Методика определения групп крови

1. Определение групп крови системы АВО стандартными изогемагглютинирующими сыворотками Стандартные сыворотки системы АВО двух различных серий каждой группы наносят по 2 капли на пластинку под соответствующими обозначениями таким образом, чтобы получились два ряда по три большие капли (0,1 мл) в следующем порядке слева направо: Обв (I), Ав (II), Вб (III). Исследуемую кровь наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) рядом с каждой каплей сыворотки и перемешивают кровь с сывороткой. Используют эритроциты реципиента не более 2-х дневного срока хранения, при температуре +2+8 єС.

Оценка результата. Реакция в каждой капле может быть положительной (наличие агглютинации эритроцитов) и отрицательной (отсутствие агглютинации). Различные сочетаний положительных и отрицательных результатов дают возможность судить о групповой принадлежности исследуемой крови (таблица):

Оценка результатов определения групп крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) — ее отсутствие.

Как видно из таблицы, результат оценивается в зависимости от реакции со стандартными сыворотками группы Обв (I), Ав (II), Вб (III). В тех случаях, когда положительный результат получен с сывороткой всех трех групп, для исключения неспецифической агглютинации производится контрольное исследование со стандартной сывороткой группы АВО (IV), не содержащей групповых агглютининов.

II. Перекрестный метод определения группы крови — одновременное распознавание агглютиногенов в эритроцитах исследуемой крови с помощью стандартных сывороток и выявление агглютининов, содержащихся в сыворотке этой крови с помощью стандартных эритроцитов:

• 1. В исследуемых эритроцитах не обнаружены агглютиногены, А и В, исследуемая сыворотка агглютинирует стандартные эритроциты группы А (II) и В (III), что указывает на наличие в ней агглютининов б и в — это О_бв(I) группа крови.
• 2. В исследуемых эритроцитах выявлен агглютиноген А, исследуемая сыворотка содержит агглютинирующие эритроциты группы В (III), в сыворотке обследуемого обнаружен агглютинин в — это А_в(II) группа.
• 3. В исследуемых эритроцитах выявлен агглютиноген В, исследуемая сыворотка содержит агглютинирующие эритроциты группы А (II), что указывает на присутствие в ней агглютинина б — это В (III) группа.
• 4. Реакция со стандартными сыворотками находит в эритроцитах исследуемой крови агглютиногены, А и В, в сыворотке исследуемой крови агглютинации со стандартными эритроцитами нет — это АВ (IV) группа крови.

Оценка результатов.

III. Определение группы крови моноклональными антителами (цоликлонами) Цоликлоны анти, А и анти В (антитела) представляют собой разведенную асептическую жидкость мышей-носителей соответствующей опухоли гибридомы, в которой содержатся специфические иммуноглобулины класса М, направленные против группоспецифических антигенов, А или В человека.

Цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов, определение групы крови как обычно на планшетах в течение 3 минут. Для получения моноклональных антител используется гибридомная технология. Гибридома — это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические моноклональные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих «родителей»: способность к неограниченному росту, характерную для опухолевой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую иммунному лимфоциту; наблюдают на планшете в течение 2,5 минут.