Тонкослойная хроматография (ТСХ)
Метод основан на способности веществ с разной силой связываться с сорбентом. При этом разделение происходит в очень тонком слое сорбента, нанесенного на нейтральный носитель. В качестве сорбента чаще всего используют силикагель, оксид алюминия или микрокристаллическую целлюлозу, в качестве подложки — стекло, алюминиевую фольгу или полимерную пленку [см.: 19, с. 50].
Достоинствами данного метода являются: относительная дешевизна, простота в исполнении, быстрота разделения. При проведении ТСХ не требуется такого сложного и дорогостоящего оборудования, как для некоторых других видов хроматографии.
Метод служит не только для качественного определения состава исследуемых смесей, но и для количественного определения веществ. Содержание компонентов в пробе может быть определено как по площади пятна, так и после элюирования веществ из области пятна.
Идентификация индивидуального вещества проводится по значению Rf (коэффициент распределения), специфичной флуоресценции или после специфичного окрашивания.
Коэффициент распределения — это величина, характеризующая степень связывания компонентов разделяемой смеси с носителем. Экспериментально ее вычисляют как отношение расстояния от линии старта до середины пятна исследуемого вещества к расстоянию, пройденному фронтом растворителя. Этот коэффициент индивидуален для каждого вещества в определенной системе растворителей и для конкретного сорбента. Он может зависеть от температуры и влажности воздуха, поэтому ориентироваться только на Rf при идентификации веществ нельзя. Обязательным является использование вещества (так называемого свидетеля) и сравнение Rf полученного для свидетеля опытным путем, с табличным. При необходимости для веществ, определяемых на хроматограмме, вносят поправки.
При применении пластин, обработанных флуоресцентным красителем, вещества, которые не флуоресцируют в ультрафиолетовом (УФ) свете, могут быть обнаружены в виде темных пятен на светящемся фоне.
Важным усовершенствованием, повышающим эффективность анализа хроматограмм, является применение дензитометров — сканеров ТСХ-пластин, позволяющих превратить изображение хроматограммы в кривую на графике, что позволяет более точно проводить количественную оценку исследуемых компонентов.
