Лекция №5 гнильцовые и вирусные болезни пчел

• 1. Европейский гнилец.
• 2. Парагнилец.
• 3. Мешотчатый расплод.
• 1. Европейский гнилец (гнилец открытого расплода, доброкачественный гнилец, кислый гнилец) — это инфекционная болезнь чаще открытого расплода" сопровождающаяся массовой гибелью личинок 3−4-дневного возраста (иногда и старше), уменьшением количества пчел и ослаблением пчелиной семьи вплоть до ее гибели.

Этиология — один или несколько видов микробов:

Melissococcus pluton (Str. pluton) — самый главный, грамположительные, ланцетовидные, вытянутой формы клетки. В культурах и тканях образуют капсулу, окружающую несколько кокков, красятся всеми анилиновыми красителями.

Enterococcus faecalis (Str. apis).

Вас. laterosporus (Вас. оrpheus) и Вас. аlvei — образуют споры внутри клетки, а снаружи — праспоральное тело.

Некоторые авторы считают основным Melissococcus pluton, остальные — сопутствующие. Другие считают;, что под названием европейский гнилец несколько заболеваний, схожих по клиническим признакам.

Устойчивость. Melissococcus pluton в трупиках личинок, корочках, при комнатной температуре сохраняется до 3 лет. На пасеке летом на ульях возбудитель жизнеспособен 50—55 дней.

Споры бацилл обладают высокой жизнеспособностью. В воске при автоклавировании при 1 атм (120 °С) споры погибают через 2 ч.

Источники заражения — больные и погибшие личинки. Разносчиками являются пчелы-кормилицы, а между семьями — воровки, трутни блуждающие.

Распространению способствует подсиливание семей. Передается через мед, пергу, инвентарь, пчеловода. Поэтому необходимо сначала осматривать здоровые семьи.

Признаки болезни очень характерные и позволяют довольно точно поставить диагноз.

• 1. Время заболевания: во второй половине мая — начале июня, а в запущенных случаях признаки болезни появляются в первой половине мая.
• 2. Поражается открытый расплод 3−4-дневного возраста" так как личинка до 3^м дневного возраста получает пчелиное молочко, которое обладает бактерицидными свойствами. Но в запущенных случаях может поражается и печатный расплод.
• 3. Погибшие личинки вначале тусклые, вздутые, желтеют, а затем становятся коричневыми.
• 4. Гнилостная масса имеет запах при первичном гнильце — кислых яблок, а в запущенных случаях — запах пота ног или запах гниющего мяса.
• 5. Гнилостная масса имеет консистенцию плохо замешанного теста и не тянется (за спичкой, пинцетом).
• 6. Высыхая, гнилостная масса превращается в корочку, располагающуюся в ячейке характерно: на нижней стенке ячейки или в нижнем задаем углу ячейки, и легко извлекается.

Различают явную и скрытую формы болезни. При скрытой форме гибели личинок и ослаблении пчелиных семей (обычно в сильных) не наблюдается, но возбудители могут быть в организме рабочих пчел, маток, в личинках, меде, перге.

Явная форма болезни характеризуется главным образом поражением личинок. В зависимости от количества погибших личинок различают 3 степени поражения пчелиной семьи: слабую, среднюю и сильную.

При слабой 5−10 больных личинок, при средней —11−20, при сильной — более 30 пораженных личинок.

Болезнь может длиться годами и вызвать гибель всех пчелиных семей.

Пораженные пчелосемьи, зимуют тяжело. Болезнь взрослых особей протекает в скрытой форме, слабо работоспособны, угнетены, безразличны к охране гнезда. Поэтому такие семьи чаще подвергаются воровству.

Первые признаки болезни чаще протекают незамеченными, характеризуются повышенной подвижностью личинок, изменением их расположения в ячейках: они вытягиваются вдоль или поперек ячеек, тело теряет округлую форму, перламутровый блеск. Крышечки при этом потемневшие, но не втянуты внутрь; редко когда продырявлены.

Заключительный диагноз ставят на основании эпизоотологических дан-ных (в 5−7 км вокруг), клинических признаков и бактериологического исследования. В лабораторию доставляют патологический материал — сот целиком или кусок 10×15 см не менее, чем с 10 погибшими личинками с каждой стороны. Из патматериала делают мазки, окрашивают по Грамму и микроскопируют. Затем проводят выделение чистой культуры и идентификацию.

Если остались только корочки, профламбированным пинцетом извлекают 10−15 корочек, растирают в стерильном физрастворе и исследуют как обычно.

В мазках обнаруживают отдельные скопления клеток овальной формы, в виде цепочек, может быть несколько клеток в общей капсуле.

Культивирование проводят обязательно вначале в анаэробных условиях. Для этого используют среды Бейли и Черепова (картофельная).

На плотных средах Melissococcus pluton образует мелкие, гладкие, круглые, бесцветные (жемчужно-белые) колонии диаметром 1 —1,6 мм.

Enterococcus faecalis хорошо растет на обычных питательных средах — МПА и МПБ при 37° С, но лучше на глюкозо-кровяном агаре. Через 24 ч на МПА он образует мелкие прозрачные бесцветные колонии или сплошное наложение, легко снимающееся бактериологической петлей.

Вас. аlvei. Через 1 сутки на МПА вырастают крупные грязно-желтого цвета шероховатые (К-форма) колонии, обладает гемолитическими свойствами. Вас. аlvei образует споры как в патматериале, так и на средах, которые характерно расположены — в виде частокола.

Вас. laterosporus выделяют из патологического материала и культивируют в лабораторных условиях на обычных средах, но лучше бацилла растет на печеночном и глюкозо-кровяном агаре.

Диагноз считается положительным, если выделяется хотя бы 1 возбудитель.

Иммунитет у пчел неспецифический, существуют семьи, имеющие врожденную устойчивость к европейскому гнильцу.

Лечение. Проводят в первой половине лета.

Помнить — даже без лечения к концу июня или в начале июля болезнь затухает из-за уменьшения расплода.

Для лечения используют антибиотики и сульфаниламиды, к которым чувствительны выделенные микроорганизмы, в виде лечебных сиропов.

Вначале устанавливают силу семьи для определения дозы — 100−200 мл на улочку, Дозы на 1 л сиропа запишите на практических занятиях, Препараты: оксивит, эндоформ, бактопол (полоски из картона).

Учитывать, что норсульфазол и сульфантрол в отношении Melissococcus pluton не активны.

Эффективны нитрофураны, особенно фуразолидон и нитрофуразон в концентрации 3 г/л.

Возможно применение препаратов путем опудривания 3 г тетрациклина смешивают со 100 г сахарной пудры или крахмала и опудривают рамки 10 г/рамку, избегая попадания на открытый расплод, Обработки повторяют через 4−5 дней до исчезновения признаков.

С лечебной и профилактической целью можно обрабатывать семьи слабой и средней степени поражения молочной сывороткой. Ей опрыскивают все рамки по 15−20 мл на рамку без стряхивания пчел. Через 7−10 дней при обнаружении признаков болезни обработку повторяют. При наличии корочек не эффективна, Дезинфекция — как при американском гнильце.

Кроме этого гнезда сокращают, утепляют, обеспечивают доброкачественными кормами. Слабые — объединяют, а маток заменяют на здоровых.

Профилактика. Неспецифической профилактикой предусматриваются следующие мероприятия.

• 1. Содержать сильные пчелиные семьи, своевременно выбраковывать соты с черными стенками, испорченным кормом, загрязненные испражнениями пчел; ежегодно обновлять до 30% гнездовых соторамок за сезон.
• 2. Проводить механическую чистку и дезинфекцию пустых ульев. Не передавать с пасеки на пасеку ульи и инвентарь без обеззараживания. Подмор и мусор сжигать, заменять отсыревшее утепление.
• 3. При весенней ревизии в гнезде оставлять не менее 10 кг меда и 1−2 рамки с пергой. Расширять гнезда светлыми сотами, а при наличии интенсивного медосбора — вощиной, предупреждать перегрев ульев, не допускать близкородственного разведения, вести отбор высокопродуктивных, устойчивых к заболеваниям, хорошо переносящих зиму пчел.
• 4. Подкормку сахарным сиропом рекомендуется проводить вместе с лекарственными препаратами в половинной дозе.
• 5. Металлический инвентарь необходимо прокаливать на огне или кипятить в течение 30 мин. Остальное кипятить в течение 30 мин или 10% формалина, или в 4%-ный раствор параформа на 4 ч, или в 1%-ный раствор активированного хлорамина на 2 ч с последующей промывкой и просушкой.
• 2. ПАРАГНИЛЕЦ

Парагнилец (ложный гнилец) — это инфекционная болезнь пчелиных семей, характеризующаяся поражением открытого и печатного расплода. Возбудитель — Вас. рагааlvei.

Отличаются от Вас. аlvei следующими признаками:

• 1 Вас. рагааlvei обладает резко выраженными антагонистическими свойствами и подавляет рост Вас. аlvei.
• 2. Имеют разное антигенное строение,
• 3. Вас. рагааlvei. обладает ползучим ростом.
• 4. Вас. рагааlvei не обладает гемолитическими свойствами.

Источники и пути заражения такие же, как и при других гнильцах,.

Морфология возбудителя. Вас. рагааlvei — грамположительная, подвижная, спорообразующая (размер спор 1,8—2,3×0,9—1,3 мкм), не образующая капсул палочка размером 2,2—5,7×0,5—0,8 мкм., факультативный аэроб. Она плохо растет на обычных питательных средах, хорошо — на глюкозно-кровяном агаре Цейслера и среде Томашеца.

На поверхности плотных сред образуются шероховатые колонии К-форма с синеватым металлическим отливом.

Споры бацилл высокоустойчивы и сохраняют жизнеспособность в перге 3 года, медогонке — до 300 дней, в меде и спецодежде — 1 год. При кипячении воды споры погибают через 38—50 мин.

Вас. рагааlvei в споровой форме патогенна для личинок пчел открытого и закрытого расплода.

Диагностика. Диагноз ставят на основании характерных клинических признаков болезни и результатов лабораторных исследований. Признаки болезни сходны с хроническими формами других гнильцов.

Обращают внимание на печатный расплод, так как открытый пчелы быстро вычищают.

Крышечки ячеек выпуклы, затем выпуклость исчезает. Вместо того чтобы распечатывать ячейки, пчелы, наоборот, нередко утолщают крышечки, которые постепенно становятся темными, впалыми, жирными, конусообразно вдавленными. Отверстия в крышечках, как правило, отсутствуют, что является дифференцирующим признаком от американского гнильца.

1. Пораженные куколки недоразвиты, темные, легко разрываются, кишечник переполнен мутноватой жидкостью желтовато-серого цвета, в которой содержится большое количество возбудителя.

2. В запечатанных ячейках погибшие личинки становятся тестообразными, тягучими; высохшие корочки легко извлекаются, что свойственно европейскому гнильцу. Погибшие личинки в открытых ячейках издают слабый гнилостный запах, в закрытых — сильный.

3. При запущенном парагнильце погибшие личинки быстро высыхают, превращаясь в корочки, приобретают темную, а затем красновато-коричневую окраску.

Лабораторные исследования. В лабораторию доставляют патологический материал такой же, как при других гнильцах.

Микроскопия. При микроскопии выделенной культуры, окрашенной по Граму и 2%-ным феноловым раствором фуксина, обнаруживают палочки 2,2—5,7×0,5—0,8 мкм, грам-положительные, а также споры, характерные для параальвейной бациллы, которые мало отличимы от спор возбудителей других гнильцов. В мазках, приготовленных из молодых культур, споры отсутствуют. Проводят посев на МПА, МПБ, Цейслера, Томашеца. На плотных средах обнаруживают характерный ползучий рост.

Лечение осуществляют, как при американском гнильце. Неомицин, эритромицин, левомицетин в дозах по 400 тыс. ЕД на 1 л сахарного сиропа применяют по 100 мл на улочку через 4—7 дней до выздоровления. Рекомендуется перегон в продезинфицированные ульи на обезвреженные соты.

Меры профилактики и борьбы основаны на выполнении ветеринарно-санитарных мероприятий аналогично, как и при американском гнильце.

3. МЕШОТЧАТЫЙ РАСПЛОД Мешотчагый расплод (мешотчатая черва, мешотчатая детка, сухой гнилец, безбактериальный гнилец и др.) — это инфекционное заболевание пчелиных семей, сопровождающееся гибелью предкуколок 8−9-дневного возраста" которые приобретают форму прозрачного мешочка, наполненного жидкостью. Есть практически на каждой пасеке и ждет своего часа Возбудитель — вирус, относящийся к роду Могаtor РНК.

Эпизоотологнческие данные. Заболевание встречается везде, где имеются медоносные пчелы. Однако штаммы вирусов неидентичны по антигенной структуре.

Наиболее восприимчивы к мешотчатому расплоду личинки в возрасте 2−3 дней.

Возбудитель распространяется как и при гнильцах, особенно при пересылке пчелопакетов и пчелосемей, купле-продаже пчелиных маток, а также клещом варроа.

Часто мешотчатый расплод обнаруживается в пчелиных семьях, пораженных европейским гнильцом.

Взрослые пчелы переболевают бессимптомно, но вирус сохраняется в их организме до появления расплода.

Возбудитель относится к РНК-содержащим вирусам, имеет изометрические (сферические) частицы диаметром 30 нм.

Устойчивость. При комнатной температуре он сохраняется в меде до 1 месяца. При кипячении вирус погибает через 40 мин, устойчив к 3%-ному раствору щелочи (NаОН), но инактивируется 0,3%-ным раствором перманганата натрия.

Инкубационный период—5−6 дней.

В пораженных тканях личинки образуется пространство между покровными тканями личинки и вновь формирующимися. Это пространство по мере развития инфекционного процесса постепенно заполняется водянистой жидкостью. Клетки жирового тела увеличиваются, при этом ядра клеток приобретают неправильную форму, ткани и клетки гемолимфы постепенно распадаются, приобретая зернистость.

Признаки болезни.

Появляется болезнь в мае и июне, (совпадает со временем проявления европейского гнильца).

• 1. Соты с пораженным расплодом имеют пестрый вид (не сплошной) и разновозрастной расплод.
• 2. Больные личинки располагаются отдельными участками величиной с ладонь Крышечки (слегка потемневшие) вскрывают и обнаруживают погибших или еще живых личинок, расположенных головкой кверху,
• 3. Отверстия в крышечках округлые с ровными краями. Иногда пчелы сами удаляют крышечки — как будто поражен открытый расплод.
• 4. Личинки лежат вначале на спинке, бурого цвета, водянистые, дряблые с заостренным головным концом. Если извлечь пинцетом, имеют вид полупрозрачного мешочка, наполненного водянистой жидкостью, в нижней части жидкости — зернистость. За характерный вид пораженной личинки заболевание названо мешотчатым.
• 5. Разрушенные ткани личинок (гнилостная масса), не имеют характерного запаха, постепенно подсыхают и превращаются в корочки коричневого, черного цветаКорочки имеют вид «турецкого» башмачка, или лодочки, легко извлекаются из ячейки.

Мешотчатый расплод, протекающий одновременно с европейским гнильцом, трудно распознать, при этом течение особенно тяжелое.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков. Окончательный диагноз ставят на основании лабораторного исследования патологического материала В качестве исследуемого материала в лабораторию отправляют образец сота 10×15 см с пораженным расплодом или 30— 50 трупиков пчел в 50%-ном стерильном растворе глицерина.

Вначале исключают бактериальные инфекции, т. е. проводят микроскопию мазков, приготовленных из первичного материала, и посев на питательные среды. При отрицательных результатах исследований проводят вирусологические.

Выделение и культивирование вируса производят в культуре клеток куриных фибробластов (КФ) и на развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ).

Кроме этого для постановки диагноза используют прямой и непрямой метод иммунофлуоресценции.

При постановке диагноза необходимо исключить гнильцы, порошковидный и застуженный расплод.

Профилактика. Как при гнильцах.

Меры борьбы. При установлении диагноза на пасеке устанавливают карантин до полной ликвидации болезни. Изымают соты с большим количеством больных и погибших предкуколок, заменяя их сотами с запечатанным расплодом^ взятыми от здоровых пчелиных семей. Слабые и больные семьи объединяют, сокращают, утепляют, обеспечивают достаточным количеством полноценного углеводного и белкового корма; маток заменяют.

Ульи, вставные доски (диафрагмы), рамки и остальное тщательно очищают и обрабатывают огнем паяльной лампы до легкого побурения или дезифицируют (см. американский гнилец).

Лечение. Эндоглюкин — это ферментный препарат бактериальной эндонуклеазы, применяют в качестве противовирусного средства и стимулятора развития пчелиных семей. Применяют трехкратно по 5000 БД на семью с интервалом 4—9 дней весной и однократно осенью.

Гипериммунную сыворотку крови кролика, лошади применяют в дозе 80 мл на 1 л сахарного сиропа, который скармливают весной или летом 3 раза через 5 дней по 150—200 мл на улочку.

Карантин снимают через год после проведенных мероприятий при отсутствии признаков болезни.