Технологическая схема производства лактобактерина

Описание технологической схемы производства лактобактерина

Др.1 Подготовка производственных помещений, персонала, оборудования, инвентаря и первичной упаковки.

Ежедневная уборка. На всех производственных участках 1 раз в смену проводят влажную уборку помещений, оборудования и трубопроводов для предотвращения появления постороннего микрофлоры. Деятельность, подсобных и бытовых помещений проводят уборщицы, а уборка рабочих мест — сами рабочие. При проведении влажной уборки допускают использование следующих дезинфицирующих растворов: — раствор натрия гидроксида с массовой долей 2,0%; - Раствор натрия хлорида с массовой долей 0,25%.

Генеральная уборка. Генеральная уборка помещений проводится один раз в неделю или по требованию бактериолога. Уборка производится с помощью раствора натрия гидроксида с массовой долей 2,0% или раствора натрия хлорида с массовой долей 0,25%. Потолок, стены, окна, перегородки и оборудование обрабатывают путем распыления дезраствора. По окончании орошения, лишний дезраствор удаляют путем протирания обработанных поверхностей чистой салфеткой. Уборке подлежат потолка, пола, стены, подоконники, поверхности всего оборудования, все производственные мебель.

Подготовка оборудования для производства С целью предупреждения загрязнения технологического оборудования и коммуникаций посторонней микрофлорой и поддержки санитарно-гигиенического состояния на производстве проводят регулярное мытье и дезинфекцию оборудования, коммуникаций, производственных помещений по разработанному графику.

Мойки оборудования и коммуникаций. Обработку оборудования и коммуникаций делают моющими растворами. (Раствором азотной кислоты с массовой долей 1 — 1,5%, раствором каустической соды с массовой долей 2,5 — 3%). Дезинфекцию оборудования и коммуникаций проводят раствором «Криодезу» с массовой долей 0,2 — 1,5% только после тщательной обработки моющими растворами.

Др.2 Приготовление растворов криопротекторов ТП.3 Получение питательных сред, растворов криопротекторов.

Для культивирования штамма Lactobacillus acidophilus, как и для выращивания других штаммов пробиотиков, используют различные питательные среды, к конструированию которых предъявляют следующие требования:

• -предварительный выбор питательных субстратов с учетом критериев биологической ценности, доступности и экономичности;
• -балансирование питательных сред;
• -получение питательных основ и оценка их эффективности на модели регламентированных питательных сред;
• -разработка и оценка способов получения питательных основ с учетом критерия технологичности и трудоемкости.

Для культивирования штамма Lactobacillus acidophilus используются питательную среду Блаурокка и Козеиново-дрожжевое среду. Для приготовления питательной среды Блаурокка используют экстракт печени, полученный путем экстракции печени очищенной водой (при соотношении 1: 1) с последующим кипячением в течение одного часа и стерилизацией при температуре (120 ± 1)? в течение 20 минут при давлении 0,1МПа.До экстракта печени прибавляют пептон (1,0%), хлорид натрия (0,5%), лактозу (1,0%), агар-агар (2,0%), цистеин (0,01%); устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации значение рН составляло (6,8 ± 0,3); кипятят, фильтруют и стерилизуют при 112? 30 минут при тиску0,05 МПа. Поживне среду хранят при температуре (6 ± 2)? не больше двух месяцев.

Приготовление Козеиново-дрожжевого среды: ферментативный гидролизат козеин, разведенный очищенной водой до содержания аминного азота (150 ± 10) мг% смешивают с дрожжевым аутолизатом (соотношение 1: 2); добавляют натрия хлорид (0,5%); устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации значение рН составляло (7,0 ± 0,2); кипятят, добавляют лактозу, агар-агар и цистеин. Сумиш фильтруют и стерилизуют пр. температуре 119−121? и давления 0,11МПа течение 30 минут.

ТП.4 Получение инокулята штамма продуцента.

ТП.4.1 Первая генерация Флакон или ампулу с лиофилизированным штаммом Lactobacillus acidophilus раскрывают в асептических условиях, вносят 2−5 мл питательной среды Блаурокка. Разводят содержимое флакона и осуществляют пересел в колбу, в которой содержится среду Блаурокка. Посев инкубируют в термостате при температуре (38 ± 0,5)? в течение 24−48 часов. На всех этапах промышленного процесса проводят контроль стерильности материала, используя питательные среды для контроля бактерий и грибов.

ТП.4.2 Вторая генерация Выращенную культуру штамма продуцента Lactobacillus acidophilus из колб пересевают в другую колбу, которая содержат 500−550 мл питательной среды Блаурокка. Посивы второй генерации инкубируют при температуре (38 ± 0,5)? течение 20−24 часов.

ТП.4.3 Третья генерация Далее, убедившись в чистоте культуры, проводят пересел штамма из колб в в баллон, содержащий 9−9,5 л питательной среды Блаурокка. Посивы инкубируют при температуре (38 ± 0,5)? в течение 24−48 часов.

ТП.5 Производственная генерация Производственную культуру выращивают методом глубинного культивирования в реакторах. Производственную культуру выращивают методом глубинного культивирования в реакторах. Реакторы должны быть оснащены паровой рубашкой .В реакторе проводят стерилизацию питательной среды. Биоректор оборудован устройствами для измерения и регуляции температуры, рН среды, концентрации растворимого кисло рода в культуральной жидкости. Помимо этого, биореактор должен быть обеспечен специальными опциями для подачи питательной среды и углеводов, введение инокулята, подачи растворов, например аммиака и пробоотборником. Для перемешивания биомассы реактор должен быть обязательно снабжен механической мешалкой. Тщательное перемешивание культуры необходимо, во-первых, для равномерной доставки питательных веществ к клеткам и, во-вторых, для предотвращения накопления токсических продуктов метаболизма в каком-то одном отсеке реактора. Помимо того реактор должен быть обеспечен опцией, которая позволит разливать препарат во флаконы или контейнеры для проведения лиофилизации.

В асептических условиях в реактор, содержащий 160 литров козеиново-дрожжевого среды, переносят микробной суспензию (20% от объема среды).

ТП.5 Добавление криопротектора: сахароза, желатин В реактор с смесью питательной среды и инокулята добавляют 8−9 литров 40% стерильного раствора лактози. Выращивание биомассы в реакторе проводят при температуре (38 ± 0,5)? в течение 72 времен при периодическом перемешивании. Пид культивировании производят корректировку величины рН с помощью 10% раствора аммиака до значения рН (6,6 ± 0,5) .Стабилизация роста величины рН свидетельствует о прекращении роста бактерий.

Проводят добавления к жидкому полуфабрикату криопротекторов. В реактор последовательно добавляют защитную среду (сахарозу-5−10%, желатин -3%, раствор лактозы 5−7%) и др. Вместимость реактора перемешивают и проводят взятие образца для проверки подлинности и чистоты культуры.

В контрольной пробе определяют:

• -Стерильностьотсутствие Посторонней микрофлоры (грибов);
• -количество Микробных клеток — в одной дозе препарата должно содержаться не менее 107 микробных клеток;
• -Микроскопическое исследование;

ТП.6 Разлив в контейнеры Разлив препарата в контейнеры проводят при непрерывной перемешивании. В процессе разлива проводится контроль на наличие по посторонней микрофлоры.

ТП.7 Лиофилизация и герметизация препарата Контейнеры с препаратом загружают в аппарат для лиофилизации и доводят температуру продукта до минус 50−60? .Замораживают препарат в течение 48 часов при указанной температуры. Час и режим сушки определяется в зависимости от марки оборудования, толщины слоя биомассы, используемых криопротекторив и других факторов.

ТП.8 Маркировка и упаковка препарата ТП.9 Контроль качества готового препарата.

• -аномальная Токсичность — контроль проводят пероральным вводом белым мышам 1 дозы препарата;
• — Стерильность — отсутствие посторонней микрофлоры (грибов);
• -количество Микробных клеток в одной дозе — в одной дозе препарата должно содержаться не менее 107 микробных клеток;
• -Антогонистическую активность штаммов пробиотика;

Микроскопическое исследование [8].