Бактериоскопия в клинической лабораторной диагностике

При носительстве могут быть обнаружены S. aureus, S. pneumonia, S. pyogenes. Мокрота, проходя через верхние дыхательные пути и полость рта, может контаминироваться вегетирующей в них микрофлорой.

Микроскопия исследуемого материала Из мокроты или материала, взятого стерильным ватным тампоном, одновременно с посевом приготавливают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют с иммерсионным объективом. При обнаружении микроорганизмов отмечают их морфологические и тинкториальные свойства (кокки, палочки, отношение к окраске по Граму).

Микроскопическое исследование является важным ориентиром. При просмотре мазков из мокроты оценивают общую картину микрофлоры: наличие скоплений грамположительных кокков (Staphylococcus, Micrococcus); цепочек грамположительных кокков (Streptococcus); мелких ланцетовидных, окруженных зоной неокрасившейся капсулы (S. pneumoniae); грамотрицательных кокков (Neisseria); грамотрицательных палочек с закругленными концами, окруженных капсулой в виде светлого ореола (Klebsiella и др.); грамотрицательных палочек (E. coli, P. aeruginosa и др.); мелких грамотрицательных палочек в виде скоплений (Haemophylus); мицелия и бластоспор гриба.

Микробиологические методы исследования отделяемого открытых инфицированных ран При появлении гнойно-воспалительного процесса в ране раневое отделяемое, гной, кусочки инфицированных тканей (грануляции, мышцы и т. п.) подвергают микробиологическому исследованию. Возбудителями гнойно-воспалительных процессов могут быть представители различных родов, подавляющее большинство которых относят к так называемой «условно-патогенной» микрофлоре (аэробной, микроаэрофильной и анаэробной). Среди них чаще встречаются виды родов: Staphylococcus, Streptococcus, Pseudomonas, Escherichia, Proteus, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia, Aeromonas, Alcaligenes, Acetobacter, Haemophilus, Peptococcus, Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Propionobacterium, Bacteroides, Nocardia, Listeria, Fusobacterium, Neisseria, Mycrococcus, Mycoplasma. Реже — Yersinia, Ervinia, Salmonella, Acinetobacter, Moraxella, Brucella, Candida, Actinomyces. Микроорганизмы могут вызывать и поддерживать гнойный процесс как в монокультуре, так и в ассоциации.

Микроскопия исследуемого материала Материал, взятый одним из стерильных ватных тампонов, «размазывают» по стерильному предметному стеклу, окрашивают по Граму и просматривают под микроскопом. При обнаружении микроорганизмов отмечают их морфологическую характеристику (грамположительные и грамотрицательные палочки, кокки и др.) и степень обсемененности. В соответствии с результатами микроскопии могут быть внесены коррективы в ход бактериологического исследования.

Микробиологические методы исследования отделяемого глаз Микробиологическое исследование проводится при заболеваниях конъюнктивы, век, слезных мешков, роговицы. Следует учитывать, что в норме только с конъюнктивы и в небольшом количестве регулярно выделяются Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium xerosis, Corynebacterium pseudodiphteriticum, непатогенные микроорганизмы семейства Neisseriaceae, Sarcina. У отдельных лиц временно могут выделяться Staphylococcus aureus, микроорганизмы семейства Streptococсaceaе (S. pneumoniae, S. feacalis, S. viridans), представители семейства Enterobacteriaceae, рода Haemophilus, микоплазмы. Причиной конъюнктивитов в преобладающем количестве случаев являются стафилококки (79,2%). Staphylococcus aureus чаще обнаруживается при остром (43,6%), а Staphylococcus epidermidis — хроническом конъюнктивите (83,5%). Другими возбудителями острых гнойных и хронических конъюнктивитов являются Neisseria gonorrhoeae, Moraxella lacunata, Branhamella catarrhalis, Corynebacterium diphteriae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans, Streptococcus faecalis, Haemophilus aegyptiсus, Haemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa, микроорганизмы семейств Enterobacteriaceae, родов Proteus, Klebsiella, Escherichia. Реже встречаются Listeria monocytogenes, грибы рода Candida, Aspergillus.

Помимо вышеперечисленных микроорганизмов, являющихся возможными возбудителями воспалительных процессов не только глаз, но и других систем и органов человека, известны микроорганизмы, обуславливающие только конъюнктивиты. К ним относятся Haemophilus aegypticus, Moraxella lacunata, Branchamella catarrhalis.

Микроскопия исследуемого материала Присланные в лабораторию мазки фиксируют на пламени и окрашивают по методу Грама или метиленовым синим. Микроскопия окрашенных мазков позволяет предположить наличие тех или иных видов бактерий, вызвавших заболевание глаз. Для обнаружения Mycobacterium tuberculosis окраску проводят по методу Циль-Нильсона. Бактериоскопию нативного материала проводят при подозрении на кандидоз методом «раздавленной капли» .

Микробиологические методы исследования отделяемого женских половых органов Вызвать гнойно-воспалительные заболевания полового тракта могут как истинно-патогенные микроорганизмы (Neisseria gonorrhoeae, Mycobacterium tuberculosis, Treponema pallida, Listeria monocytogenes), так и микроорганизмы условно-патогенной группы, роль которых в последние годы заметно возросла. Наиболее часто из патологического материала выделяют условно-патогенные микроорганизмы родов: Escherichia, Klebsiella, Proteus и других представителей семейства Enterobacteriaceae, а также родов Pseudomonas, Mycoplasma, Streptococcus (гр. D, B), Staphylococcus, Candida и другие.

Микробиологическое обследование женской половой сферы представляет определенные трудности, так как нижние отделы полового тракта в норме содержат разнообразную микрофлору, меняющуюся в различные возрастные периоды жизни женщины.

Влагалище новорожденных заселяют молочнокислые бактерии, но постепенно они вытесняются кокковой группой (преобладает Staphylococcus epidermidis), которая остается характерной до наступления полового созревания. В менопаузе вновь доминируют микроорганизмы кокковой группы. В репродуктивном возрасте в составе микрофлоры преобладают аэробные молочнокислые бактерии (доминирует группа Bact. Dederleini) в ассоциации с другими сапрофитами. Встречаются следующие виды и роды: Lactobacterium, Peptococcus, Peptostreptococcus, Corynebacterium, Staphylococcus epidermidis и др.

Количество аэробов составляет около 10 (в степени 8) и 10 (в степени 9) микробных клеток/г вагинального секрета. Кроме того, у многих здоровых женщин во влагалище можно обнаружить следующие условнопатогенные микроорганизмы, в норме обитающие в кишечнике или в других областях тела: Escherichia coli, Streptococcus (гр. D, B), Staphylococcus aureus, Haemophilus vaginalis, представители родов Klebsiella, Clostridium, Chlamidium, Bacteroides, Candida, Mycoplasma.

В процессе родов количество микроорганизмов во влагалище резко уменьшается, происходит самоочищение родовых путей. В первые 2−3 дня послеродового периода значительно нарастает число бактерий условно-патогенной группы (условия для жизнедеятельности молочнокислых бактерий отсутствуют). В лохиях обнаруживают в большом количестве эпидермальный стафилококк, эшерихии и другие энтеробактерии, микоплазмы, бактероиды, аэробные и анаэробные стрептококки. Постоянно, но не в большом количестве, эти микроорганизмы обнаруживаются и в полости матки. Однако, при гладком течении послеродового периода быстро наступает самоочищение полости матки.

Микроскопия исследуемого материала В лаборатории доставленные мазки исследуемого материала окрашивают по Граму и микроскопируют с иммерсионным объективом. При обнаружении микроорганизмов отмечают степень обсемененности, отношение к окраске по Граму и морфологические особенности. В частности, при обнаружении грамотрицательных диплококков, особенно при внутриклеточном их расположении, следует обратить внимание лечащего врача на необходимость дополнительного обследования больной на гонорею. Выявление в мазках простейших (трихомонады), мицелия или бластоспор гриба может служить основанием для выдачи ответа лечащему врачу об обнаружении этих микроорганизмов в исследуемом материале.

Микробиологические методы исследования материалов при аутопсии Микробиологические исследования проводят в случае летального исхода при гнойно-воспалительных заболеваниях, вызванных условно-патогенными бактериями.

В зависимости от клинического диагноза и сделанных в процессе вскрытия патологоанатомических находок материалом для микробиологического исследования служат кусочки органов и тканей, кровь, гной, экссудат и т. д.

Микроскопия исследуемого материала Из кусочков тканей, гноя и т. д. готовят мазки-отпечатки и окрашивают по Граму. При микроскопии отмечают степень обсемененности бактериями, морфологию и тинкториальные свойства микроорганизмов. В зависимости от результатов бактериоскопии, клинического диагноза и данных прижизненного микробиологического обследования вносят коррективы в ход исследования.

Дифференциация при бактериоскопии микроорганизмов разных видов Методы идентификации микробов рода стафилококка (staphylococcus)

В мазках, окрашенных по Граму, стафилококки располагаются по одиночке, парами или в виде скоплений (гроздей) неправильной формы. Для микрококков, помимо указанных вариантов, характерно также образование тетрад и пакетов. Размеры микробных клеток у микрококков, как правило, больше (диаметр 0,5−3,5 мкм), чем у стафилококков (диаметр 0,5−1,5 мкм).

Методы идентификации микробов семейства нейссериевых (Neisseriaceae)

Мазки из исследуемого материала окрашивают по Граму. Обнаружение в мазках грамотрицательных диплококков, расположенных внутри лейкоцитов, позволяет заподозрить патогенные виды нейссерий (менингококк или гонококк). Наличие в мазках из патологического материала грамотрицательных кокков или мелких овоидных палочек, расположенных парами или короткими цепочками, характерно для других представителей семейства нейссериевых.

Морфологические характеристики кислотоустойчивых микроорганизмов

•Кислотоустойчивые микобактерии имеют в длину примерно 1−10 мкм; обычно, они видны в виде тонких палочковидных бактерий, но иногда можно обнаружить изогнутые или извитые формы.

•При окраске карболфуксином микобактерии туберкулеза имеют вид тонких слегка изогнутых палочек красного цвета, содержащих различное количество гранул; микроорганизмы, располагающиеся по отдельности, парами или в виде групп, хорошо выделяются на голубом фоне.

•В отдельных микобактериях могут обнаруживаться участки более интенсивного окрашивания, в результате чего они похожи на бусы, а места неравномерного окрашивания могут быть видны в виде полос.

•При флуорохромном окрашивании микобактерии туберкулеза имеют форму палочек и испускают яркое желтое свечение на бледно-желтом (при докрашивании перманганатом калия) или оранжевом (при докрашивании акридиновым оранжевым) фоне.

•Некоторые другие микроорганизмы, не относящиеся к M. tuberculosis, могут иметь различные формы — от длинных палочек до кокковых форм с различной интенсивностью окрашивания.

•Различную степени кислотоустойчивости могут проявлять не только микобактерии, но и другие микроорганизмы. Это могут быть различные виды Rhodococcus, Nocardia и Legionella, а также цисты Cryptosporidium и Isospora.

•Быстрорастущие микобактерии могут различаться по степени кислотоустойчивости.

Заключение

Современная клиническая лабораторная диагностика, и бактериоскопия, как одна из ее ветвей, располагает многочисленными методами исследования, число которых продолжает непрерывно увеличиваться. У фундаментальных наук микробиологическая лабораторная диагностика постоянно заимствует новые теоретические знания, методы и средства исследования, а клинические дисциплины ставят перед ней новые задачи, связанные с усложнением и интенсификацией методов постановки диагноза и лечения. С другой стороны, правильное использование методов лабораторной диагностики, выбор тестов исследования, определение их диагностической значимости и интерпретация полученных сведений зависят от глубины познания основных процессов, происходящих на различных уровнях организации организма. При этом для бактериоскопии в клинической лабораторной диагностике на данном этапе особенно актуальна стандартизация основных методик бактериоскопического исследования. Отсутствие стандартизованных методик не только осложняет работу вновь созданных лабораторных служб, но и препятствует объединению уже существующих лабораторий в единую сеть. Стандартизация позволяет получать сопоставимые результаты в масштабах страны, облегчает обучение персонала и выбор закупаемого оборудования, материалов и реактивов; упрощает оценку качества работы лабораторий и организацию надлежащего контроля для повышения эффективности лабораторных исследований.

В работе изучены вопросы морфологии микроорганизмов, правил организации работы при проведении бактериоскопических исследований, основные методики подготовки, окраски, микроскопии мазков, освещены правила приема материала для исследований в лабораторию. Также рассмотрены вопросы особенностей исследования различных типов патологического материала и дифференциальные признаки микроорганизмов различных видов.

Список литературы

Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М.: Медицинское информационное агентство. — 2001. — 736 с.

Верещагин Н.Н., Смирнова О. А., Плотникова О. А., Коваленко Е.В.// Мат-лы IX съезда Всероссийского научно-практич. общества эпиде-миологов, микробиологов и паразитологов. Москва. — 2007. — Т.

3.- С. 93.

Ветеринарная и медицинская паразитология: Энциклопедический справочник. Ятусевич А. И., Рачковская И. В., Каплич В. М. М.: Колос. — 2001. — 538 с.

Гусев М.В., Микробиология: учебник/ Гусев М. В., Минеева Л. А. — 3-е издание. -М: Академия. — 2007. — 464 с.

Колычев Н.М., Ветеринарная микробиология и иммунология.: учебник для ВУЗов/ Колычев Н. М., Госманов Р. Г. — М.: Колосс.- 2006. — 432 с.

Кузьмин В.А., Святковский А. В., ред. Эпизоотология с микробиологией. М.: Академия. — 2005. — 429 с.

Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Академика РАМН А. А. Воробьева М.: Медицинское информационное агентство. — 2004. 691 с.

Общая микробиология: учебник / Шлегель Г; ред. Е. Н. Кондратьева, пер .с нем. Л. В. Алексеевой. — М: Мир. — 1987. — 566 с.

Определитель бактерий Берджи/ Под ред. Дж. Хоулта, Н. Кинга, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уилльямса, пер. с англ. под ред.

Г. А. Заварзина. — М: Мир. — 1997 — в 2.т.

Справочник ветеринарного врача. Под ред. В. Г. Гавриша и И. И. Калюжного. — РостовнаДону: Феникс. — 1999 — 608с.