Иммуноферментный анализ. 
Механическая желтуха

ИФА — Иммуноферментный анализ — лабораторный иммунологический метод качественного или количественного определения различных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакция антиген-антитело. Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием фермента в качестве метки для регистрации сигнала. Этим методом мы определяли количество интерлейкинов в крови. Интерлейкины — группа цитокинов (небольшие пептидные информационные молекулы.), синтезируемая в основном лейкоцитами (по этой причине было выбрано окончание «-лейкин»). Также производятся мононуклеарными фагоцитами и другими тканевыми клетками. Интерлейкины являются частью иммунной системы.

Прямой иммуноферментный анализ — этапы проведения :

В прямом иммуноферментном анализе используют антитела к выявляемому антигену, соединенные со специфической меткой. Эта специфическая метка и есть субстрат ферментативной реакции.

Прикрепление антигенов к поверхности лунки и соединение антигена с антителом.

Как проходит прямой иммуноферментный анализ? Берется биологический материал (кровь, соскобы со слизистых, мазки) и помещается в специальные лунки. Биологический материал оставляют в лунках на 15−30 минут, чтобы антигены могли приклеиться к поверхности лунок. Далее в эти лунки добавляют антитела к выявляемому антигену. Это значит, что выявляя антигены, например, сифилиса, добавляются антитела против антигенов сифилиса. Эти антитела получают промышленным способом, а лаборатории покупают уже готовые наборы. Данную смесь исследуемого материала и антител оставляют на некоторое время (от 30 минут до 4−5 часов), чтобы антитела смогли найти и связаться со «своим» антигеном. Чем больше в биологической пробе антигенов, тем больше антител свяжется с ними.

Удаление «лишних» антител. Как было указано, антитела к тому же связаны со специфической меткой. Поскольку антитела добавляются в избытке, то не все они свяжутся с антигенами, а если антигена вообще нет в пробе, то, соответственно, ни одно антитело не свяжется с искомым антигеном. Для того чтобы убрать «лишние» антитела, содержимое из лунок просто выливают. В результате этого все «лишние» антитела убираются, а остаются те, которые связались с антигенами, поскольку антигены «приклеены» к поверхности лунок. Лунки несколько раз ополаскивают специальным раствором, который позволяет вымыть все «лишние» антитела.

Ферментативная реакция — образование окрашенного соединения.

Далее начинается второй этап — ферментативная реакция. В промытые лунки добавляют раствор с ферментом и оставляют на 30−60 минут. Данный фермент имеет сродство к веществу (специфической метке), с которым связаны антитела. Фермент проводит реакцию, в результате которой эта специфическая метка (субстрат) превращается в окрашенное вещество (продукт). Затем методом колориметрии находят концентрацию этого окрашенного вещества. Поскольку данная специфическая метка связана с антителами, значит, концентрация окрашенного продукта реакции равна концентрации антител. А концентрация антител равна концентрации антигенов. Таким образом, в результате проведенного анализа мы получаем ответ, какова концентрация выявляемого микроба или гормона.

Мне удалось наблюдать и немного поучаствовать в этом методе на определение Интерлейкина 2 и Интерлейкина 6.

Интерлейкин 2 — белок, который относится к цитокинам воспаления и является медиатором иммунитета. Он является базовым в семействе интерлейкинов 2, в которое входят так же интерлейкины 4,7,9,15 и 21. Интерлейкин 2 играет центральную роль в регуляции клеточного иммунитета. Он вырабатывается активированными CD4+ Т-лимфоцитами, трансформированными Ти В-клетками, лейкемическими клетками, лимфоцитарными активированными киллер-клетками и натуральными киллер-клетками. Интерлейкин 2 вызывает антигенную неспецифическую пролиферацию всех популяций Т-лимфоцитов и является фактором роста всех киллерных клеток, поэтому играет большую роль в противоопухолевом и трансплантационном иммунитете.

Биологическая функция ИЛ-2 заключается в стимуляции пролиферации Т-лимфоцитов, индукции синтеза ими гамма-интерферона, обеспечения их дифференцировки. Совместно с гамма-интерфероном он усиливает секрецию IgM и IgG. Это позволяет усилить защиту организма от инфекционных заболеваний путем запуска только тех клеток, которые активны в отношении микроорганизмов и вирусов.

IL-2 участвует в развитии септического шока. Он усиливает проницаемость кишечной стенки и способствует вовлечению кишечной микрофлоры в септический процесс. По мере прогрессирования сепсиса уровень IL-2 в крови снижается, что требует проведения его коррекции.

При некоторых заболеваниях и старении рецепция IL-2 угнетается, что приводит к снижению активности клеточного иммунитета и развитию неопластических процессов.

В клинической практике, измеряя уровень IL-2, определяют функциональную активность Т-лимфоцитов при воспалительных, септических состояниях. Наиболее информативным является измерение растворимых рецепторов к IL-2, которые при патологических состояниях в большинстве случаев находятся в периферической крови и связывают избыток IL-2 в кровяном русле.

Когда уровень интерлейкина 2 повышен:

° Аллергические заболевания.

° Аутоиммунные заболевания.

° Отторжение трансплантата.

° Гематологические заболевания.

° Бактериальный эндокардит.

° Острый период первичной инфекции.

Когда уровень интерлейкина 2 понижен:

° Онкологические заболевания.

° Первичный и вторичный иммунодефицит.

° СПИД.

° Тяжелые вирусные инфекции.

° Тяжелые ожоги, травмы.

° Лечение цитостатиками и иммунодепрессантами.

° Облучение ионизирующая радиация.

Интерлейкин 6 — то белок, который относится к цитокинам воспаления. Продуцируется в ответ на стимулирование антигеном, интерлейкином 1 и фактором некроза опухолей клетками иммунной системы, фибробластами, кератиноцитами, хондроцитами, клетками стромы эндометрия, клетками Лейдига в яичках, фолликулярно-звёздчатыми клетками гипофиза и гладкомышечными клетками кровеносных сосудов, эндотелиальными и синовиальными клетками, опухолевыми клетками различной гистологической природы.

Интерлейкин-6 характерен более широким набором эффектов по сравнению с другими цитоканами, имеет существенное сходство с действием интерлейкина-1. Под воздействием ИЛ-6 усиливается продукция кортикотропина и белков острой фазы, индуцируется лихорадка. Усиливается терминальная дифференцировка и продукция антител.