Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Анализ полиморфизма гена BoLA-DRB3 методом ПЦР-ПДРФ

РефератПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Параметры амплификации указаны в таблице 3. ПЦР проводили в многоканальном амплификаторе «Терцик» фирмы «ДНК-технология», Россия. Таблица 2 — Состав реакционной смеси для амплификации фрагментов BoLA-DRB3. Таблица 3 — Параметры амплификации фрагмента экзона 2 гена BoLA-DRB3. Таблица 4 — Приготовление 1.5% агарозного геля. Денатурация ДНК Отжиг праймеров Синтез ДНК. Первоначальная денатурация ДНК… Читать ещё >

Анализ полиморфизма гена BoLA-DRB3 методом ПЦР-ПДРФ (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Амплификация фрагмента гена BoLA-DRB3 методом ПЦР

Для последующего анализа методом гнездовой ПЦР амплифицировали участок экзона два гена BoLA-DRB3 размером 284 п.н. (281 п.н. для аллелей с делецией).

Таблица 2 — Состав реакционной смеси для амплификации фрагментов BoLA-DRB3.

H2O.

HLO-30.

(5'-3': tcctctctctgcagcacatttcc) (20пМ).

HLO-32.

(5'-3' tcgccgctgcacagtgaaactctc) (20пМ).

MgCl2 (25мМ).

дНТФ (2,5 мМ).

Tris-HCL (pH 8,8-буфер).

ДНК-полимераза (5 ед./мкл).

19,5 мкл.

1,2 мкл.

1,2 мкл.

1,2 мкл.

0,5 мкл.

3 мкл.

0,4 мкл.

Конечный объем реакционной смеси составлял 27 мкл. Количество реакционной смеси определялось с учетом положительного и отрицательного контроля.

Параметры амплификации указаны в таблице 3. ПЦР проводили в многоканальном амплификаторе «Терцик» фирмы «ДНК-технология», Россия.

Таблица 3 — Параметры амплификации фрагмента экзона 2 гена BoLA-DRB3.

Стадия ПЦР.

Количество циклов.

Температура, оС.

Длительность стадии.

Первоначальная денатурация ДНК.

3 мин.

Денатурация ДНК Отжиг праймеров Синтез ДНК.

  • 94
  • 65
  • 72
  • 30 сек
  • 30 сек
  • 30 сек

Заключительный синтез.

5 мин.

Для контроля прохождения реакции проводили электрофорез в 1,5 процентном агарозном геле для оценки качества и концентрации полученного фрагмента.

Таблица 4 — Приготовление 1.5% агарозного геля.

Гель.

Анализируемый фрагмент.

Название анализа.

Компоненты.

1.5% гель.

600−700 пн.

Контроль прохождения ПЦР.

  • — Агароза — 1.5 г
  • — Доводим до 100мл 1% TBE-буфером
  • — Бромистый этидий — 5мкл

На гель наносили 5 мкл образца.

Показать весь текст
Заполнить форму текущей работой