Техника реакции. 
Диагностика беременности кобыл

Мочу пропускают через бумажный фильтр, подкисляют уксусной кислотой до слабокислой реакции (лакмус). Для освобождения от токсичных веществ к моче прибавляют равное количество эфира и тщательно взбалтывают. Эфир сливают, а мочу оставляют стоять открытой до испарения остатков эфира (пока не останется слабый запах). Обработка эфиром повышает активность фолликулина.

Лабораторными животными служат овариоэктомированные белые мыши (кастраты), выдержанные в течение двух недель после операции и проверенные на отсутствие течки. Можно использовать инфантильных самок мышей; у каждой из них окрасить шерсть на условном месте и в течение трех дней два раза в день вводить под кожу:

к, а с т р, а т, а м.

• 1-й мыши — 0,3 цельной мочи
• 2-й «- 0,2 ««
• 3-й «- 0,1 ««
• 4-й «- 0,1 мочи, разбавленной водой в 2 раза инфантильным
• 1-й мыши — 0,2 цельной мочи
• 2-й «- 0,1 ««
• 3-й «- 0,1 ««
• 4-й «- 0,1 мочи, разбавленной водой в 2 раза

Если есть основание предполагать более поздние сроки жеребости, когда фолликулина в моче много, можно всем мышам вводить мочу, разбавленную воду в 2−3 раза.

Через 100 часов после первой инъекции (лучше с 70−80-го часа) из влагалищной слизи каждой мыши три раза в день изготовляют мазки. Для получения материала и приготовления мазков употребляют платиновые петельки. Прокаленную на спиртовке петельку погружают в дистиллированную воду и вместе с захваченной ею каплей воды вводят во влагалище. Для извлечения слизи петли проводят по слизистой оболочке легким скоблящим движением. Той же петлей слизь размазывают на поверхности предметного стекла. На одно стекло можно нанести 3-ж мазков. Каждый мазок помечают восковым карандашом тем номером, которым обозначена мышь.

Мазок высушивают на воздухе, фиксируют спиртом и окрашивают по Романовскому или просматривают под микроскопом без окраски, в затемненном поле зрения. Наличие в мазке безъядерных клеток (чешуек), указывающих на появление течки, расценивается как положительный диагноз. В сомнительных случаях можно вскрыть 1−2 мыши. Диагноз подтверждается обнаружением матки, увеличенной под влиянием фолликулина.

Реакция Колла и Харта. Пролан появляется в крови кобыл через 30−40 дней после начала жеребости в количестве 144 МЕ* в литре (в среднем). К 40−50-му дню жеребости количество пролана достигает 26 тысяч, к 90-му дню — 30−40 тысяч МЕ. С 90-го дня содержание в крови пролана начинает уменьшаться.

Практически выявление пролана в сыворотке крови кобыл может быть осуществлено в период между 40−120 днями жеребости (с половины второго до пятого месяца).

Тестобъектом служат инфантильные мыши (весом 6−8 г) или крысы (весом 20−28 г).

Из вены кобылы, подлежащей исследованию, берут около 50 мл крови и ставят в прохладное место для отделения сыворотки. Последнюю вводят под кожу трем мышам или крысам в дозах (мл):

• 1-й мыши… 0,5
• 2-й «. … 0,3
• 3-й «. … 0,1
• 1-й крысе… 1,0
• 2-й «. … 0,5
• 3-й «. … 0,3

Всего делают шесть инъекций в течение трех суток (по две инъекции в сутки).

На 4−5-й день после начала инъекций от подопытных животных 2−3 раза в день готовят мазки из влагалищной слизи и исследуют под микроскопом. Если кобыла была жеребой, то под влиянием имеющегося в крови пролана у инфантильных мышей или крыс происходит половое созревание — развитие фолликулов. С созреванием фолликулов образующийся в них фолликулин вызывает течку, и мазок состоит из безъядерных клеток (чешуек). Если картина не ясна, через 100 часов после начала инъекции мышей убивают. При наличии у кобылы жеребости у мышей удается установить увеличение рогов матки, а в яичниках — зрелые фолликулы, желтые тела или фолликулы, заполненные кровью.

Решающее значение имеют изменения яичников и матки, поэтому для суждения о реакции всех или некоторых мышей убивают или вскрывают.

Реакция Фридмана и Шнейдера. Объектом служат крольчихи весом 900−1200 г, то есть достигшие половой зрелости. Самки должны содержаться изолировано от самцов, а еще лучше и от самок.

Десять миллилитров сыворотки крови исследуемой кобылы вводят в ушную вену крольчихи. Через 36−48 часов после инъекции у крольчихи производят лапаротомию и осмотр яичников. После инъекции сыворотки на месте разорвавшихся фолликулов или обнаруживают фолликулы, полость которых заполнена кровью.

После осмотра яичников рану брюшной стенки зашивают. Через 2−3 недели эту же крольчиху можно использовать вторично (иногда одно животное удается использовать 5−6 раз). При повторных инъекциях следует иметь в виду возможность анафилаксии.

К преимуществам этой реакции относится укорочение срока ее до 48 часов, вместо 100 часов при методике Колла и Харта дней проверить повторно.

Ультразвук можно использовать для определения числа плодов, контроля их состояния, а также для предсказания даты родов. Поскольку частота пульса плодов постепенно снижается (с 200−240 ударов в минуту за 60−80 дней до родов до 120−160, когда до ягнения остается 20 дней), то можно определить время, оставшееся до ягнения, руководствуясь формулой: y=0,7x-88, где y — теоретический срок до родов в днях; x — частота пульса плода в минуту.

Принцип действия некоторых ультразвуковых приборов основан на том, что ткани с различной плотностью по-разному поглощают и отражают ультразвуковую энергию, что позволяет установить наличие в матке жидкости. При этом точность определения суягности в разные сроки составляет: до 30-го дня суягности — 38%, между 31-м и 60-м днем — 67, между 61-м и 90-м днем — 98 и между 91-м и 120-м днем — 96%.

Большинство приборов портативные, поэтому их можно использовать в любых животноводческих помещениях. К недостаткам метода относится сравнительно поздний срок определения суягности. Из-за высокой стоимости аппаратуры метод применяется только в научно-исследовательской работе.

Лабораторные методы. Одним из наиболее простых лабораторных методов является исследование цервикальной слизи. Пробы слизи у овцы берут с помощью металлического стержня, один конец которого изогнут в виде петли, и трубчатого зеркала, через которое стержень продвигают в наружное отверстие шейки матки. Приклеившиеся к стержню пробы слизи переносят в пробирку, содержащую 3−5 мл дистиллированной воды, и нагревают над пламенем спиртовки до кипения. После 1−2-минутного кипячения оценивают реакцию.

Положительной (наличие беременности) считается реакция в тех пробах, в которых слизь, несмотря на сильное встряхивание, не растворяется и окрашивается в бело-серый цвет, сходный с цветом коагулированного белка куриного яйца, причем вода, находящаяся в пробирке, остается прозрачной.

Отрицательной (отсутствие беременности) считается реакция, если слизь при нагревании растворяется или распадается на мелкие хлопья, а вода в пробирке мутнеет.

Число правильных определений у овец, слизь которых дает положительную реакцию, составляет 93−95%, а у животных с отрицательной реакцией — 62−89%. У овец со сроком суягности 3−6 недель число правильных определений составляет 62%, а в 7−22 недели — 100%.

Перспективным методом считается определенное суягности на ранних стадиях по концентрации прогестерона в крои или молоке. Пробы крови или молока для исследования берут у овец на 17−20-й день после осеменения. Содержание прогестерона в плазме крови (определения белков) должно составлять у суягных не менее 0,5 нг/мл (чаще оно бывает 1,5−3 нг/мл), а у несуягных — менее 0,5 нг/мл. С помощью этого метода можно исключить наличие суягности с точностью до 78% (ошибки могут возникать вследствие гибели зародыша на ранних стадиях развития — скрытый аборт).