Π Π°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ° ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ° Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ
ΠΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½Π°Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ «ΡΠ»ΠΈΠΏΠ°Π½ΠΈΡ» Π΄Π²ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ, ΠΎΠ΄Π½Π° ΠΈΠ· ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ Π½Π΅ΠΏΠΎΠ΄Π²ΠΈΠΆΠ½ΠΎ Π·Π°ΠΊΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½Π° Π½Π° ΠΏΠΎΠ΄Π»ΠΎΠΆΠΊΠ΅, ΠΈ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠΌ ΠΠΠ-ΡΠΈΠΏΠ°. Π§Π΅ΠΌ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡΡΡ Π² ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»ΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌ ΡΠΈΠΏΠ°, ΡΠ΅ΠΌ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ ΠΈΡ Π±ΡΠ΄Π΅Ρ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ Ρ ΡΠΈΠΏΠΎΠΌ, ΠΈ ΡΠ΅ΠΌ Π²ΡΡΠ΅ Π±ΡΠ΄Π΅Ρ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π°, Π²ΠΎΡΠΏΡΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°Π΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΡ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°. ΠΠ° ΡΠΈΡ. 9 ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΡΡΠ΅ΠΉΠΊΠΈ ΠΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ… Π§ΠΈΡΠ°ΡΡ Π΅ΡΡ >
Π Π°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ° ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ° Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ (ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ°Ρ, ΠΊΡΡΡΠΎΠ²Π°Ρ, Π΄ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½Π°Ρ)
Π€Π΅Π΄Π΅ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ Π°Π³Π΅Π½ΡΡΡΠ²ΠΎ ΠΏΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΠ΅Π½Π·Π΅Π½ΡΠΊΠΈΠΉ Π³ΠΎΡΡΠ΄Π°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠΉ ΠΏΠ΅Π΄Π°Π³ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΡΠ½ΠΈΠ²Π΅ΡΡΠΈΡΠ΅Ρ ΠΈΠΌ. Π.Π. ΠΠ΅Π»ΠΈΠ½ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ | ||
Π€Π°ΠΊΡΠ»ΡΡΠ΅Ρ ΠΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ-Π³Π΅ΠΎΠ³ΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ | ΠΠ°ΡΠ΅Π΄ΡΠ° ΠΠΈΠΎΡ ΠΈΠΌΠΈΠΈ | |
ΠΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌΠ½Π°Ρ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ° Π Π°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ° ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ° Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ | ||
Π‘ΡΡΠ΄Π΅Π½Ρ _____________________________________________ ΠΠ΅Π½Π΅Π΄ΠΈΠΊΡΠΎΠ² Π.Π. ΠΏΠΎΠ΄ΠΏΠΈΡΡ | ||
Π ΡΠΊΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡΠ΅Π»Ρ _________________________________________ ΠΠ΅Π»Π΅ΡΠΊΠΈΠΉ Π.Π. ΠΏΠΎΠ΄ΠΏΠΈΡΡ Π Π·Π°ΡΠΈΡΠ΅ Π΄ΠΎΠΏΡΡΡΠΈΡΡ. ΠΡΠΎΡΠΎΠΊΠΎΠ» β ΠΎΡ «____» ___________200_Π³. | ||
ΠΠ°Π². ΠΊΠ°ΡΠ΅Π΄ΡΠΎΠΉ _________________________________________ ΠΠ΅Π½Π³ΠΈΠ½ Π.Π’. ΠΏΠΎΠ΄ΠΏΠΈΡΡ | ||
ΠΠ΅Π½Π·Π°, 2008 Π³. | ||
ΠΠ»Π°Π²Π° 1. ΠΠ±Π·ΠΎΡ Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ
1.1 Real Time ΠΠ¦Π
1.1.1 ΠΠΈΠ΄Ρ RealTime ΠΠ¦Π
1.1.2 ΠΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΡ
1.2 ΠΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΈΠΏΡ
1.2.1. ΠΠΠ-ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΈΠΏΡ
1.2.2. ΠΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ-ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π° ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ
1.2.3. ΠΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΠΠ-ΡΠΈΠΏΠΎΠ²
ΠΠ»Π°Π²Π° 2. ΠΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π» ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ
2.1 ΠΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠΎΠ²
2.2 ΠΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡΠ° ΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΈ ΡΠΌΠΈΡΡΠΈΠΈ SYBR green
2.3 ΠΡΠΎΡΠΎΠΊΠΎΠ»Ρ ΠΠ¦Π
2.3.1 ΠΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠ° ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΠΈΡΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π½Π°Π±ΠΎΡΠ° (ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ°SYB green)
2.3.2 ΠΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠ° ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π±Π΅Π· ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠΈΡΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π½Π°Π±ΠΎΡΠ° (ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ°SYBgreen)
2.3.3 ΠΡΠΎΡΠΎΠΊΠΎΠ» ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ TaqMan
2.4 ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ Π² ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°Ρ ΠΠ¦Π -ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ
2.5 Π‘ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ° Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ² Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°
ΠΠ»Π°Π²Π° 3. Π Π΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΈ ΠΎΠ±ΡΡΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠ΅
3.1 ΠΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΎΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ
3.2 ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΠ¦Π Π² ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π² ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠ°Ρ
3.3 ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΠ¦Π Π² ΠΏΠ»Π°ΡΡΠΈΠΊΠΎΠ²ΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠ°Ρ
3.4 ΠΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠ° ΠΠ¦Π Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ Ρ ΠΎΡΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠΌΠΈ
3.5 ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ Π² ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°Ρ ΠΠ¦Π -ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ
ΠΡΠ²ΠΎΠ΄Ρ
ΠΠ°ΠΊΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅
Π‘ Π²ΠΎΠ·Π½ΠΈΠΊΠ½ΠΎΠ²Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ Π½ΠΎΠ²ΡΡ Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠΉ Π² Π½Π°ΡΠΊΠ΅, Π² ΠΊΠ»ΠΈΠ½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠ΅ ΡΡΠΏΠ΅ΡΠ½ΠΎ Π½Π°ΡΠ°Π»ΠΈ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ ΠΠΠ-ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΉ ΡΡΠ΅Π΄ΠΈ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ , Π±Π΅Π·ΡΡΠ»ΠΎΠ²Π½ΠΎ, ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΎΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΡΠΎ Π·Π°Π½ΠΈΠΌΠ°ΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΠ½Π°Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ (ΠΠ¦Π ). ΠΠ΅ ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ ΠΌΠΎΡΠ½ΡΠΌ ΠΈ ΡΠ½ΠΈΠΊΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌ ΠΏΠΎ ΡΠ²ΠΎΠΈΠΌ Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΡΡΠΈΠΊΠ°ΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΈΠΏΠΎΠ². ΠΡΠΎΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ ΠΏΠΎΡΠ²ΠΈΠ»ΡΡ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π½Π΅Π΄Π°Π²Π½ΠΎ, Π½ΠΎ ΡΠΆΠ΅ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ΡΡΡ Π² ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΊΠ΅.
Π ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ Π²ΡΠ΅Ρ ΠΠΠ-ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΉ, Π»Π΅ΠΆΠ°Ρ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΈ ΡΠ΅Π³ΠΈΡΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ.
ΠΠΏΡΠΈΠΌΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΎΠ² ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΡ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΡΡ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, ΡΠ½ΠΈΠ·ΠΈΡΡ ΡΡΠΎΠΈΠΌΠΎΡΡΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠΈΡΡ Π΅Π³ΠΎ ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ. ΠΠ΄Π½ΠΈΠΌ ΠΈΠ· Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΡ ΠΏΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ Π²ΠΎΠΏΡΠΎΡΠ° ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π² Π΅Π΄ΠΈΠ½ΡΡ ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ ΡΡ Π΅ΠΌΡ ΡΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΠΎΠ΄Ρ ΠΎΠ΄ΠΎΠ² Π² Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΠΠ.
Π Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅Π΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΡΡ ΡΡ Π΅ΠΌ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡΡΡ Π½Π° ΡΡΠ°Π΄ΠΈΠΈ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠΈ Π² ΡΡΠ΄Π΅ Π·Π°ΡΡΠ±Π΅ΠΆΠ½ΡΡ Π»Π°Π±ΠΎΡΠ°ΡΠΎΡΠΈΠΉ. ΠΠ°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π²Π΅ΡΠΎΡΡΠ½ΡΠΌ Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π±Π»ΠΈΠΆΠ°ΠΉΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΈΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½Π°Ρ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠ° Π½Π°ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ Π·Π°Π±ΠΎΠ»Π΅Π²Π°Π½ΠΈΠΉ ΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΈΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ, ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π½Π° Π²ΡΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ ΠΠΠ ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°.
Π¦Π΅Π»Ρ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ — ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΠΏΡΡΠΊΠ° ΡΠΎΠ·Π΄Π°ΡΡ ΠΌΠΎΠ΄Π΅Π»Ρ Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ Π·Π° ΡΡΠ΅Ρ ΠΎΠ±ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ² Π΄Π²ΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ² — ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π²ΠΈΠ΄Π° ΠΠ¦Π — Real Time ΠΈ Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠΏΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°, Π² ΡΠ²ΡΠ·ΠΈ Ρ ΡΠ΅ΠΌ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Ρ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠ΅ Π·Π°Π΄Π°ΡΠΈ: ΠΈΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠΎΠ² Ρ Π»ΡΠ½ΠΊΠ°ΠΌΠΈ, ΠΎΠ±ΡΠΈΠΉ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π½Π΅ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°ΡΡ 2ΠΌΠΊΠ» (Π² Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅Π΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°ΡΠΊΠΈ Ρ Π»ΡΠ½ΠΊΠ°ΠΌΠΈ, ΡΠ°ΡΡΡΠΈΡΠ°Π½Π½ΡΠ΅ Π½Π° 200 ΠΌΠΊΠ»), ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π²ΠΎΠ΄ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π² ΡΠΎΡΠΌΠ°Ρ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΈΠΏΠ° ΠΈ ΠΎΡΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ° ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ ΠΠ¦Π Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ΅ (ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΠ¦Π ΡΡΠ°Π²ΡΡ Π² ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ΅ 20−30 ΠΌΠΊΠ», Π² ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠ΅ Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠΏΠ° ΠΎΠ±ΡΠΈΠΉ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π½Π΅ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°ΡΡ 1−2 ΠΌΠΊΠ»).
Π Π°Π±ΠΎΡΠ° Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½ΡΠ»Π°ΡΡ Π½Π° Π±Π°Π·Π΅ Π»Π°Π±ΠΎΡΠ°ΡΠΎΡΠΈΠΈ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΠΆΠ΅Π½Π΅ΡΠΈΠΈ ΠΠ½ΡΡΠΈΡΡΡΠ° Π’Π΅ΠΎΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΈ ΠΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΈΠΎΡΠΈΠ·ΠΈΠΊΠΈ Π ΠΠ, Π³. ΠΡΡΠΈΠ½ΠΎ.
ΠΠ»Π°Π²Π° 1. ΠΠΠΠΠ ΠΠΠ’ΠΠ ΠΠ’Π£Π Π«
1.1. RealTime ΠΠ¦Π
ΠΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π±ΡΠ» ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½ ΠΡΡΠΈ ΠΡΠ»Π»ΠΈΡΠΎΠΌ Π² 1983 Π³. ΠΠ΅ΡΠ²ΡΠ΅ ΡΠΎΠΎΠ±ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎ ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΌΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΠΏΠΎΡΠ²ΠΈΠ»ΠΈΡΡ Π² 1985 Π³. 18] Π‘ ΡΠ΅Ρ ΠΏΠΎΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΏΡΠ±Π»ΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΉ, Π³Π΄Π΅ ΠΠ¦Π ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ· ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ² ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ, Π·Π°Π½ΠΈΠΌΠ°Π΅Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎ ΠΈΠ· ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΡ ΠΌΠ΅ΡΡ Π½Π°ΡΡΠ΄Ρ Ρ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ, Π² ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡΡΡΡ Π°Π²ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ (ΡΠΈΠΊΠ²Π΅Π½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΠΠ) ΠΈ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠ΅ ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ. 7]Π‘ΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±ΠΎΠ² ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΡΡ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ Π² ΠΏΡΠΎΠ±Π΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΠ¦Π , Π½ΠΎ Π²ΡΠ΅ ΠΎΠ½ΠΈ ΡΡΠ΅Π±ΡΡΡ Π΄ΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΡΡΠ΄ΠΎΠ΅ΠΌΠΊΠΈΡ ΡΡΠ°ΠΏΠΎΠ² ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ, ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Π½ΡΡ Ρ ΠΏΡΠ΅Π΄Π²Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΈΡΡΠΎΠ²ΠΊΠΎΠΉ Π²ΡΠ΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠ±Ρ ΠΠΠ, ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ Π² Ρ ΠΎΠ΄Π΅ ΠΠ¦Π Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΠΊΠΎΠ½ΠΎΠ², ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ, Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π»Ρ ΠΏΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΠΈ ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΏΡΠ΅ΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ² [12,15]. Π’Π°ΠΊΠΆΠ΅, Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΠ΅ Π΄ΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ°ΠΏΠΎΠ² ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ²Π°Π΅Ρ Π²Π΅ΡΠΎΡΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΎΡΠΈΠ±ΠΊΠΈ ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠΎΠ²Π΅ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ°.
ΠΠ° ΡΠ΅Π³ΠΎΠ΄Π½Ρ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄, Π»ΠΈΡΠ΅Π½Π½ΡΠΉ Π²ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΡΠΈΡΠ»Π΅Π½Π½ΡΡ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ² — ΡΡΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ ΠΠ¦Π Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ (Real-Time PCR). Π‘ΡΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° Π·Π°ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π² ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΈΠ±ΠΎΡΠ° Π±Π΅Π· ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π°. Π’Π°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΠΊΠ° Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½Π° Ρ ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΡΠΌ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ Π΄Π°Π΅Ρ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡΡ Π΅Ρ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ.
ΠΡΠ»ΠΈΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΡΠ΅ΡΡΠ°ΠΌΠΈ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π°, Π² ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΎΡ ΠΊΠ»Π°ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΠ¦Π , ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΠΠ/Π ΠΠ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ Π°Π³Π΅Π½ΡΠΎΠ² Π² ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Π΅, ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π΄ΠΈΠΈ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π°, ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ ΡΡΡΠΎΠ³ΠΈΠ΅ ΡΡΠ΅Π±ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΊ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΠ¦Π -Π»Π°Π±ΠΎΡΠ°ΡΠΎΡΠΈΠΈ ΠΈ Π°Π²ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΡΠ΅Π³ΠΈΡΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΏΡΠ΅ΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ².
ΠΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π΄ΠΈΠΈ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π° ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠΌΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠΈΡΠΊ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΌΠΈΠ½Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΠ¦Π ΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ ΡΠ΅Π·ΠΊΠΎ ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠΈΡΡ ΡΠΈΡΠ»ΠΎ Π»ΠΎΠΆΠ½ΠΎΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ². ΠΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΡΠ΅Π³ΠΈΡΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π½Π΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Π² ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅ ΠΠ¦Π , Π²Π΅ΡΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡΡ Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ-Π΄Π²ΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠ½Π°ΡΠ°Ρ Π»Π°Π±ΠΎΡΠ°ΡΠΎΡΠΈΠΈ ΠΈ Π½Π΅Ρ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ Π² ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ ΠΏΠΎΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ Π΄Π»Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ.
ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ² Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡΡ Π°Π²ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΏΡΠ΅ΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ² ΠΈ ΡΠ½ΠΈΠΌΠ°Π΅Ρ ΠΏΡΠΎΠ±Π»Π΅ΠΌΡ ΡΡΠ±ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΊΠΈ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π³ΡΠ°ΠΌΠΌ.
1.1.1. ΠΠΈΠ΄Ρ RealTime ΠΠ¦Π
ΠΠ»Ρ Π²ΡΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π² ΡΠ΅ΠΆΠΈΠΌΠ΅ ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠ΅ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ°ΡΠΏΡΠΎΡΡΡΠ°Π½Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ΄Ρ ΠΎΠ΄Ρ.
ΠΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ 5' ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΊΠΈ (TaqMan Assay).
ΠΠ°Π½Π½Π°Ρ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½Π° Π½Π° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ 5'-ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ. Π ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΡΡ ΠΠΠ-Π·ΠΎΠ½Π΄Ρ, Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π² ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π²Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½Π°Ρ ΠΌΠ΅ΡΠΊΠ° Π² 5'-ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΈ Π³Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π² 3'-ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½Π°Ρ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ° Π² 3'-ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ. ΠΡΠΈ Π·ΠΎΠ½Π΄Ρ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ ΠΌΠ΅ΡΡΠ° ΠΏΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΠΈ Π²Π½ΡΡΡΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΠΈ. ΠΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ ΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠ°Π΅Ρ ΠΈΡΠΏΡΡΠΊΠ°Π΅ΠΌΠΎΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΈΠ·Π»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅, Π° ΡΠΎΡΡΠ°ΡΠ½Π°Ρ Π³ΡΡΠΏΠΏΠ° Π² 3'-ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ Π±Π»ΠΎΠΊΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ (Π ΠΈΡ. 1) Π Ρ ΠΎΠ΄Π΅ ΠΠ¦Π Π²ΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΡΡΠ°Π΄ΠΈΠΈ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΠΠ-Π·ΠΎΠ½Π΄Π° ΠΊ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠΈ ΠΠΠ, ΠΏΡΠΈΡΠ΅ΠΌ ΡΠ΅ΠΌ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΡΡΡ Π² Ρ ΠΎΠ΄Π΅ ΠΠ¦Π , ΡΠ΅ΠΌ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² ΡΠ²ΡΠΆΠ΅ΡΡΡ Ρ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠΌΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΠΊΠΎΠ½Π°ΠΌΠΈ. ΠΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΡΡΠ°Π΄ΠΈΠΈ ΡΠ»ΠΎΠ½Π³Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π° ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΡ ΠΠΠ ΠΈ ΠΏΡΠΈ Π΄ΠΎΡΡΠΈΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ Π·ΠΎΠ½Π΄Π° Π½Π°ΡΠΈΠ½Π°Π΅Ρ Π΅Π³ΠΎ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»ΡΡΡ Π±Π»Π°Π³ΠΎΠ΄Π°ΡΡ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΡ 5'-ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π½ΠΎΠΉ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΊΠΈ ΠΈ Π³Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ, ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ²Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ. ΠΡΠ΅Π²ΠΈΠ΄Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΠ΅ΠΌ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΠΊΠΎΠ½ΠΎΠ² Π±ΡΠ»ΠΎ Π½Π°ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½ΠΎ Π² Ρ ΠΎΠ΄Π΅ ΠΠ¦Π Π½Π° Π΄Π°Π½Π½ΡΠΉ ΠΌΠΎΠΌΠ΅Π½Ρ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ, ΡΠ΅ΠΌ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½Π΅Π΅ Π±ΡΠ΄Π΅Ρ ΡΠ²Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅[19].
Π ΠΈΡ. 1. Π‘Ρ Π΅ΠΌΠ° ΠΠ¦Π Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π·ΠΎΠ½Π΄Π° TaqMan. 7]
Π‘ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΈΠΉΠ½ΡΡ ΡΠ°Π·Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠΉ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ² ΠΠΠ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΠΈΠ»ΠΈ ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ ΠΠ¦Π Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ Π² ΠΎΠ±ΡΡΠΆΠ΄Π°Π΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠ΄Π΅Π»ΠΈ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ»Π° ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡ 0,28 Π½Π³ (ΠΏΡΠΈΠ±Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ 20 ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ) ΠΠΠ Π² ΠΏΡΠΎΠ±Π΅[8]
ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠΌΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΌΠΈ (molecular beacons).
ΠΠ°Π½Π½Π°Ρ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ° ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠ°Π΅ΡΡΡ ΠΎΡ ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΉ Π²ΡΡΠ΅ ΡΠ΅ΠΌ, ΡΡΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π·ΠΎΠ½Π΄Π° ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΡΡ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠ½ΠΎ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΠΈ, ΠΏΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² ΠΎΠ½ΠΈ ΡΡ Π»ΠΎΠΏΡΠ²Π°ΡΡΡΡ ΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡ ΡΠΏΠΈΠ»ΡΠΊΠΈ [16](Π ΠΈΡ. 2). ΠΠ½ΡΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΡ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΠΈ. ΠΡΠΈ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² Π·ΠΎΠ½Π΄Ρ, Π½Π΅ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΠ²ΡΠΈΠ΅ΡΡ ΠΊ ΠΠΠ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅, ΠΎΡΡΠ°ΡΡΡΡ Π² «ΡΡ Π»ΠΎΠΏΠ½ΡΡΠΎΠΌ» ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ, ΡΠ°ΠΊ ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ.
Π’Π΅ ΠΆΠ΅ Π·ΠΎΠ½Π΄Ρ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π°ΡΡΡΡ Π½Π° ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ, ΡΠ°Π·Π²ΠΎΡΠ°ΡΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ, ΠΈ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½Π°Ρ ΠΌΠ΅ΡΠΊΠ° ΠΈ Π³Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ ΡΠ°ΡΡ ΠΎΠ΄ΡΡΡΡ Π² ΡΠ°Π·Π½ΡΠ΅ ΡΡΠΎΡΠΎΠ½Ρ. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΠ²Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ. Π‘ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ ΠΠ¦Π Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ, ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π½Π° ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π²ΡΠΌΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΌΠΈ, ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡ Π³ΠΎΡΠ°Π·Π΄ΠΎ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡΡ ΡΠ΅ΠΌ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ° TaqMan, ΠΈ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ΠΎΡΠ½ΡΠ΅ Π·Π°ΠΌΠ΅Π½Ρ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² Π² ΠΠΠ. [8]
ΠΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ 2-Ρ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² Ρ ΡΠ΅Π·ΠΎΠ½Π°Π½ΡΠ½ΡΠΌ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡΠΎΠΌ ΡΠ½Π΅ΡΠ³ΠΈΠΈ (Fluorescent resonance energy transfer — FRET).
ΠΠ°Π½Π½ΡΠΉ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ± Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠ°Π΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡΡ, ΡΠ°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΌ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΠΊΠΎΠ½Π°ΠΌΠΈ ΡΡΠ°Π·Ρ 2-Ρ ΠΠΠ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² (Π ΠΈΡ 3). ΠΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° Π·Π°ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π² ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡΠ΅ ΡΠ½Π΅ΡΠ³ΠΈΠΈ ΠΎΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ»ΡΠΎΡΠΎΡΠΎΡΠ°, Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡΠ΅Π³ΠΎΡΡ Π½Π° 3` ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΎΠ³ΠΎ Π·ΠΎΠ½Π΄Π°, ΠΊΠΎ Π²ΡΠΎΡΠΎΠΌΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠΎΡΠΎΡΡ, Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡΠ΅ΠΌΡΡΡ Π½Π° 5` ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ Π²ΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ Π·ΠΎΠ½Π΄Π°, ΠΏΡΠΈΡΠ΅ΠΌ ΡΠ°ΡΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠΎΡΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ 1−3 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°.
Π ΠΈΡ. 3. Π‘Ρ Π΅ΠΌΠ° ΠΠ¦Π Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² FRET.
ΠΡΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΠΎΠΈΡ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² Ρ ΠΠΠ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ΠΉ ΠΈΡΠΏΡΡΠΊΠ°Π΅ΠΌΠΎΠ΅ ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΠΌ ΡΠ»ΡΠΎΡΠΎΡΠΎΡΠΎΠΌ ΠΈΠ·Π»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π° Π²ΡΠΎΡΠΎΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠΎΡΠΎΡ, Π° Π΅Π³ΠΎ ΠΈΠ·Π»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠ±ΠΎΡΠΎΠΌ. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°.
ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΠΈΡΡΡΡΠΈΡ Π°Π³Π΅Π½ΡΠΎΠ².
ΠΡΠΎΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ± Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ Π½Π° ΡΠΎΠΌ ΡΠ°ΠΊΡΠ΅, ΡΡΠΎ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ Π±ΡΠΎΠΌΠΈΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΡ ΠΈ SYBR Green I Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ ΠΏΡΠΈ ΠΈΡ Π²Π½Π΅Π΄ΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ Π² Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ (Π ΠΈΡ. 4). Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°ΡΡ Π·Π° Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. ΠΡΠ΅Π½Ρ Π²Π°ΠΆΠ½ΠΎ ΠΎΡΠΌΠ΅ΡΠΈΡΡ ΡΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΡΠ²ΡΠ·Π°Π½ΠΎ ΠΊΠ°ΠΊ Ρ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ°, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π½Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ (ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ-Π΄ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ, ΡΠΌΠ΅Ρ). ΠΠ»Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΡΡΠ΅ΠΊΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ² Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ Π΄ΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΠΊΠΎΠ½ΠΎΠ² Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΡΡΡΠΎΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ°ΠΊ Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΡΡ «ΠΊΡΠΈΠ²ΡΡ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ» .
Π ΠΈΡ. 4. Π‘Ρ Π΅ΠΌΠ° ΠΠ¦Π Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΉ.
ΠΠΎΠ΄Π²ΠΎΠ΄Ρ ΠΈΡΠΎΠ³ΠΈ, ΡΡΠΎΠΈΡ ΠΎΡΠΌΠ΅ΡΠΈΡΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅Π΅: ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΠΠ-Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² Π² ΡΠΎΠΌ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΈΠ½ΠΎΠΌ Π²Π°ΡΠΈΠ°Π½ΡΠ΅ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΡΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΌ Π² ΡΠ²Π΅ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΊ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠ°ΠΌ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΡΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΠ°Ρ ΡΡΠΎΠΈΠΌΠΎΡΡΡ, ΡΡΠΎ Π΄Π΅Π»Π°Π΅Ρ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ ΠΏΠΎ ΠΏΠΎΠ΄Π±ΠΎΡΡ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ², ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² ΠΈ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π΄ΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΡΡΠΎΡΡΠ΅ΠΉ. ΠΠΌΠ΅ΡΡΠ΅ Ρ ΡΠ΅ΠΌ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΠΈΡΡΡΡΠΈΡ Π°Π³Π΅Π½ΡΠΎΠ² ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΡΠ΅Π½Ρ ΠΏΡΠΎΡΡΡΠΌ ΠΈ Π΄Π΅ΡΠ΅Π²ΡΠΌ. ΠΡΠΏΠ°Π΄Π°Π΅Ρ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΡΡΡ ΠΏΠΎΠ΄Π±ΠΎΡΠ° ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ², Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ², ΡΠ°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ ΡΠΆΠ΅ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΠΌΠΈ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠ°ΠΌΠΈ, ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠΆΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΠ΅Π½Π°. ΠΡΠΈ ΠΎΠ±ΡΡΠΎΡΡΠ΅Π»ΡΡΡΠ²Π° Π΄Π΅Π»Π°ΡΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΠΈΡΡΡΡΠΈΡ Π°Π³Π΅Π½Π½ΡΠΎΠ² Π²Π΅ΡΡΠΌΠ° ΠΏΡΠΈΠ²Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΌ.
1.1.2 ΠΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΡ
ΠΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΠΊΡΠΈΠ²Π°Ρ. Π€Π»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΠΈ ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ, ΠΏΡΡΠΌΠΎ ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Ρ ΠΠ¦Π -ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ° — ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ. ΠΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΡ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ°ΡΡΡΡ Π² Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ ΠΎΡ ΡΠΈΠΏΠ° real-time PCR.
ΠΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΠΊΡΠΈΠ²Π°Ρ PCR Π² ΠΊΠΎΠΎΡΠ΄ΠΈΠ½Π°ΡΠ°Ρ «Π£ΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ — ΡΠΈΠΊΠ» Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ» ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΡΠΈΠ³ΠΌΠΎΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΡΠΎΡΠΌΡ (Π ΠΈΡ. 5).
Π ΠΈΡ 5. ΠΡΠΈΠΌΠ΅Ρ ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΊΡΠΈΠ²ΡΡ RealTime PCR (ΠΏΠΎ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Π°ΠΌ www.molbiol.ru).
Π Π½Π΅ΠΉ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π²ΡΠ΄Π΅Π»ΠΈΡΡ ΡΡΠΈ ΡΡΠ°Π΄ΠΈΠΈ:
1. Π‘ΡΠ°Π΄ΠΈΡ ΠΈΠ½ΠΈΡΠΈΠ°ΡΠΈΠΈ (ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° PCR-ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΡ Π΅ΡΠ΅ Π½Π΅ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ).
2. ΠΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ°Π΄ΠΈΡ (Π² ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½Π°Ρ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΎΡ ΡΠΈΠΊΠ»Π° PCR).
3. ΠΠ»Π°ΡΠΎ (ΡΡΠ°Π΄ΠΈΡ Π½Π°ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ).
ΠΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½Π°Ρ ΡΡΠ°Π΄ΠΈΡ PCR ΠΎΠΏΠΈΡΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ:
Pn = P0 * E n (1) (www.molbiol.ru),
Π³Π΄Π΅ Pn — ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ°/ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΊ ΡΠΈΠΊΠ»Ρ n, P0 — ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ», ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΠΉ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ (template), E — ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ. Π ΠΈΠ΄Π΅Π°Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ E = 2, Ρ. Π΅. Π½Π° ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΌ ΡΠΈΠΊΠ»Π΅ ΡΠ΅ΠΏΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΠ΄Π²ΠΎΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ°.
ΠΡΠΎΠ»ΠΎΠ³Π°ΡΠΈΡΠΌΠΈΡΡΠ΅ΠΌ ΠΎΠ±Π΅ ΡΠ°ΡΡΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ 1 ΠΈ ΠΏΡΠ΅ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΠΌ Π΅Π³ΠΎ ΠΊ Π²ΠΈΠ΄Ρ:
n = - (1/log E) * log P0 + log Pn/log E (2) (www.molbiol.ru)
ΠΠ°Π·ΠΎΠ²Π΅ΠΌ ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΡΠΌ ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠΌ (threshold cycle, C (T)) ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ ΡΠΈΠΊΠ» n, Π½Π° ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΌ Π΄ΠΎΡΡΠΈΠ³Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π΅ΠΊΠΈΠΉ Π·Π°Π΄Π°Π½Π½ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ — ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²Π°Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ PC (T)=const. ΠΠ»Ρ n=C (T) ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ 2 ΠΏΡΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°Π΅Ρ Π²ΠΈΠ΄:
C (T) = - (1/log E) * log P0 + log PC (T)/log E (3) (www.molbiol.ru),
Ρ.Π΅. Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π‘ (T) ΠΏΡΡΠΌΠΎ ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΡΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎ Π»ΠΎΠ³Π°ΡΠΈΡΠΌΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ° (ΠΏΠΎ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Π°ΠΌ www.molbiol.ru). Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, real-time PCR ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΠ²Π°ΡΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ° ΠΏΡΠΈ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΈ, ΡΡΠΎ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΈ Π·Π°Π΄Π°Π½Π½ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²Ρ Π΄Π»Ρ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΠΈΠ· ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΠ²Π°Π΅ΠΌΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΉ.
ΠΠ°Π·ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ. ΠΡΠΎ ΡΠΎΡ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π΄ΠΎ ΠΏΠΎΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π°. ΠΠ°ΠΊ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΠΎ, ΡΠΏΡΠ°Π²Π»ΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΡ real-time PCR ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ Π·Π°Π΄Π°ΡΡ Π±Π°Π·ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π°ΠΌΠΈ. ΠΠ΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ Π²ΡΠ±ΡΠ°ΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±, ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΌ:
1. ΠΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π΄ΠΎ ΠΏΠΎΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π°.
2. ΠΠ°ΡΠ°Π»ΠΎ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π·Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ Ρ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡΡ.
Π ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅, Π±Π°Π·ΠΎΠ²ΡΡ Π»ΠΈΠ½ΠΈΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ Π²ΡΠ±ΠΈΡΠ°ΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΡΡΠ΅Π΄Π½Π΅Π΅ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π² Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΡΠΈΡΠΎΠΊΠΎΠΌ Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π΅ ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² Π΄ΠΎ ΠΏΠΎΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ (Ρ.Π΅. Π΄ΠΎ Π½Π°ΡΠ°Π»Π° Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π·Ρ). ΠΡΠΈ Π²ΡΠ±ΠΎΡΠ΅ Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π° ΠΆΠ΅Π»Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΈΠ·Π±Π΅Π³Π°ΡΡ ΠΈ ΡΠΈΠΊΠ»Ρ Π²Π½Π΅ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π·Ρ, Π² ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°ΡΡΡΡ ΡΠΊΠ°ΡΠΊΠΈ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ.
ΠΠ»Ρ SYBR Green, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΠΎ, Ρ ΠΎΡΠΎΡΠΎ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π΅Ρ ΡΠ°ΡΡΠ΅Ρ Π±Π°Π·ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΏΠΎ ΡΡΠ΅Π΄Π½Π΅ΠΌΡ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π² Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π΅ ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² Ρ 3 ΠΏΠΎ 7 (ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΠ΅ 2 ΡΠΈΠΊΠ»Π° Π½Π΅ Π²Π»ΡΡΠ°ΡΡ Π² Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ Π½Π° Π½ΠΈΡ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°ΡΡΡΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠΈΠ»ΡΠ½Π°Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ ΠΈΠ·-Π·Π° Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π²ΡΠ΅ΠΉΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ).
ΠΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΎΡΡΠΎΡΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π½ΡΠΆΠ½ΠΎ Π²ΡΠ±ΠΈΡΠ°ΡΡ Π±Π°Π·ΠΎΠ²ΡΡ Π»ΠΈΠ½ΠΈΡ ΠΏΡΠΈ TaqMan Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΊ Π½Π°ΡΠ°Π»Ρ PCR Π² ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°ΡΡΡΡ Π΄ΠΎΠ²ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΈΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΎΡ «ΡΠ»ΠΎΠΌΠ°Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ±» (Π² ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·ΠΎΡΠ»Π° Π΄ΠΈΡΡΠΎΡΠΈΠ°ΡΠΈΡ ΠΌΠ°ΡΠΊΠ΅ΡΠ° ΠΎΡ ΡΡΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ). ΠΡΠ»ΠΈ «ΡΠ»ΠΎΠΌΠ°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ±Ρ» Π½Π΅ ΠΏΡΠ΅Π²Π°Π»ΠΈΡΡΡΡ, ΡΡΠΎ Π½Π΅ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠΉ ΠΎΠΏΠ°ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, ΠΈ Π±Π°Π·ΠΎΠ²Π°Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Π½ΠΎ ΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π½Π° Π½Π΅Ρ (ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΊ 3−7 ΡΠΈΠΊΠ»Ρ). ΠΠ°ΠΊ ΡΠΆΠ΅ Π±ΡΠ»ΠΎ ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ Π²ΡΡΠ΅, Π² ΡΠ°ΠΊΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ Π½Π°ΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠΈΠΊΠ» Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π° Π½ΡΠΆΠ½ΠΎ Π²ΡΠ±ΠΈΡΠ°ΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ, Π² ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ ΠΎΡ «ΡΠ»ΠΎΠΌΠ°Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ±» ΡΠΆΠ΅ Π΄ΠΎΡΡΠΈΠ³Π»Π° ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠΌΡΠΌΠ°.
Π Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ ΠΎΡ «ΡΠ»ΠΎΠΌΠ°Π½Π½ΡΡ » ΠΏΡΠΎΠ± Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ ΠΈ Π½Π° Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΏΠΎΠ·Π΄Π½ΠΈΡ ΡΡΠ°Π΄ΠΈΡΡ PCR, ΠΊ 20−25 ΡΠΈΠΊΠ»Ρ. Π’Π°ΠΊΠΎΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡ Π½Π΅ΠΆΠ΅Π»Π°ΡΠ΅Π»Π΅Π½, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΎΠ½ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π΅Ρ ΡΡΡΠ΄Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΏΡΠΈ Π²ΡΠ±ΠΎΡΠ΅ Π±Π°Π·ΠΎΠ²ΠΎΠΉ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ, ΡΡΠΎ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΏΡΠΈΠ²Π΅ΡΡΠΈ ΠΊ «ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈΡΠΎΠ²ΠΊΠ΅» Π½Π°ΡΠ°Π»Π° ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π·Ρ. Π ΡΠ°ΠΊΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ΅Π½Π΄ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΎΠ±ΠΈΡΠ°ΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ Π·Π°ΡΠ°Π½Π΅Π΅ ΠΈ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π΅Π΅ Π² Ρ ΠΎΠ»ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΈΠΊΠ΅ 1 ΡΠ°Ρ ΠΈΠ»ΠΈ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π΄ΠΎ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΠΠ (Π΅ΡΠ»ΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±ΠΈΡΡΡΡΡΡ Π² ΡΠ΅ΠΌΠ½ΠΎΡΠ΅ ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ΅ ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ +4oC, ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΈΠ½ΠΊΡΠ±Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π½Π΅ΠΎΠ³ΡΠ°Π½ΠΈΡΠ΅Π½ΠΎ).
Π‘Π²ΠΈΠ΄Π΅ΡΠ΅Π»ΡΡΡΠ²Π°ΠΌΠΈ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΡΡΠΎ Π±Π°Π·ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ Π²ΡΠ±ΡΠ°Π½ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΡΠ΅ΠΊΡΠ½ΠΎ, ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ:
1. ΠΠ½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ «ΠΏΡΠΎΠ²ΠΈΡΠ°Π½ΠΈΠ΅» ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π½ΠΈΠΆΠ΅ Π½ΡΠ»Π΅Π²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ.
2. ΠΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π² ΡΠΎΡΠΊΠ΅ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π³ΠΈΠ±Π° (Ρ.Π΅. Π½Π°ΡΠ°Π»Π° ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π·Ρ).
" ΠΡΠΎΠ²ΠΈΡΠ°Π½ΠΈΠ΅" ΡΠ°ΡΡΠΎ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΠ²ΠΈΠ΅ΠΌ Π²ΠΊΠ»ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π² ΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΉ Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½ ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ², ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠΆΠ΅ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π°ΡΠ°Π»ΠΎ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π·Ρ ΠΈΠ»ΠΈ, Π½Π°ΠΎΠ±ΠΎΡΠΎΡ, Π½Π°ΡΠ°Π»ΡΠ½Π°Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ «ΠΏΡΠΎΠ²ΠΈΡΠ°Π½ΠΈΠ΅» ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ Π²ΡΠ·Π²Π°Π½ΠΎ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΈ Π²ΡΠ±ΠΎΡΠΎΠΌ ΡΠ»ΠΈΡΠΊΠΎΠΌ ΡΠ·ΠΊΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π° ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ², ΡΠ°ΠΊ ΡΡΠΎ ΡΠ°Π·Π±ΡΠΎΡ Π±Π°Π·ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π² Π½Π΅ΠΌ ΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ Π² ΡΡΠ΅Π΄Π½Π΅ΠΌ ΠΏΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌ ΡΠΈΠΊΠ»Π°ΠΌ.
ΠΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π² ΡΠΎΡΠΊΠ΅ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π³ΠΈΠ±Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ «ΠΈΡΠΏΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ» ΡΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π° ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ². Π’Π°ΠΊΠΎΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°ΡΡΡΡ, Π΅ΡΠ»ΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅Ρ Π²Π΅Π΄Π΅ΡΡΡ ΠΏΠΎ ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌ, Π° Π½Π΅ ΠΏΠΎ ΡΡΠ΅Π΄Π½ΠΈΠΌ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡΠΌ Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π°.
ΠΠ°ΠΏΠΎΠΌΠ½ΠΈΠΌ, ΡΡΠΎ Π²ΡΡΠ΅ΠΊΠ°ΡΡΠ°Ρ ΠΈΠ· ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ (1) Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΡ, ΠΎΡΡΠ°ΠΆΠ°Π΅ΠΌΠ°Ρ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ (3) ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΠ²Π°ΡΡ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π»ΠΈΡΡ ΠΏΡΠΈ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΈ, ΡΡΠΎ PC (T)= const. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ PC (T) Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ Π±ΡΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ² Π΄Π»Ρ Π²ΡΠ΅Ρ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΠ²Π°Π΅ΠΌΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ².
ΠΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ. Π Π΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ½Π°Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΠΎΡΠ²Π΅ΡΠ°Π΅Ρ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ 3 Π² ΡΠ°ΠΌΠΎΠΌ Π½Π°ΡΠ°Π»Π΅ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π·Ρ. ΠΠ° Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΏΠΎΠ·Π΄Π½ΠΈΡ ΡΡΠ°ΠΏΠ°Ρ Π²ΠΊΠ»Π°Π΄ ΡΡΠΎΡ Π°ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΎΠ² Π² ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΠΊΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΈΡΡΡ Π²ΡΠ΅ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΌ. ΠΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π²ΡΠ±ΠΈΡΠ°ΡΡ Π² ΡΠ°ΠΌΠΎΠΌ Π½Π°ΡΠ°Π»Π΅ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π·Ρ, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΡΡΠΎΡ Π°ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΡ Π½Π΅ ΡΡΠΎΠ»Ρ Π²Π΅Π»ΠΈΠΊ.
Π‘ΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ ΡΡΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π° Π²ΡΠ±ΠΎΡΠ° ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ:
Π°) Π½Π° Π³Π»Π°Π·;
Π±) ΠΏΠΎ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π½Π°Π΄ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΡΠΌ ΠΎΡΠΊΠ»ΠΎΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ;
Π²) ΠΏΠΎ Π²ΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ.
ΠΡΠΈ Π²ΡΠ±ΠΎΡΠ΅ «Π½Π° Π³Π»Π°Π·» Π·Π° ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ Π²ΡΠ±ΠΈΡΠ°ΡΡ ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ Π²ΠΎ Π²ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Π½ΡΡ Ρ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠ°ΡΠΎΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡΡ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ Π½Π°ΡΠ°Π»Ρ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π·Ρ. Π₯ΠΎΡΡ ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ Π±ΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π½ΠΈΠΆΠ΅, ΠΏΡΠΈ Π΅Π³ΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠΈΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Π° ΡΠΆΠ΅ «ΡΡΡΠ°ΠΊΠ°Π½ΠΈΡΡΡΡ» — Π½Π° ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΎΠΌ ΡΠΈΠΊΠ»Π΅ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°Π·Ρ ΠΏΠΎΠ³ΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ Π²ΡΡΠΎΠΊΠ° (Π² ΡΠΎΠΌ ΡΠΈΡΠ»Π΅ ΠΈ ΠΈΠ·-Π·Π° ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΡΡΠΎ Π²ΡΠ±ΠΎΡ baseline ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΠΎΠ³ΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΡΡΡ). ΠΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΡΡΠΎΠ²Π½ΠΈ ΠΏΠΎΡΡΠ΄ΠΊΠ° 0.05−0.1 Π΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ, Π² Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ ΠΎΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π° Π·Π°Π΄Π°Π½ΠΈΡ Π±Π°Π·ΠΎΠ²ΠΎΠΉ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ ΠΈ ΠΎΡ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΠΊΠ°ΠΊ Π²Π΅Π΄Π΅Ρ ΡΠ΅Π±Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ. ΠΡΠ±ΠΎΡ «Π½Π° Π³Π»Π°Π·» ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΊΠΎΡΡΠ΅ΠΊΡΠ½ΡΠΌ Ρ ΡΠΎΡΠΊΠΈ Π·ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ 3, ΠΏΡΠΈ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΈ, ΡΡΠΎ Π±Π°Π·ΠΎΠ²Π°Ρ Π»ΠΈΠ½ΠΈΡ Π²ΡΠ±ΡΠ°Π½Π° ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²ΠΎ ΠΈ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, Ρ Π½Π°ΡΠ΅ΠΉ ΡΠΎΡΠΊΠΈ Π·ΡΠ΅Π½ΠΈΡ, ΠΈΠΌ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΡΠΌΡΡΠ» ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΡ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠ»Π°ΡΠΊΠ΅ (ΠΈΠ»ΠΈ, Π² ΠΊΡΠ°ΠΉΠ½Π΅ΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅, Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ², Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½Π΅Π½Π½ΡΡ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²ΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠ², ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠΎΠ², Π½Π° ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΈ ΡΠΎΠΉ ΠΆΠ΅ ΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π΅ Ρ Π½Π΅Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΌ ΠΏΡΠΎΠΌΠ΅ΠΆΡΡΠΊΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ) — Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΠΏΡΠΈ ΠΎΡΠ»Π°Π΄ΠΊΠ΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ. ΠΡΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΠΈ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ°Π·Π½ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΡΡ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ «Π½Π° Π³Π»Π°Π·» Π±ΡΠ΄Π΅Ρ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΡΠ΅ΠΊΡΠ½ΡΠΌ. ΠΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ Π΄Π²ΡΡ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ² ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ Π² ΡΠΎΠΌ, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π²ΡΠ±ΠΎΡ ΠΏΠΎΡΠΎΠ³Π° Π½Π΅ ΠΏΠΎ Π°Π±ΡΠΎΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠΌΡ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ, Π° ΠΏΠΎ ΠΏΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ. ΠΡΠ±ΠΎΡ ΠΏΠΎΡΠΎΠ³Π° ΠΏΠΎ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π½Π°Π΄ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΡΠΌ ΠΎΡΠΊΠ»ΠΎΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ — ΡΡΠΎ ΡΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠ° ΠΏΠΎΡΠΎΠ³Π° ΡΠ°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ Π½Π°Π΄ Π±Π°Π·ΠΎΠ²ΡΠΌ ΡΡΠΎΠ²Π½Π΅ΠΌ (threshold Π½Π°Π΄ baseline) Π±ΡΠ»ΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΠΌΠ°Π»ΡΠΌ, Π½ΠΎ ΡΠΆΠ΅ ΡΡΠ°ΡΠΈΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π΄ΠΎΡΡΠΎΠ²Π΅ΡΠ½ΡΠΌ. ΠΠ±ΡΡΠ½ΠΎ Π²ΡΠ±ΠΈΡΠ°ΡΡ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π² Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π΅ 8−10 ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΡΡ ΠΎΡΠΊΠ»ΠΎΠ½Π΅Π½ΠΈΠΉ. ΠΠ΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠΌ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΎΡΠΊΠ»ΠΎΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ — ΡΡΠΎ ΡΡΡΠ΅Π΄Π½Π΅Π½Π½Π°Ρ Π²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ½Π° ΠΏΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΉ ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ, Π² ΠΊΠ°ΠΊΠΈΡ -ΡΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΎΠΊΠ°Π·Π°ΡΡΡΡ ΡΠ»ΠΈΡΠΊΠΎΠΌ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΈΠΌ (ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ Π΅ΡΠ΅ Π½Π΅ «ΡΡΡΠ°ΠΊΠ°Π½ΠΈΠ»Π°ΡΡ») ΠΈΠ»ΠΈ, Π½Π°ΠΎΠ±ΠΎΡΠΎΡ, ΡΠ»ΠΈΡΠΊΠΎΠΌ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΈΠΌ (ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΡΠΆΠ΅ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°ΡΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊΠΈΠ΅-ΡΠΎ ΠΎΡΠΊΠ»ΠΎΠ½Π΅Π½ΠΈΡ). ΠΡΠΈΡ Π½Π΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΎΠ² Π»ΠΈΡΠ΅Π½ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ Π²ΡΠ±ΠΎΡΠ° ΠΏΠΎΡΠΎΠ³Π° — ΠΏΠΎ Π²ΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ. Π ΡΠ°ΠΊΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅, ΠΈΠ· Π²ΡΠ΅Ρ ΡΠΊΠ°ΡΠΊΠΎΠ² ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π·Π° ΠΏΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ²Π΅Π½Ρ Π²ΡΠ±ΠΈΡΠ°Π΅ΡΡΡ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ΅Π·ΠΊΠΈΠΉ ΡΠΊΠ°ΡΠΎΠΊ — Π°Π±ΡΠΎΠ»ΡΡΠ½ΡΠΉ ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΡΠΌ Π²ΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ. ΠΡΠΎΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ± Π½Π°ΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»Π΅Π½ ΠΊ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Ρ Π²ΡΠ±ΠΎΡΠ° Π±Π°Π·ΠΎΠ²ΠΎΠΉ Π»ΠΈΠ½ΠΈΠΈ ΠΈ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠΈΡΠΌ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ (ΠΏΠΎ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Π°ΠΌ www.molbiol.ru).
ΠΠ½Π°Π»ΠΈΠ· ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ. ΠΡΠ΅Π½ΠΊΡ ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΏΠΎ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ, ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΈΠ· ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ (Π΄Π»Ρ SYBR Green).ΠΡΠΈΠ²Π°Ρ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Π° Π±ΡΡΡ ΠΏΠΎΡΡΡΠΎΠ΅Π½Π° Π² Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π΅ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡ ΠΎΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΎΡΠΆΠΈΠ³Π° (ΠΏΡΠΈ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π½ΠΈΠ·ΠΊΠΈΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ°Ρ ΡΡΠΎ Π΄Π΅Π»Π°ΡΡ Π½Π΅ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΡΠΌΡΡΠ»Π°) Π΄ΠΎ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΠΉ Π΄Π΅Π½Π°ΡΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ — ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ 95OC. ΠΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΠΎΠΊΠΎΠ½ΡΠ°Π½ΠΈΡ ΠΠ¦Π ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π½Π°Π³ΡΠ΅Π²Π°ΡΡ ΠΈ Π½Π΅ΠΏΡΠ΅ΡΡΠ²Π½ΠΎ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΡΡΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ. ΠΠΎ Π΄ΠΎΡΡΠΈΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ° Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ ΡΠ΅Π·ΠΊΠΎ ΡΠ½ΠΈΠΆΠ°Π΅ΡΡΡ.
Π ΠΈΡ. 6. ΠΡΠΈΠΌΠ΅Ρ ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ.
ΠΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ΅ ΡΠ΅Π·ΠΊΠΎΠ΅ ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π½Π° Π³ΡΠ°ΡΠΈΠΊΠ΅ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ ΡΠΈΡΠ»Ρ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΡΠΎΠΊ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΠΌΡΡ Π½Π° ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π΅, ΡΠΎ Π΅ΡΡΡ ΡΠΈΡΠ»Ρ ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΡΠΈΠΏΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΠΊΠΎΠ½ΠΎΠ². ΠΠ»Ρ ΠΎΠ±Π»Π΅Π³ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΠ΅ΠΉ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡ Π΄ΠΈΡΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΉ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ. Π’Π°ΠΊΠΎΠΉ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ± Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ Π³ΠΎΡΠ°Π·Π΄ΠΎ ΡΠ΄ΠΎΠ±Π½Π΅Π΅ Π΄Π»Ρ ΠΏΠΎΠ½ΠΈΠΌΠ°Π½ΠΈΡ ΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°.
ΠΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΡΠΈΠ²ΡΡ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π½Π΅ ΠΎΠ³ΡΠ°Π½ΠΈΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ΅ΠΉ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π±ΡΠΎΠΌΠΈΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΡ ΠΈ SYBR Green I. ΠΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΊΡΠΈΠ²ΡΡ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π² ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ Ρ ΠΠΠ-Π·ΠΎΠ½Π΄Π°ΠΌΠΈ (Taq-man assay, beacons) Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ°ΡΡ ΡΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ, ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π²Π½ΡΡΡΠΈ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΠ΅ΠΉ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΠΠ-ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ ΠΈ Π·ΠΎΠ½Π΄Π°. ΠΠ°Π»ΠΈΡΠΈΠ΅ ΡΠ°ΠΊΠΈΡ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΠΉ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎ ΠΏΡΠΈΠ²Π΅ΡΡΠΈ ΠΊ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π·ΠΎΠ½Π΄Π° ΠΈ ΠΊ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡΠΌ Π² Π³ΡΠ°ΡΠΈΠΊΠ΅ ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ. ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΡΠΈΠ²ΡΡ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π½Π΅ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅Ρ ΠΎΡ ΠΎΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΠΎΡΠ° Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΎΡΠ° Π½ΠΈΠΊΠ°ΠΊΠΈΡ Π΄ΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΌΠ°Π½ΠΈΠΏΡΠ»ΡΡΠΈΠΉ Ρ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠ°ΠΌΠΈ, Π° ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΏΡΠ΅ΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΡ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ Π°Π²ΡΠΎΠΌΠ°ΡΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π° ΠΈ ΡΠΎΡΠΌΠ°Π»ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π°.
Π ΠΈΠ΄Π΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅, Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡΡ Ρ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ΠΉ ΠΌΡ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Ρ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°ΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΠΏΠΈΠΊ (ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠΉ ΠΏΠ»Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠ°), Π° ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»Ρ «ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ Π±Π΅Π· ΠΠΠ» — ΡΠ»Π°Π±ΡΠ΅, Π·Π°ΡΡΡ Π°ΡΡΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΡ Π°ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»Π΅Π±Π°Π½ΠΈΡ Π²ΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌ Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½Π΅ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡ.
ΠΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ° Π΄Π°Π½Π½ΡΡ . ΠΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠΈ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ real-time PCR ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π½Π° ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ (3).ΠΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ ΠΎΠ±ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠΈ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ Real-time PCR — ΡΡΠΎ — ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ ΠΊΠ°Π»ΠΈΠ±ΡΠΎΠ²ΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π³ΡΠ°ΡΠΈΠΊΠ°.
ΠΡΠΎΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»Π°Π³Π°Π΅Ρ ΠΏΠΎΡΡΡΠΎΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠ°Π»ΠΈΠ±ΡΠΎΠ²ΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π³ΡΠ°ΡΠΈΠΊΠ° Π² ΠΊΠΎΠΎΡΠ΄ΠΈΠ½Π°ΡΠ°Ρ C (T) — log P0 Ρ ΡΠ΅ΡΠΈΠ΅ΠΉ ΡΠ°Π·Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠΉ ΠΠΠ-ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ°, ΠΈΠ· ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ° (P0) Π² ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°Ρ .
Π’ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π° Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΡ ΠΎΡ ΡΠΎΠ³ΠΎ, Π½Π°ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡ PCR (ΠΈ, ΠΏΡΠ΅ΠΆΠ΄Π΅ Π²ΡΠ΅Π³ΠΎ, ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ) ΡΠ΅ΡΠΈΠΈ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠΎΠ² Π±Π»ΠΈΠ·ΠΊΠΈ ΠΊ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΠΌ PCR ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ². ΠΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΠΏΡΠΈ Π²ΡΠ±ΠΎΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠΎΠ² Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ ΡΡΠΊΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠΌΠΈ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈ:
Π°) ΡΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ΅ΠΉ Π² ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΠΎΠΌ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ΅ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½ΠΎ Π±ΡΡΡ ΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎ Ρ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ²ΡΠΌ Π² ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ΅;
Π±) Π΄Π»Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ° Π² ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Π° Π±ΡΡΡ Π±Π»ΠΈΠ·ΠΊΠ° ΠΊ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ²ΠΎΠΉ Π² ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ;
Π²) ΡΠ΅ΡΠΈΡ ΡΠ°Π·Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠΉ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Π° ΠΎΡ Π²Π°ΡΡΠ²Π°ΡΡ Π²Π΅ΡΡ Π΄ΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΉ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ° Π² ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ.
ΠΡΠ»ΠΈ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΠΈΡΡ Π»ΠΈΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ°, Π΄Π»Ρ ΠΏΠΎΡΡΡΠΎΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠ°Π»ΠΈΠ±ΡΠΎΠ²ΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π³ΡΠ°ΡΠΈΠΊΠ° ΡΠ΄ΠΎΠ±Π½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠ΅ΡΠΈΡ ΡΠ°Π·Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠΉ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ· ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ². Π ΡΠ΅Ρ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ , ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎ ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΏΠΎ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΌ ΠΈ Π΄ΠΎΠ»Π΅ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ° Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ, ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΡΠΌΡΡΠ» ΠΏΡΠΈ Π½Π°Π»Π°Π΄ΠΊΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΡΠΎΠ²ΠΈΡΡ ΡΠ΅ΡΠΈΡ ΡΠ°Π·Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠΉ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ· Π½ΠΈΡ ΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ.
Π ΡΠ΅Ρ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ , ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡΡ «Π°Π±ΡΠΎΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠ΅» ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ°, Π²ΡΠ±ΠΎΡ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠΎΠ² Π΄Π»Ρ Π³ΡΠ°Π΄ΡΠΈΡΠΎΠ²ΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π³ΡΠ°ΡΠΈΠΊΠ° ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΡΡ Π·Π°Π΄Π°ΡΡ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΡΡΠΎΡΠΎΠ½Ρ, Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ Π·Π½Π°ΡΡ ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΠΈΡΠ»ΠΎ. ΠΠ»Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ Π² RT-PCR ΠΏΡΠ΅Π΄Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½Ρ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠ΅ Π²Π°ΡΠΈΠ°Π½ΡΡ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠΎΠ²:
1. ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π½Π½ΡΠΉ RT-PCR-ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡ;
2. ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½Π°Ρ ΠΠΠ;
3. ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°Π½ΡΠ½Π°Ρ Π ΠΠ Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅ΠΉ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠ΅ΠΉ;
4. ΡΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠΉ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ.
ΠΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΎΠ² Π² ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ Π²ΡΠ΅Π³Π΄Π° Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΡΡ Π½Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΠΠ, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΠΏΡΠΈΠ±Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΊ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌ. ΠΠ»Ρ RT-PCR ΡΡΠΎ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ, Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π ΠΠ, polyA-Π ΠΠ, ΡΠ ΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ ΠΠ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ Π½Π°ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π±Ρ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠΎ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°ΠΌΠΈ Π½Π΅ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΈΠ±Π»ΠΈΠΆΠ΅Π½Ρ ΠΊ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌ, «Π°Π±ΡΠΎΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠ΅» ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎ-ΠΏΡΠ΅ΠΆΠ½Π΅ΠΌΡ ΠΎΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ ΡΠ°ΡΡΡΡΠΎΠΌ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ°.
1.2. ΠΠΠΠΠΠΠΠ§ΠΠ‘ΠΠΠ ΠΠΠΠ ΠΠ§ΠΠΠ«
Π ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄Π½Π΅Π΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ ΠΠΠ-ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ Π½Π΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠ·Π½Π°ΠΊ, Π½ΠΎ ΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡΡ Π΄ΠΈΡΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠΈΠΊΠ²Π΅Π½Ρ, Ρ. Π΅. ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈΠ·ΠΌΠ° Π² ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ°Ρ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ°. ΠΠ°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄ ΡΡΠ°Π΄ΠΈΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎ-Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π°ΠΌΠΈ, Ρ.ΠΊ. ΠΎΠ½ΠΈ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠ°ΡΡΡΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅ΠΌΡΠΉ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·Π΅Ρ ΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°ΡΠΎΡ, ΡΡΠΎ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠ½ΠΈΠΆΠ°Π΅Ρ ΡΡΠΎΠΈΠΌΠΎΡΡΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΠΈ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ Π΅Π³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΡΡ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΡ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°, ΠΏΡΠΈΡΠ΅ΠΌ Π±Π΅Π· ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠΈ ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ². ΠΠ»Π°Π²Π½ΡΠΌ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ² ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ Π½Π° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΡΠΈΠΏΠΎΠ² Ρ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌΠΈ Π²ΡΠ΅Ρ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ, ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΈΡ ΡΠ½ΠΈΠ²Π΅ΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ. ΠΠ°Π»ΠΈΡΠΈΠ΅ Π½Π° ΡΠΈΠΏΠ΅ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π° Π»ΡΠ±ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π΄Π΅Π»Π°Π΅Ρ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΠΌ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· Π»ΡΠ±ΠΎΠΉ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ. Π ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΈΠΏΠΎΠ² Π»Π΅ΠΆΠΈΡ ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ Π±ΡΡΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠΉ ΡΠ΅Ρ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΈΠ½ΡΡ Π»ΠΈΠ³Π°Π½Π΄ΠΎΠ² ΡΠΎ ΠΌΠ½ΠΎΠΆΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ. Π‘ΠΎΠ±ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΈΠΏΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΡΡ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ ΡΡ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΈΠ½ΡΡ ΡΠ²Π΅ΡΠ΄ΡΡ ΠΏΠΎΠ΄Π»ΠΎΠΆΠΊΡ, Π½Π° ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ Π½Π°Π½Π΅ΡΠ΅Π½Ρ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ, ΠΈΠ»ΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ, ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ³Π»Π΅Π²ΠΎΠ΄Ρ, ΠΈΠ»ΠΈ ΠΊΠ°ΠΊΠΈΠ΅-Π»ΠΈΠ±ΠΎ ΠΈΠ½ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ-Π·ΠΎΠ½Π΄Ρ, ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΡΠ΅ Π±ΡΡΡ ΡΠ·Π½Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠ²Π»ΡΡΡ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ. ΠΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² Π½Π° ΠΏΠΎΠ΄Π»ΠΎΠΆΠΊΠ΅ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π΄ΠΎΡΡΠΈΠ³Π°ΡΡ ΡΠΎΡΠ΅Π½ ΡΡΡΡΡ, ΠΏΡΠΈΡΠ΅ΠΌ ΡΠΈΠΏΡ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΏΠ° ΡΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠ½Ρ ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΡ ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π² ΡΠΎΡΠ½ΡΡ ΡΡΡΡΡ ΠΈ ΠΌΠΈΠ»Π»ΠΈΠΎΠ½Π°Ρ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ Π½Π°Π½Π΅ΡΠ΅Π½Π½ΡΡ Π½Π° ΠΏΠΎΠ΄Π»ΠΎΠΆΠΊΡ.
1.2.1 ΠΠΠ-ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΈΠΏΡ
Π‘ΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ²ΡΠ΅, ΠΠΠ, ΡΠ³Π»Π΅Π²ΠΎΠ΄Π½ΡΠ΅, ΡΠΊΠ°Π½Π΅ΡΠ΅ ΡΠΈΠΏΡ. ΠΡΠΎΠ±ΠΎΠ³ΠΎ Π²Π½ΠΈΠΌΠ°Π½ΠΈΡ Π·Π°ΡΠ»ΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡ ΠΠΠ-ΡΠΈΠΏΡ. ΠΠ½ΠΈ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΡΡ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ ΡΠ½ΠΈΠΊΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΉ Π°Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΌΠ΅Π½Ρ, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡΠΈΠΉ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΡΡ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΠ΅ Π² Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ (ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΠΎ, Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΡ) Π·Π°Π΄Π°Π½Π½ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ ΠΠΠ (Ρ.Π½. Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΉ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·). ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΠΠ-ΡΠΈΠΏΠΎΠ² ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π² Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΠ°Π· Π΄Π΅ΡΠ΅Π²Π»Π΅, ΡΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π°Π»ΡΡΠ΅ΡΠ½Π°ΡΠΈΠ²Π½ΡΡ ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΉ (ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·, ΠΠ¦Π Π² ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ) ΠΈ Π΄ΠΎΠΏΡΡΠΊΠ°Π΅Ρ, ΠΏΡΠΈ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΠΈ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΎΡΠ° Π½Π΅ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ, ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ Π²Π½Π΅ Π»Π°Π±ΠΎΡΠ°ΡΠΎΡΠΈΠΈ.
ΠΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΠ΅ ΠΠΠ-ΡΠΈΠΏΡ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π² ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΡ Π² ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ 80-Ρ Π³ΠΎΠ΄ΠΎΠ² ΠΏΡΠΎΡΠ»ΠΎΠ³ΠΎ Π²Π΅ΠΊΠ°. Π ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΡΡ ΡΠΆΠ΅ ΡΠΈΡΠΎΠΊΠΎ ΡΠ°ΡΠΏΡΠΎΡΡΡΠ°Π½Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Π°, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡ ΠΌΠ½ΠΎΠΆΠ΅ΡΡΠ²Π° Π³Π΅Π½ΠΎΠ², Π»Π΅ΠΆΠΈΡ ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ ΡΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ ΠΌΠ ΠΠ-ΠΎΠ²ΡΡ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΊΠΠΠ-ΠΎΠ²ΡΡ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Π΅ΠΉ ΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ²ΠΎΠΌ ΠΈΡ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Ρ ΠΈΠΌΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌΠΈ Π½Π° ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΈΠΏΠ΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΠΠ.
ΠΠΠ-ΡΠΈΠΏ — ΡΡΠΎ ΡΠ²Π΅ΡΠ΄Π°Ρ ΠΏΠΎΠ΄Π»ΠΎΠΆΠΊΠ°, Π½Π° ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΈΠΌΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ (ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΠΎ, ΠΊΠΎΠ²Π°Π»Π΅Π½ΡΠ½ΠΎ) ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ½ΠΈΡΠ΅Π²ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ ΠΠΠ ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ: ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ — 15−25 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ², Π΄Π»ΠΈΠ½Π½ΡΠ΅ — 25−60 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΈ ΠΊΠΠΠ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ — ΠΎΡ 100 Π΄ΠΎ 3000 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ². Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Π° ΠΏΠΎΠ΄Π»ΠΎΠΆΠΊΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ ΡΡΠ΅ΠΊΠ»ΠΎ, ΠΊΡΠ΅ΠΌΠ½ΠΈΠΉ, ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ, Π³ΠΈΠ΄ΡΠΎΠ³Π΅Π»ΠΈ (Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, Π½Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄Π°) ΠΈ Π΄Π°ΠΆΠ΅ Π·ΠΎΠ»ΠΎΡΠΎ.
1.2.2. ΠΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ-ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π° ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ
ΠΡΠ½ΠΎΠ²Π° Π²ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΡΡ ΠΠΠ-ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΉ — Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ. Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Ρ ΡΠΎΡΠΌΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΡΠ΅ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ Π±Π»Π°Π³ΠΎΠ΄Π°ΡΡ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠΌ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» — Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°ΠΌΠΈ. ΠΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ Π°Π΄Π΅Π½ΠΈΠ½ (Π) ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»ΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ΅Π½ ΡΠΈΠΌΠΈΠ½Ρ (Π’), Π³ΡΠ°Π½ΠΈΠ½ (Π) — ΡΠΈΡΠΎΠ·ΠΈΠ½Ρ (Π¦). Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΠ’ΠΠ¦ Π±ΡΠ΄Π΅Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²ΡΠ²Π°ΡΡ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½ΡΡ Π°ΡΡΠΎΡΠΈΠ°ΡΠΈΡ, Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ, Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΠΎΠΉ ΠΠΠ ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π° Π’ΠΠ¦Π.
…ΠΠ’ΠΠ¦…
| | | |
…Π’ΠΠ¦Π…
ΠΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½Π°Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ «ΡΠ»ΠΈΠΏΠ°Π½ΠΈΡ» Π΄Π²ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ, ΠΎΠ΄Π½Π° ΠΈΠ· ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ Π½Π΅ΠΏΠΎΠ΄Π²ΠΈΠΆΠ½ΠΎ Π·Π°ΠΊΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½Π° Π½Π° ΠΏΠΎΠ΄Π»ΠΎΠΆΠΊΠ΅, ΠΈ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠΌ ΠΠΠ-ΡΠΈΠΏΠ°. Π§Π΅ΠΌ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡΡΡ Π² ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»ΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌ ΡΠΈΠΏΠ°, ΡΠ΅ΠΌ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ ΠΈΡ Π±ΡΠ΄Π΅Ρ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ Ρ ΡΠΈΠΏΠΎΠΌ, ΠΈ ΡΠ΅ΠΌ Π²ΡΡΠ΅ Π±ΡΠ΄Π΅Ρ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π°, Π²ΠΎΡΠΏΡΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°Π΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΡ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°. ΠΠ° ΡΠΈΡ. 9 ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΡΡΠ΅ΠΉΠΊΠΈ ΠΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠΏΠ°, ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΉ Π½Π° ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π°Π΄Π΅Π½ΠΈΠ½Π° (Π) Ρ ΡΠΈΠΌΠΈΠ½ΠΎΠΌ (Π’) ΠΈ Π³ΡΠ°Π½ΠΈΠ½Π° (G) Ρ ΡΠΈΡΠΎΠ·ΠΈΠ½ΠΎΠΌ (Π‘) Π² Π΄Π²ΡΡ Π½ΠΈΡΡΡ ΠΠΠ. ΠΡΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ Π½ΠΈΡΠΈ ΠΠΠ (ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°) ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½Π° ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΉ Π½ΠΈΡΠΈ, ΡΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΡΠ°Π±ΠΈΠ»ΡΠ½Π°Ρ ΡΠΎΠ²Π΅ΡΡΠ΅Π½Π½Π°Ρ Π΄Π²ΡΡ Π½ΠΈΡΡΠ°ΡΠ°Ρ ΡΠΏΠΈΡΠ°Π»Ρ — Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ Π² Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ΅ Π΄Π°ΠΆΠ΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ Π½Π΅ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠ°ΡΡ, Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ G-G, ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΎΡΠ²ΡΠ°ΡΠ°Π΅Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ°. ΠΡΠ»ΠΈ ΠΈΠΌΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌ ΠΈΠ· ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΈΠΏΠ° ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΠΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ, ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΠΌ, 20-ΠΌΠ΅ΡΠ½ΡΠΉ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ (ΠΏΡΠΎΠ±Ρ), ΡΠΎ ΠΏΡΠΈ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΊ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΈΠΏΡ ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½Π½ΡΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠΌΠΈ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ, Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ° ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°, Π±ΡΠ΄Π΅Ρ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡ ΠΈΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΠ΅ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅. ΠΠ°Π΄Π°Π½Π½ΡΠΉ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΠΉ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½Ρ Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠΏΠ° ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ ΡΠ²ΡΠΆΠ΅Ρ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΎΠ΄Π½Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈΠ· 420=1.09×1012 Π²ΡΠ΅Ρ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ ΡΡΠΎΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ Π² ΠΠΠ. Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΠ²Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π½Π° ΡΡΠΎΠΌ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΌ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠΏΠ°. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½Ρ Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠΏΠ° ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΎΠ΄Π½Ρ Π²ΡΠ±ΠΎΡΠΊΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ ΠΈΠ· ΡΡΠΈΠ»Π»ΠΈΠΎΠ½Π° Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΡ Π²Π°ΡΠΈΠ°Π½ΡΠΎΠ², Π² ΠΎΡΠ»ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΎΡ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΠ½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΏΠ°, Π³Π΄Π΅ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π΄Π²ΠΎΠΈΡΠ½Π°Ρ Π²ΡΠ±ΠΎΡΠΊΠ°: ΠΠ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΠΠ’.
Π ΠΈΡ. 9. Π‘Ρ Π΅ΠΌΠ° ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π΄Π²ΠΎΠΉΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΏΠΈΡΠ°Π»ΠΈ ΠΠΠ Π½Π° Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠΏΠ΅. ΠΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ ΡΠΈΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ Π½Π° ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌ ΠΈΠ· ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠΏΠ° ΠΈ ΠΈΠ·Π±ΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅Ρ ΠΈΠ· ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΡ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΠΠ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ. Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΡΠΎΡ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½Ρ Π½Π°ΡΠΈΠ½Π°Π΅Ρ ΡΠ²Π΅ΡΠΈΡΡΡΡ. ΠΡΠΎ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ Π±Π»Π°Π³ΠΎΠ΄Π°ΡΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎ-ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΠΌ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡΠΌ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ ΠΏΠ°Ρ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² Π Ρ Π’ ΠΈ G Ρ Π‘. ΠΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΠ΅ Π½Π΅ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠ°ΡΡ, Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ G-G, ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΎΡΠ²ΡΠ°ΡΠ°Π΅Ρ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΠΈ ΠΎΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΈΠΏΠ° ΡΠ΅ΠΌΠ½ΡΠΌ.
ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΠ΅ Π΄Π»Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΠΎΠ² Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΡΡΡΡΠΎΠΉΡΡΠ²Π° ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ ΡΠ΅Π³ΠΈΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π½Π΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΊΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°Ρ, Π½ΠΎ ΠΈ ΠΊΠΈΠ½Π΅ΡΠΈΠΊΡ Π°ΡΡΠΎΡΠΈΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΈ Π΄ΠΈΡΡΠΎΡΠΈΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ. ΠΡΠΈ ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ, Π΄Π΅Π»Π°Ρ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΠΌ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ· ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ², ΠΌΠΎΠ³ΡΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΎΡΡΠ°Π²Π»ΡΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΈΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΠΈ. Π Π΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Π·Π°Π²ΠΈΡΡΡ ΠΎΡ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ ΠΠΠ — ΠΏΡΠΎΠ±Ρ, Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π° ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΠΉ ΠΠΠ — ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ, ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ, ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ, ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π° Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ, ΡΠΈΠΏΠ° ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΊΠΈ. ΠΠ΄Π΅ΡΡ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ ΠΎΡΠΌΠ΅ΡΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ Π² ΠΠΠ-ΡΠΈΠΏΠ°Ρ Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΠΎΠΌ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠ°ΡΡΠΈΠ²Π½Π°Ρ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΡ, Ρ. Π΅. Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅ ΠΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Ρ ΠΈΠΌΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π²Π΅ΡΠΎΡΡΠ½ΠΎΡΡΠ½ΡΠΌ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠΎΠΌ ΠΈ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΡ ΠΎΡ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ.
1.2.3. ΠΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΠΠ-ΡΠΈΠΏΠΎΠ²
ΠΡΠ΅Π½ΠΊΠ° ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΡ ΠΈ ΠΈΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ Π²ΡΠ΅Ρ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· Π²Π°ΠΆΠ½Π΅ΠΉΡΠΈΡ Π·Π°Π΄Π°Ρ, ΠΏΠΎΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΡΠΈΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΠΠΠ-ΡΠΈΠΏΠΎΠ². Π Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠΉ Π·Π°Π΄Π°ΡΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π±ΡΡΡ ΡΠ΅Π°Π»ΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΎ Π² ΠΈΠΌΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Π²ΡΠ΅Ρ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° Π½Π° Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΡΠΈΠΏ, ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ½ΠΎ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡΡ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠ΅ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² ΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ° Π² ΡΠ΅Π»ΠΎΠΌ. ΠΠΈΠΎΠ³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ Π±Π°Π·Ρ Π΄Π°Π½Π½ΡΡ , ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠ΅ Π²ΡΡ ΠΈΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΡ (ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ°ΡΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ) ΠΏΠΎ Π³Π΅Π½Π°ΠΌ ΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ°ΠΌ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ², ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΡΡ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠΌ ΠΎΠ³ΡΠΎΠΌΠ½ΡΠ΅ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π² Π΄ΠΈΠ·Π°ΠΉΠ½Π΅ ΠΠΠ-ΡΠΈΠΏΠΎΠ².
Π ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΡΠΌ ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½Π°ΠΌ ΡΠΈΡΠΎΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΡΠΏΡΠΎΡΡΡΠ°Π½Π΅Π½ΠΈΡ Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠΏΠΎΠ²ΡΡ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²ΠΈΠ°Π½ΠΈΠΉ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΡΡ ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈ Π²ΠΎΡΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΡΡΡ, ΠΏΡΠΎΡΡΠΎΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π΄ΡΡΡ Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½Π΅Π½ΠΈΡ, Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π° ΠΌΠ½ΠΎΠΆΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΠΎΠ² ΠΈ ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π½Π΅Π²ΡΡΠΎΠΊΡΡ ΡΡΠΎΠΈΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ°Π±ΠΎΡ. ΠΡΠΈ ΠΆΠ΅ ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½Ρ Π·Π°ΡΡΠ°Π²Π»ΡΡΡ ΡΠ°ΡΡΠΌΠ°ΡΡΠΈΠ²Π°ΡΡ Π±ΠΈΠΎΡΠΈΠΏΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΠ΅ΡΡΠΏΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΉ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΌΠ΅Π½Ρ Π² ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΡΡ Π½Π°ΡΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ Ρ ΠΎΠ·ΡΠΉΡΡΠ²Π°.
ΠΠΎΠ΄Π²ΠΎΠ΄Ρ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΈΡΠΎΠ³ΠΈ Π½ΡΠΆΠ½ΠΎ ΠΎΡΠΌΠ΅ΡΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΈΠΏΡ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌ ΠΏΠΎΠ΄Ρ ΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Π΄Π»Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΎΡ Π΄Π΅ΡΡΡΠΊΠΎΠ² Π΄ΠΎ ΡΡΡΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² ΠΈ ΠΈΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°, Π΄Π»Ρ Π²ΡΡΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ ΠΈ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π½ΡΡ Π²Π°ΡΠΈΠ°ΡΠΈΠΉ Π² ΠΈΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ΅. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° Π³Π΅Π½Ρ ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΡΡΡ Π² Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ΅ Π² ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ, Ρ ΡΠ΅ΠΌ ΠΏΠΎΡΡΠΎΡΠ½Π½ΠΎ ΠΈ ΠΏΡΠΈΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ ΡΡΠ°Π»ΠΊΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ Π² ΠΊΠ»ΠΈΠ½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΠΊΠ΅, ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΈΡ ΠΏΡΠ΅Π΄Π²Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½Π°Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ. ΠΠ°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΠ½Π°Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ, Π² ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» ΠΠΠ ΠΎΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ Π΄ΠΎ ΠΌΠΈΠ»Π»ΠΈΠΎΠ½ΠΎΠ² ΠΈ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΉ, Π° ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π½ΠΎΠ΅ Π΄ΠΎΡΡΠΎΠΈΠ½ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ³ΠΎ Π²ΠΈΠ΄Π° ΠΠ¦Π ΠΊΠ°ΠΊ Real Time, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ Π΄Π°Π²Π°ΡΡ Π΄Π°ΠΆΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΎΡΠ΅Π½ΠΊΡ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ. ΠΡΠΎ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ Π²Π°ΠΆΠ½ΠΎΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π·Π°Π΄Π°Ρ Π² ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΠΈ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΡ ΡΡΠ½Π΄Π°ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΈ ΠΈΠ½ΡΠ΅Π³ΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ Π½Π°ΡΠΊ, Π° ΡΠ°ΠΊ ΠΆΠ΅ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ² Π΄ΠΈΠ°Π³Π½ΠΎΡΡΠΈΠΊΠΈ.
ΠΠΎΡΡΠ°Π²ΠΈΠ² ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π»Ρ ΠΎΠ±ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΈΠΌΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠ², ΠΌΡ ΡΡΠΎΠ»ΠΊΠ½ΡΠ»ΠΈΡΡ Ρ ΡΡΠ΄ΠΎΠΌ ΠΏΡΠ΅ΠΏΡΡΡΡΠ²ΠΈΠΉ, ΠΊΠ°ΡΠ°ΡΡΠΈΡ ΡΡ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ. ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ΅ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅Ρ Π½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΡΠ½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ. Π‘ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΡΠΉ ΡΡΠ½ΠΎΠΊ ΠΏΡΠ΅Π΄Π»Π°Π³Π°Π΅Ρ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΡ, ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌ Π»ΡΠ½ΠΎΠΊ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ Π½Π΅ ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ 200 ΠΌΠΊΠ». ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΠ¦Π Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ΅ Π² ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΡΡ ΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠ°Ρ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ²ΠΎΡΠ΅ΡΠΈΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΠΌ Π½Π°ΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°. ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΡΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΎΡΡ Π½Π΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ ΠΌΠ°Π½ΠΈΠΏΡΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠΎΡΠΌΠ°ΠΌΠΈ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΠ±Π»ΠΎΠΊΠΎΠ². Π ΡΠ²ΡΠ·ΠΈ Ρ ΡΡΠΈΠΌ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄ Π½Π°ΡΠ°Π»ΠΎΠΌ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ Π±ΡΠ»ΠΎ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π°ΠΏΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ Π±Π°Π·Ρ Π΄Π»Ρ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΈ ΡΠ΅Π³ΠΈΡΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»ΠΎΠ², ΠΈΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠΎΠ² Ρ Π»ΡΠ½ΠΊΠ°ΠΌΠΈ, ΠΎΠ±ΡΠΈΠΉ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π½Π΅ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°ΡΡ 2 ΠΌΠΊΠ».
2.1. ΠΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠΎΠ²
ΠΠ»Ρ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ° Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΈΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½Ρ ΠΏΠ»Π°ΡΡΠΈΠ½Ρ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΠΎΠΌ 50×50 ΠΌΠΌ Ρ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ΠΉ Π·ΠΎΠ½ΠΎΠΉ 20×20 ΠΌΠΌ Ρ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠΌ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎΠΌ Π»ΡΠ½ΠΎΠΊ (Π΄ΠΎ 91 ΡΡ). ΠΡΠΈ ΠΈΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠΎΠ² ΠΌΡ ΡΡΠΊΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈΡΡ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΠΎΠΌ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΠΊΠ°ΠΌΠ΅Ρ Π² ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°, ΠΏΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΡΠ°ΠΊΠΈΠ΅ ΠΈΡ Π΄Π»ΠΈΠ½Π° ΠΈ ΡΠΈΡΠΈΠ½Π° ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ. Π‘Ρ Π΅ΠΌΠ° Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΎΡΠ° ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π° Π½Π° ΡΠΈΡ. 10.
ΠΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π», ΠΈΠ· ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Ρ Π±ΡΡΡ ΠΈΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½Ρ ΠΏΠ»Π°ΡΠΊΠΈ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠΌΠΈ ΡΠ²ΠΎΠΉΡΡΠ²Π°ΠΌΠΈ:
Ρ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΡΡΠΎΠΉΠΊΠΎΡΡΡ (ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π» Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ Π²ΡΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡ ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠΌΡΠΌ 95 Π‘-ΡΠ°ΠΌΠ°Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠ°Ρ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ° Π² ΡΠΈΠΊΠ»Π΅);
Ρ ΠΏΡΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ (Π½Π΅ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ ΠΏΠΎΠ΄Π²Π΅ΡΠ³Π°ΡΡΡΡ Π΄Π΅ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΠΈ Π΄Π°ΠΆΠ΅ ΠΏΡΠΈ Π½Π΅Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ Π²ΠΎΠ·Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡΡ );
Ρ Ρ ΠΈΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ ΠΈΠ½Π΅ΡΡΠ½ΠΎΡΡΡ (ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π» Π½Π΅ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡ Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΠ¦Π ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ);
Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅Π²ΠΈΠ·Π½Π° (ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π» Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ Π±ΡΡΡ Π½Π΅ Π΄ΠΎΡΠΎΠ³ΠΈΠΌ ΠΈ Π΄ΠΎΡΡΡΠΏΠ½ΡΠΌ).
ΠΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ Π±ΡΠ» ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±ΡΠ°Π½ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π», ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°Π΅Ρ Π²ΡΠ΅ΠΌΠΈ Π²ΡΡΠ΅ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΡΠΈΡΠ»Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π°ΠΌΠΈ — ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΊΠ° Aikor DecoDesign Black (ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎ ΠΠ΅ΡΠΌΠ°Π½ΠΈΡ). ΠΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠ»Π°ΡΠ΅ΠΊ Π΄Π΅Π»Π°Π»ΠΈ ΠΏΡΡΠ΅ΠΌ ΡΠ΅ΡΠΌΠΎΡΠΎΡΠΌΠΎΠ²ΠΊΠΈ Π½Π° ΠΌΠ΅ΡΠ°Π»Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠ°Π»Π»ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠ°Π½ΡΠΎΠ½Π°-ΠΏΠΎΠ·ΠΈΡΠΈΠΎΠ½Π΅ΡΠ° ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ Π½Π° ΡΠΈΡ 11. Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π»ΠΈ ΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΡ Ρ Π»ΡΠ½ΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π±Π°Π» ΡΠ°Π²Π΅Π½ 1,5 ΠΌΠΌ3.
2.2 ΠΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡΠ° ΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΈ ΡΠΌΠΈΡΠΈΠΈ SYBRgreen
Π RealTimeΠΠ¦Π ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½ΠΎ Π²ΡΡΠ΅ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π²ΠΈΠ΄ΠΎΠ² Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ². Π ΡΠ²ΠΎΠΈΡ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΡ ΠΌΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ SYBR Green. ΠΡΠΈ Π²ΡΠ±ΠΎΡΠ΅ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² ΠΌΡ ΡΡΠΊΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈΡΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΠ°ΠΌΠΈ, Π² ΡΠΎΠΌ ΡΠΈΡΠ»Π΅ ΡΡΠΎΠΈΠΌΠΎΡΡΡ, ΡΠΎΠ²ΠΌΠ΅ΡΡΠΈΠΌΠΎΡΡΡ Ρ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΈ Ρ. Π΄. Π’Π΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ Molecular beacons ΠΈ LightCycler ΡΡΠΎΡΡ ΠΎΡΡΡΠΈΠΌΠΎ Π΄ΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ, ΠΈ ΠΈΡ ΠΎΡΠΌΡΡΠ»Π΅Π½Π½ΠΎ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡΡ Π»ΠΈΡΡ Π² ΡΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΊΡΠ°ΠΉΠ½Π΅ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½Π°Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡ Π»ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ· ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΡΡΠΈΡ ΡΡ PCR-ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² (Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΠΏΡΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π΅ SNP). ΠΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠΈ SYBR Green ΠΈ TaqMan ΡΡΠΎΡΡ Π΄Π΅ΡΠ΅Π²Π»Π΅, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΠΈΠ· Π½ΠΈΡ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΡΠ²ΠΎΠΈ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΠΈ. Π ΡΠ°Π±Π»ΠΈΡΠ΅ 1, ΠΏΡΠΈΠ²Π΅Π΄Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π½ΠΈΠΆΠ΅, ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠΈ SYBR Green ΠΈ TaqMan. Π Π½Π°ΡΠΈΡ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡΡ ΠΌΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΡΠΈ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ. ΠΠ½ΠΈ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΡΡ Π² RealTimeΠΠ¦Π Π΄Π»Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΠ°ΡΠ°ΠΌΠ΅ΡΡΠΎΠ² ΠΠ¦Π Π½Π΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Π² Ρ ΠΎΠ΄Π΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΌΡ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΡΡ Π·Π°Π΄Π°Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈΡΡ ΡΡΠΈΠΌΠΈ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ°ΠΌΠΈ Π΄Π»Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° ΠΏΠΎ ΠΊΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΎΡΠΊΠ΅.
Π ΡΠ²ΠΎΠ΅ΠΉ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ ΠΌΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΠΉ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ SYBRgreen (10 000 ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΡΡΠΎΠΊ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΡΠΌΡ «ΠΠΠ-ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·») ΠΈ Π½Π°Π±ΠΎΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠΎΠ½Π΅Π½ΡΠΎΠ² Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ ΠΠ¦Π Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ TaqMan, ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ°Π½ΠΈΠ΅ΠΉ «Π‘ΠΈΠ½ΡΠΎΠ»» (Π½Π°ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½Π½ΡΠΉ ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅Ρ ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 100 ΠΏ.Π½.).
ΠΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ SYBR Green — ΠΈΡΠΊΠ»ΡΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΡΠ²ΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΠΉ ΠΈΠ½Π΄ΠΈΠΊΠ°ΡΠΎΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ. ΠΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ΡΡΡ Π΄Π»Ρ realtime-PCR, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠΎΠΊΡΠ°ΡΠΊΠΈ Π³Π΅Π»Π΅ΠΉ (ΠΊΠ°ΠΊ Π°Π³Π°ΡΠΎΠ·Π½ΡΡ , ΡΠ°ΠΊ ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠ°ΠΊΡΠΈΠ»Π°ΠΌΠΈΠ΄Π½ΡΡ ). ΠΡΠ΅Π΄Π΅Π» ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ Π΄Π»Ρ SYBR Green ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ 1−2 Π½Π°Π½ΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΠ° Π΄Π»Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΎΠ»ΠΈΠ³ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ² ΠΈ Π΄ΠΎ 20 ΠΏΠΈΠΊΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΠΠ. SYBR Green I ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°Π΅Ρ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΉ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΡΡ Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΠΠ-Π΄ΡΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° ΠΈ ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ Π±Π΅Π·ΠΎΠΏΠ°ΡΠ½ΡΠΌ ΠΏΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠΌΠΈ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠΌΠΈ — ΠΎΠ½ Π½Π΅ ΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠΎΠ²Π½Ρ ΠΌΡΡΠ°Π³Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ.
ΠΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠ° | ΠΠΎΡΡΠΎΠΈΠ½ΡΡΠ²Π° | ΠΠ΅Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΊΠΈ | |
SYBR Green | ΠΠ½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π΄Π΅ΡΠ΅Π²Π»Π΅ ΡΠΎΠ±ΡΠ°ΡΡ Π½ΠΎΠ²ΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ, Ρ.ΠΊ. Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ Π»ΠΈΡΡ Π·Π°ΠΊΠ°Π·Π°ΡΡ Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ. | ΠΠ΅Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°ΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ PCR-ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠ΅ΠΉ Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ. ΠΡΡΠΎΠΊΠΈΠ΅ ΡΡΠ΅Π±ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΊ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ — Π»ΡΠ±Π°Ρ Π΄Π²ΡΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΠΠ, Π² ΡΠΎΠΌ ΡΠΈΡΠ»Π΅ Π΄ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ², Π±ΡΠ΄Π΅Ρ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ½ΡΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ. ΠΠ΅Π½ΡΡΠ°Ρ ΡΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΌΠ°Π»ΡΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π°Ρ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ°. ΠΠΊΠΈΡΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π΅ΠΌ | |
TaqMan | ΠΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΉ Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ. ΠΠ΅Π½ΡΡΠΈΠ΅ ΡΡΠ΅Π±ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΊ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ: ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅ΡΠ½Π°Ρ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ Π±ΡΠ΄Π΅Ρ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΏΡΠΈ Π³ΠΈΠ±ΡΠΈΠ΄ΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠ±Ρ ΡΠΎ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ PCR-ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠΌ. ΠoΠ»ΡΡΠ°Ρ ΡΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΌΠ°Π»ΡΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π°Ρ ΡΡΠ±ΡΡΡΠ°ΡΠ°. | ΠΠΎΡΠΎΠ³ΠΎΠ²ΠΈΠ·Π½Π°. ΠΠΎΠ²ΡΠΉ Π·ΠΎΠ½Π΄ (ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ $ 200) Π΄Π»Ρ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ. ΠΠ΅Π½ΡΡΠ΅ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ Π΄Π»Ρ ΠΎΠΏΡΠΈΠΌΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ (Π΅ΡΠ»ΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΡ Π½Π΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π° Ρ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°ΡΠΈΠ΅ΠΉ Π·ΠΎΠ½Π΄Π° ΠΈ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ², ΡΠΎ, ΡΠΊΠΎΡΠ΅Π΅ Π²ΡΠ΅Π³ΠΎ, ΠΏΡΠΈΠ΄Π΅ΡΡΡ Π·Π°ΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ Π½ΠΎΠ²ΡΠΉ Π·ΠΎΠ½Π΄ ΠΈ Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΡ). | |
ΠΠ°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΎ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ: ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΡΠΌ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π² ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ΅ Ρ ΠΠΠ ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ 521 Π½ΠΌ, ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΡΠΌ Π²ΠΎΠ·Π±ΡΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΡ — 497 Π½ΠΌ (Π²ΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΡΠΌ ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 254 Π½ΠΌ). Π₯ΠΎΡΠΎΡΠΎ Π²ΠΎΠ·Π±ΡΠΆΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ ΡΡΠ°Π½Π΄Π°ΡΡΠ½ΡΠΌ 488-Π½ΠΌ Π»Π°Π·Π΅ΡΠΎΠΌ. ΠΠ²Π°Π½ΡΠΎΠ²ΡΠΉ Π²ΡΡ ΠΎΠ΄ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ — ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 0.8 (ΡΡΠΎ Π² 5 ΡΠ°Π· ΠΏΡΠ΅Π²ΡΡΠ°Π΅Ρ ΠΊΠ²Π°Π½ΡΠΎΠ²ΡΠΉ Π²ΡΡ ΠΎΠ΄ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° ΡΡΠΈΠ΄ΠΈΠΉ-ΠΠΠ). ΠΠ±ΡΡΠ½ΠΎ SYBR Green Ρ ΠΎΡΠΎΡΠΎ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π΅Ρ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ Π΄ΠΎ C (T) = 35−37, Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΡΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π½Π°ΡΠΈΠ½Π°Π΅Ρ ΠΏΠ°Π΄Π°ΡΡ. ΠΠΈΠ°ΠΏΠ°Π·ΠΎΠ½ Π΄ΠΎΡΡΠΎΠ²Π΅ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ² Π»Π΅Π³ΠΊΠΎ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΠΈΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠ°ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ², ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Ρ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π½Π΅Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΡΡ real-time PCR.
Π ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ΅ TaqMan ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ Π·ΠΎΠ½Π΄, ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½Π½ΡΠΉ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΌ FAM ΠΈ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡΠΈΠΉ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ:
5'(FAM) — Π‘TT GAA AGA TCT GCT AGA GTC AGC TTG TCA GCG — (TAMRA) — 3'. ΠΠ»ΠΈΠ½Π° 33 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄Π°. ΠΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΠΉ Π²Π΅Ρ 10 137. ΠΠ»ΠΈΠ½Π° Π²ΠΎΠ»Π½Ρ Π²ΠΎΠ·Π±ΡΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΡ FAM 470 Π½ΠΌ, Π΄Π»ΠΈΠ½Π° Π²ΠΎΠ»Π½Ρ ΡΠΌΠΈΡΡΠΈΠΈ 525 Π½ΠΌ.
ΠΠ΅ΡΠ΅Π΄ ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΎΠΉ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ»ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡ ΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΈ ΠΈΡΠΏΡΡΠΊΠ°Π½ΠΈΡ ΡΠ²Π΅ΡΠ° ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΡΡΠΎΡΠ° Π½Π° ΠΏΡΠΈΠ±ΠΎΡΠ΅ Perkin Elmer MPF-44-B Fluorescence Spectrophotometer. Π Π΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Ρ Π½Π° ΡΠΈΡ. 13.
Π ΠΈΡ. 13. ΠΡΠ°ΡΠΈΠΊ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° ΡΠΎΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΎΡΠ° ΠΎΡ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ.
ΠΠ° ΡΠΈΡΡΠ½ΠΊΠ΅ ΡΠΈΠ½Π΅ΠΉ ΠΊΡΠΈΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡ ΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΠ²Π΅ΡΠ° ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΌ. ΠΡΠΈΠ²Π°Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π° ΠΏΡΠΈ ΡΠΌΠΈΡΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ° 520Π½ΠΌ. ΠΠΈΠ΄Π½ΠΎ ΡΡΠΎ SYBR ΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠ°Π΅Ρ ΡΠ²Π΅Ρ Π΄Π»ΠΈΠ½Π½ΠΎΠΉ 260Π½ΠΌ (ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΠΉ ΠΏΠΈΠΊ). ΠΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΏΠΈΠΊ ΠΏΡΠΈΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π½Π° 470 ΠΈ 495 Π½ΠΌ. ΠΠ΅Π»Π΅Π½Π°Ρ ΠΊΡΠΈΠ²Π°Ρ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°Π΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡ ΠΈΡΠΏΡΡΠΊΠ°Π½ΠΈΡ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ. Π‘ΠΎΠ³Π»Π°ΡΠ½ΠΎ Π΅ΠΉ, ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΊΠ°Π»ΡΡΠΎΡ ΠΈΡΠΏΡΡΠΊΠ°Π΅Ρ ΡΠ²Π΅Ρ Ρ Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ 520 Π½ΠΌ. ΠΡΠ° ΠΊΡΠΈΠ²Π°Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π° ΠΏΡΠΈ Π²ΠΎΠ·Π±ΡΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ° Π΄Π»ΠΈΠ½Π½ΠΎΠΉ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ 470 Π½ΠΌ.
2.3. ΠΡΠΎΡΠΎΠΊΠΎΠ»Ρ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ:
2.3.1. ΠΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠ° ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΠΈΡΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π½Π°Π±ΠΎΡΠ° (ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ° SYBgreen)
ΠΠ»Ρ ΠΠ¦Π Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ pcDNA3 cavmut — ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Π½ΡΠΉ Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡ, ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠΉ ΠΊΠΠΠ ΠΌΡΡΠ°Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠ°Π²Π΅ΠΎΠ»ΠΈΠ½Π° (P132L) ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ° (ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½Π°Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ 0,7 ΠΌΠ³/ΠΌΠ»), ΠΏΠ°ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² pc1(ΠΈΡΡ .ΠΊΠΎΠ½Ρ. 31 ΠΌΠΊΠ) ΠΈ pc2 (ΠΈΡΡ .ΠΊΠΎΠ½Ρ. 12 ΠΌΠΊΠ), SYBRgreen (10 000 ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ) ΠΈ taq-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ. Π€Π΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΏΠΎΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠΈΡΠΌΠΎΠΉ Sigma Π² Π½Π°Π±ΠΎΡΠ΅ c Π±ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΌ Π² Π»ΠΈΠΎΡΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎΠΌ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ Π² ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ΅ Ρ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»Π΅ΠΌ. ΠΠΈΡ ΡΠ°ΡΡΡΠΈΡΠ°Π½ Π½Π° ΠΎΠ±ΡΠΈΠΉ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ 20 ΠΌΠΊΠ». ΠΠΌΠ»ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΡΡ ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ (ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ) ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΠΎΠΌ ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 650 ΠΏ.Π½.
ΠΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠ° ΠΠ¦Π :
Β· 7 Π½Π³ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ,
Β· 0,2ΠΌΠΊΠ pc1,
Β· 0,2ΠΌΠΊΠ pc2,
Β· Π΄Π΅ΠΈΠΎΠ½ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½Π°Ρ (milliQ) Π΄ΠΈΡΡΠΈΠ»Π»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½Π°Ρ Π²ΠΎΠ΄Π° Π΄ΠΎ 10 ΠΌΠΊΠ»,
Β· 10ΠΌΠΊΠ» ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ,
Β· 0,2ΠΌΠΊΠ» SYBRgreen (ΡΠ°Π·Π²Π΅Π΄Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π² 100 ΡΠ°Π·).
ΠΠ»Ρ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΡ ΡΠΎΠ±ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ. Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»Ρ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΠ»Π° Π»ΡΠ½ΠΊΠ° Ρ ΠΠ¦Π -Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΡΡ Π±Π΅Π· ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ. ΠΠ»Ρ ΠΎΡΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠΈ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ ΠΠ¦Π Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ 30 ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ². Π Π΅Π³ΠΈΡΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎ ΠΊΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΎΡΠΊΠ΅. Π’Π΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ΅ΠΆΠΈΠΌ (1 ΡΠΈΠΊΠ»):
94ΠΎ Π‘ 120 ΡΠ΅ΠΊ | 1 ΡΠΈΠΊΠ» | |
94ΠΎ 20 ΡΠ΅ΠΊ | 30 ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² | |
60ΠΎ 20 ΡΠ΅ΠΊ | ||
72 ΠΎ Π‘ 40 ΡΠ΅ΠΊ | ||
ΠΈ ΠΏΠΎ ΠΎΠΊΠΎΠ½ΡΠ°Π½ΠΈΠΈ Π½ΡΠΆΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² 72 ΠΎ Π‘ 120 ΡΠ΅ΠΊ | ||
2.3.2. ΠΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠ° ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π±Π΅Π· ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠΈΡΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π½Π°Π±ΠΎΡΠ° (ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ° SYBRgreen)
Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ pcDNA3 cavmut (ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½Π°Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ 0,7 ΠΌΠ³/ΠΌΠ»), ΠΏΠ°ΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠ΅ΡΠΎΠ² pc1 (ΠΈΡΡ .ΠΊΠΎΠ½Ρ. 31ΠΌΠΊΠ) ΠΈ pc2 (ΠΈΡΡ .ΠΊΠΎΠ½Ρ. 12 ΠΌΠΊΠ), SYBRgreen ΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ° (taq-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π°) Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ — ΡΠ°ΠΊ Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΡΠΉ Hotstart, 10-ΠΊΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΡΡΠΎΠΊ Π±ΡΡΠ΅ΡΠ°, ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΡ dNTP ΠΈ MgCl2. Π‘Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅Π»Π°ΠΌΠΈ Π½ΡΠΆΠ΅Π½ Π΄Π»Ρ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ Π½Π°ΡΠΈΠ½Π°Π» ΡΠ²ΠΎΡ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΏΡΠΈ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΈΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ°Ρ (ΠΏΠ΅ΡΠ²Π°Ρ ΡΠ΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ° ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΊΠ»Π° ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ — 94ΠΎΠ‘), Π° ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠ½Π°ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΎΡΡΠ°Π²Π°Π»ΡΡ Π½Π΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌ. ΠΠ±ΡΠΈΠΉ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ 20 ΠΌΠΊΠ». ΠΠΌΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ΄Π΄Π°Π²Π°Π»ΡΡ ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΠΎΠΌ ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 650 ΠΏ.Π½.
ΠΠΎΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠ° ΠΠ¦Π :
Β· 7 Π½Π³ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ,
Β· 0,2 ΠΌΠΊΠ pc1,
Β· 0,2 ΠΌΠΊΠ pc2,
Β· Π΄Π΅ΠΈΠΎΠ½ΠΈΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½Π°Ρ (milliQ) Π΄ΠΈΡΡΠΈΠ»Π»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½Π°Ρ Π²ΠΎΠ΄Π° Π΄ΠΎ 14 ΠΌΠΊΠ»,
Β· 2 ΠΌΠΊΠ» SYBRgreen,
Β· 2 ΠΌΠΊΠ» Π±ΡΡΠ΅ΡΠ° (ΡΡΠΎΠΊ Ρ 10),
Β· 2 ΠΌΠΊΠ» 2 ΠΌΠ MgCl2,
Β· 0,2 ΠΌΠΊΠ» taq-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ (5Π/ΠΌΠ»),
Β· 0,4 ΠΌΠΊΠ» 0,2 ΠΌΠ dNTP (Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΡΡΠΈΡΠΎΡΡΠΎΡΡ).
ΠΠ»Ρ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΡ ΡΠΎΠ±ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ. Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»Ρ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΠ»Π° Π»ΡΠ½ΠΊΠ° Ρ ΠΠ¦Π -Π½ΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΡΡ Π±Π΅Π· ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ. ΠΠ»Ρ ΠΎΡΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠΈ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠΉ ΠΠ¦Π Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ΅ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ 30 ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ². Π Π΅Π³ΠΈΡΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎ ΠΊΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΎΡΠΊΠ΅.
Π’Π΅ΠΌΠΏΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ΅ΠΆΠΈΠΌ (1 ΡΠΈΠΊΠ»):
94ΠΎ Π‘ 120 ΡΠ΅ΠΊ | 1 ΡΠΈΠΊΠ» | |
94ΠΎ 20 ΡΠ΅ΠΊ | 30 ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² | |
60ΠΎ 20 ΡΠ΅ΠΊ | ||
72 ΠΎ Π‘ 40 ΡΠ΅ΠΊ | ||
ΠΈ ΠΏΠΎ ΠΎΠΊΠΎΠ½ΡΠ°Π½ΠΈΠΈ Π½ΡΠΆΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² 72 ΠΎ Π‘ 120 ΡΠ΅ΠΊ | ||
2.3.3. ΠΡΠΎΡΠΎΠΊΠΎΠ» ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΏΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ TaqMan.
ΠΠ° ΠΎΠ΄Π½Ρ ΠΏΡΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌ 20 ΠΌΠΊΠ» ΡΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°ΡΡ:
Β· 8,75 ΠΌΠΊΠ» ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π,
Β· 8,75 ΠΌΠΊΠ» ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π,
Β· 0,2 ΠΌΠΊΠ» Taq-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ,
Β· 2 ΠΌΠΊΠ» ΠΠΠ.
95ΠΎ Π‘ 5 ΠΌΠΈΠ½ | 1 ΡΠΈΠΊΠ» | |
95ΠΎ Π‘ 20 ΡΠ΅ΠΊ | 40 ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² | |
62ΠΎ Π‘ 20 ΡΠ΅ΠΊ | ||
72 ΠΎ Π‘ 40 ΡΠ΅ΠΊ | ||
ΠΈ ΠΏΠΎ ΠΎΠΊΠΎΠ½ΡΠ°Π½ΠΈΠΈ Π½ΡΠΆΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠ² 72 ΠΎ Π‘ 40 ΡΠ΅ΠΊ | ||
2.4 ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ Π² 8% ΠΠΠΠ
ΠΠ»Ρ ΠΏΡΠΈΠ³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ Π³Π΅Π»Ρ Π±ΡΠ»ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΎ.
gels | |||
H2O (ΠΌΠ») | 3,7 | 7,4 | |
30%ΠΠ/bAA (29:1) (ΠΌΠ») | 1,87 | 3,74 | |
5Ρ Π’ΠΠ (ΠΌΠ») | 1,4 | 2,8 | |
TEMED (ΠΌΠΊΠ») | |||
10% PSA (ΠΌΠΊΠ») | |||
Π‘ΠΎΠ±ΠΈΡΠ°Π»ΠΈ ΠΊΠ°ΡΡΠ΅ΡΡ Ρ Π²Π΅ΡΡΠΈΠΊΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠ»Π°ΡΡΠΈΠ½ΠΊΠ°ΠΌΠΈ. Π Π³Π΅Π»Ρ Π²Π½ΠΎΡΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΎΡΡ, ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΡΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΈ Π·Π°Π»ΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ 4.2 ΠΌΠ» ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΠΏΠ»Π°ΡΡΠΈΠ½. ΠΠΎΡΠ»Π΅ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π»Ρ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΡΠ΅ΠΊΠΎΠ» Π²ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ Π³ΡΠ΅Π±Π΅Π½ΠΊΡ. ΠΠΎΡΠ»Π΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π»Ρ ΠΏΠ»Π°ΡΡΠΈΠ½Ρ ΠΈΠ·Π²Π»Π΅ΠΊΠ°Π»ΠΈ ΠΈΠ· ΠΊΠ°ΡΡΠ΅ΡΡ ΠΈ ΠΏΠΎΠΌΠ΅ΡΠ°Π»ΠΈ Π² ΠΊΠ°ΠΌΠ΅ΡΡ Π΄Π»Ρ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π·Π°. ΠΠ°Π»ΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΠ΄Π½ΡΠΉ Π±ΡΡΠ΅Ρ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΡΠΎΡΡΠ°Π²Π°:
0,5 Π ΠΠΠ’Π, ΡΠ=8.0,
0,4 Borie Acid,
0,4 Tris.
ΠΠ·Π²Π»Π΅ΠΊΠ°Π»ΠΈ Π³ΡΠ΅Π±Π΅Π½ΠΊΡ ΠΈΠ· Π³Π΅Π»Ρ, Π½Π΅ Π΄Π΅ΡΠΎΡΠΌΠΈΡΡΡ ΠΊΠ°ΡΠΌΠ°Π½Ρ. ΠΠΈΠΏΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠΏΡΠΈΡΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΎΠΌΡΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΊΠ°ΡΠΌΠ°Π½Ρ ΠΎΡ Π½Π΅ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠΈΠ·ΠΎΠ²Π°Π²ΡΠ΅ΠΉΡΡ ΠΆΠΈΠ΄ΠΊΠΎΡΡΠΈ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΠ΄Π½ΡΠΌ Π±ΡΡΠ΅ΡΠΎΠΌ. ΠΠ½ΠΎΡΠΈΠ»ΠΈ ΠΠΠ ΠΏΡΠΎΠ±Ρ Π² ΠΊΠ°ΡΠΌΠ°Π½Ρ ΠΏΠΈΠΏΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ, V=5 ΠΌΠΊΠ». ΠΠΎΠ΄ΠΊΠ»ΡΡΠ°Π»ΠΈ ΠΊΠ°ΠΌΠ΅ΡΡ ΠΊ ΠΈΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΊΡ ΡΠΎΠΊΠ°. ΠΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΡΠΎΡΠ΅Π· ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΡ ΠΌΠΈΠ½ΡΡΠ° ΠΊ ΠΏΠ»ΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΠΏΠΎΡΡΠΎΡΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΈΠ»Π΅ ΡΠΎΠΊΠ° I=20ΠΌA Π½Π° ΠΎΠ΄Π½Ρ ΠΏΠ»Π°ΡΡΠΈΠ½Ρ, ΠΏΠΎΠΊΠ° Π»ΠΈΠ΄ΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ Π½Π΅ Π²ΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΠ» ΠΈΠ· Π³Π΅Π»Ρ (Π±ΡΠΎΠΌΡΠ΅Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΠΈΠ½ΠΈΠΉ), ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 40 ΠΌΠΈΠ½ΡΡ.
2.5. Π‘ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ° Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠΎΠ² Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π°
ΠΠΎΡΠ»Π΅ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΠ΅Π³ΠΈΡΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Π½Π° ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠ΅, ΡΠΎΠ±ΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΉ Π½Π° Π±Π°Π·Π΅ Π±ΠΈΠ½ΠΎΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΊΠΎΠΏΠ° ΠΠΠ‘-11 (Π ΠΎΡΡΠΈΡ) c ΡΠ΅Π»Π΅Π²ΠΈΠ·ΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΌ Π°Π΄Π°ΠΏΡΠΎΡΠΎΠΌ TV-A ΠΈ ΠΊΠ°ΠΌΠ΅ΡΠΎΠΉ ΡΠΈΡΠΌΡ «WateΡ» (Japan) WAT-120 N. Π‘ΠΈΠ³Π½Π°Π» Ρ ΠΊΠ°ΠΌΠ΅ΡΡ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π°Π»ΡΡ Π½Π° ΠΏΠ»Π°ΡΡ Π²ΠΈΠ΄Π΅ΠΎΠ·Π°Ρ Π²Π°ΡΠ° «PixelView CX 881 P», Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡΠΈΠΉΡΡ Π½Π° ΡΠΈΠ½Π΅ IDE ΠΏΠ΅ΡΡΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠΎΠΌΠΏΡΡΡΠ΅ΡΠ° ΡΠΈΠΏΠ° IBM PC. Π‘ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΠΊΠΈ ΡΠ΅Π³ΠΈΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π» (Π²ΠΎΠ·Π±ΡΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ — 470 Π½ΠΌ, ΡΠΌΠΈΡΡΠΈΡ — 520 Π½ΠΌ), ΠΎΠ±ΡΠ°Π±Π°ΡΡΠ²Π°Π»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΡ «QwantΠ°» (ΠΎΡΠΈΠ³ΠΈΠ½Π°Π»ΡΠ½Π°Ρ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠΊΠ° Π»Π°Π±ΠΎΡΠ°ΡΠΎΡΠΈΠΈ).
ΠΠ½ ΠΏΠΎΠ΄Π΅Π»Π΅Π½ Π½Π° 4 ΡΠ°ΡΡΠΈ. ΠΠ΅ΡΠ²Π°ΡCapture window — ΡΡΠΎ ΠΎΠ½Π»Π°ΠΉΠ½ ΠΎΠΊΠ½ΠΎ, Π² ΠΏΠΎΠ»Π΅ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΡΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΠΈΠ·ΠΎΠ±ΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π»ΡΠ½ΠΊΠΈ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠΌ. ΠΠ΅Π²ΠΎΠ΅ ΡΠ΅ΠΌΠ½ΠΎΠ΅ ΠΏΠΎΠ»Π΅ — ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΠ»Π΅ Π·Π°Ρ Π²Π°ΡΠ° ΠΈΠ·ΠΎΠ±ΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ. ΠΠ΄Π΅ΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π½Π°ΡΡΡΠΎΠ΅ΠΊ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠΊΠ°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠ±Π»Π°ΡΡΠΈ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ, Π³ΡΠ°Π½ΠΈΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±ΠΎΠ·Π½Π°ΡΠ΅Π½Ρ Π·Π΅Π»Π΅Π½ΠΎΠΉ ΠΎΠΊΡΡΠΆΠ½ΠΎΡΡΡΡ, ΡΡΡΠ°Π½Π°Π²Π»ΠΈΠ²Π°ΡΡ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅Ρ ΠΈ ΡΠΎΡ ΡΠ°Π½ΡΡΡ ΠΈΠ·ΠΎΠ±ΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅. ΠΠΈΠΆΠ½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ»Ρ — «ΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°» ΠΈ «ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π² ΡΠ΅ΠΊΡΡΠ΅ΠΌ ΠΊΠ»Π°ΡΡΠ΅ΡΠ΅» Π΄Π°ΡΡ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠ½ΠΈΠΌΠ°ΡΡ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΈΡ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ ΠΈ ΠΌΠ°Π½ΠΈΠΏΡΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΈΡ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΡΠ°ΠΌΠΈ. ΠΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΠ° ΡΠ°ΠΊ ΠΆΠ΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΡΠ½ΠΈΠΌΠ°ΡΡ Π·Π°ΠΏΠΎΠΌΠΈΠ½Π°ΡΡ ΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π±Π°ΡΡΠ²Π°ΡΡ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π½Π΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Ρ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ³ΠΎ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ Π½Π° ΡΠΈΡΡΠ½ΠΊΠ΅, Π½ΠΎ ΠΈ Ρ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ ΡΡΠ΄ΠΎΠ² Π»ΡΠ½ΠΎΠΊ Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°ΠΌΠΈ.
ΠΠ±ΠΎΡΡΠ΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· Π΄Π²ΡΡ ΠΊΠΎΡΠΏΡΡΠΎΠ². ΠΠΎΡΠΏΡΡ Π½ΠΎΠΌΠ΅Ρ 2 ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΌΠ΅ΡΠ½ΡΠΉ ΡΡΠΎΠ»ΠΈΠΊ, ΠΊΡΠ΄Π° ΠΊΠ»Π°Π΄Π΅ΡΡΡ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΠΉ ΡΠΈΠΏ. ΠΠ° ΠΊΠΎΡΠΏΡΡΠ΅ 1 Π·Π°ΠΊΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½Ρ ΡΠ²Π΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΎΠ΄Π½Π°Ρ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ° ΠΈ ΡΠΈΡΡΠΎΠ²Π°Ρ Π’V-ΠΊΠ°ΠΌΠ΅ΡΠ°. ΠΠ±ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ² ΠΊΠ°ΠΌΠ΅ΡΡ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ ΡΡΠ΅ΠΌΠ½ΡΠ΅ ΠΎΠΏΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΡΠΈΠ»ΡΡΡΡ. ΠΡΠΈ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·Π΅ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠ² Ρ SYBRgreen ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ Π·Π΅Π»Π΅Π½ΡΠΉ ΡΠ²Π΅ΡΠΎΡΠΈΠ»ΡΡΡ, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Π½Π΅ Π²ΠΎΠ»Π½Ρ ΠΈΡΠΏΡΡΠΊΠ°Π΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΠΈΠΌ ΡΠ²Π΅ΡΠ°. Π‘Π²Π΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΎΠ΄Π½Π°Ρ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ° ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ ΠΈΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΊΠΎΠ² ΡΠ²Π΅ΡΠ°, Π΄Π»ΠΈΠ½Π° Π²ΠΎΠ»Π½Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΠΊΡΡΡ Π²ΠΎΠ·Π±ΡΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΡ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ. ΠΠ° ΡΠΈΡΡΠ½ΠΊΠ΅ ΡΡΠΎ ΠΈΠ·ΠΎΠ±ΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΎ ΡΠΈΠ½ΠΈΠΌΠΈ ΡΡΡΠ΅Π»ΠΊΠ°ΠΌΠΈ. ΠΠ΅Π»Π΅Π½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½Π° ΡΠΌΠΈΡΡΠΈΡ.
ΠΠ»Π°Π²Π° 3. Π ΠΠΠ£ΠΠ¬Π’ΠΠ’Π« Π ΠΠΠ‘Π£ΠΠΠΠΠΠ
3.1. ΠΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΎΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ
ΠΠΎΡΠΎΠ²ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ°Π·Π²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡΠΌΠΈ 7, 3.5, 1.75, 0.875 ΠΈ 0.219 Π½Π³. Π ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡΠ°ΠΌ ΠΠΠ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²ΠΎΠ΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΊΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ SYBRgreen ΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠΎΠΊΠΎΠ»Ρ ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΌΡ Π² ΠΏΡΠ½ΠΊΡΠ΅ 2.3.1. ΠΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌ 1 ΠΌΠΊΠ» ΠΏΠΎΠΌΠ΅ΡΠ°Π»ΠΈ Π² Π»ΡΠ½ΠΊΠΈ ΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠΎΠ². ΠΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈ ΡΠ΅Π³ΠΈΡΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΈ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΡ «QwantΠ°». Π Π΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Ρ Π² ΡΠ°Π±Π»ΠΈΡΠ΅ 2 ΠΈ ΡΠΈΡ. 16.
Π’Π°Π±Π»ΠΈΡΠ° 2
ΠΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΠΠ (Π½Π³) | Π€Π»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π» (Ρ.Π΅.) | ||
ΠΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ | ΠΡΠΊΠ»ΠΎΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅ | ||
+/-15 | |||
3,5 | +/-13 | ||
1,75 | +/-11 | ||
0,875 | +/-7 | ||
0,437 | +/-4 | ||
0,219 | +/-2 | ||
+/-2 | |||
ΠΠ° Π³ΡΠ°ΡΠΈΠΊΠ΅ (ΡΠΈΡ. 16) Π²ΠΈΠ΄Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ ΠΎΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ Π½Π΅ΠΊΡΡ ΠΊΡΠΈΠ²ΡΡ. Π Π°Π·Π±ΡΠΎΡ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ ΠΏΠΎ ΠΌΠ΅ΡΠ΅ ΡΠΎΡΡΠ° ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ.
Π ΠΈΡ 16. ΠΡΠ°ΡΠΈΠΊ Π·Π°Π²ΠΈΡΠΈΠΌΠΎΡΡΠΈ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° ΠΎΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΠΠ.
3.2. ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΠ¦Π Π² ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π² ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠ°Ρ
ΠΠ΅ΡΠ΅Π΄ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°ΡΠΊΠ°Ρ ΠΠ¦Π ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π»ΠΈ Π² ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠ°Ρ Eppendorf Ρ ΠΎΠ±ΡΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ 5, 4, 3, 2 ΠΈ 1 ΠΌΠΊΠ» (ΠΈΡΡ ΠΎΠ΄Π½Π°Ρ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΠΠ — 7 Π½Π³) Π² ΡΡΠ΅Π΄Π΅ ΠΌΠ°ΡΠ»Π°. ΠΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½Π°Ρ ΠΌΠΎΠ΄Π΅Π»Ρ ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠ°ΡΡΡΠΈΠ·Π°ΡΠΈΠΈ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π΄Π°ΡΡ ΠΎΡΠ²Π΅Ρ Π½Π° Π²ΠΎΠΏΡΠΎΡ Π² ΠΊΠ°ΠΊΠΎΠΌ ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ΅ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΎΡ ΠΎΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΈ Π½Π°ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎ. ΠΠ°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΎ ΠΏΡΠΈΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ Π±ΡΠ΄ΡΡ ΡΠ²ΠΎΠ΅ΠΎΠ±ΡΠ°Π·Π½ΡΠΌ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»Π΅ΠΌ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ° Π² ΠΈΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠ°Ρ .
ΠΠ¦Π -ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π·Π°Π»ΠΈΠ²Π°Π»ΠΈ ΠΌΠΈΠ½Π΅ΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌ ΠΌΠ°ΡΠ»ΠΎΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌ 10 ΠΌΠΊΠ». Π ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π»ΠΈ ΠΊΠ°ΠΏΠ΅Π»ΡΠΊΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ° Π² ΡΡΠ΅Π΄Π΅ ΠΌΠ°ΡΠ»Π° (ΡΠΈΡ. 17 Π).
Π ΠΈΡ. 17. ΠΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠΈ Ρ ΡΠ°Π·Π½ΡΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌ ΠΠ¦Π ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ Π² ΡΡΠ΅Π΄Π΅ ΠΌΠΈΠ½Π΅ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ°ΡΠ»Π°. Π — ΡΡ Π΅ΠΌΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ ΠΈΠ·ΠΎΠ±ΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅. Π — ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΈΠ·ΠΎΠ±ΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠ°ΠΏΠ»ΠΈ Π² ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π΅ ΠΊΠ°ΠΌΠ΅ΡΡ.
Π ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»Ρ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΠ»Π° ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π±Π΅Π· ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ Π² ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ . ΠΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Π² Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΎΡΠ΅ «Π’Π΅ΡΡΠΈΠΊ» ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° «ΠΠΠ-ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡ». Π Π΅Π°ΠΊΡΠΈΡ ΡΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΠΈ Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ Π·ΠΎΠ½Π΄ΠΎΠ² SYBRgreen ΠΈ TaqMan ΠΏΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠΎΠΊΠΎΠ»Π°ΠΌ ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½Π½ΡΠΌ Π² ΠΏΡΠ½ΠΊΡΠ΅ 2.3.2 ΠΈ 2.3.3 ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ. ΠΠΎΡΠ»Π΅ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΈΠ· ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΠΏΡΠΎΠ±Ρ ΠΎΡΠ±ΠΈΡΠ°Π»ΠΈ ΠΏΠΎ 1 ΠΌΠΊΠ» Π½Π° ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π² ΡΡΡΠΈΠΏΠ°Ρ . Π’Π΅ΠΌ ΡΠ°ΠΌΡΠΌ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΡΠ»ΠΈ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ Π² ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ . ΠΠΎ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ°ΠΌ ΡΡΠΈΡ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ ΡΡΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΠ± ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ Π² ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΠΊΠ°ΠΏΠ»Π΅. Π Π΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ Π½Π° ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΌ Π²ΡΡΠ΅ ΠΎΠ±ΠΎΡΡΠ΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π² ΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠ°Ρ ΠΈ Π² ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½Π΅ΡΠ΅Π½Π½ΡΡ Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠ°Ρ (ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌ Π°Π½Π°Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠΎΠΉ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ² Π²ΠΎ Π²ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΡΠΈ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ — 1 ΠΌΠΊΠ») (ΡΠΈΡ. 18.).
Π Π
Π ΠΈΡ 18. ΠΡΠ½ΠΊΠ° ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠ° Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠΎΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌ 1 ΠΌΠΊΠ». Π — Π² ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π΅, Π — Π²ΠΈΠ΄ Π² ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ² ΠΊΠ°ΠΌΠ΅ΡΡ (ΡΠΎΡΠΎΠ³ΡΠ°ΡΠΈΡ).
Π Π΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Ρ Π² ΡΠ°Π±Π»ΠΈΡΠ°Ρ 2 ΠΈ 3.
Π’Π°Π±Π»ΠΈΡΠ° 2.
ΠΠ±ΡΠ΅ΠΌ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ (ΠΌΠΊΠ») | ΠΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Ρ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ΠΉ (Ρ.Π΅. ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ) | ΠΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Π±Π΅Π· ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ (Ρ.Π΅. ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ) | ΠΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° (Ρ.Π΅. ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ) | ΠΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Ρ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ΠΉ(Ρ.Π΅. ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ) | ΠΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Π±Π΅Π· ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ (Ρ.Π΅. ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ) | ΠΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° (Ρ.Π΅. ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ) | |
Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠ°Ρ | Π² ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ΅ 1 ΠΌΠΊΠ» Π² ΠΏΠ»Π°ΡΡΠΈΠΊΠΎΠ²ΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΡΡΠΈΠΏΠ°Ρ | ||||||
130,43 | 119,12 | 11,31 | 59,44 | 31,38 | 28,06 | ||
129,82 | 111,55 | 18,25 | 50,89 | 44,01 | 6,88 | ||
176,10 | 150,34 | 25,76 | 63,01 | 59,86 | 3,14 | ||
162,77 | 155,13 | 7,64 | 65,70 | 55,88 | 9,82 | ||
161,55 | 149,38 | 12,17 | 70,00 | 52,70 | 17,30 | ||
Π’Π°Π±Π»ΠΈΡΠ° 3.
ΠΠ±ΡΠ΅ΠΌ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ (ΠΌΠΊΠ») | ΠΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Ρ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ΠΉ (Ρ.Π΅. ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈ) | ΠΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Π±Π΅Π· ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ (Ρ.Π΅. ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ) | ΠΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° (Ρ.Π΅. ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ) | ΠΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Ρ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ΠΉ (Ρ.Π΅. ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ) | ΠΠ±ΡΠ°Π·ΡΡ Π±Π΅Π· ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ(Ρ.Π΅ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ) | ΠΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° (Ρ.Π΅. ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠΈΠΈ) | |
Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΡΠΎΠ±ΠΈΡΠΊΠ°Ρ | Π² ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ΅ 1ΠΌΠΊΠ» Π² ΠΏΠ»Π°ΡΡΠΈΠΊΠΎΠ²ΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΡΡΠΈΠΏΠ°Ρ | ||||||
218,43 | 199,52 | 18,91 | 98,48 | 78,61 | 19,87 | ||
226,78 | 202,54 | 24,24 | 90,61 | 81,81 | 8,80 | ||
187,78 | 156,85 | 30,93 | 92,38 | 76,21 | 16,17 | ||
199,48 | 166,48 | 33,01 | 112,30 | 97,60 | 14,70 | ||
215,14 | 186,65 | 28,49 | ; | 65,43 | ; | ||
ΠΠΎ ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ°ΠΌ Π²ΠΈΠ΄Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΡΠ»Π° Π²ΠΎ Π²ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΎΠ±Π°Ρ , ΡΠ°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ Π²ΠΎ Π²ΡΠ΅Ρ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΡΠΈΡΠ»ΠΎ, ΠΎΠ·Π½Π°ΡΠ°ΡΡΠ΅Π΅ ΠΏΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π°, ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΌ. ΠΡΠ»ΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠΈΡΡ Π²Π½ΠΈΠΌΠ°Π½ΠΈΠ΅ Π½Π° ΠΏΡΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° Π² ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ°Ρ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅ΡΡΠ΅ΠΌΡΡ Π² ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΡΡΠΈΠΏΠ°Ρ ΠΈ ΡΡΠ°Π²Π½ΠΈΡΡ Ρ Π΄ΡΡΠ³ Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΌ, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ΄Π΅Π»Π°ΡΡ Π²ΡΠ²ΠΎΠ΄, ΡΡΠΎ Π°ΠΌΠΏΠ»ΠΈΡΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΡ Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌ ΠΌΠΊΠ» ΠΏΡΠΎΡΠ»Π° Π½Π΅ ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎ, ΡΠ΅ΠΌ Π² ΠΎΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ . Π‘Π»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠΉ ΡΡΠ°ΠΏ ΡΠ°Π±ΠΎΡΡ — ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π² ΠΏΠ»Π°ΡΡΠΈΠΊΠΎΠ²ΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠ°Ρ Π² ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ΅ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ 1 ΠΌΠΊΠ».
3.3. ΠΡΠΎΠ²Π΅Π΄Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΠ¦Π ΡΠ΅Π°ΠΊΡΠΈΠΈ Π² ΠΏΠ»Π°ΡΡΠΈΠΊΠΎΠ²ΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠ°Ρ
ΠΠ¦Π ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎ Π²ΡΡΠ΅ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΌΡ ΠΏΡΠΎΡΠΎΠΊΠΎΠ»Ρ (ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡ ΠΊΠΈΡ) Π½Π° ΠΏΠ»Π°Π½ΡΠ΅ΡΠ΅ Ρ 25 Π»ΡΠ½ΠΊΠ°ΠΌΠΈ. ΠΠ¦Π ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΠ»ΠΈ Π² Π»ΡΠ½ΠΊΠΈ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠΎΠΌ 1 ΠΌΠΊΠ». ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π»ΠΎΡΡ 2 Π²ΠΈΠ΄Π° ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΠΎΠ±. ΠΠ΅ΡΠ²ΡΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»Ρ — ΡΡΠΎ ΠΏΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΡ Π±Π΅Π· ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΡ. ΠΡΠΎΡΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»Ρ — ΡΡΠΎ Π²ΠΎΠ΄Π½ΡΠΉ ΡΠ°ΡΡΠ²ΠΎΡ SYBRgreen ΡΠΎΠΉ ΠΆΠ΅ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅Π½ΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΡΡΠΎ ΠΈ Π² ΠΏΡΡ ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ. Π‘Ρ Π΅ΠΌΠ° ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ° ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π° Π½Π° ΡΠΈΡ. 19. ΠΠ·ΠΌΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈ ΡΠ΅Π³ΠΈΡΡΡΠ°ΡΠΈΡ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Π° ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΎΠΏΠΈΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΈ ΠΏΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΡ «QwantΠ°».