Объекты исследования
Микробиологические объекты:
- — изоляты клубеньковых бактерий R. trifolii 1, 3−9, выделенные из клубеньков клевера лугового;
- — штаммы клубеньковых бактерий R. trifolii 4, R. trifolii 9, отобранные как наиболее эффективные.
Растительные объекты:
— клевер луговой Tr. pratense, раннеспелый сорт «МАРС».
Среды и растворы
Выращивание растений клевера и инокуляцию его семян проводили в условиях светокультуры. Для изучения и оценки эффективности предпосевной инокуляции семян клевера лугового выделенными изолятами клубеньковых бактерий и отбора наиболее эффективных использовали среду Jensen:
CaHPO4 1,0 г.
K2HPO4 0,2 г.
MgSO4 • 7H2O 0,2 г.
NaCl 0,2 г.
FeCl3 0,1 г.
H2O 1,0 л рН 7,0.
Агар 7−15 г (добавляется после установления рН) Микроэлементы:
B (0,005% раствор):
маточный раствор — 0,28 г (H3BO3) + 100 мл (H2O).
рабочий раствор — 2 мл маточного раствора + 100 мл (H2O).
Zn (0,005% раствор):
маточный раствор — 0,223 г (ZnSO4 • 7 H2О) + 50 мл (H2O).
рабочий раствор — 2 мл маточного раствора + 100 мл (H2O).
Cu (0,005% раствор):
маточный раствор — 0,25 г (CuSO4) + 100 мл (H2O).
рабочий раствор — 1 мл маточного раствора + 100 мл (H2O).
Mo (0,005% раствор):
маточный раствор — 0,26 г (NH4)6 Mo7O24 • 4 H2O)+ 50 мл (H2O).
рабочий раствор — 2 мл маточного раствора + 50 мл (H2O).
Mn (0,005% раствор):
маточный раствор — 0,223 г (MnSO4 • 5 H2O) + 100 мл (H2O).
рабочий раствор — 2 мл маточного расвора + 100 мл (H2O).
Добавляем все по 1 мл/л (Jensen, 1992).
Для изучения физиолого-биохимических свойств и хранения использовали жидкую агаризованную бобовую среду:
Горох отварной — 100 г/л.
Необходимо отварить 100 г гороха в течение 45 минут в 1000 мл воды, процедить и довести до метки.
Сахар — 10 г/л.
Сахароза — 10 г/л.
После стерилизации рН довести до значения 7,2 — 7,4.
Для хранения клубеньковых бактерий использовали агаризованную бобовую среду:
Горох отварной — 100 г/л;
сахар — 10 г/л;
сахароза — 10 г/л;
агар-агар — 20 г/л.
Горох отваривали в течение 45 минут в 1 литре воды, процеживали, доводили до метки.
После стерилизации рН довести до значения 7,2 — 7,4 (Хотянович и др., 1980).
Для отбора оптимальной питательной среды и изучения закономерностей роста клубеньковых бактерий клевера в периодических условиях культивирования использовали жидкую бобовую, кукурузно-мелассную и заводскую питательные среды: бобовая, %: гороховый отвар — 10,0; сахар пищевой — 2,0; pH 7,2 — 7,4 и заводская, %: гороховый экстракт — 10,0; дрожжевой экстракт — 0,05; сахароза — 0,5; (NH4)2SO4 — 0,05; K2HPO4 • 3H2O — 0,025; MgSO4•7H2O — 0,020 (Хотянович и др., 1980) и опытной, кукурузно-мелассная: кукурузный экстракт — 1,0; меласса — 0,5; (NH4)3PO4 — 0,05; pH — 7.
