогрупп с различными генетическими характеристиками
  • ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕТОДА РАО С АНТИЛИПАЗНЫМ ДИАГНОСТИКУМОМ НА ЭТАПЕ ВЫДЕЛЕНИЯ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ
    • 5. 1. Зависимость продукции липазы холерными вибрионами от условий культивирования штаммов
    • 5. 2. Определение специфичности метода РАО с использованием имму-ноглобулинового антилипазного диагностнкума
      • 5. 2. 1. Выявление липазы, гомологичной липазе Pseudomonas spp. и холерных вибрионов эльтор, у представителей рода Vibrio
      • 5. 2. 2. Выявление липазы, гомологичной липазе Pseudomonas spp. и холерных вибрионов эльтор, у представителей семейства Enterobacteriaceae
    • 5. 3. Изучение возможности применения метода РАО с полимерным им-муноглобулиновым антилипазным диагностикумом в схеме идентификации холерных вибрионов
  • ГЛАВА 6. ВЫЯВЛЕНИЕ ЛИПАЗНОЙ АКТИВНОСТИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИМ МЕТОДОМ НА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ С ДОБАВЛЕНИЕМ РАЗЛИЧНЫХ ЖИРОВ И ГЛИЦЕНРИНА
    • 6. 1. Изучение липазной активности холерных вибрионов 01 серогруппы бновара эльтор бактериологическим методом
    • 6. 2. Изучение липазной активности холерных внбрионов Ol серогруппы классического биовара на питательных средах
    • 6. 3. Изучение липазной активности холерных вибрионов 0139 серогруппы, выделенных из различных источников, бактериологическим методом
    • 6. 4. Изучение гидролазной активности холерных вибрионов Ol и 0139 серогрупп по отношению к глицерину
    • 6. 5. Изучение липазной активности холерных вибрионов не Ol/не серогрупп с различными генетическими характеристиками бактериологическим методом

Актуальность проблемы.

В соответствии с основными критериями, определяющими вероятность использования микроорганизмов в качестве биологического оружия, возбудитель холеры отнесен к категории В — высокоприоритетных патогенов (Онищенко Г. Г., 2000; Кутырев В. В., 2007; Ломов Ю. М., 2007, 2008). В этой связи продолжает оставаться актуальным вопрос о факторах, определяющих патогенность и эпидзначимость холерных вибрионов, методах их выявления, разработка которых требует углублённого и всестороннего изучения биологии возбудителя холеры. Попадая в макроорганизм, патоген сталкивается с защитными структурами мембран клеток в виде белков, углеводов и липи-дов. И в то время как хорошо изучены белковый и углеводный обмены возбудителя холеры, механизмы преодоления липидных барьеров продолжают оставаться неизученными. В настоящее время способность продуцировать липазы установлена и изучена у целого ряда патогенных и непатогенных микроорганизмов. Однако существующие данные по изучению микробных липаз часто являются отрывочными и несопоставимыми, т.к. получены на различных субстратах, отличающихся разной степенью дисперсности (Бро-керхофф X. с соавт., 1978). В нашей работе мы обратились к вопросу изучения липазной активности холерных вибрионов, учитывая то обстоятельство, что присутствующие в клетках возбудителя холеры ферменты с липолитиче-ской активностью рассматриваются в качестве возможных факторов пато-генности (Fiore Е., 1997; Ogierman М.А., 1997). Установлено, что ген, ответственный за продукцию липазы, характерен для всех микроорганизмов, относящихся к Vibrio cholerae (Fiore Е., 1997; Harris J.R., 2002). Также была установлена (Casanova Т.В., 1995) высокая степень гомологии липазы Pseudomo-nas spp. с геном липазы холерных вибрионов, обозначенным (ЫуС или НрА), на основании чего сотрудниками РостНИПЧИ (Телесманич Н.Р.с соавт, 2006) были разработаны методы её выявления у холерных вибрионов: серологичеекая детекция липазы с помощью антилипазного полимерного диагностику-ма, сконструированного на основе иммуноглобулинов к липазе Pseudomonas spp. фирмы «Sigma», и бактериологическое выявление липазной активности с применением жиров в питательной среде. Были определены корреляционные связи липазной и гемолитической активностей холерных вибрионов эльтор, выделенных из объектов окружающей среды, предложена возможность дифференциации токсигенных и атоксигенных вариантов. Однако результатов проведённых исследований недостаточно для общего понимания закономерностей проявления липазной активности, так как объектами в экспериментах служили холерные вибрионы только биоварианта эльтор и штаммы, выделенные исключительно из объектов окружающей среды. При этом липазная активность вибрионов классического биовара, 0139 серогруппы, а также холерных вибрионов не 01/не 0139 серогрупп с различными генетическими характеристиками формулы эпидзначимости, выделенных из различных источников, остаётся не изученной, в то время как разнообразие генотипиче-ских форм, свойственное возбудителю холеры, может определять неодинаковое фенотипическое проявление липазной активности у разных вариантов холерных вибрионов, что обусловливает актуальность нашего исследования.

Цель работы.

Изучение закономерностей проявления триацилглицероллипазной активности холерных вибрионов 01 серогруппы биоваров эльтор и классического, вибрионов 0139 и не 01/не 0139 серогрупп.

Задачи исследования.

1. Приготовление новых серий антилипазного диагностикума на основе иммунных сывороток, полученных в результате применения различных схем иммунизации животных, позволяющих повысить чувствительность диагностического препарата.

2. Изучение способности холерных вибрионов 01 серогруппы классического биовара и эльтор, вибрионов 0139 и не 01/не 0139 серологических групп продуцировать липазу, гомологичную липазе Pseudomonas spp., выявляемую с помощью антилипазного диагностикума в РАО.

3. Выявление липазной активности холерных вибрионов различных био-варов и серологических групп на питательных средах с добавлением различных жиров.

4. Изучение закономерностей проявления гидролазной активности холерных вибрионов различных серологических групп по отношению к глицерину, как составляющей триацилглицероллипазной активности.

5. Конструирование питательной среды с использованием в качестве стандартного субстрата глицерина для гидролазной активности, как составляющей глицероллипазной активности холерных вибрионов.

6. Изучение возможности стандартизации бактериологического метода дифференциации токсигенных и атоксигенных холерных вибрионов на основе гидролазной активности по отношению к глицерину.

Новизна исследований.

Впервые с помощью бактериологического метода выявлена липазная активность вибрионов 0139 серогруппы, в то время как в серологическом методе РАО с помощью антилипазного днагностикума показано, что продуцируемая этим вариантом возбудителя холеры липаза серологически не гомологична липазе Pseudomonas spp. и вибрионов эльтор. Впервые показано, что способность к продукции липазы холерных вибрионов эльтор (токсигенных и атоксигенных) через 24 часа является дифференциальным признаком между вибрионами 01 классического и эльтор биоваров.

Впервые выявлена зависимость проявления липазной активности от ¦ состава питательных сред, содержащих определённые добавки. Показано, что добавление глицерина 3% в бульон Мартена способствует увеличению продукции липазы холерными вибрионами, что позволяет достичь наиболее точных результатов в изучении способности холерных вибрионов к продукции липазы, выявляемой серологическим методом РАО. Впервые определено, что продукция липазы гемолитическими вибрионами эльтор более активно проявляется при выращивании штаммов в триптоновой среде без ионов железа или с минимальной концентрацией FeCb, что подтверждает корреляционные связи липазной и гемолитической активностей холерных вибрионов эльтор. Впервые для идентификации холерных вибрионов эльтор предложен полимерный диагностический препарат, позволяющий выявлять гемолитические атоксигенные штаммы вибрионов эльтор на этапе скрининга подозрительных колоний.

Впервые липазная активность холерных вибрионов разных биоваров и серогрупп была изучена на питательных средах, содержащих широкий спектр жиров различного происхождения. Показано разнообразие проявления ацилгидролазной активности у различных групп холерных вибрионов различной эпидемической значимости в ответ на находящийся в питательной среде субстрат. Впервые изучена гидролазная активность холерных вибрионов по отношению к глицерину. Показана возможность дифференциации гемолитических и негемолитических штаммов холерных вибрионов эльтор и 0139 серогруппы на основе проявления ими гидролазной активности. Впервые предложен стандартный субстрат — глицерин — для конструирования дифференциальной среды, предназначенной для выявления гемолитических вариантов холерных вибрионов 01 и 0139 серогрупп на основе проявления ими гидролазной активности. Впервые при помощи бактериологического и серологического методов показана корреляционная связь триацилглицерол-липазной, гидролазной (в отношении глицерина) и гемолитической активностей холерных вибрионов эльтор, 0139 серогруппы и вибрионов различных не Ol/не 0139 серогрупп.

Теоретическая и практическая значимость.

Изучение триацилглицероллипазной активности расширило наши познания в сфере липидного обмена и биологии возбудителя холеры. Были выявлены отличия по липолитической активности между различными вариантами холерных вибрионов, выделенными из различных источников, на основании которых возможно дифференцировать атоксигенные гемолитические варианты вибрионов от токсигенных негемолитических.

Установлено, что липазы вибрионов эльтор, классического биовара и 0139 серогруппы являются серологически различными. С помощью антили-пазного полимерного иммуноглобулинового диагностикума, сконструированного с применением биотехнологических подходов на основе чужеродного, но высокогомологичного антигена липазы Pseudomonas spp. (степень гомологии 93,7%), показано, что последний не образует в РАО иммунобиологического комплекса антиген-антитело с липазой вибрионов классического биовара и 0139 серогруппы, что свидетельствует о возможной различной их аминокислотной последовательности. При этом липазная активность холерных вибрионов классического биовара и 0139 серогруппы проявляется при культивировании на средах с добавлением жировых субстратов и глицерина.

Установлено, что гемолитичные (атоксигенные) холерные вибрионы эльтор, выделенные от человека, продуцируют липазу через 4 часа культивирования в мясопептонном бульоне, в то время как негемолитичные не проявляют липазной активности через данный промежуток времени, что даёт возможность дифференцировать штаммы эльтор по продукции липазы в РАО на гемолитичные и негемолитичные, независимо от источника выделения (человек или ООС). Показано, что гемолитичные (атоксигенные) и негемолитичные (токсигенные) штаммы холерных вибрионов эльтор, независимо от источника выделения, способны продуцировать липазу через 24 часа культивирования в мясопептонном бульоне, выявляемую в РАО с применением ан-тилипазного Pseudomonas spp. диагностикума. Определены добавки — глицерин и гидролизат казеина — в жидкие питательные среды для культивирования холерных вибрионов с целью выявления липазы в РАО с помощью анти-лииазного иммуноглобулинового Pseudomonas spp. диагностикума, которые позволяют повысить чувствительность серологического метода при выявлении гемолитических штаммов вибрионов эльтор. Выявлены корреляционные изменения гемолитической активности и продукции липазы холерных вибрионов при культивировании их в средах с различным содержанием ионов железа. Показана возможность использования метода РАО с применением антилипазного диагностикума в схеме идентификации холерных вибрионов на этапе скрининга подозрительных на холеру колоний под контролем агглютинации с 01-холерной сывороткой.

Показана возможность выявления гидролазной активности у гемолитических штаммов холерных вибрионов при культивировании на плотной питательной среде с добавлением глицерина в качестве субстрата. Показана возможность дифференциальных свойств гидролазной активности холерных вибрионов, проявляющейся на среде с добавлением глицерина. Предложено стандартизировать бактериологический метод дифференциации токсигенных и атоксигенных холерных вибрионов 01 и 0139 серогрупп на основе различной способности гемолитических и негемолитических штаммов к гидролизу глицерина, являющегося стандартным субстратом в сравнении с жирами.

Установлено, что экспрессия лпполитических свойств атоксигенных гемолитических холерных вибрионов эльтор более выражена pi обнаруживается в более короткие сроки культивирования в жидких и на плотных питательных средах, чем у токсигенных негемолитических вариантов, что имеет важное диагностическое и дифференциальное значение.

Усовершенствована схема получения антилипазной сыворотки к липазе Pseudomonas spp. с целью дальнейшего конструирования полимерного диагностического иммуноглобулинового препарата для выявления гемолитических штаммов холерных вибрионов в РАО. Разработан режим лиофилизации антилипазного диагностикума, обеспечивающий стабильность препарата при хранении без снижения его активности в течение двух лет.

Показаны корреляционные связи ацилглгидролазной и гемолитической активностей холерных вибрионов, выявленные с помощью комплексного методического подхода, включающего серологический и бактериологический методы, которые открывают перспективы дальнейшего совершенствования дифференциальной диагностики. Данные методы, предназначенные для обнаружения и изучения триацилглицероллипазной активности холерных вибрионов, можно применять в лабораторной практике при проведении исследований с различными вариантами возбудителя холеры, с целью более глубокого изучения биохимических особенностей вибрионов, а также в системе эпи-днадзора за холерой.

Метод РАО с применением антилипазного диагностикума включён в методический документ «Серологические методы в диагностике холеры» (дополнение к МУ 4.2.2218−07 «Лабораторная диагностика холеры»), утвержденные в 2008 г. Главным санитарным врачом РФ Г. Г. Онищенко. Получен патент на изобретение «Способ выявления атоксигенных гемолитичных штаммов холерных вибрионов» (№ 2 261 444, от 27 сентября 2005 г.). Оформлена и утверждена директором института «Инструкция по изготовлению и контролю диагностикума антилипазного иммуноглобулинового полимерного сухого для выявления в РАО гемолитичных штаммов холерных вибрионов» (протокол № 1 от 13.01.05). Депонирован в ГКПВ «Микроб» штамм холерных вибрионов 01 V. cholerae КМ 254 в качестве тест-штамма, который предложено использовать как положительный контроль в реакции агломерации объёмной. Получена справка № 2 008 117 194 о приоритете в оформление патента «Способ дифференциации атоксигенных штаммов холерных вибрионов от токсигенных на основе гидролазной активности».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Липаза холерных вибрионов биовара эльтор, выявляемая в реакции агломерации с помощью антилипазного диагностикума, серологически отличается от липазы вибрионов 0139 серогруппы. Отсутствие у классических вибрионов продукции липазы, гомологичной липазе Psendomonas spp. и вибрионов эльтор, определяет возможность дифференциации биоваров.

2. Холерные вибрионы способны проявлять липазную активность по отношению к широкому спектру жиров различного происхождения на питательных средах. Однако проявления триацилгидролазной активности у холерных вибрионов разных биоваров, серологических групп и токсигенности различаются, что обусловливает разные критерии её оценки у разных групп холерных вибрионов.

3. Гемолитические холерные вибрионы способны проявлять гидролазную активность на питательной среде с добавлением глицерина, что обусловливает его использование в качестве стандартного субстрата для дифференциации токсигенных и атоксигенных штаммов холерных вибрионов бактериологическим методом.

4. Гемолитические холерные вибрионы не Ol/не 0139 различных серог-рупп способны продуцировать липазу, гомологичную липазе Pseudomonas spp. и вибрионов эльтор, выявляемую серологическим методом РАО, а также проявлять триацилгидролазную активность при культивировании штаммов на питательной среде с жирами и глицерином.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на 13 научных конференциях: Проблемная комиссия «Холера и патогенные для человека вибрионы», (Ростов-на-Дону, 2004;2008гг.) — Всероссийская научно-практическая конференция «Медицинская микробиология — XXI век», (Сара-, тов, 2004 г.) — IV Межвузовская международная конференция «Обмен веществ при адаптации и повреждении», (Ростов-на-Дону, 2005 г.) — VII Межгосударственная научно-практическая конференция государств-участников СНГ «Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении и санитарная охрана территорий государств-участников СНГ», (Оболенск, 2006 г.) — Научно-практическая конференция «Современные аспекты эпидемиологического надзора за особо опасными инфекционными заболеваниями на юге России», (Ставрополь, 2007 г.) — IX съезд Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, (Москва, 2007 г.) — Международная конференция «Vibrio 2007», (Париж, 2007) — VII Межвузовская международная конференция с международ, участ. «Обмен веществ при адаптации и повреждении», (Ростов-на-Дону, 2008 г.) — IX Межгосударственная научно-практическая конференция государств-участников СНГ «Современные технологии в реализации глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями на территории государств-участников СНГ», (Волгоград, 2008 г.). Получены акты внедрения в лабораторную практику разработанного антилипазного диагностического препарата от ФГУЗ «ЦГиЭ» Свердловской обл.- ФГУЗ Иркутский ПЧИ Сибири и Дальнего Востока РоспотребнадзораФГУЗ ПЧЦ Роспотребнадзора. План диссертационной работы одобрен Ученым советом Ростовского НИПЧИ и утвержден директором института 27.06.07 (протокол № 3). Исследования выполнены в рамках плановых научных тем: № 0120.0 507 857 «Триацилглицероллипазная активность холерных вибрионов 01" — № 01. 2. 007 7 281 «Липазная и адгезивная активности холерных вибрионов не 01 серогруппы».

Публикации результатов исследований. По теме диссертационного исследования опубликована 21 работа, в том числе две из них в периодических изданиях из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования и науки России и рекомендованных для публикации основных научных результатов диссертации на соискание искомой ученой степени, получен один патент на изобретение и «Инструкция по изготовлению и контролю».

План диссертационной работы утверждён на заседании Ученого совета ФГУЗ РостНИПЧИ Роспотребнадзора 27.06.07 (протокол № 3). Исследования выполнены в рамках плановых научных тем: № 0120.0 507 857 «Триа-цилглицероллипазная активность холерных вибрионов 01" — № 01. 2. 007 7 281 «Липазная и адгезивная активности холерных вибрионов не 01 серогруппы».

Структура работы. Диссертация изложена на 197 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4-х глав результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 156 работ отечественных и 144 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 21 рисунком.

ВЫВОДЫ.

1. Холерные вибрионы эльтор гемолитичные (атоксигенные) и негемолитичные (токсигенные), независимо от источника выделения, продуцируют липазу, выявляемую в РАО с применением антилипазного Pseudomonas spp. диагностикума через 24 часа культивирования, продукция которой отсутствует у вибрионов классического биовара, на основании чего возможно дифференцировать вибрионы эльтор от вибрионов классического биовара по продукции липазы через 24 часа культивирования.

2. Холерные вибрионы классического биовара не проявляют липазную активность на питательных средах с добавлением жиров, что согласуется с отрицательными результатами в реакции объёмной агломерации.

3. Выявление липазной активности холерных вибрионов различных серогрупп на питательных средах, содержащих добавки жиров, позволило определить разные критерии оценки липазной активности у возбудителей холеры 01 и0139: 1) для атоксигенных гемолитических (ctx" Hly+) вибрионов 01 эльтор и 0139 серогруппы характерен рост с активным гидролизом субстрата (образование плотных колоний) — 2) для негемолитических токсигенных (ctx+Hly") вариантов эльтор характерен рост на средах с субстратами без активного гидролиза жиров с образованием на агаре голубых плёнок- 3) для вибрионов классического биовара и токсигенных (ctx+Hly-) вариантов 0139 серогруппы характерно подавление роста (возможное наличие единичных колоний).

4. Применение глицерина в качестве субстрата в среде культивирования позволило стандартизировать бактериологический метод для дифференциации атоксигенных гемолитических и токсигенных негемолитических вариантов вибрионов эльтор и 0139 серогруппы по проявлению гидролазной активности в отношении глицерина, что является значимым в диагностическом отношении.

5. Добавление глицерина (3%) в жидкую среду культивирования для выявления липазы в реакции агломерации стимулирует продукцию липазы гемолитическими вариантами холерных вибрионов эльтор и не влияет на продукцию липазы у токсигенных вариантов, что позволяет повысить чувствительность РАО при выявлении гемолитических штаммов.

6. Продукция липазы гемолитическими вариантами холерных вибрионов, выявляемая в РАО, более активна при культивировании штаммов в агаре Мартена с добавлением казеина (5%), а также в триптоновой среде с минимальной концентрацией ионов железа. Повышение уровня продукции липазы в среде с низким содержанием ионов железа подтверждает корреляционные связи липазной и гемолитической активностей холерных вибрионов эльтор.

7. Холерные вибрионы не Ol/не 0139 различных серогрупп, независимо от наличия генов патогенности, способны продуцировать липазу, гомологичную липазе Pseudomonas spp. и V. cholerae <or, выявляемую серологическим методом РАО, а гемолитические варианты способны проявлять липазную и гидролазную активности, соответственно при культивировании штаммов на питательной среде с жирами и глицерином.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Как известно, бактерии рода Vibrio обладают широким набором ферментативных систем, обеспечивающих им выживаемость в объектах окружающей среды и их патогенность для макроорганизма. Липолитические ферменты у холерных вибрионов изучены мало, в то время как данные по ферментам белкового и углеводного обменов представлены в большом количестве публикаций. Для оценки липазной активности холерных вибрионов, условий и закономерностей её продукции необходимо было оптимизировать методические приёмы, направленные на её выявление. Одним из этапов исследования являлось конструирование и использование для этих целей им-муноглобулинового диагностикума. Ранее не существовало препаратов для серологического выявления липазы у микроорганизмов, в том числе и холерных вибрионов. С целью конструирования иммуноглобулинового полимерного диагностического препарата для выявления продукции липазы холерными вибрионами сотрудниками Ростовского-на-Дону научно-исследовательского противочумного института (Телесманич Н.Р. с соавт., 2006) была предпринята попытка использовать коммерческий препарат липазы Pseudomonas spp. фирмы «Sigma». Оригинальность исследования заключалась в использовании препарата липазы Pseudomonas spp. — высокогомологичного (93,7% гомологии), но чужеродного антигена для холерных вибрионов. Данный методический подход был обусловлен сложностью получения высокоочищенных препаратов ферментов и токсинов холерных вибрионов в лабораторных условиях. Кроме того следовые количества липополисахарида и других примесей, присутствующие в препаратах, полученных в лабораторных условиях, существенно влияют на специфичность и активность полученных на их основе диангостикумов. Проведённые эксперименты открыли нам возможности для исследования ранее малоизученного фермента холерных вибрионов, его роли в биологии возбудителя и возможность использования в диагностике холеры. Однако возникло множество вопросов, связанных с закономерностями продукции липазы различными вариантами холерных вибрионов, способах её выявления, определением стандартного субстрата в среде для обнаружения липазной активности, определением возможности использования полученных данных в дифференциальных и диагностических целях при идентификации возбудителя холеры.

В связи с расширением спектра изучаемых групп холерных вибрионов первым этапом нашей работы явилось получение новых серий антилипазного диагностикума и одновременного повышения чувствительности препарата за счёт подбора оптимальной схемы иммунизации животных. Для получения иммунных сывороток использовали беспородных кроликов и применили несколько схем иммунизации. В результате применения четырёх схем иммуни-заций животных нами были получены иммунные сыворотки против липазы Pseudomonas spp., которые были охарактеризованы по некоторым параметрам: количество белка, чувствительность, специфичность. Результаты исследования свидетельствуют о том, что полученные нами сыворотки содержали специфические антитела, способные связываться в реакции преципитации с антигеном липазы псевдомонад и холерных вибрионов, представленного как в виде коммерческого препарата, так и содержащегося в среде культивирования гемолитических холерных вибрионов. Из полученных данных иммуноблотинга следует, что наибольшей активностью (титр антител против липазы псевдомонад — 1/6400) обладали сыворотки № 517, 1948 и 1949, которые проявили специфическую активность в реакции преципитации (титр преципити-нов против препарата липазы Pseudomonas spp. — 1/32). Остальные сыворотки № 518, 519 и 1950 показали значительно меньшую активность в пределах от 1/400 до 1/800 титра антител против липазы псевдомонад. Показано, что предварительная иммуностимуляция животных препаратом ««Тактивина», который мы использовали во II и IV схемах иммунизации, позволяет повысить продукцию специфических антител, что является важным моментом с практической точки зрения при получении препаративных количеств полимерного диагностикума для выявления у холерных вибрионов липазы, гомологичной липазе псевдомонад. Определены параметры проведения лиофиль-ной сушки, которые способствуют сохранности специфической активности и чувствительности диагностического препарата в высушенном состоянии в течение 2-х лет.

С применением нескольких методических подходов нами проведено комплексное изучение фенотипического проявления гемолитической и липазной активностей холерных вибрионов. В результате были выявлены закономерности проявления липазной активности у различных вариантов холерных вибрионов, коррелирующие с гемолитичностью и токсигенностью штаммов. Показана возможность дифференциации токсигенных и атоксигенных вариантов вибрионов эльтор, независимо от источника выделения, основанной на сравнительном выявление способности штаммов к продукции липазы при культивировании штаммов в течение 4-х и 24-х часов. Таким обра/ зом, изучение штаммов, выделенных от людей и из объектов окружающей среды, с различными генетическими характеристиками показало, что вибрионы эльтор независимо от источника выделения и токсигенности способны продуцировать липазу при выращивании в течение 24-х часов. Это положение согласуется с результатами бактериологических и молекулярнобиологи-ческих исследований, свидетельствующих о липазной активности холерных вибрионов как о видовом признаке (Williams S.G. et al., 1991, 1993). При этом, выявление липазы у гемолитических штаммов возможное через 4 часа культивирования является основой для внутривидовой дифференциации холерных вибрионов эльтор, в отличие от липазы токсигенных вариантов, выявляющейся через 24 часа.

Показать весь текст

Список литературы

  1. , Е.П. Характеристика эитеропатогениых холерных вибрионов не Ol/не 0139 серогрупп, выделенных в Узбекистане / Е. П. Авдеева, Б. Л. Мазрухо, Л. Г. Воронежская // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -2005.-№ 3.-С. 80−82.
  2. , А.К. Методика дифференцирования патогенных и апатоген-ных вибрионов Эль Тор / А. К. Адамов, Н. Ф. Быстрый, Д. Л. Шмеркевич, В. Г. Середин // Пробл. особо опас. инф. Саратов, 1971. — Вып. 1. — С. 116−123.
  3. , А.К. Холерные вибрионы / А. К. Адамов, М. С. Наумшина. -Саратов, 1984. 328 с.
  4. , И.Т. Действие энтеротоксина Vibrio cholerae на микроорганизмы / И. Т. Андрусенко, Н. А. Пастернак, Е. А. Ведьмина // Журн. микробиол., эпидемиол., и иммунобиол. 1984. — № 10. — С. 52−55.
  5. , И.Т. Изучение биологического действия холерного энтеротоксина холерного вибриона / А. К. Адамов, Э. А. Яговкин, А. П. Шепелев // Сборник науч. трудов. Новороссийск, 1994. — Вып. 1. — С. 173−175.
  6. , И.Т. Исследование факторов, влияющих на вирулентность холерных вибрионов и разработка новых методов ее определения: Автореф. дис.. д-ра биол. наук. Саратов, 1991.-43 с.
  7. , А.С. Об уточнении систематического положения некоторых морских бактерий методом гибридизации ДНК-ДНК / А. С. Антонов, Г. Ф. Леванова, Л. С. Попов // Журн. микробиол., эпидемиол., и иммунобиол. -1975. -№ 1.- С. 94−96.
  8. , И.М. Биосинтез липолитических ферментов культурой гриба Aspergillus awamori: Автореф. дис.. канд. мед. наук. Москва, 1971. — 20 с.
  9. , И.М. Использование липазы для удаления липидов из культурной жидкости Penicillinum nigricans / И. М. Аренде, Т. Г. Борисова, О. Н. Выборных // Прикладная биохимия и микробиология. 1968. — Т. 4, № 3. — С. 240.
  10. , Б.В. К генетической пластичности Vibrio cholerae / Б. В. Бабёнышев, В. Н. Савельев, С. И. Винокурова // Матер. IX съезда Всерос. на-уч.-практ. об-ва эпидемиол., микробиол. и паразитол. Москва, 2007. — Том 2. -С. 210.
  11. , О.В. Холера эльтор / О. В. Бароян. М.: Медицина, 1971. — 256 с.
  12. , С.Б. Биология водных вибрионов р. Дона. Ростов-на Дону, 1929.-49 с.
  13. Биологическая безопасность. Реферат, сб. / Под ред. чл.-корр. РАМН, д-ра. мед. наук. проф. В. В. Кутырева. Саратов, 2007. — Вып. 7. — 64 с.
  14. Биохимия / Под ред. Е. С. Северина. 2-е изд. М.: ГЭОТАР-МЕД., 2004. -784 с.
  15. , Е.П. Изв. АН СССР, сер. биол. 1976. — № 2, 250 (Патент. Швейцария кл. С11: 3138, № 540 335, 1973)
  16. , В.М. Гемолизины энтеробактерий и их связь с вирулентностью возбудителя / В. М. Бондаренко, А. В. Голубев // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1988. — № 11. — С. 103−109.
  17. , В.М. Секретируемые факторы патогенности энтеробактерий / В. М. Бондаренко, А. Р. Мавзютов, Е. Н. Голкочева // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2002. — № 1. — С. 84−90.
  18. , В.М. Типы секреции и регуляции функциональной активности молекул, ассоциированных с патогенностью энтеробактерий / В. М. Бондаренко, А. Р. Мавзютов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2002. — № 5. — С. 86−91.
  19. , Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / Л. Б. Борисов. М., 2005. — 734 с.
  20. X. Липолитические ферменты / X. Брокерхоф, Р. Дженсен. -М.: Мир, 1978.-396 с.
  21. , П.Н. Вибрионы / П. Н. Бургасов, И. В. Домарадский, А.Е. Ли-бинзон // Большая мед. энциклопедия. Изд. 3-е. М., 1976. Т. 4. — С. 184 186.
  22. , С.В. Экспериментальная микробиология. София: Медицина и физкультура. — 1965. — С. 372.
  23. , Ю.В. Токсин-опосредованная обусловленность инфекционных заболеваний / Ю. В. Вертиев // Мол. структура бактериал. токсинов и ге-нетич. контроль их биосинтеза: Тез. 1-й Всесоюз. конф. -М., 1985. С. 28−30.
  24. , В.П. Гемолизин Vibrio cholerae El Tor: клонирование и экспрессия генов в Е. coli. / В. П. Власов, Е. В Монахова, И. Е. Ушакова // Мол. генетика, микробиол. и вирусол. 1992. — № 7−8. — С. 27−31.
  25. , Л.Г. Определение степени сходства холерных и НАГ-вибрионов / Л. Г. Воронежская // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммуноби-ол. 1985.-№ 10.-С. 11−15.
  26. , Л.Г. Серовары НАГ-вибрионов, выделенные от людей и из внешней среды, и возможность распространения их водным путем / Л. Г. Воронежская, А. Г. Сомова, Г. М. Мединский // Патол. физиол. особо опас. инф. Саратов, 1981.-С. 118−123.
  27. , Л.Г. Холерные вибрионы не 01 группы (биологическая характеристика): Дис. в форме науч. докл.. д-ра мед. наук. Саратов, 1994. -65 с.
  28. , Л.Г. Эколого-географическое распространение НАГ-вибрионов различных сероваров / Л. Г. Воронежская, А. Г. Сомова, Г. М. Мединский // Эпидемиол. и эпизоотол. чумы. Саратов, 1980. — С. 74−78.
  29. , Г. В. О некоторых вибрионах различного происхождения / Г. В. Гальцева, А. Г. Сомова, A.M. Зайденов // Технология производства сухих диагност, питат. сред. Махачкала, 1974. — Вып. 5. — С. 101−105.
  30. , Г. В. Таксономия и идентификация холерных и других вибрионов: Автореф. дис.. канд. мед. наук. Саратов, 1973. — 21 с.
  31. , Г. В. Холероподобный гастроэнтерит, обусловленный вибрио флювиалис / Г. В. Гальцева, A.M. Зайденов, Э. Л. Черноусова // Сборник науч. трудов. Новороссийск, 1994.-Вып. 1.-С. 129−132.
  32. , B.C. К вопросу о вибрионах открытых водоемов г. Иркутска / B.C. Ганин, А. С. Марамович, А. А. Вейде // Вопр. краевой инфекционной па-тол. Восточной Сибири. Иркутск, 1975. — С. 253−260.
  33. , B.C. Серологическое типирование не агглюти-нирующихся 01-холерной сывороткой вибрионов, выделенных на территории СССР / B.C. Ганин, Л. Я. Урбанович, А. Г. Сомова // Журн. микробиол., эпидемиол и им-мунобиол. 1978. — № 4. — С. 49−54.
  34. , А.Л. Изучение полиморфизма штаммов холерного вибриона разного происхождения методом геномной дактилоскопии / А. Л. Гинцбург, Г. М. Грижебовский, О. Н. Токарская // Генетика. 1989. — Т. XXV. — № 7. — С. 1320−1324.
  35. , А.Л. Организация и клонирование структурных генов энте-ротоксина Vibrio cholerae eltor RV 79 / А. Л. Гинцбург, Н. В. Янишевский, В. Л. Мотин // Мол. генетика, микробиол. и вирусол. 1984. — № 9. — С. 12−18.
  36. , Г. М. Холера на Кавказе (теоретические и прикладные вопросы эпидемиологии): Автореф. дис. в виде науч. доклада. д-ра мед. наук. — Саратов, 1997. 78 с.
  37. , Е.Б. Совершенствование методов выделения и идентификации патогенных для человека вибрионов: Автореф. дис.. канд. мед. наук. Саратов, 1995. — 16 с.
  38. , М.Н. Оральная химическая вакцина из гипертоксигенныхштаммов КМ-76 Инаба и КМ-68 Огава возбудителя холеры / М. Н. Джапаридзе, А. В. Наумов, Г. П. Никитина // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммуно-биол. 1991. — № 4. — С. 31−33.
  39. , О.В. Способность расщеплять твин 20 как дифференциальный тест для вибрионов 0139 серовара различного происхождения / О. В. Дуванова, Н. Я. Шиманюк, Б. Н. Мишанькин // Клин. лаб. диагностика. 2000. -№ 5. — С. 48−49.
  40. , С.П. Протеолитическая и лецитиназная активность холерных вибрионов 0139 серовара / С. П. Евлахова, Б. Н. Мишанькин // Пробл. сан.-эпид. охраны территории стран СНГ: Тез. докл. междунар. науч.-практ. конф. -Саратов, 1998.-С. 154−155.
  41. , З.В. Свойства и патогенетическое значение НАГ-вибрионов / З. В. Ермольева, Е. А. Ведьмина, Н. И. Гивенталь // Пробл. особо опасн. инф. -Саратов, 1973. -№ 3.- С. 16−22.
  42. , Г. А. Молекулярное типирование штаммов Vibrio cholerae не Ol/не 0139, выделенных на территории Российской Федерации и другихстран СНГ от больных людей / Г. А. Ерошенко // Проблемы особо опас. инф. Саратов, 2005. — Вып. 2. — С. 64.
  43. , Д.К. Морфология, биология и распознавание холерных вибрионов. Холерная эпидемия 1908−1909 гг. в Петербурге / Д. К. Заболотный, С. И. Златогоров, Г. С. Кулеша, В. И. Яковлев // СПб., 1910. С. 33−44.
  44. , С.П. Механизмы секреции грамотрицательных бактерий. / С. П. Заднова, Ю. В. Лозовский // Пробл. особо опас. инф. Саратов, 2005. -Вып.2. — С. 11−16.
  45. , С.И. К вопросу о диагностике холерного вибриона. Экспериментальные данные к эпидемиологии холеры / С. И. Златогоров // Русский врач. 1908. — № 2. — С. 806−812.
  46. , Л.Ф. Современное состояние вопроса о лабораторной диагностике холеры / Л. Ф. Зыкин // Микробиол. и иммунол. особо опас. инфекций. -Саратов, 1968. С. 391−395.
  47. , Е.И. Микробиология и эпидемиология холеры. М., 1959.-304 с.
  48. , Е.А. Молекулярно-генетические свойства штаммов холерного вибриона с различной эпидемической значимостью: Автореф. дис.. канд. мед. наук. Саратов, 2004. — 22 с.
  49. Лабораторная диагностика холеры: Методические указания. МУК 4.2.2218−07. М., 2007. — 87с.
  50. , Г. Ф. Дифференциация бактерий рода Aeromonas от других представителей семейства Vibrionaceae на основе изучения их ДНК / Г. Ф. Леванова, В. М. Лавровская, Ю. П. Швецов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1980.- № 8. -С. 13−15.
  51. , А. Основы биохимии /А. Ленинджер. Москва, 1985. — Т. 1. — 365с.
  52. , В.В. Актуальные проблемы изучения продукции и биологических свойств холерного токсина: Автореф. дис.. д-ра мед. наук. — Ростов-на-Дону, 1994.-37с.
  53. , В.В. Современные подходы к оценке способности холерных вибрионов продуцировать холероген / В. В. Лобанов, В. П. Власов, Е. В. Монахова // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол. — 1990. № 1. — С. 101 102.
  54. , Ю. М. Выявление липазы у Vibrio cholerae 01 серогруппы в реакции объёмной агломерации / Ю. М. Ломов, В. В. Агафонова, Н. Р. Телесманич // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2007, Т. 1. — С. 74−77.
  55. , Ю.М. Изучение динамики выделения и характеристика фено- и генотипических свойств штаммов холерных вибрионов, изолированных в процессе мониторинга из водных объектов окружающей среды г. Ростова-на
  56. Дону / Ю. М. Ломов, Б. Л. Мазрухо, В. Д. Крутиков // Пробл. комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы». Ростов-на-Дону, 2007. — Вып. 20. -С. 16−22.
  57. , Ю.М. Пандемии холеры и эволюция возбудителя / Ю. М. Ломов // Холера: Матер. 8-ой Рос. науч. практ. конф. — Ростов-на-Дону, 2003. — С. 13−23.
  58. , Ю.М. Характеристика современного этапа в развитии 7 пандемии холеры / Ю. М. Ломов, Г. Г. Онищенко, Э. А. Москвитина, Л.С. Подосин-никова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1997. — № 6. — С. 3942.
  59. , Ю.М. Холера и проблема биотерроризма / Ю. М. Ломов, Э. А. Москвитина, Л. С. Подосинникова, Ю. М. Федоров // Матер. IX съезда Всерос. науч.-практ. об-ва эпидемиол., микробиол. и паразитол. Москва, 2007. — Том З.-С. 122−123.
  60. , Ю.М. Холера как постоянная угроза эпидемических осложнений / Ю. М. Ломов, // Пробл. комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы». Ростов-на-Дону, 2008. — Вып. 21. — С. 8−13.
  61. , Ю.М. Эволюция возбудителя холеры и прогноз по этой инфекции на ближайшее будущее / Ю. М. Ломов // Журн. эпидемиол. и инфекционные болезни. 2004. — № 1. — С. 7−12.
  62. , Ю.М. Эпидемиология холеры, экология холерных вибрионов и эпиднадзор / Ю. М. Ломов, Ю. М. Фёдоров, Л. С. Подосинникова, Н.Р. Теле-еманич // Пробл. комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы». -Ростов-на-Дону, 2007. Вып. 20. — С. 10−13.
  63. , Ю.М. Эпидемически опасные холерные вибрионы нового серо-вара 0139 «Бенгал» / Ю. М. Ломов, Б. Л. Мазрухо, Л. Г. Воронежская // Сборник науч. трудов. Новороссийск, 1994. — Вып. 1. — С. 92−97.
  64. А.Б. Изучение продукции и свойств энтеротокси на холерных вибрионов О-139 серовара: Автореф. дис.. канд. мед. наук. Саратов, 1997. -20с.
  65. , Б.Л. Перспективы серодиагностики холеры, обусловленной холерными вибрионами 0139 «Бенгал» / Б. Л. Мазрухо, Ю. М. Ломов, Л. Г. Воронежская // Сборник науч. трудов. Новороссийск, 1994. — Вып.1. — С. 123−124.
  66. Р. Биохимия человека / Р. Мари, Д. Греннер, П. Мейес, В. Роду-элл. М.: Мир. — 1993. — Т. 1. — 384 с.
  67. , Г. М. Диарейные заболевания, вызываемые холерными вибрионами не 01 группы / Г. М. Мединский, Л. Г. Воронежская, А.Г. Сомова
  68. Актуал. вопр. микробиол., лаб. диагност, и профилакт. холеры: Тез. Всесо-юз. науч. конф. Ростов-на-Дону, 1988 — С. 276−279.
  69. , Г. М. Случаи пищевых токсикоинфекций, вызванных НАГ-вибрионами / Г. М. Мединский, A.M. Зайденов, P.M. Саямов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1976. -№ 7. — С. 131−134.
  70. , Г. М. Эпидемиологические аспекты холеры eltor в Ростовской области / Г. М. Мединский, Ю. М. Ломов, Г. И. Кулов // Холера. Вопр. эпидемиол., микробиол. и лаб. диагност.: Матер. Рос. науч. конф. — Ростов-на-Дону, 1992.-С. 16−20.
  71. , Е.А. Гемолитическая активность и токсигенность V. cholerae различных серогрупп / Е. А. Меньшикова, Л. С. Подосинникова, А. В. Миронова, О. И. Сальникова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -2002.-№ 5.-С. 7−11.
  72. , Е.А. Гемолитическая активность токсигенных и атоксигенных штаммов V. cholerae и V. cholerae 0139 серогрупп / Е. А. Меньшикова, Л. С. Подосинникова, А. В. Соколенко // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2004. — № 5. — С. 106−108.
  73. , Е.А. Гемолитическая активность токсигенных и нетокси-генных штаммов холерных вибрионов различных серогрупп: Автореф. дис.. канд. биол. наук. Ростов-на-Дону, 2004. — 18 с.
  74. , Б.Н. Нейраминидазная активность у вибрионов различной серопринадлежности / Б. Н. Мишанькин, Ю. М. Ломов, Н. Я. Шиманюк // Пробл. комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы». — Ростов-на-Дону, 2000. Вып. 13. — С. 78−80.
  75. , Е.В. Видоспецифичный зонд для идентификации Vibrio cholerae / Е. В. Монахова, В. П. Власов, В. Н. Вуцан // Мол. генетика, микробиол. ивирусол. 1993.-№ 4.-С. 8−11.
  76. , Э.А. Современные тенденции в развитии седьмой пандемии холеры / Э. А. Москвитина // Журн. проблемы особо опасных инфекций. 2008. — Вып. 95. — С. 22−26.
  77. , Л.С. Очистка и характеристика секреторного гемолизина холерных вибрионов / JI.C. Оленичева, JT.H. Лобанова, Е. И. Евтеева // Бактериальные токсины: Всесоюз. Конф: Тезисы. Юрмала, 1989. — 94 с.
  78. , Л.С. Секреторные белки холерных вибрионов / Л. С. Оленичева, О. П. Фецайлова, Н. Б. Непомнящая // Регуляция микроб, метаболизма: Всесоюз. конф. Пущино, 1989. — С. 79.
  79. , Э.Я. Некоторые аспекты НАГ-инфекции в Дагестане / Э. Я. Омариев, Ш. Г. Алиев, С. Н. Чернышев // Пробл. комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы». Ростов-на-Дону, 2000. — Вып. 13. — С. 87−88.
  80. , Г. Г. Боитерроризм как национальная глобальная угроза / Г. Онищенко, Л. С. Сандахчиев, С. В. Нетёсов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2000. — № 6. — С. 83−85.
  81. , Г. Г. Холера, обусловленная Vibrio cholerae Ol ctxAB" tcpA+ / Г. Г. Онищенко Ю. М. Ломов, Э. А. Москвитина и др. // Жури, микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. — 2004. № 1. — С. 29−34.
  82. , Г. Г. Вибрионы не 01 серологической группы и их значение в патологии человека / Г. Г. Онищенко, B.C. Ганин, Е. П. Голубинский. — М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2001. 384 с.
  83. , Г. Г. Холера в начале XXI века. Прогноз / Г. Г. Онищенко, Ю. М. Ломов, Э. А. Москвитина // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2005. — № 3. — С. 44−48.
  84. , Г. Г. Холерные вибрионы серогрупп не Ol, выделенные в Узбекистане в 1987—1990 гг.: ретроспективный VNTR-анализ / Г. Онищенко, Б. Н. Мишанькин, А. С. Водопьянов // Эпидемиол. и инф. болезни 2003. -№ 6.-С. 25−29.
  85. , Г. Г. Эпидемиологическая обстановка в Чеченской Республике / Г. Онищенко, Г. М. Грижебовский, В. И. Ефременко // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2001. — Приложение 6. — С. 5−9.
  86. , Г. Г. Эпидемиологический надзор за холерой: обоснования к оценке его эффективности / Г. Онищенко, Ю. М. Ломов, Э. А. Москвитина // Пробл. особо опас. инф. Саратов, 2005. — Вып.1. — С. 5−9.
  87. Определитель бактерий Берджи. М.: Мир, 1997. — Т. 1. — С. 199−200-
  88. , О.В. Изучение стабильности гемолитического теста уштаммов Vibrio cholerae eltor различной вирулентности / О. В. Осауленко,
  89. А.С. Марамович, А. А. Вейде // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1983.-№ П.- С. 100−101.
  90. , О.В. Лецитиназная активность холерных и не агглютинирующихся 01-холерной сывороткой вибрионов / О. В. Осауленко, А.Ф. Пини-гин // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1987. — № 2. — С. 15−18.
  91. , Л.С. Холерные вибрионы, выделенные на территории СССР в период седьмой пандемии: Автореф. дис.. д-ра мед. наук. Саратов, 1993.-44 с.
  92. , В.И. Клиника, патогенез и лечение холеры / В. И. Покровский, В. В. Малеев, А. К. Адамов. Саратов, 1988.- 272 с.
  93. , В.И. Холера / В. И. Покровский, В. В. Малеев. М.: Медицина, 1978.-232 с.
  94. Рис, Э. От клеток к атомам / Э. Рис, М. М. Стернберг. М.: Мир, 1988. -144 с.
  95. , Е. JI. Микробные липиды и липазы. Москва, 1977
  96. , В.Н. Распространение и свойства холерных вибрионов, выделенных от людей и из объектов внешней среды на территории Предкавказья и Закавказья / В. Н. Савельев, А. Д. Антоненко, Г. М. Грижебовский, В. И. Ефременко. Ставрополь, 2007. — 416 с.
  97. , В.Н. К микробиологии, клинике и эпидемиологии неэпидемической формы холеры / В. Н. Савельев, Г. М. Грижебовский, И.В. Савельева* // Пробл. комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы». — Ростов-на-Дону, 2006. Вып. 19. — С. 25−27.
  98. , В.Н. Этиология холеры эльтор / В. Н. Савельев, Г. М. Грижебовский, А. Ф. Брюханов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1998. № 1. — С. 21−24.
  99. , B.JI. Группы V. cholerae, имеющие различную эпидемическую значимость / B.JI. Семиотрочев // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1990. — № 4. — С. 61−67.
  100. , B.JI. Селекция клеток холерного вибриона Ol, лишенных1гемолитических свойств / B.JI. Семиотрочев, С. Н. Бабицин, А. О. Цитцер // Матер, обл. науч.-практ. конф. Гурьевской ПЧС по профилакт. ООИ. — Гурьев, 1989.-С. 192−194.
  101. , Л.М. Сезонная динамика численности вибрионов и родственных микроорганизмов в реке Дон / Л. М. Смоликова, А. Г. Сомова, Г. М. Мединский // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. — 1977. № 2. -С. 29−33.
  102. Справочник биохимика / Р. Досон, Д. Эллиот, У. Эллиот, К. Джонс К. -М.: Мир, 1991.-544с.
  103. , Н.Р. Механизмы реализации гемолитической активности холерных вибрионов / Н. Р. Телесманич, Ю. М. Ломов, Л. С. Подосинникова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2007. — № 4. — С. 85−92.
  104. , Н.Р. К вопросу о природе гемолитической активности холерных вибрионов / Н. Р. Телесманич, Ю. М. Ломов // Пробл. комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы». Ростов-на-Дону, 2005. — Вып. 18. -С. 59−64.
  105. , Н.Р. Лабораторная диагностика холеры (проблемы и пути усовершенствования) / Н. Р. Телесманич // Пробл. комиссия «Холера и патоген. для человека вибрионы». Ростов-на-Дону, 2008. — Вып. 21. — С. 18−24.
  106. , Н.Р. Механизмы гемолитической активности холерных вибрионов: Автореф. дис.. д-ра биол. наук. — Ростов-на-Дону, 2006. — 38с.
  107. , Н.Р. Способ выявления атоксигенных гемолитичных штаммов холерных вибрионов / Н. Р. Телесманич, Е. В. Безуглова, Г. Л. Карбышев, В .В. Агафонова // Патент № 2 261 444. Опубл. 27.09.2005 г. — Бюл. № 27.
  108. , Н.Р. Способ дифференциации атоксигенных штаммов холерных вибрионов от токсигенных / Н. Р. Телесманич, Н. И. Винокур // Патент на изобретение № 2 257 415.
  109. , Н.Р. Триацилглицероллипазная активность гемолитических холерных вибрионов / Н. Р. Телесманич // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2004. — № 2. — С. 11−14.
  110. , В.Н. Жирные кислоты, липиды (транспортные формы жирных кислот) и аполипопротеины (липидпереносящие макромолекулы) единая функциональная система /В.Н. Титов //Клин. лаб. диагностика, 2006. — № 9. -С. 3−10.
  111. , Т.П. Сходство полинуклеотидных последовательностей ДНК холерных и так называемых неагглютинирующихся вибрионов / Т. П. Турова, А. С. Антонова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1977. — № 7. — С. 47−50.
  112. , Б.Я. Взаимодействие бактерий и эритроцитов / Б. Я. Усвяцов, Е. А. Ханина, О. В. Бухарин // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -2005.-№ 4.-С. 89−95.
  113. , И.Е. Гемолитическая активность холерных вибрионов: Автореф. дис.. канд. мед. наук. Саратов, 1993. — 22с.
  114. , И.Е. Клонирование и экспрессия генов гемолизина Vibrio cholerae eltor / И. Е. Ушакова, В. П. Власов, Н. К. Михась, Е. В. Монахова // Генетика и биохимия вирул. возб. особо опас. инф. Тез. докл. Рос. науч. конф. -Волгоград, 1992. С. 66.
  115. , Г. С. Некоторые особенности образования антител в процессе гипериммунизации кроликов антигенами кишечной палочки / Г. С. Фейгин, Н. М. Ландсман, Л. А. Громова, В. М. Смирнова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1971. — № 2. — С. 29−33.
  116. , Р.В. Получение концентрированных ферментных препаратов. ЦИНТИ, Пищепром. Москва, 1960.
  117. , О.П. Иммуногенность гемолизина холерных вибрионов / О. П. Фецайлова, B.C. Уралева // I съезд иммунологов России: Тез. докл. -Новосибирск, 1992. С. 495−496.
  118. , А.О. Характеристика свойств цитолизина холерного вибриона / А. О. Цитцер, О. В. Красильникова, Д. Н. Муратхаджаев, В. Л. Семиотрочев // Холера. Вопр. эпидемиол., микробиол. и лаб. диагност.: Матер. Рос. науч. конф. Ростов-на-Дону, 1992. — С. 78.
  119. , И.В. Изучение биологических свойств холерных вибрионов 0139 серогруппы: Автореф. дис.. канд. мед наук. Ростов-на-Дону, 2000J.- 18с.
  120. , И.Я. Антигенная изменчивость холерных вибрионов, выделенных в период седьмой пандемии холеры: Автореф. дис.. д-ра мед. наук. Ростов-на-Дону, 2000 — 43с.
  121. , И.Я. Некоторые экологические аспекты антигенной вариабельности холерных вибрионов / И. Я. Черепахина, Б. Н. Мишанькин, О. С. Бурлакова // Холера: Матер. VIII Рос. науч.-практ. конф. по пробл. «Холера». -Ростов-на-Дону, 2003. С. 169−172.
  122. , Л.А. Фоефотазная активность у представителей V. cholerae 0139 «Бенгал» / Л. А. Шевченко, Е. С. Филякина, Б. Н. Мишанькин // Пробл. комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы». — Ростов-на-Дону, 1999.-Вып. 12.-С. 77−78.
  123. , Н.Я. Нейраминидаза холерных вибрионов 0139 серовара «Бенгал» / Н. Я. Шиманюк, О. В. Дуванова, Б. Н. Мишанькин // Матер, науч.-практ. конф., посвящ. 100-лет. образован, противочумной службы России. -Саратов, 1997.-Т.2. С. 151−152.
  124. , Н.Я. Уреазная активность V. cholerae 0139 «Бенгал» / Н. Я. Шиманюк, М. В. Шишияну, О. В. Дуванова, Б. Н. Мишанькин // Пробл. комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы». Ростов-на Дону, 1999. — Вып. 12. — С.75−76.
  125. Albert, M.J. Characterization of Aeromonas trota strains that cross-react with Vibrio cholerae 0139 Bengal / M.J. Albert, M. Ansaruzzaman, T. Shimada // J. Clin. Microbiol. 1995. — Vol.33, № 12. — P. 3119−3123.
  126. Albert, M.J. Epidemiology and molecular biology of Vibrio cholerae 0139 Bengal / M.J. Albert // Indian J. Med. Res. 1996. — Vol.104. — P. 14−27.
  127. Albert, M.J. Large outbreak of clinical cholera due to V. cholerae non 01 in Bangladesh / M.J. Albert, A.K. Siddique, M.S. Islam // Lancet. 1993. — Vol.341, № 8846.-P. 704.
  128. Aldova, E. Isolation of non-agglutinable vibrio from an enteritis outbreak in Czechoslovakia / E. Aldova, K. Laznickova, E. Stepankova, J. Lietava // J. Infect. Dis.- 1968.-Vol.118.-P.25−31.
  129. Ali, A. Mutations in. extracellular protein secretion pathway genes (eps) / A. Ali, J.A. Johnson, A.A. Franco // Infect. Immun. 2000. — Vol. 48, № 4. — P. 1967−1974.
  130. Anderson, R.S. Deoxyribonucleic acid relationships among marine Vibrios / R.S. Anderson, E.T. Ordal // J. Bacteriol. 1972.- Vol. 109, № 2.- P. 696−706.
  131. Aubert, G. Isolation of Vibrio strains in French coastal waters and infection with Vibrio cholerae non 01/non0139 / G. A. Aubert, Garricajo, R. Vermesch // Presse Med. 2001 — Vol.30, № 13. — P. 1631 -1633.
  132. Barrett, T. J. Epidemiological usefulness of changes in hemolytic activity of Vibrio cholerae biotype ELTor during the seventh pandemic / T. J. Barrett, P. A. Blake//J. Clin. Microbiol.-1984.-Vol. 13, № 1.-P. 126−129.
  133. Bernard, P. L hemolyse par le vibrion El Tor et par son hemolysine / P. Bernard, J. Guillerm, J. Gallut // Compt. Rend. Soc. Biol.- 1939.- Vol. 130.- P. 147−148.
  134. Bik, E.M. Global climate infectious disease: the cholera paradigm / E.M. Bik, R.R. Colwell // Science. 1996. — Vol. 274, № 5295. — P. 2025−2030.
  135. Bik, E.M. Genesis of the novel epidemic Vibrio cholerae 0139 strain: evidence for horizontal transfer of genes involved in polysaccharide synthesis / E.M. Bik, A.E. Bunschoten, R.D. Gouw, F.R. Mooi // EMBO Journal. 1995. — Vol. 14, № 2.-P. 209−216.
  136. Bitter, W. Formation of oligomeric rings by XcpQ and PilQ, which are involved in protein transport across the outer membrane of Pseudomonas aeruginosa / W. Bitter, M. Koster, M. Latijnhouwers, H. De Cock // Mol. Microbiol. 1998. -Vol.27.-P. 209−219.
  137. Bojic, I. Diseases caused by bacteria and rickettsia in biological warfare andbioterrorism /1. Bojic, J. Vukadinov, S. Minic //Med. Pregl. 2007. — Vol.60, № 3−4.-P. 195−197.
  138. Brady, D. Spherenzymes: a novel structured self-immobilisation enzyme technology / D. Brady, J. Jordaan, C. Simpson, A. Chetty, C. Arumugam, F.S. Moolman .// BMC Biotechnol. 2008. — Vol. 8. — P. 8.
  139. Casanova, T.B. The Vibrio cholerae hlyC gene encodes a protein that is related to lipases of pseudomonas species / T.B. Casanova, K.M. Peterson // DNA Seq. -1995. Vol. 5, № 3. P. 181−184.
  140. Chattopadhyay, K. Unfolding of Vibrio cholerae hemolysin induces oligomeri-zation of the toxin monomer / K. Chattopadhyay, K.K. Banerjee // J Biol Chem. -2003. Vol. 278, № 40. — P. 38 470−38 475.
  141. Christenson, B. Septicemia due to a non-01/non-0139 Vibrio cholerae / B. Christenson, L.M. Souchet, L. Nieves, M. Soler // Bol. Asoc. Med. P.R. 1997. -Vol.89, № 1.-P.31−32.
  142. Chung, C.W. Export of recombinant proteins in Escherichia coli using ABC transporter with an attached lipase ABC transporter recognition domain (LARD) / C.W. Chung, J. You, K. Kim, M. Yoon, H. Kim, J.H. Ahn I I Microb. Cell Fact. -2009.-P. 8−11.
  143. Citarella, R.V. Polyphasic taxonomy of the genes Vibrio: polynucleotide sequence relationship among selected Vibrio species / R.V. Citarella, R.R. Colwell // J Bacteriol. 1970. — Vol. 104, № 2. — P. 434−442.
  144. Colwell, R.R. Global climate infectious disease: the cholera paradigm / R.V. Citarella // Science. 1996. — Vol. 274, № 5295. — P. 2025−2030.
  145. Dakin, W.P.H. Gastroenteritis due to non-agglutinable (non-cholera) vibrios / W.P.H. Dakin, D.J. Howell, R.G.A. Sutton // Med. J. Aust. 1974. — Vol.2, № 13. -P. 487−490.
  146. De, S.N. The haemolytic activities of Vibrio cholerae and related vibrios / S.N. De, K. Bhattacharyya, P.K. Roychaudhury // J. Pathol. Bacteriol. 1954. -Vol. 67.-P. 117.
  147. Dodin, A. Laboratory methods for the diagnosis of cholera vibrio and other vibrios / A. J. Dodin, M. Fournier // Unite Cholera et vibrions Institute Pasteur. -Paris, 1992. 148p.
  148. Faruque, S.M. Distribution of zonula occludens toxin (zot) gene among clinical isolates of Vibrio cholerae Ol from Bangladesh and Africa / S.M. Faruque, L. Comstock, J.B. Kaper, J. Albert //J. Diar. Dis. Res. 1994. — Vol. 12, № 3. — P.222−224.
  149. Finlai, B.B. Common themes in microbial pathogenicity revisited / B.B. Fin-lai, S. Falkow//Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1997. — Vol. 61. — P. 136−169.
  150. Fiore, E. Cloning, characterization, and chromosomal mapping of a phos-pholipase (lecithinase) produced by Vibrio cholerae / E. Fiore, J. Michalski, R. Russel // Infect. Immun. 1997. — Vol. 65, № 8. — P. 3112−3117.
  151. Fournier, J.M. Laboratory methods for the diagnosis of cholera vibrio and other vibrios / J.M. Fournier // Unite Cholera et vibrions Institute Pasteur. Paris, 1992.
  152. Fraga, S.G. Environment and virulence factors of Vibrio cholerae strains isolated in Argentina / S.G. Fraga, M. Pichel, M. Costagliola // J. Appl. Microbiol. -2007. Vol.103, № 6. — P.2448−2456.
  153. Fujii, R Directed evolution of Pseudomonas aeruginosa lipase for improved amid-hydrolyzing activity / R Fujii, Y. Nakagawa, J. Hiratake // Protein Eng Des Sel.-2005.-Vol. 18, № 2.-P. 93−101.
  154. Gallut, J. Complete analysis of the specific antigen of the cholera vibrio and its practical applications / J. Gallut // Bull. Wold. Hlth. Org. 1949. — Vol.2. -P.39.
  155. , J. Взаимодействие вибрионов классической холеры биотипа Эль Тор и вибрионов НАГ / J. Gallut, J. Quiniou // Бюлл. ВОЗ 1971. — Т. 42, № 3. — С. 480−482.
  156. Ganguly, R. Haemolysis in vibrios / R. Ganguly, A. K. Ghosh, S. P. De // Indian. J. Med Rec. 1966.- Vol. 54. — P. 15−23.
  157. Gatti-Lafranconi, P. Unscrambling thermal stability and temperature adaptation in evolved variants of a cold-active lipase. / P. S. Gatti-Lafranconi, M. Caldarazzo, A. Villa, L. Alberghina, M. Lotti // FEBS Lett. 2008 — Vol. 582, № 15.-P. 2313−2318.
  158. Gaur, R. Protein-coated microcrystals of Pseudomonas aeruginosa PseA lipase / R. Gaur, G.N. Gupta, M. Vamsikrishnan, S. K Khare // Appl. Biochem. Biotechnol. 2008 Vol. 151, № 2−3.-P. 160−166.
  159. Gilboa-Garber, N. Pseudomonas aeruginosa lectins as a model for lectin production, properties, applications and functions / N. Gilboa-Garber // Zbl. Bakt. Hyg. 1988. — Vol. 270, № 1−2. — P. 3−15.
  160. Goldberg, S.L. Cloning and characterization of the hemolysin determinants from Vibrio cholerae RV 79 (Hly +), RV 79 (Hly and 569B / S.L. Goldberg, J.R. Murphy // J. Bacteriol. 1985. — Vol. 162, № 1. — P. 35−41.
  161. Goldberg, S.L. Molecular cloning of the hemolysin determinant from Vibrio cholerae El Tor / S.L. Goldberg, J.R. Murphy // J. Bacteriol. 1984. — Vol. 160, № l.-P. 239−244.
  162. Gopal, S. The occurrence of Vibrio species in tropical shrimp culture environments- implications in food safety / S. Gopal, S.IC. Otta, S. Kumar // J. Food
  163. Microbiol. 2005. — Vol.102, № 2. — P. 151−159.
  164. Gotschlich, F. Uber cholera und cholera-ahnliche Vibrionen unter den aus Mekka zurtickkehrenden Pilgern / F. Gotschlich // Zschr. Hyg. Infektkr.-1906. — Bd. 53. — H. 2. — S. 281−304.
  165. Gotschlich, F. Vibrions choleriques isoles au campement de Tor. Retour du pelerinage de l’annee 1905. Rapport adresse au president du Conseil quarantenaire d’Egypte, Alexandria/F. Gotschlich //Bull. Inst. Pasteur. 1905.- Vol. 3.- P. 726.
  166. Gupta, N. Single-step purification of lipase from Burkholderia multivorans using polypropylene matrix / P. Gupta, N. Rathi, R. Singh // Apl. Microbiol. Bio-technol. 2005. — Vol. 67, № 5. — P. 648−53.
  167. Gupta, R. Bacterial lipase: an overview of production, purification and biochemical properties / N. Gupta, P. Rathi // Appl. Microbial. Biotechnol. 2004. -Vol. 64, № 6. -P. 763−781.
  168. Hales, L. M. Legionella pneumophila contains a type II general secretion pathway required for growth in amoebae as well as for secretion of the Msp protease / L. M. Hales, H. A. Shuman // Infect. Immun. 1999. — Vol. 67. — P. 36 623 666.
  169. Hardeman, F. Metagenomic approach for the isolation of a novel low-temperature-active lipase from uncultured bacteria of marine sediment. / F. Hardeman, S. Sjoling. // FEMS Microbiol Ecol. 2007. — Vol. 5, № 2. — P. 524 534.
  170. Harris, J.R. Interactin of the Vibrio cholerae cytolysin (VCC) with cholesterol, some cholesterol esters, and cholesterol derivatives: а ТЕМ study / J.R. Harris, S. Bhakdi, U. Meisner // J. Struct. Biol. 2002. — Vol. 139, № 2. — P. 122 135.
  171. Hasanuzzaman, M. Isolation, identification, and characterization of a novel, oil-degrading bacterium Pseudomonas aeruginosa T1 / M. Hasanuzzaman, К M. Umadhay-Briones, SM. Zsiros // Curr Microbial. 2004. — Vol. 49, № 2. — P. 108 114.
  172. Hase, C.C. Cloning and nucleotide sequence of the Vibrio cholerae hemag-glutinin/protease (HA/protease) gene and construction of an HA/protease-negative strain / C.C. Hase, R. A. Finkelstein // J. Bacteriol. 1991. — Vol. 173. — P. 33 113 317.
  173. Heidelberg, J.F. DHA sequence of both chromosomes of the cholera pathogen Vibrio cholerae / J.F. Heidelberg, J.A. Eisen, W.C. Nelson et al. // Nature. -2000. Vol. 406, № 6795. — P. 477−483.
  174. Henderson, I.R. Virulence functions of autotransporter proteins / I.R. Henderson, J.P. Nataro // Infect. Immunol. 2001. — Vol. 69, № 3. — P. 1231−1243.
  175. Hilton, S. Action of a microbial lipase/acyltransferase on phospholipid monolayers / S. Hilton, J.T. Buckley // Biochemistry. 1991. -Vol.18, № 30. — P. 6070−6074.
  176. Hugh, R. A comparison of the neotype strain and 119 isolates of Vibrio eltor Pribram 1933 / R. Hugh // Indian. J. Med. Res. 1966. — Vol. 54, № 9. — P. 839−848.1kigai,
  177. Ikigai, H. Two forms of Vibrio cholerae Ol El Tor hemolysin derived from identical precursor protein / H. Ikigai, Т. Ono, T. Nakae // Bioch. Bioph. Acta. -1999.-Vol. 1415, № 5.-P. 297−305.
  178. Ingole, K.V. Study of proteases and other enzymes of Vibrio cholerae Ol El Tor and 0139 serotypes isolated in Yavatmal (Maharashtra) / K.V. Ingole, S.V.
  179. Jalgaonkar, R.P. Fule // Indian J. Pathol. Microbiol. 1998. — Vol. 41, № 4. — P. 419−422.
  180. International travel and health. Situation as on 1 January, 2005//WHC), Geneva, 2005. 202 p.
  181. Johnson, J.A. Vibrio cholerae 0139 synonym Bengal is closely related to Vibrio cholerae El Tor but has important differences / J.A. Johnson, C.A. Salles, P. Pa-nigrahi // Infect. Immun. 1994. — Vol. 62, № 5. — P. 2108−2110.
  182. Kaper, J.B. Molecular approaches to the study of infectious diseases / J.B. Ka-per, //Mar. Technol. Soc. J. 1981. — Vol. 15, № 2. — P. 41−44.
  183. Kaper, J.B. Molecular epidemiology of Vibrio cholerae in the United States Gulf Coast / J.B. Kaper, H.B. Bradford, N.C. Roberts, S. Falkow // J. Clin. Microbiol. -1982. Vol. 16, № 1. — P. 129−134.
  184. Kaper, J.B. Numerical taxonomy of vibrios isolated from astuarine environments / J.B. Kaper, H. Lockman, E.F. Remmers // Int. J. Syst. Bact. 1983 -Vol.33, № 2.-P.229−255.
  185. Kienn, E.D. Characterization and relatedness of marine Vibrios pathogenic to fish: deoxyribonucleic acid homology and base composition / E.D. Kienn, R.E. Pacha//J. Bacteriol. 1969. — Vol. 100, № 3. — P. 1248−1255.
  186. Kim, K.R. Purification, refolding and characterization of recombinant Pseudomonas fluorenscens lipase / K.R. Kim, D.Y. Kwon, S.H. Yoon // Protein Expr Purif. 2005. — Vol. 39, № 1. — P. 124−9.
  187. Kisiel, M. The case of infection Vibrio cholerae non Ol поп 0139 in Warsaw / M. H. Kisiel, Zacharska, M. Czerniawska-Ankiersztejn, D. Rudal // Przegl. Epidemiol. 2006. — Vol.60, № 4. — P. 779−787. ¦
  188. Kontkanen, H. Characterization of steryl esterase activities in commercial lipase preparations / H. M. Kontkanen, Tenkanen, R. Fagerstrom // J. Biotechnol. -2004. Vol. 108, № 1. — P. 51 -59.
  189. Krasilnikov, O.V. The mode of action of Vibrio cholerae cytolysin. The influences on both erythrocytes and planar lipid bilayers / O.V. Krasilnikov, J.N.
  190. Muratkhodjaev, A.O. Zitzer // Biochim. Biophys. Acta. 1992. — Vol. 1111, № 1. -P. 7−16.
  191. Krzeslak, J. Lipase expression in Pseudomonas alcaligenes is under the control of a two-component regulatory system. / J. Krzeslak, G. Gerritse, R. van Merkerk, R.H. Cool, W.J. Quax. // Appl. Environ. Microbiol. 2008 — Vol. 74, № 5.-P. 1402−1411.
  192. Loghem, J J. van. Der El Tor Vibrio / J .J. van. Loghem // Z. Hyg. Infekt. Kr. 1932.-Bd. 114. — S. 20.
  193. Loghem, J.J. van. Un vibrion ElTor pathogene isole aux Indes Neerlandaises / J.J. van. Loghem // Bull. Off. Int. Hyg. Publ. 1938. — T. 30, № 8. — P. 1520−1523.
  194. Lowry, O.H. Protein measurement with the folin phenol reagent / O.H. Lowry, N.J. Rosenbrough, A.L. Fair, R.J. Randall //J. Biol. Chem. 1951. — Vol. 193, № l.-P 265−275.
  195. Manning, P.A. Cloning of the structural gene (hly) for the hemolysin of Vibrio cholerae El Tor strain 07 / P.A. Manning, M.H. Brown, M.W. Heusenroeder //Gene. 1984.-Vol. 31, № 1−3.-P. 225−231.
  196. Matsumiya, Y. Isolation and characterization of a lipid-degrading bacterium and its application to lipid-containing wastewater treatment / Y. Matsumiya, D. Wakita, A. Kimura // Japan. J Biosci Bioeng. 2007. — Vol. 103, № 4. — P.325−30.
  197. McCardell, B.A. Isolation and characterization of a cytolysin produced by Vibrio cholerae serogroup lion Ol / B.A. McCardell, l.M. Madden, D.B. Shah // Canad. J.
  198. Microbiol.- 1985. -Vol. 31, № 8. P. 711−720.
  199. McCardell, B.A. Two-step purification and partial characterization of a variant of the Vibrio cholerae non 01 hemolysin / B.A. McCardell, M.H. Kothaiy, J.M. Madden//FEMS Microbiol. Lett. 1999. — Vol. 180, № 2. — P. 177−182.
  200. Mechow, S. Mapping of a gene that regulates hemolysin production in Vibrio cholerae / S. Mechow, A.B. Vaidya, M.G. Bramucci // J. Bacterid.- 1985. -Vol. 163, № 2.-P. 799−802.
  201. Medina, R.B. Determination of estsrolytic and lipolytic activities of lactic acid bacteria / R.B. Medina, M.B. Katz, S. Gonzalez // Methods Mol Biol. 2004. -Vol. 268.-P. 465−470.
  202. Mekalanos, J.J. Cholera toxin genes: nucleotide sequence, deletion analysis and vaccine development / J.J. Mekalanos, D.J. Swartz, Y.D. Pearson //Nature. 1983. — Vol. 306, № 5943. — P. 551−557.
  203. Mekalanos, J.J. Cholera: Molecular basis for emergence and pathogenesis / J.J. Mekalanos, E.U. Rubin, M.K. Waldor // FEMS Immunol. Med. Microbiol.1997.-Vol.18.-P.241−248.
  204. Mekalanos, J.J. Cholera: Molecular basis for emergence and pathogenesis / J.J. Mekalanos, M.K. Waldor, E.Y. Rubin // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1997. — Vol. 18, № 4. — P. 241−248.
  205. Morris, T.G. Cholerae and other virioses in the United States / T.G. Moms, R.E. Black //N. Engl. J. Med. 1985. — Vol. 312, № 6. — P. 343−350.
  206. Morris, T.G. Non-Ol group Vibrio cholerae: a look at the epidemiology of occasional pathogen // Epidemiol. Rev. 1990. — Vol. 12. — P. 179−191.
  207. Morris, T.G. Experimental non-Ol group Vibrio cholerae gastroenteritis in humans / T.G. Morris, T. Takeda, B.D. Tail // J. Clin. Invest. 1990. — Vol.85. -P. 697−705.
  208. Mukhopadhyay, A.K. Molecular epidemiology of reemergent Vibrio chlerae Bengal in India / A. Basu, P. Garg / A.K. Mukhopadhyay // J. Clin. Microbiol.1998. Vol. 36, № 7. — P. 2149−2152.
  209. Nardiello, S. Cholera: recent acquisitions / S. Nardiello, A. Ilario, F.M. Fus-co, G. Cuomo // Infez. Med. 2007. — Vol.15, № 2. — P.85−92.
  210. Norton, R. Vibrio cholerae non Ol facial cellulitis in a North Queensland, Australian child / R. Norton, M. Vucak, H. Stalewski // Pediatr. Infect. Dis. J. -2001. Vol. 20, № 5. — P. 550−551.
  211. Noureddini, H. Immobilized Pseudomonas cepacia lipase for biodiesel fuel production from soybean oil / H. Noureddini, X. Gao, RS. Philkana // Bioresour Technol. 2005. — Vol. 96, № 7. — P. 769−77.
  212. Ogierman, M.A. Characterization of the Vibrio cholerae eltor lipase operon lip AB and a protease gene down-stream of the hly region / M.A. Ogierman, A. Fallarino, T. Riess // J. Bacteriol. 1997. — Vol. 179, № 22. — P. 7072−7080.
  213. Olson, R. Vibrio cholerae cytolysin is composed of an alpha-hemolysin-like core / R. Olson, E. Gouaux // Protein Sci. 2003. — Vol. 12, № 2. — P. 379−383.
  214. Otero, C. General characterization of non commercial microbial lipase in hydrolytic and synthetic reactions / C. Otero, MA. Berrendero, F. Cardenas // Apl. Biochem Biotechnol. 2005. — Vol. 120, № 3. — P. 209−24.
  215. Ouchterlony, O. Gel diffusion techniques / O. Ouchterlony // Immunoche-mie-Berlin, Heidelberg, New-York. 1965. — P. 13−35.
  216. Palomo, J.M. Use of immobilized lipase for lipase purification via specific lipase-lipase interactions / J.M. Palomo, C. Ortiz, M. Fuentes // J. Chromatogr. A. 2004. — Vol. 1038, № 1−2. — P. 267−273.
  217. Prabhakar, H. Outbreak of gastroenteritis due to a new strain of non О group-1 Vibrio cholerae, in Ludhiana in May August 1993. / H. Prabhakar, M. Lai, H. Kaur // Indian. J. Med. Res. — 1994.- Vol. 99, № 3.- P. 107−108.
  218. Prim, N. Esterase EstA6 from Pseudomonas sp. CR-611 is a novel member in the utmost conserved cluster of family VI bacterial lipolytic enzymes / N. Prim, C. Bofill, F.I. Pastor, P. Diaz. // Biochimie. 2006. — Vol. 88, № 7. — P. 859−867.
  219. Qadri, F. Enterotoxigenic Escherichia coli and Vibrio cholerae diarrhea, Bangladesh, 2004 / F. Qadri, A.I. Khan, A.S. Faruque // Emerg. Infect. Dis. 2005.-Vol. 11, № 7. -P. 1104−1107.
  220. Rahman, R.N. S5 Lipase: an organic solvent tolerant enzyme. / R.N. Rahman, S.N. Baharum, A.B. Salleh, M. Basri .// J. Microbiol. 2006. — Vol. 44, № 6.-P. 583−590.
  221. Rahman, R. N, High-yield purification of an organic solvent-tolerant lipase from Pseudomonas sp. strain S5 / R.N. Rahman, S. N Baharum, M. Basri // Anal Biochem. 2005. — Vol. 342, № 2. — P. 267−74.
  222. Ramamurthy, T. Emergence of novel strain of Vibrio cholerae with epidemic potential in southern and eastern India / T. Ramamurthy, S. Garg, R. Sharma // Lancet. 1993. — Vol. 341, № 8846. -P.703−704.
  223. Ramamurthy, T. Health impairments arising from drinking water resources contaminated with Vibrio cholerae / T. Ramamurthy, S. Chakraborty, G.B. Nair, S.K. Bhattacharya // Schriftenr. Ver. Wasser, Boden, Lufthyg. 2000. — Vol. 105. -P. 29−34.
  224. Richardson, K. Hemolysin production and cloning of two hemolysin determinants from classical Vibrio cholerae / K. Richardson, J. Michalski, J. Kaper // Infect. Immun. 1986. — Vol. 54, № 2. — P. 415−420.
  225. Roh, C. Isolation of a low-temperature adapted lipolytic enzyme from uncultivated micro-organism / C. Roh, F. Villatte // J. Appl Microbiol. 2008 — Vol. 10, № 1. — P. 116−123.
  226. Roy, C. Haemolytic and nonhaemolytic El Tor vibrios / C. Roy, S. Mukerjee, S. Tanamal // Ann. Biochem. Exp. Med. 1963. — Vol. 23, № 12. — P. 553−558.
  227. Roy, D. Structural features of a cold-adapted Alaskan bacterial lipase. / D. Roy, S. Sengupta // J. Biomol Struct Dyn. 2007. — Vol. 24, № 5. — P. 463−470.
  228. Royo, G. Bacteriemia рог Vibrio cholerae no Ol / G. Royo, C. Martin, E. Fuentes // Enferm. Infecc. у microbiol. Clin. 1993. — Vol. 11, № 4. — P.228.
  229. , M. Случай септицемии с циррозом печени, (вызванный) Vibrio cholerae, не относящимися к серотипу Ol / М. Sakaguchi, N. Itagaki, М. Funauchi // J. Jap. Assoc. Infect. Dis. 1992. — Vol.66, № 5. — P. 653−656.
  230. Saminathan, M. Blue native electrophoresis study on lipases. / M. Samina-than, K.T. Muthukumaresan, S. Rengarajan, N. Muthukrishnan, P. Gautam. // Anal Biochem. 2008/ - Vol. 37, № 2/ - P. 270−281.
  231. Sandkvist, M. Biology of type II secretion / M. Sandkvist // Mol. Microbiol. 2001. — Vol. 40. — P. 271−283.
  232. Sandkvist, M. Direct interaction of the EpsL and EpsM proteins of the general secretion apparatus in Vibrio cholera / M. Sandkvist, L. P. Hough, M. M. Bagdasarian, M. Bagdasarian//J. Bacteriol. 1999. — Vol. 181. — P. 3129−3135.
  233. Sandkvist, M. General secretion pathway (eps) genes required for toxin secretion and outer membrane biogenesis in Vibrio cholerae / M. Sandkvist, L. O. Michel, L. P. Hough // J. Bacteriol. 1997. — Vol. 179. — P. 6994−7003.
  234. Sandkvist, M. Interaction between the autokinase EpsE and EpsL in the cytoplasmic membrane is required for extracellular secretion in Vibrio cholera / M. Sandkvist, M. Bagdasarian, S. P. Howard, V. J. DiRita // EMBO J. 1995. Vol. 14.-P. 1664−1673.
  235. Sen, R. A note on designating strains as Vibrio cholerae biotype El Tor / R. Sen, D.L. Shrivastava//Indian. J. Med Rec. 1970. — Vol. 58, № 2. — P. 174−178.
  236. Sen, R. Observations on the haemolytic character of Vibrio cholerae in a medium containing glycerol / R. Sen // Indian. J. Med Rec. 1971. — Vol. 59, № 7. -P. 1019−1024.
  237. Shimada, Т. Outbreak of Vibrio cholerae non 01 in India and Bangladesh / T. Shimada, G.B. Nair, B.B. Deb //Lancet. 1993. — Vol. 341. — P. 1347.
  238. Singh, R. A simple activity staining protocol for lipases and esterases. / R. Singh, N. Gupta, V.K. Goswami, R. Gupta .// Appl Microbiol Biotechnol. 2006. — Vol. 7, № 6. — P. 679−682.
  239. Suankratay, C. Non-serogroup 01 Vibrio cholerae bacteremia and cerebritis / C. Suankratay, K. Phantumchinda, W. Tachawiboonsak, H. Wilde // Clin. Infect. Dis.-2001.-Vol. 32, № 7.-P. 117−119.
  240. Tison, D.L. Vibrio species of medical importance / D.L. Tison, M.T. Kelly // Diagn. Microbiol. Inf. Dis. 1984. — Vol. 2 — P. 263−276.
  241. Towbin, H. Electroforetic transfer of proteins from poliacrilamide gels to nitrocellulose sheets: Procedure and some applications / H. T. Towbin, Stachelin, J. Gordon // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. — Vol. 76, № 9. — P. 4350−4354.
  242. Trucksis, M. The Vibrio cholerae genome contains two unique circular chromosomes / M. J. Trucksis, Michalski, Y.K. Deng // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1998. Vol. 95, № 24. — P. 14 464−14 469.
  243. Vargas, V.A. Lipase-producing microorganisms from a Kenyan alkaline soda lake / V.A. Vargas, O.D. Delgado, R. Hatti-Kaul // Biotechnol. Lett. 2004. -Vol. 26, № 2.-P. 81−86.
  244. Waldor, M.K. Lysogenic conversion by a filamentous phage en coding cholera toxin / M.K. Waldor, J.J. Mekalanos // Science. 1996. — Vol. 272, № 5270. — P.1910−1914.
  245. Waldor, M.K. Regulation, replication and integration functions of the Vibrio cholerae CTX phi are encoded by region RS 2 / M.K. Waldor, J.J. Mekalanos, H. Kimsey // Mol. Microbiol. 1997. — Vol. 24, № 5. — P. 917−926.
  246. Waldor, M.K. Regulation, replication and integration functions of the Vibrio cholerae CTXcp are encoded by region RS2 / M.K. Waldor, E.J. Rubin, D.N. Gregory // Mol. Microbiol. 1997. — Vol. 24. — P. 917−926.
  247. Waldor, M.K. ToxR regulates virulence gene expression in non-Ol strains of Vibrio cholerae that cause epidemic cholera / M.K. Waldor, J.J. Mekalanos // Infect. Immun. 1994. — Vol. 62, № 1. — P. 72−78.
  248. West, P.A. Identification and classification of Vibrionaceae an overview / B.C. West, R.R. Colwell // Vibrios in the Environment. — 1984. — P. 285−363.
  249. West, P.A. The human pathogenic vibrios a public althea update with environmental perspectives / B.C. West // Epidemiol. Infect. 1989. — Vol. 103, № 1. -P. 1−34.
  250. Williams, S.G. The transcriptional activator HlyU of Vibrio cholerae: nucleotide sequence and role in virulence gene expression / S.G. Williams, S.R. Attridge, P.A. Manning // Mol. Microbiol. 1993. — Vol. 9, № 4. — P. 751−760.
  251. Williams, S.G. Transcription of the Vibrio cholerae haemolysin gene, hlyA, and cloning of a positive regulatory locus, hlyU / S.G. Williams, P.A. Manning // Mol. Microbial. 1991. — Vol. 5, № 8. — P. 2031−2038.
  252. Wong, H.C. Incidence of toxigenic vibrios in foods available in Taiwan / H.C. Wong, S.H. Ting // J. Appl. Bacteriol. 1992. — Vol. 73, № 3. — P. 197−202.
  253. Yamamoto, K. Hemolysins of Vibrio cholerae: homology of non Ol hemolysin to Eltor hemolysin and its enterotoxicity / K. Yamamoto, N. Nakasone, M. Tanabe // Jap. J. Med. Sci. Biol. 1985. — Vol. 38. — P. 263.
  254. Yamamoto, K. Identity of hemolysins produced by Vibrio cholerae non Ol and Vibrio cholerae Ol biotype El Tor / K. Yamamoto, Y. Ichinose, N. Nakasone //Infect. Immun. 1986.-Vol. 51.-P. 927−931.
  255. Yamamoto, K. Non 01 Vibrio cholerae hemolysin: purification, partial characterization and immulogical relatedness to El Tor hemolysin / K. Yamamoto, M. Al-Omani, T. Honda // Infect. Immun. 1984. — Vol. 45, № 1. — P. 192−196.
  256. Zitzer, A. Mode of primary binding to target membranes and pore formation induced by Vibrio cholcrae cytolysin (hemolysin) / A. Zitzer, M. Palmer, U. Weller//Eur. J. Biochem. 1997. — Vol. 247, № 1. — P. 209−216.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!