Влияние растений семейства грушанковых на процессы свободнорадикального окисления (экспериментальное исследование)

Актуальность. Несмотря на успехи химии, давшей медицине множество новых эффективных лекарственных препаратов, использование лекарственных растений приобретает все большие масштабы. Опыт практической медицины показывает, что разумное сочетание сильнодействующих синтетических средств с фитопрепаратами часто приводит к успешному лечению заболеваний. Все возрастающему вниманию к фитотерапии способствует большое число случаев непереносимости ряда синтетических препаратов и антибиотиков, лежащих в основе ятрогенных (лекарственных) болезней, в то время как препараты растительного происхождения отличаются малой токсичностью, возможностью длительного применения без существенных побочных явлений. Это позволяет использовать лекарственные растения с целью профилактики и лечения хронических заболеваний человека [38, 48].

Действующие вещества в составе препаратов растительного происхождения бывают представлены, как правило, компонентами различных классов растительных соединений. Однако, пристальное внимание сегодня уделяется изучению растительных фенолов, к числу которых относятся биофлавоноиды. Интерес к флавонои-дам очень велик ввиду присущей им антиоксидантной активности и широкого спектра биологических эффектов [41]. Существует много доказательств противомикробного и противовирусного действия флавоноидов, а также антиканцерогенной, антиагрегантной, противовоспалительной, антиаллергической, гепатопротекторной и антиоксидантной активности [38, 72, 73, 75, 81, 83, 87, 88, 93, 102, 104, 110, 111, 112, ИЗ, 120, 127, 128, 130, 132, 133, 134, 135, 136, 138, 139, 149, 154, 155, 157, 158, 161, 172, 177, 181, 183, 185]. При многообразии тематики публикаций, посвященных изучению биологических свойств флавоноидов и растений, их содержащих, прослеживается основная идея, заключающаяся в непосредственном участии флавоноидов в процессах активации свободно-радикального окисления.

Многообразие флоры Алтая создает хорошие предпосылки для постоянного пополнения арсенала лекарственных растений, применяемых в различных областях медицины, в том числе флавоно-идсодержащих растений [11]. На протяжении последних лет нами ведется активная исследовательская работа по изучению фармакологических эффектов различных представителей местной флоры, в частности растений семейства Грушанковых, достаточно распространенных в смешанных лесах Алтая [12, 13].

Растения сем. Грушанковых (Pyrolaceae) зимолюбка зонтичная (Chimaphyla umbellate (L.) W. Barton), ортилия однобокая (Orthilia secunda (L.) House.) и грушанка круглолистная (Pyrola rotundifolia L.) традиционно применяются в народной медицине при воспалительных заболеваниях почек. Важно отметить, что Грушанковые филогенетически близки растениям сем. Вересковых, среди которых — толокнянка обыкновенная, являющаяся известным уроанти-септиком. Ранее в нашей лаборатории установлено, что содержание фенольных соединений в листьях Грушанковых не уступает содержанию последних в листьях толокнянки, а противовоспалительная и мочегонная активность отваров зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной сопоставима с активностью водных извлечений из листьев толокнянки, что позволяет рекомендовать их для лечения воспалительных заболеваний мочевыделительной системы [11, 12, 13, 40].

В настоящее время известно, что во всех клетках организма происходит непрерывный процесс образования свободных радикалов, являющийся частью нормального функционирования организма [7, 43, 58, 63, 107, 183]. Чрезвычайно высокая окислительная способность свободно-радикальных частиц обусловливает их участие в многочисленных метаболических процессах, включающих перекисное окисление липидов, необходимое для обновления клеточных мембран, активацию мембранных ферментов митохондрий, участвующих в синтезе макроэргов, деструкцию ксенобиотиков в эндоплазматическом ретикулуме (прежде всего в печени), участие в процессах индукции факторов иммунитета [16, 35, 36, 37, 58, 80, 91, 95, 97, 103, 147, 165, 169].

Однако, важное физиологическое значение радикалы имеют лишь при низком стационарном уровне, поддерживаемом системой антиоксидантной защиты, представленной комплексом ферментных и неферментных антиоксидантов. При гиперпродукции свободных радикалов или длительной стимуляции антиоксидантной системы, ведущей к истощению ее ресурсов, возникает оксидатив-ный стресс, при котором свободно-радикальные частицы приобретают патогенетическое значение, ведущее к повреждению клеточных структур, что чревато развитием различных заболеваний [7, 43, 58, 78, 107, 108, 109, 144, 145, 148, 184].

Существует множество научных доказательств вовлечения реакций свободно-радикального окисления (СРО) в процессы клеточного повреждения, играющих значительную роль в развитии многих патологических состояний организма. Клинические наблюдения и эпидемиологические данные подтверждают участие СРО в развитии атеросклероза, сахарного диабета, дегенеративных заболеваний нервной системы, сердечно-сосудистых заболеваний, таких как ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда, эссенци-альная гипертония. Многочисленные исследования свидетельствуют, что процессы свободно-радикального окисления лежат в основе хронических заболеваний печени, токсичности ксенобиотиков, инфекционных и аутоиммунных процессов, новообразований, заболеваний мочевыделительной системы [62, 64, 66, 67, 70, 82, 84, 86, 90, 92, 93, 97, 98, 11 1, 115, 116, 119, 122, 125, 144, 160, 166, 174, 178, 186]. Оксидативное повреждение клеточных мембран свободно-радикальными формами кислорода имеет место при воспалительных процессах, шоке, ишемических и реперфузионных поражениях органов [78, 122, 179].

Широкое участие свободно-радикальных процессов в патогенезе различных патологических состояний, затрагивающих все без исключения органы и системы, ставит вопрос о необходимости профилактики и коррекции таких нарушений фармакологическими средствами. В этих условиях для поддержания гомеостаза патогенетически оправданным является применение препаратов-антиоксидантов, способных тем или иным способом предотвращать избыточный синтез свободно-радикальных интермедиатов, снижать чрезмерную интенсивность СРО, а также способствовать повышению активности эндогенной антиоксидантной системы [58, 79,89,179,184,185].

Учитывая роль свободно-радикального окисления в развитии воспалительных заболеваний и противовоспалительные свойства извлечений из листьев Грушанковых, мы рискнули предположить, что фармакологическая активность последних может быть обусловлена влиянием на процессы свободно-радикального окисления.

Цель исследования. Расширить фармакологическую характеристику и установить возможные механизмы действия водных и спиртовых извлечений из листьев растений семейства Грушанковых (Pyrolaceae): зимолюбки зонтичной — Chimaphyla umbellate (L.) Barton, ортилии однобокой — Orthilia secunda (L.) House, и грушанки круглолистной — Pyrola rotundifolia L.

Задачи исследования:

1. Исследовать влияние отваров и настоек зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной на процессы свободно-радикального окисления в эксперименте in vitro.

2. Разработать экспериментальную модель активации свободно-радикального окисления на подопытных животных.

3. Изучить изменения показателей оксидантного и антиокси-дантного статуса у интактных животных и на фоне экспериментального воспаления.

4. Исследовать влияние длительного введения водных и спиртовых извлечений из листьев зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной на изменения показателей оксидантного и антиоксидантного статуса у крыс на фоне экспериментальной активации свободно-радикального окисления.

5. Выявить извлечения с наибольшей антиоксидантной активностью.

Научная новизна. Впервые было проведено определение про-оксидантной и антиоксидантной активности препаратов из листьев зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной как в эксперименте in vitro, так и у подопытных животных на фоне экспериментальной активации свободно-радикального окисления. Установлены антиоксидантные свойства ряда использованных извлечений, выявлены препараты, обладающие наибольшей активностью.

Практическая значимость. Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать отвары и настойки зимолюбки, ортилии и грушанки для клинических испытаний в качестве эффективных антиоксидантных средств. Изученные растения могут служить основой для создания новых препаратов, применяемых в клинике внутренних болезней для лечения воспалительных заболеваний.

Полученные результаты расширяют знания относительно анти-оксидантной активности флавоноидсодержащих растений, увеличивая возможности фитотерапии.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Водные и спиртовые извлечения из листьев зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной оказывают выраженное (хотя и разнонаправленное) влияние на процессы свободно-радикального окисления в условиях in vitro.

2. В экспериментах на крысах разработана новая адекватная экспериментальная модель активации свободно-радикального окисления.

3. На фоне экспериментального воспаления отмечается значительная динамика показателей оксидантного и антиоксидант-ного статуса подопытных животных.

4. Длительное введение водных и спиртовых извлечений из листьев изученных растений оказывает благоприятное влияние на течение экспериментального оксидативного стресса.

5. В условиях длительного применения наибольшую антиоксидантную активность проявляют отвары зимолюбки.

Апробация материалов диссертаци: Материалы диссертации доложены на XII съезде физиологического общества им. И. П. Павлова (г. Санкт-Петербург, 2004 г.), на конференции, посвященной 50-летию АГМУ (г. Барнаул, 2004 г.), на Всероссийской научно-практической конференции «Болезни почек: эпидемиология, диагностика, лечение» '(г. Кызыл, 2004 г.), на VI городской конференции «Молодежь — Барнаулу» (г. Барнаул, 2004 г.), на совместной научно-практической конференции АГМУ и фармацевтической компании «Эвалар» (г. Бийск, 2004 г.), на VI конгрессе молодых ученых и специалистов (г. Томск, 2005 г.), на Всероссийской научно-практической конференции (г. Новосибирск, 2005 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 167 страницах машинописного текста, иллюстрирована 42 рисунками, тремя таблицами, состоит из введения, списка условных сокращений, 3 глав, заключения, выводов, списка цитируемой литературы, в котором приведено 186 источников, из них 124 — иностранных авторов.

ВЫВОДЫ.

1. Водные и спиртовые извлечения из листьев зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной оказывают выраженное влияние на процессы свободно-радикального окисления, моделируемые in vitro. Более выраженное воздействие на процессы пероксидации in vitro оказывают отвары Грушанковых, среди которых максимальный антиоксидантный эффект выявлен у отваров зимолюбки.

2. Для спиртовых извлечений из листьев Грушанковых наравне с антиоксидантной активностью in vitro характерны значительные прооксидантные свойства.

3. Длительное введение водных и спиртовых извлечений из листьев Грушанковых оказывает благоприятное влияние на течение моделируемого оксидативного стресса у животных с экспериментальным воспалением.

4. Максимальное снижение содержания свободно-радикальных прооксидантов в плазме крови крыс на фоне экспериментального воспаления происходит в условиях длительного введения отваров зимолюбки зонтичной. Отвары грушанки проявляют выраженные свойства прооксидантов.

5. Для настоек Грушанковых наравне с антиоксидантным действием установлена некоторая прооксидантная активность, обусловленная присутствием в качестве экстрагента этилового спирта. При этом настойка ортилии на 70° этаноле делает наибольший вклад в повышение уровня свободно-радикальных продуктов в крови.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

В настоящее время общепризнанным является широкое участие процессов свободно-радикального окисления в развитии различных патологических состояний, в частности заболеваний, имеющих воспалительную компоненту. Принимая во внимание ключевую роль свободно-радикальных интермедиатов в прямом или косвенном повреждении всех без исключения органов и систем организма, патогенетически оправданным является применение с целью профилактики и лечения воспалительных заболеваний препаратов из группы антиоксидантов. Несмотря на длительный исторический период изучения проблематики свободно-радикального окисления и огромное количество исследовательских работ, список препаратов, обладающих антиоксидантным действием, в частности препаратов растительного происхождения, весьма ограничен, а потому вопрос поиска новых антиоксидантных средств и внедрения их в практику является чрезвычайно актуальным.

В последние годы пристальное внимание уделяется изучению препаратов из растений — продуцентов биофлавоноидов. Существует масса экспериментальных данных, доказывающих противо-микробное, противовирусное действие флавоноидов, а также их антиканцерогенную, антиагрегантную, противовоспалительную, антиаллергическую, гепатопротекторную и антиоксидантную активность.

Растения семейства Грушанковых (зимолюбка зонтичная, ор-тилия однобокая и грушанка круглолистная), произрастающие на территории Алтайского края, традиционно применяются в народной медицине при воспалительных заболеваниях мочеполовой сферы. Ранее в нашей лаборатории установлено, что содержание фенольных соединений в листьях зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной не уступает содержанию последних в листьях известного уроантисептика — толокнянки обыкновенной, а мочегонные и противовоспалительные эффекты отваров Грушанковых сопоставимы по силе с эффектами отваров толокнянки [40]. Принимая во внимание ключевое значение перок-сидации в развитии воспаления, а также установленную ранее значительную фармакологическую активность отваров Грушанковых, возник вопрос, не обусловлено ли противовоспалительное действие препаратов Грушанковых возможным их влиянием на процессы свободно-радикального окисления?

С целью предварительной оценки возможного влияния водных и спиртовых извлечений из листьев зимолюбки зонтичной, ортилии однобокой и грушанки круглолистной на процессы СРО нами были поставлены эксперименты по определению оксидантной и антиоксидантной активности препаратов в условиях in vitro. Для этого готовили отвары из листьев названных растений в соотношении 1:10 и настойки в соотношении 1:5. При этом настойки из листьев зимолюбки зонтичной и ортилии однобокой готовились на 70% спирте, из листьев грушанки круглолистной — с использованием 40% этанола. Все извлечения изготавливали согласно методикам Государственной Фармакопеи СССР (1986).

В ходе экспериментов по определению общей прооксидантной активности, базирующихся на способности препаратов стимулировать в условиях in vitro окисление ТВИН-80, установлено, что наименьшими прооксидантными свойствами обладают отвары зимолюбки зонтичной. Иными словами, в опытах in vitro отвары зимолюбки практически не обладали способностью индуцировать напрямую перекисное окисление клеточных мембран, которые имитирует ТВИН-80. Наряду с этим отвары зимолюбки проявили самую высокую антиоксидантную активность, определение которой основано на способности препаратов подавлять в условиях in vitro окисление ТВИН-80, индуцированное аскорбатом железа. Отвары же ортилии однобокой и грушанки круглолистной проявили в эксперименте довольно выраженные прооксидантные свойства на фоне более низких показателей антиоксидантной активности. Таким образом, мы заключили, что, несомненно, водные извлечения из листьев Грушанковых оказывают существенное, хотя и разнонаправленное, влияние на течение процессов свободно-радикального окисления, моделируемые in vitro. Принимая во внимание особенности модели СРО in vitro, а также высокие показатели общей антиоксидантной активности отваров зимолюбки, мы предположили, что возможно, последние обладают способностью напрямую улавливать свободные радикалы и, тем самым, подавлять процесс пероксидации, то есть, выступать в роли прямых ан-тиоксидантов.

При установлении возможного влияния спиртовых извлечений из листьев Грушанковых на процессы свободно-радикального окисления in vitro, а также для адекватного сравнения выраженности их оксидантных и антиоксидантных свойств с эффектами отваров необходимо было принять во внимание то, что при изготовлении настоек из листьев исследуемых растений используется спирт в концентрации 40° (настойки грушанки) и 70° (настойки зимолюбки и ортилии). Перед нами стоял вопрос: может ли этиловый спирт, присутствующий в настойках Грушанковых оказывать сколько-нибудь значимое влияние на процессы СРО in vitro и, как следствие, модулировать оксидантные и антиоксидантные свойства Грушанковых?

В ходе определения возможного влияния 40° и 70° этанола на процессы пероксидации в условиях in vitro установлено, что оба разведения этилового спирта обладают низкой прооксидантной и антиоксидантной активностью. Однако, при этом, в отличие от 40° этанола, вероятно в силу более высокой концентрации, 70° спирт обладает более значительной оксидантной активностью. Этот факт, необходимо принимать во внимание при оценке эффектов настоек из растений, изготовленных на 70° этаноле. Можно было ожидать, что последний будет выступать не только в роли экстра-гента, но и в качестве агента, потенцирующего прооксидантные свойства настоек Грушанковых.

В результате эксперимента по установлению возможного влияния спиртовых извлечений Грушанковых на СРО in vitro установлено, что настойки ортилии, изготовленные на 70° спирте, обладают наименьшей прооксидантной способностью по сравнению с настойками зимолюбки и грушанки. Причем способность настойки ортилии индуцировать пероксидацию ТВИН-80 была существенно ниже, чем у отваров той же ортилии. Однако, наравне со снижением оксидантной активности снижается и антиоксидантная активность настойки ортилии. Возможно, благодаря введению 70° этанола в изготовление настойки из ортилии извлекается меньше водорастворимых прооксидантов и веществ с антирадикальным действием, чем при изготовлении отваров, что закономерно приводит к некоторому угасанию ее эффектов. Подобная картина наблюдается у настойки зимолюбки, у которой антиоксидантная активность почти в 2 раза ниже, чем у отваров этого растения. При этом существенно усиливаются оксидантные эффекты. Возможно, в случае зимолюбки, присутствие 70° спирта не только обусловливает меньшее содержание водорастворимых антиоксидантов в настойке, но и приводит к потенцированию ее оксидантных эффектов по сравнению с отваром. Настойка же грушанки на 40° этаноле проявила четко выраженные свойства прооксиданта. Причем, ок-сидантные эффекты настойки грушанки сопоставимы по силе с таковым у отваров грушанки на фоне снижающейся до минимума антиоксидантной активности. Учитывая, что 40° этанол не влияет на СРО in vitro, как показано нами ранее, мы предположили, что введение 40° этанола при изготовлении настойки грушанки существенно снижает антиоксидантную активность последней по сравнению с отваром и наделяет ее исключительно свойствами прооксиданта.

Таким образом, суммируя предварительные данные, полученные нами в ходе эксперимента in vitro, мы заключили, что водные извлечения из листьев Грушанковых обладают более выраженным влиянием на процессы СРО, чем спиртовые. Причем среди них наибольшей активностью обладают отвары зимолюбки зонтичной, которые, возможно, выступают в роли «ловушек» для свободных радикалов, и, тем самым, способны прямо подавлять процесс пе-роксидации. Среди исследуемых настоек наибольшей активностью in vitro обладают настойки ортилии, изготовленные на 70° этаноле и проявляющие наименьшие прооксидантные эффекты по сравнению с настойками зимолюбки и грушанки. У настойки же грушанки выявлены выраженные прооксидантные свойства.

Учитывая данные, полученные в ходе предварительного анализа оксидантных и антиоксидантных эффектов водных и спиртовых извлечений из листьев Грушанковых in vitro, мы предположили, что препараты Грушанковых могут влиять на процессы СРО и в условиях организма. Для установления возможности этого влияния нами была разработана экспериментальная модель активации СРО у белых беспородных крыс обоего пола массой 200−250 г. С целью активации СРО была избрана модель острого воспаления, индуцированного у крыс. В качестве модели воспаления использовали методику образования формалинового отека обеих задних лап животных. Через 1, 2, 3, 5 суток после субплантарных инъекций раствора формалина определяли показатели оксидантной (ТБРП и ОПА) активности плазмы и антиоксидантной (КАТ, СОД, ГПО, ОАА) активности. Оказалось, что уже в первые сутки после инъекции флогистика значительно возрастает содержание свободно-радикальных прооксидантов и продуктов пероксидации в плазме крови животных, свидетельствующих о взрыве реакций СРО и ок-сидативном стрессе. В последующие сутки на фоне всевозрастающей концентрации прооксидантов отмечается значительное снижение ТБРП. Рискнем предположить, что, возможно, подобное поведение ТБРП и ОПА обусловлено активацией неких протектив-ных факторов антиоксидантной системы организма, направленных, прежде всего, на «оборону» клеточных мембран против свободных радикалов. В то время как иные факторы антиоксидантной защиты, напрямую «улавливающие» радикалы, еще не активировались или активировались в недостаточной степени. В последующие сутки вовлекаются все возможные факторы антирадикальной защиты, что приводит к значительному снижению ТБРП и ОПА до значений, присущих здоровым животным.

Параллельно на фоне экспериментального воспаления отмечается значительная динамика показателей активности антиокси-дантных ферментов крови крыс. Уже в первые сутки экспериментального отека в ответ на рост концентрации прооксидантов в крови крыс значительно активизируется фермент каталаза, в то время как СОД и ГПО проявляют менее лабильный характер. Вероятно, одной из причин столь «отсроченного» вступления этих энзимов в борьбу с радикалами может быть необходимость достижения некой пороговой концентрации последних. Таким образом, мы заключили, что именно каталаза — энзим первой линии антиоксидантной защиты, к которому позднее последовательно подключаются ГПО и СОД. Кроме того, динамика каталазы на фоне развития оксидативного стресса имеет постепенный характер, в отличие от СОД и ГПО. Так, для СОД характерен довольно длительный латентный период индукции, сменяющийся резким взлетом активности, совпадающий с третьими сутками эксперимента, после чего активность фермента поддерживается (даже на фоне низкой концентрации прооксидантов) на высоком уровне. Для индукции же ГПО требуется меньше времени, чем в случае с СОД, однако и активность фермента угасает гораздо быстрее. Вероятно, последнее обусловлено быстрым истощением глутатиона, играющего ключевую роль в глутатионпероксидазной системе. Таким образом, максимальная активация антиоксидантной системы организма крыс приходится на третьи сутки экспериментального воспаления и совпадает с пиком воспалительной реакции.

На пятые сутки экспериментального воспаления отмечается значительное снижение всех антиоксидантных показателей, обусловленное, вероятно, снижением в крови концентрации прооксидантов. Это свидетельствует о «затухании» свободно-радикальных реакций и, как следствие, об окончании воспалительного процесса. Таким образом, можно сделать вывод, что на фоне экспериментального формалинового воспаления наблюдается резкая активация процессов свободно-радикального окисления, а пиком экспериментального воспаления следует считать третьи сутки формалинового отека.

В результате экспериментов на подопытных животных с экспериментальным воспалением, предварительно получавших водные и спиртовые извлечения Грушанковых, установлено, что наибольшее влияние на процессы СРО оказывают водные извлечения Грушанковых. Причем, наибольшей активностью обладают отвары зимолюбки зонтичной. Так, на фоне экспериментального формалинового отека отвары зимолюбки снижают содержание свободных радикалов более чем в 3,5 раза. Этот факт подтвердил наши ожидания предполагаемого механизма действия отваров зимолюбки. Таким образом, можно сделать вывод, что водные извлечения зимолюбки зонтичной оказывают самое непосредственное влияние на процессы пероксидации, причем, прежде всего, выступая в роли прямых антиоксидантов. Иными словами, отвары зимолюбки способны напрямую уничтожать свободные радикалы, практически без помощи «внутренних» факторов антиоксидантной системы организма. Это не только приводит к быстрому «угасанию» оксида-, тивного стресса, но и препятствует излишней активации дорогостоящих для организма антиоксидантных энзимов.

В отличие от отваров, настойка зимолюбки на 70° этаноле проявила меньшую способность непосредственно подавлять СРО. Содержание прооксидантов на фоне длительного введения настойки зимолюбки снижается в меньшей степени, чем на фоне введения отваров зимолюбки. Последнее, вероятно, обусловлено присутствием в настойке 70° этанола, проявляющего свойства прооксидан-та. Однако это компенсируется более высокой активностью антиоксидантных энзимов. Кроме того, учитывая довольно высокий антиоксидантный статус животных, получавших настойку зимо-. любки, по сравнению с крысами, получавшими отвары зимолюбки, можно сделать вывод, что спиртовые извлечения из листьев зимолюбки сочетают в себе свойства не только прямых антиоксидан-тов, но и антиоксидантов, косвенно ингибирующих СРО, посредством стимуляции антиоксидантных факторов организма.

Подобно отварам зимолюбки, длительное введение отваров ортилии однобокой вызывает значительное снижение показателей оксидантного статуса. Так, у животных, получавших отвары ортилии, содержание прооксидантов в плазме крови снижалось почти в 2 раза, что, в свою очередь, указывает на способность отваров ортилии проявлять прямые антиоксидантные свойства. При этом, однако, у животных отмечается значительное повышение общего ан-тиоксидантного статуса на фоне довольно низкой активности антиоксидантных энзимов. Это позволило нам сделать вывод, что наряду со способностью выступать в роли «ловушек» для свободных радикалов, отвары ортилии стимулируют некоторые факторы антиоксидантной защиты организма, нами не определявшиеся. Вероятно, отвары ортилии, в отличие от отваров зимолюбки, проявляют и прямое, и косвенное воздействие на течение СРО у подопытных животных.

Для настойки ортилии, изготовленной на 70° этаноле, также характерна способность снижать активность ферментов антиоксидантной защиты каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы. При этом общий антиоксидантный статус крыс, получавших спиртовое извлечение ортилии, так же, как и в случае с ее водными извлечениями, остается на высоком уровне. Так что, можно предположить, что подобно отварам, настойка ортилии обладает способностью стимулировать некие другие антиоксидантные факторы организма, кроме, определяемых нами энзимов, и, тем самым, подавлять течение оксидативного стресса. Однако, на фоне введения настойки ортилии отмечается довольно высокая концентрация радикальных прооксидантов. Последнее, вероятно, обусловлено присутствием 70° спирта, который, как указано ранее, обладает прооксидантным действием, а потому нивелирует анти-оксидантные эффекты ортилии.

В отличие от отваров зимолюбки и ортилии, на фоне длительного введения отваров грушанки в крови подопытных животных значительно возрастает содержание прооксидантов. Вероятно, отвары грушанки не обладают способностью прямо «улавливать» свободные-радикалы, либо содержат наравне с антиоксидантами, вещества прооксидантного характера, противодействующие антирадикальным эффектам грушанки. Причем последнее предположение выглядит более убедительно, поскольку недавно в нашей лаборатории установлено, что из всех изучаемых препаратов Грушанковых, только отвары грушанки круглолистной содержат кофейную кислоту [15]. Между тем, давно известно, что при окислении фенольных кислот образуется значительное количество супероксида, запускающего дальнейшее образование других более токсичных радикалов [1]. Возможно, именно присутствие кофейной кислоты и определяет некоторые прооксидантные свойства отваров грушанки, а также довольно высокие концентрации свободно-радикальных интермедиатов в крови животных. Кроме того, с этой позиции можно объяснить низкую активность каталазы и глутати-онпероксидазы на фоне высокого антиоксидантного статуса животных. Возможно, длительное введение отваров грушанки приводит к значительной «перегрузке» ферментных систем организма и истощению запасов каталазы и глутатиона. Однако, несмотря на присутствие довольно выраженных прооксидантных эффектов, грушанка, по всей вероятности, стимулирует ряд факторов антиоксидантной системы организма ферментной или неферментной природы, что и объясняет высокую антиоксидантную активность крови подопытных животных.

В результате эксперимента по выявлению возможного влияния на процессы СРО длительного введения настойки грушанки круглолистной на 40° этаноле, установлено, что спиртовые извлечения грушанки обладают гораздо меньшей прооксидантной активностью, нежели отвары. По характеру проявляемых эффектов, настойка грушанки имеет значительные сходства с настойкой зимолюбки зонтичной. В отличие от отваров, настойка грушанки значительно снижает содержание прооксидантов в крови животных. При этом активность антиоксидантных ферментов сопоставима с показателями в норме. Этот факт, вероятно, обусловлен, присутствием 40° спирта. Возможно, в процессе приготовления спиртового извлечения в настойку извлекается меньшее количество водорастворимых прооксидантов, а потому не столь существенно их влияние на буферную емкость ферментных систем, в связи с чем не происходит их истощения. Следовательно, можно предположить, что в сравнении с отварами грушанки, проявляющими значительный прооксидантный характер, настойка грушанки сочетает в себе свойства как прямых, так и непрямых антиоксидантов.

Принимая во внимание результаты экспериментов на подопытных животных с экспериментальной активацией реакций СРО, данные ранних экспериментов по изучению фармакологических эффектов отваров Грушанковых вполне объяснимы. Так, ранее показано, что отвары из листьев грушанки круглолистной обладают более выраженной по сравнению с отварами зимолюбки и ортилии противовоспалительной активностью [41]. Вероятно, это обусловлено фитохимическими особенностями грушанки круглолистной, в водных извлечениях которой методом высокоскоростной газожидкостной хроматографии установлено наибольшее содержание арбутина (90,89 мг%), аскорбиновой кислоты (2,07 мг%), рутина (36,6 мг%), кверцетина (0,2 мг%), а также оксикоричных кислот по сравнению с отварами других Грушанковых [15]. Известно, что эти вещества являются мощными природными антиоксидантами и определяют значительные антиоксидантные свойства растений, их содержащих. В то же время, как выяснилось, длительное профилактическое введение отваров грушанки подопытным животными на фоне экспериментальной активации СРО приводит к значительному росту антиоксидантного статуса животных на фоне низкой активности антиоксидантных ферментов (каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы). Учитывая, что антиокси-дантный статус организма включает в себя различные факторы антирадикальной защиты, и ферментной и неферментной природы, можно сделать вывод, что отвары грушанки способствуют угнетению воспалительной реакции, в том числе, и за счет увеличения в организме содержания неферментных антиоксидантов, в частности, фенольных соединений.