Активационный апоптоз субпопуляций Т-лимфоцитов при ишемической болезни сердца

Актуальность проблемы.

Ишемическая болезнь сердца является одной из наиболее распространенных патологий сердечно-сосудистой системы, на долю которой приходится до 50% всех случаев смерти. Морфологической основой ИБС является атеросклеротическое повреждение коронарных артерий. В настоящее время атеросклероз рассматривается как неспецифический системный воспалительный процесс, развивающийся в ответ на повреждающее действие дислипидемии и других факторов риска (артериальная гипертензия, курение, гиподинамия, метаболические нарушения).

В последние годы активно ведутся исследования, касающиеся роли, иммунной системы в патогенезе атеросклероза [Stemme S., 1994, Hansson G.K., 2002]!. Воспалительный процесс, протекающий в атеросклеротических бляшках, привлекает различные клеточные элементы, ив- частности, Т-лимфоциты: в основном CD4±T-лимфоциты, при небольшом уровне С08±лимфоцитов, а также NKT. лимфоцитов: [Пигаревский П.В., 2002]. Активация иммунного ответа осуществляется засчет стимуляции неоантигенами (апоптотические клетки и окисленные ЛПНП). В: атеросклеротическом процессе клетки иммунной системы участвуют по одному из трех механизмов: межклеточное взаимодействие между антигенпредставляющими клетками (макрофаги, В-лимфоциты или дендритные клетки) и Т-лимфоцитамисекреция различных цитокинов активированными Т-лимфоцитами, модулирующих активность макрофагов в атеросклеротической бляшкепродукция различных антител (включая аутоантитела) В-лимфоцитами по Т-зависимому илиТ-независимому механизмам. Некоторые из антител обладают свойством блокировать взаимодействие окисленных ЛПНП и scavenger-рецепторов макрофагов.

В процессе атерогенеза иммунная система выступает, с одной стороны, как индуктор воспаления в стенке артерии, а с другой стороны, факторы повреждения сосудов могут вызывать различные изменения в иммунной системе, такие как дисбаланс субпопуляций Т-клеток, функциональные нарушения активации лимфоцитов. От степени активационного потенциала лимфоцитов in situ зависит модулирование воспалительного процесса, протекающего в атеросклеротической бляшке: ее дальнейший рост и нестабильность.

Существует мнение, что функциональная недостаточность лимфоцитов, сопровождающаяся высокой долей апоптоза клеток иммунной системы, может привести к преждевременному старению организма. [Ковальчук Л.В., Чередеев А. Н., 1999, Ярилин.

А.А., 2003]. Вместе с тем, усиление апоптотической гибели лимфоцитов, вызывая нарушения регуляции иммунного ответа, может оказывать влияние на атерогенез. Однако, в настоящее время активационный апоптоз лимфоцитов остается мало изученным, а его роль в развитии атеросклероза до сих пор не выяснена.

Большой интерес представляет изучение активационного апоптоза субпопуляций лимфоцитов у больных, подвергшихся воздействию малых доз ионизирующего облученияучитывая быстрое прогрессирование ИБС у этих пациентов.

Все выше изложенное послужило основанием для проведения настоящего исследования.

Цель исследования.

Цель настоящей работы — изучение активационного апоптоза Т-лимфоцитов при атерогенезе у больных ИБС. Задачи исследования.

1. Сформировать клинические группы больных, отражающие прогрессирование атеросклероза коронарных артерий.

2. Определить субпопуляционный состав Т-лимфоцитов у пациентов с атеросклерозом магистральных артерий и ИБС.

3. Оценить выраженность спонтанного раннего и позднего апоптоза субпопуляций Т-лимфоцитов (CD4, CD8), а также чувствительность к индукции позднего апоптоза Т-лимфоцитов (CD4+, CD84), активированного ФГА, у пациентов с атеросклерозом магистральных артерий и ИБС.

4. Изучить неравномерность апоптоза CD4+, CD8+ Т-лимфоцитов при прогрессировании атеросклероза коронарных артерий.

5. Определить зависимость между активационным апоптозом CD4+, CD8+ Т-лимфоцитов и концентрацией СРБ, а также уровнем AT к кардиолипину.

6. Изучить влияние гиполипидемической терапии статинами на активационный апоптоз субпопуляций Т-лимфоцитов у больных ИБС.

7. Оценить особенности клинической картины заболевания, субпопуляционного состава лимфоцитов, чувствительности к апоптозу и его неравномерности у больных ИБС, подвергшихся воздействию малыми дозами ионизирующего облучения.

Научная новизна.

Впервые проведено комплексное клинико-иммунологическое исследование с оценкой активационного апоптоза лимфоцитов у больных атеросклерозом магистральных артерий и ИБС, в т. ч. у пациентов^ подвергшихся воздействию малыми дозами ионизирующего облучения.

Впервые установлена l зависимость активационного апоптоза CD4+ и GD8+ Т-лимфоцитов от степени выраженности атеросклероза коронарных сосудов, в отличие от показателей спонтанного раннего и позднего апоптоза:

Впервые показана: неравномерность активационного апоптоза, среди субпопуляций Т-лимфоцитов при прогрессировании атеросклероза5 коронарных артерий у больных ИБС, причем-степень этой предпочтительности меняется от. высокой доли CD 8^ Т-лимфоцитовдо высокой доли: CD4+Т-лимфоцитов среди апоптотической фракции лслеток.

Впервые: показано влияние: гиполипидемической терапиистатинамина чувствительность к. активационному апоптозу субпопуляций Т-лимфоцитов? у больных ИБС.

Разработана: методика: подсчета неравномерности? активационного апоптозаТ-лимфоцитов на основании средних значений активационного индекса:

Впервые установлено соответствие между чувствительностью — к активационному: апоптозу субпопуляций лимфоцитов и уровнемСРБ, а также AT к кардиолипину при." прогрессировании ИБС.

Впервые: выявлены клинико-иммунологические особенности ИБС у больных, подвергшихся воздействию малыми эдозами ионизирующего облученияПрактическая значимость диссертации:

Выявленные особенности функциональной активности Т-лимфоцитов? наг различных стадиях атеросклероза коронарных артерий позволили уточнить его патогенез;

Полученныерезультаты позволяют рекомендовать, определение: активационного апоптоза! субпопуляций? Т-лимфоцитов с целью уточнения выраженностиатеросклеротического процесса и оценки риска сосудистых осложнений у больных ИБС.

Определены иммунологические параметры активационного апоптоза на примере созданной клинической модели прогрессирования: коронарного атеросклероза. Эта модель может быть использована', в: различных. сравнительных: исследованиях с применением лекарственных препаратов, а также при изучении" сопутствующих хронических иммунопатологических процессов:

Выявленные клинико-иммунологические особенности развития атеросклероза коронарных, артерит у больных. ИБС, подвергшихся: воздействию малыми дозами ионизирующего облученияобосновывают целесообразность более «агрессивного» применениястатинов. у этой группы пациентов, начиная с доклиническойстадии заболевания;

Обнаруженные взаимосвязи развития атеросклероза и функциональной активности клеток иммунной системы обосновывают применение рекомбинатных цитокинов (TGFP) и рекомбинатных молекул адгезии (Е-селектин) как стабилизаторов мембран эндотелиальных клеток коронарных сосудов.

Внедрение результатов исследования.

Метод оценки степени неравномерности активационного апоптоза субпопуляций лимфоцитов при прогрессировании ИБС используется в научном и учебном процессе кафедры иммунологии ГОУ ВПО РГМУ Росздрава. Определение параметров активационного апоптоза введено в терапевтических отделениях Центральной клинической больницы РАН и научно-консультативного отделения клиники ГНЦ Института Иммунологии ФМБА для оценки риска сосудистых осложнений.

Апробация работы.

Материалы диссертационной работы докладывались на научных заседаниях кафедр иммунологии и внутренних болезней с курсом функциональной и ультразвуковой диагностики МБФ ГОУ ВПО РГМУ, на клинических конференциях ЦКБ РАН, Объединенном иммунологическом форуме (г. Екатеринбург, 2004), Российской научно-практической конференции «Современные технологии в иммунологии: иммунодиагностика и иммунотерапия» (г. Курск, 2006).

Публикации.

Основные положения диссертационного исследования отражены в 6 публикациях.

выводы.

1. У больных ИБС по мере прогрессирования заболевания в периферической крови достоверно (р<0,05) возрастают абсолютные и относительные показатели CD8+CD25+ Т-лимфоцитов при отсутствии изменений показателей CD3+ Т-лимфоцитов, CD4+CD25+ регуляторных Т-клеток и субпопуляций CD3+CD16+CD56+NKT клеток.

2. Ранний и поздний спонтанный апоптоз Т-лимфоцитов не отражают прогрессирования ИБС и не коррелируют с такими маркерами воспаления атеросклеротического процесса, как С-реактивный белок и антитела к кардиолипину.

3. Прогрессирование ИБС сопровождается значимыми (р<0,05) изменениями чувствительности Т-лимфоцитов к позднему активационному апоптозу в ответ на стимуляцию клеток ФГА in vitro: достоверным повышением для CD3+CD4± и снижением для CD3+CD8+ Т-лимфоцитов. Усиленное вовлечение в апоптозCD3+CD4+ Т-клеток соответствует более высокому уровню экспрессии CD95 молекул.

4. У больных хроническими формами ИБС определяется различная избирательность вовлечения субпопуляций Т-лимфоцитов в активационный апоптоз. Неравномерность апоптоза на ранних стадиях атерогенеза коронарных артерий' выражена за счет высокой доли в апоптотической фракции CD8+ Т-лимфоцитов, а прогрессирование ИБС характеризуется преобладанием CD4+ Т-лимфоцитов.

5. Преобладание CD3+CD4+ Т-лимфоцитов в апоптотической фракции клеток при прогрессировании ИБС соответствует повышению уровня в сыворотке крови маркеров атеросклеротического воспаления.

6. Применение гиполипидемической терапии у больных ИБС статистически значимо (р<0,05) снижает чувствительность к активационному апоптозу субпопуляций Т-лимфоцитов.

7. Ранний дебют и быстрое прогрессирование ишемической болезни сердца у пациентов, подвергшихся воздействию малыми дозами ионизирующего облучения, сопровождаются особенностями динамики субпопуляций лимфоцитов и их чувствительности к активационному апоптозу. В отличие от больных основной группы, происходит достоверное (р<0,05) увеличение абсолютного содержания CD3 Т-лимфоцитов, CD3 CD8 -клеток, NKT-лимфоцитов и снижение степени чувствительности к позднему активационному апоптозу с одновременным повышением в сыворотке уровня антител к кардиолипину, что, возможно, способствует формированию аутоиммунных реакций.

8. Активационный апоптоз субпопуляций Т-лимфоцитов периферической крови in vitro отражает динамику атеросклероза коронарных артерий и может рассматриваться как один из важных факторов патогенеза ИБС.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. У больных ИБС рекомендуется исследование чувствительности к активационному апоптозу субпопуляций Т-лимфоцитов с определением его неравномерности для оценки выраженности атерогенеза и риска сосудистых осложнений, а также эффективности проводимой терапии.

2. В комплексную терапию лиц, подвергшихся действию малых доз ионизирующего облучения, целесообразно включение статинов в максимально эффективных дозах как при наличии ИБС, так и в доклиническую стадию заболевания с целью его профилактики.

3. Разработанные методики определения параметров активационного апоптоза и его неравномерности (индекс активационного апоптоза и индекс неравномерности) рекомендуются для применения в клинической практике для оценки влияния лекарственных препаратов на функциональный потенциал лимфоцитов как у больных ИБС, так и при другой патологии.