Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Дефицит специфического гуморального иммунитета и его диагностика при LeC-позитивном раке молочной железы

Диссертация: Дефицит специфического гуморального иммунитета и его диагностика при LeC-позитивном раке молочной железы
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Впервые показано, что рак молочной железы характеризуется л экспрессией гликана Le на опухолевых клетках в большинстве случаев — 58% по данным иммуногистохимии и 72% по данным проточной цитометрии. Установлено, что обнаружение антигена в цитоплазме опухолевых клеток во всех случаях происходит при наличии мембранной экспрессии антигена. Концентрация антител к Lec в сыворотке крови больных раком… Читать ещё >

Дефицит специфического гуморального иммунитета и его диагностика при LeC-позитивном раке молочной железы (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
  • ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. Л. Опухолеассоциированный гликан LeC у больных раком молочной железы: антитела LU-BCRXJ-G7, прогностическое значение антигена
      • 1. 2. Муцины (MUC-1), их углеводная структура и особенности гликозилирования при раке
      • 1. 3. Гуморальный иммунитет к опухолеассоциированным углеводным антигенам
  • ГЛАВА 2. ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
    • 2. 1. Пациенты и характеристика клинического, биопсийного материала
    • 2. 2. Реактивы и методы исследования
      • 2. 2. 1. Реактивы
      • 2. 2. 2. Методы исследования
      • 2. 2. 3. Учет реакций
      • 2. 2. 4. Статистическая обработка результатов исследования
  • ГЛАВА 3. ЭКСПРЕССИЯ LEC НА КЛЕТКАХ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ, ВЫЯВЛЯЕМАЯ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИМ (ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ) МЕТОДОМ И МЕТОДОМ МНОГОЦВЕТНОЙ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ
    • 3. 1. Выявление экспрессии LeC на клетках рака молочной железы иммуногистохимическим (флуоресцентным) методом на свежезамороженных (криостатных) срезах опухолевой ткани
    • 3. 2. Выявление мембранной экспрессии LeC на клетках рака молочной железы методом многоцветной проточной цитометрии
    • 3. 3. Резюме
  • ГЛАВА 4. ВЗАИМОСВЯЗЬ ЭКСПРЕССИИ LEC НА ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ И УРОВНЕЙ АНТИТЕЛ К LEC В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
    • 4. 1. SuLeC
    • 4. 2. SiaLeC
    • 4. 3. Резюме
  • ГЛАВА 5. ВЗАИМОСВЯЗЬ ЭКСПРЕССИИ LEC НА ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ С МОРФОЛОГИЧЕСКИМИ И КЛИНИЧЕСКИМИ ХАРАКТЕРИСТИКАМИ ОПУХОЛИ
    • 5. 1. Взаимосвязь экспрессии LeC на опухолевых клетках с морфологическими характеристиками опухоли и рецепторным статусом
    • 5. 2. Резюме
    • 5. 3. Взаимосвязь экспрессии LeC на опухолевых клетках с клиническими характеристиками опухолевого процесса
    • 5. 4. Резюме
  • ГЛАВА 6. УРОВНИ АНТИТЕЛ К LEC У БОЛЬНЫХ ОПЕРАБЕЛЬНЫМ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
    • 6. 1. Взаимосвязь уровня антител к LeC с в сыворотке крови морфологическими характеристиками опухоли и рецепторным статусом
    • 6. 2. Резюме
    • 6. 3. Взаимосвязь уровня антител к LeC в сыворотке крови с клиническими характеристиками опухолевого процесса
    • 6. 4. Резюме
  • ОБСУЖДЕНИЕ И
  • ЗАКЛЮЧЕНИЕ
  • ВЫВОДЫ

Рак молочной железы (РМЖ) в структуре заболеваемости и смертности от злокачественных заболеваний среди женщин в России, а также в странах Европы и Америке занимает первое место. В России в 2007 г. его доля составила 20% (Давыдов М.И., Аксель Е. М. 2009). Ежегодно в мире выявляют около 1 млн. новых случаев рака молочной железы, и к 2010 году ученые прогнозируют рост заболеваемости до 1,45 млн. (Parkin D., Pisani P., 1999). Статистические данные последних лет свидетельствуют о том, что во всех экономически развитых странах отмечается неуклонный рост заболеваемости и увеличение смертности от рака этой локализации, а научным исследованиям по данной проблеме отводится одно из ведущих мест в онкологической науке.

Широкое распространение при раке молочной железы получили молекулярно-биологические исследования, направленные на оценку пролиферативной активности опухолевых клеток (Ki-67), экспрессии рецепторов неблагоприятного прогноза, которые могут служить мишенями для таргетной терапии (Her2/neu). Исследуются биологические показатели, которые могут иметь диагностическое и прогностическое значение, служить маркерами лекарственной чувствительности и резистентности. Большой раздел молекулярно-биологических работ посвящен иммунологии рака молочной железы.

Иммунологические исследования в области рака молочной железы ведутся по трем основным направлениям: иммунофенотип опухолевых клеток, противоопухолевый иммунитет, иммунологическое стадирование рака молочной железы — оценка микрометастазов и циркулирующих опухолевых клеток (Н.Н.Тупицын, 2005; Артамонова Е. В. и соавт., 2005; Бжадуг О. Б. и соавт., 2008; Крохина О. В. и соавт., 2008). Эти исследования в последние годы стали одним из приоритетных направлений в структуре научных изысканий.

Исследования в области иммунодиагностики опухолей и противоопухолевого иммунитета в самое последнее время получили новое интересное и перспективное продолжение. Оказалось, что опухолеассоциированные (часто их называют «опухолеспецифическими») гликаны опухолевых клеток являются мишенями естественного (врожденного) противоопухолевого гуморального иммунитета. Естественные антитела способны вызывать гибель опухолевых клеток путем индукции апоптоза или липоптоза.

В крови здоровых лиц и больных раком молочной железы присутствуют антитела к опухолеассоциированным антигенам углеводной природы (ОАА), таким как TF, Tn, SiaTn, Le° и некоторым ганглиозидам.

Один из наиболее перспективных, и в то же время недостаточно л изученных углеводных ОАА — это дисахарид Le. Он является структурным «кором» нескольких хорошо известных онкомаркеров, таких как СА19−9. Кроме того, моноклональные антитела, специфичные к дисахариду Le, показали высокую диагностическую ценность для выявления прогностически неблагоприятных групп рака молочной железы ранних стадий (Шинкарев С.А., 2004). В ходе совместной работы РОНЦ РАМН и ИБХ РАН при сравнении здоровых лиц с больными раком молочной железы по уровню «естественных» антител к Lec (Тупицын Н.Н., и соавт., 2009) сделан вывод о пониженном содержании антител у больных, что аналогично ситуации с другим типом антител к ОАА — анти-TF (Томсена-Фриденрайха). При этом осталось невыясненным, является ли понижение уровня антител ответом на появление опухоли, или врожденно низкое содержание антител способствует опухолевому процессу. В связи с этим, представляет несомненный интерес более детальное изучение тонкой специфичности анти-Le антител с помощью современных молекулярных подходов, а также выделение этих антител с помощью аффинного сорбента с последующим изучением их диагностических возможностей.

У больных раком молочной железы уровень естественных антител не л только к Le, но и к некоторым другим изученным углеводным ОАА отличается от такового для нормальных доноров, таких антигенов насчитывается несколько десятков (Huflejt М. et al., 2009). Вместе с тем, говорить о протективной роли анти-Le0 антител возможно только в тех случаях, когда опухоли (рак молочной железы) являются Leпозитивными. Исследование уровней анти-Le в сопоставлении с анализом экспрессии антигена на опухоли до настоящего времени не проводилось и представляет несомненную актуальность.

Цель исследования.

Изучить уровень антител к Le в сыворотке крови больных раком молочной железы во взаимосвязи с экспрессией антигена на первичной опухоли.

Задачи исследования.

1. Оценить уровень антител к Le в сыворотке крови больных раком молочной железы.

2. Выделить антитела к Lec из сыворотки крови здоровых доноров с помощью аффинной хроматографии, оценить возможности использования этих антител в иммунофенотипировании рака молочной железы. л.

3. Оценить экспрессию Le на клетках рака молочной железы методами иммуногистохимии и проточной цитометрии.

4. Сопоставить показатели экспрессии Lec на опухолевых клетках с уровнями антител к Lec в сыворотке крови больных раком молочной железы.

5. Оценить клинические и морфологические характеристики рака молочной железы в группах больных, различающихся по экспрессии Lec и уровню антител к Lec.

Научная новизна.

Впервые показано, что рак молочной железы характеризуется л экспрессией гликана Le на опухолевых клетках в большинстве случаев — 58% по данным иммуногистохимии и 72% по данным проточной цитометрии. Установлено, что обнаружение антигена в цитоплазме опухолевых клеток во всех случаях происходит при наличии мембранной экспрессии антигена. Концентрация антител к Lec в сыворотке крови больных раком молочной железы варьируют в широких пределах: практически полное отсутствие антител (7,4%), низкие уровни (44,4%), умеренные и высокие уровни (48,2%). Доказано, что концентрация антител к Lec в сыворотке крови и экспрессия Lec на опухолевых клетках имеют обратную взаимосвязь. Нарастание уровней сывороточных антител к Le сопровождается достоверным снижением пропорции иммуногистохимически определяемых антиген-позитивных опухолевых клеток. Показано, что при отсутствии экспрессии гликана Lec на клетках рака молочной железы метастазы в регионарные лимфатические узлы наблюдаются достоверно чаще, чем в антиген-позитивной группе (88% и 51% соответственно, р = 0,05).

Практическая значимость.

Показана пригодность человеческих поликлональных антител к Le для диагностики рака методами иммуногистохимии и проточной цитометрии. Иммуногисгохимический метод рекомендуется для диагностики Ьес-позитивного рака молочной железы.

Анализ группы из 55 больных раком молочной железы показал, что более чем у трети из них повышенная экспрессия антигена на опухолевых клетках сопровождается низким уровнем соответствующих антител в сыворотке крови. Эти результаты дают основание для научно обоснованной разработки адоптивной иммунотерапии рака молочной железы, основаной на применении антител к Le .

ВЫВОДЫ.

1. Рак молочной железы характеризуется экспрессией гликана Le на опухолевых клетках: 58% случаев по данным иммуногистохимии и.

72% - по данным проточной цитометрии.

2. Антиген Le присутствует как в цитоплазме опухолевых клеток, так и в составе клеточной мембраны.

3. Уровень сывороточных антител к Le достоверно обратно пропорционален доле антиген-позитивных опухолевых клеток, выявленных иммуногистохимически, р = 0,015. Независимым параметром является уровень антител.

4. Антиген Lec иммуногистохимически обнаруживается на опухолевых клетках достоверно чаще при инфильтративном дольковом раке (80,0%) в сравнении с инфильтративным протоковым раком (53,8%), р = 0,043.

5. При отсутствии экспрессии гликана Le на клетках рака молочной железы метастазы в регионарные лимфатические узлы наблюдаются достоверно чаще, чем в антиген-позитивной группе (88% и 51% соответственно, р = 0,05).

6. Уровень антител к Lec в сыворотке крови больных раком молочной железы не взаимосвязан с морфологическими и клиническими характеристиками опухолевого процесса.

ОБСУЖДЕНИЕ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Исследования в области иммунологии рака — это поистине кладезь дерзких идей, надежд, казалось бы, близкой победы иммунологии над раком и горьких разочарований с отсутствием какой бы то ни было перспективы в обозримом будущем.

Последние годы вновь вселяют в нас надежду, и мы готовы с новой силой и вдохновением проверить очередную идею, и, кажется, вновь природа слегка приоткрыла завесу таинственности, и близится понимание того, как же организм осуществляет противоопухолевый надзор.

Ветер надежды подул со стороны гуморального иммунитета. И, как бы оправданием перед ним за долгие годы забвения, звучат названия статей в зарубежных научных журналах: «естественные IgM антитела. от отверженных до парвеню», «сиротские молекулы в иммунном надзоре», «игнорируемые средства самозащиты в иммунном надзоре», «лучшие средства противоракового иммунного надзора — воскрешение человеческих моноклональных IgM антител» (Vollmers Н.Р. & Brandlein S., 2006; Brandlein S. & Vollmers H.P., 2004).

Дело в том, что в последние годы доказана способность естественных моноклональных IgM-антител, направленных к углеводным опухолеспецифическим антигенам, убивать раковые клетки путем индукции апоптоза или липоптоза. Таким образом, открываются перспективы разработки новых методов иммунотерапии рака, основанные на коррекции дефицита гуморального иммунитета с учетом профиля экспрессии опухоле-специфических гликанов на злокачественных клетках.

Именно базисным принципам этого перспективного направления исследований посвящена данная диссертационная работа. Мы поставили перед собой задачу охарактеризовать экспрессию опухолеассоциированного гликана Lec на опухолевых клетках и оценить уровни естественных антител к нему в сыворотке крови больных раком молочной железы.

Естественные антитела — это одна из систем врожденного иммунитета.

Эти антитела обычно являются 10-тивалентными пентамерами IgM-класса. Они способны реагировать со всеми (или с большинством) патогенов, с которыми данный вид встречался в ходе эволюции и, следовательно, индивид имеет высокую вероятность встречи. Так осуществляется феномен эволюционной иммунологической памяти. Уровни естественных IgM антител не возрастают при иммунизации. Они продуцируются особой субпопуляцией В-лимфоцитов (В 1-клетками), экспрессирующими на мембране молекулу CD5. Данный тип клеток у взрослых составляет примерно 10% от числа В-лимфоцитов, а у новорожденных и плода является доминирующим. Как правило, естественные IgM антитела направлены к углеводным детерминантам.

Наиболее типичный и всем хорошо известный пример естественных антител — агглютинины — антитела к антигенам групп крови, А и В, различающимся всего по одному сахару.

Это обычные антитела, субъединицы которых, как и все иммуноглобулины, кодируются тремя (VJC — легкие цепи) или четырьмя (VDJC — тяжелые цепи) генными сегментами.

Разумеется, набор специфичностей естественных IgM антител значительно уже (точного количества рецепторов никто не знает, менее 100 ООО), чем таковой для обычных иммуноглобулинов, так как в этом случае используется ограниченный репертуар VH и VL-генов иммуноглобулинов.? Чрезвычайно сложно было доказать, что именно естественные IgM антитела способны уничтожать опухолевые клетки. Для этого потребовались 1 знания не только молекул-мишеней, но и особенностей генетического наследования, клеток-продуцентов и т. д. Поэтому условно можно выделить 2.

1 j этапа в развитии данного вопроса. Ранние исследования доказали роль сывороточных факторов, антител, антител IgM-класса. Но точные доказательства были получены с использованием триомной гибридомной технологии для получения человеческих IgM антител против антигенов раковых клеток. Моноклональные антитела IgM класса в этом случае получают путем слияния клеток селезенки больных раком желудка с человеческой миеломой. Получено уже множество антител, которые реагируют с опухолеспецифическими антигенами (терминология авторов) и не реагируют с нормальными тканями (Brandlein S., Pohle Т. et al.2003). Следует признать, однако, что ряд описанных авторами антигенов являются онкофетальными. Пионерами в данной области являются немецкие исследователи из Вюрцбурга.

Доказательствами принадлежности к естественным антителам является использование ими ограниченного репертуара VH-областей генов Ig, характерного для естественных IgM антител, продуцируемых CD5+ В-клетками, а также практически полное отсутствие соматических гипермутаций. Продукция этих антител осуществляется CD5+ В-лимфоцитами селезенки. Все естественные моноклональные антитела к опухолеспецифичным гликанам индуцировали апоптоз опухолевых клеток, причем в ходе исследований была установлена новая опухолеспецифичная форма апоптоза — липоптоз (Pohle Т. et al., 2004). Это клеточная смерть, обусловленная накоплением липидов в цитоплазме опухолевых клеток под действием моноклональных IgM антител.

Все известные на сегодняшний день естественные моноклональные антитела реагировали с углеводной порцией гликопротеинов, подчас хорошо известных, таких как фактор, ускоряющий свертывание и препятствующий комплемент-зависимому лизису клеток DAF-CD55, рецептор для фактора роста фибробластов CFR, белок теплового шока GRP78. Однако еще раз подчеркнем, что углеводная детерминанта, распознаваемая IgM антителами, в нормальных тканях не встречалась. Справедливости ради следует отметить, что точная специфичность антител, т. е. те сахара, которые ими определяются, в работах не была установлена. Спектр реактивности — от узкого (например, только рак желудка) до широкого, включая рак толстой кишки, молочной железы и т. д.

Используя для гибридизации клетки селезенки здоровых лиц, также возможно получение опухолеспецифических естественных IgM антител. То есть, клетки-продуценты естественных противоопухолевых антител присутствуют и у здоровых лиц, а не только у онкологических больных.

Работы по изучению опухолеспецифичных гликанов раковых клеток и антител к ним проводятся и в России — институте биоорганической химии РАН и Онкологическом научном центре имени Н. Н. Блохина РАМН. Предметом совместных исследований ИБХ и РОНЦ является в первую с очередь опухолеспецифичный гликан Le. С середины 90-х годов использовались моноклональные антитела LU-BCRU-G7 IgM класса, предоставленные P. Rye (Норвегия). Антитела распознавали углеводную детерминанту в составе высокомолекулярного гликопротеина 230 кДа, выделенного из клеток рака молочной железы.

В 1995 году профессором Н. В. Бовиным и сотрудницей его лаборатории Екатериной Власовой была установлена точная специфичность антител G7 — дисахарид галактозил бета1−3 N-ацетил гликозамин. Другие названия этого дисахарида — антиген Льюис С или изолактозамин. Это углеводная структура в составе ряда муцинов, в том числе, и MUC-1. Детерминанта Gaipi-3GlcNAc является концевым сахаром MUC-1 женского молока. Данная структура не обнаруживается в молочной железе в норме, она отсутствует при доброкачественных пролиферативных процессах и выявляется только при раке молочной железы.

В широком смысле дисахарид галактозид (31−3 N-ацетилгликозамин является предшественником 1-го типа антигена Н — основной структурной единицы групп крови АВО и Льюис а, Ь. По данным P. Rye & R.A.Walker (1993) при ранних стадиях (N0) рака молочной железы обнаружение антигена ассоциируется с достоверным ухудшением показателей безрецидивной выживаемости. Появление антигена на клетках рака молочной железы ранних стадий является достаточно частым и ассоциируется с более агрессивным течением этих опухолей.

Этот факт был подтвержден в работе С. А. Шинкарева (2003 г) на материале 89 случаев рака молочной железы ранних стадий pTi.2NoM0. Частота экспрессии Le у этих больных составила 57%. Антиген почти вдвое чаще обнаруживался при опухолях более крупного размера (более 3 см). Уникальной особенностью Le — позитивного рака молочной железы явился тропизм к ткани легкого в случаях гематогенных метастазов. Отмечено ухудшение прогноза в Le — позитивной группе больных раком молочной железы, которое носило достоверный характер при III степени злокачественности, умеренной и выраженной лимфоидной инфильтрации опухоли.

Таким образом, экспрессия анализируемого дисахарида ассоциируется с признаками менее благоприятного прогноза при раке молочной железы ранних стадий (pTi.2N0M0). Одной из причин неблагоприятного прогноза опухолей в случаях экспрессии углеводных опухоле-ассоциированных антигенов, широко обсуждаемых в литературе (помимо биологических свойств самих раковых клеток), является отсутствие или низкие показатели врожденного гуморального ответа, способного элиминировать трансформированные клетки. Доказать протективную роль естественных IgM антител в отношении возникновения или контроля роста опухолей чрезвычайно сложно. В крови здоровых лиц и больных раком молочной железы присутствуют антитела к опухолессоциированным антигенам углеводной природы (ОАА), таким как TF, Tn, SiaTn, Lec и некоторым ганглиозидам.

Одна из точек зрения состоит в том, что имеет место некий специфический иммунодефицит в естественных IgM антителах. В этом случае, как и вообще при В-клеточных иммунодефицитах, в группе риска возникновения опухоли уровни соответствующих специфических антител должны быть низкими.

На сегодняшний день отсутствуют стандартизованные подходы для определения концентрации антител к монои олигосахаридам в сыворотке крови человека. Подобный метод был разработан и апробирован в лаборатории профессора Н. В. Бовина. Проведено сравнение уровней анти-Le у больных операбельным раком молочной железы при диагностике и в донорской группе. Эти исследования показали, что достоверно (р = 0,001) л" более высокие уровни антител к Le присутствуют у здоровых женщин в сравнении с больными раком молочной железы (Тупицын Н.Н. и соавт., 2009). Сделан вывод о пониженном содержании антител у больных, что аналогично ситуации с другим типом антител к ОАА — анти-TF (Томсена-Фриденрайха).

Однако у некоторых женщин донорской группы концентрации анти-Le были очень низкими. Эти данные не исключают возможностей формирования группы риска заболевания раком молочной железы (или точнее — Льюис С-позитивным, прогностически неблагоприятным раком молочной железы).

Существует и другая возможная причина, объясняющая более низкие уровни антител у больных раком — это истощение сывороточного пула естественных антител за счет их сорбции на опухолевой ткани. В этом случае при нарастании опухолевой массы уровни антител будут снижаться, а в ремиссии, в послеоперационном периоде, напротив, повышаться.

Косвенным отражением опухолевой массы при раке молочной железы является концентрация маркера СА 15.3 в сыворотке крови больных. СА15.3 — это молекула MUC-1. У 111 больных раком молочной железы на различных этапах диагностики и лечения параллельно изучены маркер СА15.3 и антитела к одной из углеводных детерминант молекулы MUC-1 дисахариду Lec. Два этих показателя находились в отрицательной корреляционной связи. При разделении больных на группы с повышенными и нормальными уровнями СА15.3, и с высокими и низкими уровнями антител, два анализируемых признака были достоверно сопряженными: у больных с высокими тирами антител были, как правило, низкие уровни маркера и, наоборот, при высоких уровнях антител повышение маркера было лишь в 12% случаев, в 3 раза реже, чем в группе с низкими значениями OD (р = 0,034).

Концентрация антител была достоверно ниже у больных с высокими уровнями маркера в сыворотке. Отмечены достоверно более высокие значения анти-Ьес в группе больных с нормальным содержанием СА 15.3, в сравнении с группой больных, у которых уровни маркера были повышены, р = 0,004 (Тупицын Н.Н. и соавт., 2009). Эти данные хорошо соотносятся с данными литературы, в которых показаны реципрокные взаимоотношения между концентрацией MUC-1 и антител к нему. Сходную динамику демонстрируют антитела к углеводным эпитопам MUC1: TF, Тп и aGal (Kurtenkov 2005, 2007). л.

Да, у больных раком молочной железы уровни антител к Le ниже, чем у здоровых женщин и находятся в реципрокных взаимоотношениях с концентрацией маркера СА 15.3. Однако, для подтверждения того, что это именно естественные антитела, необходимо доказать наличие специфического В-клеточного рецептора на В1-клетках, то есть на CD5-позитивных В-лимфоцитах. Для проверки этой гипотезы в лаборатории профессора Бовина были синтезированы конъюгаты дисахарида с полиакриламидом, меченными флуоресцеин-изотиоцитанатом (FITC). В качестве контроля неспецифического связывания использовали меченый лактозамин. Эти реактивы использовали для изучения специфичных лимфоцитов у больных раком молочной железы. Разумеется, эти эксперименты чрезвычайно сложны, так как требуют изучения минорных субпопуляций В-лимфоцитов в тройной флуоресцентной метке. Использование FITC-меченого дисахарида позволило выявить субпопуляции п лимфоцитов, экспрессирующих В-клеточный рецептор, специфичный к Le, у 67% больных раком молочной железы. Субпопуляция В-лимфоцитов, связывающих дисахарид, является минорной (в районе процента) и включает значительную пропорцию С05-позитивных клеток, то есть относится к клеткам-продуцентам естественных антител. л.

Следует отметить, что связывание FITC-конъюгата Le CD5 лимфоцитами крови и обратные взаимоотношения между концентрацией MUC-1 и анти-Le у больных раком молочной железы установлены российскими учеными впервые и в зарубежной и отечественной литературе не описаны. Они дают дополнительную информацию к пониманию продукции естественных антител В-клетками и дальнейшему изучению диагностической роли aHTH-Lec антител.

В литературе обсуждается возможность использования естественных антител как разновидности адоптивной терапии при эпителиальных опухолях. Ранние исследования базировались на использовании сывороток и препаратов иммуноглобулинов, обогащенных естественными антителами, причем точная специфичность антител (углеводная детерминанта) не была установлена. В Германии проведена II фаза клинических испытаний естественных человеческих моноклональных антител IgM класса SC-1 у 20 больных низкодифференцированной аденокарциномой желудка в качестве неоадъювантной терапии (Vollmers et al., 2007). Показана их эффективность (сокращение размера опухоли, индукция апоптоза) и отсутствие токсичности (отсутствие повреждающего влияния на нормальные ткани и на клетки иммунной системы).

Разумеется, использование естественных антител, реагирующих в 100% случаев того или иного вида опухоли (например, SC-1 при аденокарциноме желудка) не требует прескрининга опухолей на предмет экспрессии антигена.

Иная ситуация с антителами к Le, которые определяют антиген не во всех случаях рака молочной железы. В этих случаях необходимо исследовать как сывороточные уровни антител, так и экспрессию антигена на опухоли. При высоких титрах антител использование анти-Le в качестве адоптивной иммунотерапии, вряд ли показано. У больных с отсутствием сывороточных антител возможны 2 ситуации — опухоль антиген-негативна, опухоль антиген-позитивна. Именно в последнем случае целесообразно использование антител. По этой причине совершенно необходимо проводить скрининг опухолей на предмет мембранной экспрессии Lec.

Этому направлению работы была посвящена настоящая диссертация. Мы сочли, что наиболее точное представление о взаимодействии антител к Lec с данным гликаном на опухолевых клетках может быть получено при использовании человеческих антител. По этой причине из сыворотки крови здоровой женщины-донора с высокими титрами антител к Lec, эти антитела были выделены методом аффинной хроматографии, помечены биотином и использованы для оценки экспрессии антигена на клетках рака молочной железы методами проточной цитометрии и иммуногистохимии. Получены р биотинилированные поликлональные антитела человека, специфичные к Le. Реагент характеризовался как моноспецифичный к Le при реакции с серией РАА-гликоконъюгатов. Взаимодействие человеческих антител к Le с клетками Lec-no3HTiiBHoro рака молочной железы полностью отменялось предварительной обработкой опухоли мышиными моноклональными антителами к.

Le LU-BCRU-G7. Доказана пригодность поликлональныех р человеческих антител для диагностики Leпозитивного рака молочной железы методами иммуногистохимии и проточной цитометрии.

Как и предполагалось, антиген отсутствует на лимфоцитах (тройная флуоресцентная метка) и экспрессирован в значительной части случаев рака молочной железы. Минорная популяция лимфоцитов, связывающих антитела, оказалась интратуморальными В-клетками. Это вполне объяснимо, так как антиген секретируется и связывается за счет специфического рецептора В-лимфоцитов. Экспрессия Lec подтверждена и на криосрезах опухолевой ткани. Таким образом, открывается реальная возможность иммунотераппи рака молочной железы естественными антителами на основании титров сывороточных антител и экспрессии антигена на опухолевых клетках.

С использованием данных поликлональных моноспецифических антител нами установлено, что рак молочной железы характеризуется экспрессией гликана Le на опухолевых клетках: 58% по данным иммуногистохимии, и 72% по данным проточной цитометрии. Важно то, что антиген обнаруживается иммуногистохимически в цитоплазме опухолевых клеток только при наличии его мембранной экспрессии. Мембранная экспрессия антигена свидетельствует о возможности его использования в качестве мишени иммунотерапии.

Экспрессия Le на клетках рака молочной была взаимосвязана с некоторыми морфологическими и клиническими параметрами. Обнаружение л антигена Le на опухолевых клетках методом иммуногистохимии достоверно чаще наблюдалось при инфильтративном дольковом раке в сравнении с инфильтративным протоковым раком — 80,0% и 53,8% соответственно, р = л.

0,043. При отсутствии экспрессии гликана Le на клетках рака молочной железы метастазы в регионарные лимфатические узлы выявлялись достоверно чаще, чем в антиген-позитивной группе (88% и 51% соответственно, р = 0,05).

Уровни антител к Lec в сыворотке крови больных раком молочной железы не имеют достоверной взаимосвязи с морфологическими и клиническими характеристиками опухолевого процесса. Нами впервые показано, что уровень сывороточных антител к Lec достоверно обратно пропорционален доле антиген-позитивных опухолевых клеток, выявленных иммуногистохимически, р = 0,007. Независимым параметром является уровень антител. Иными словами, наличие у больного низких концентраций антител к Lec является фактором, предрасполагающим к росту Lec-позитивного рака молочной железы.

И всё же, судя по данным литературы, собственному опыту, исходя из особенностей и титров естественных IgM антител, наибольшее применение они могут найти в качестве адъювантной терапии в лечении микрометастазов, являющихся главной причиной развития отдаленных метастазов и смерти больных раком молочной железы. Вообще говоря, получить экспериментальное доказательство влияния естественных антител на циркулирующие и диссеминированные раковые клетки достаточно сложно. Весьма убедительные данные были получены в 2005 году Illert и соавторами. Авторы вводили естественные человеческие моноклональные антитела IgM класса SC-1 мышам nude с метастазирующей аденокарциномой желудка, а в группе сравнения антитела не вводили. Эти антитела направлены к углеводной детерминанте клеток рака желудка, индуцируют апоптоз опухолевых клеток. Спустя неделю после введения антител оценивали частоту обнаружения диссеминированных опухолевых клеток в костном мозге и крови методом RT-PCR. Отмечено достоверное снижение частоты обнаружения диссеминированных клеток у животных, которым вводили антитела (р = 0,0011).

Работа по изучению диссеминированных опухолевых клеток свидетельствует о высокой частоте поражения костного мозга при-эпителиальных опухолях даже на ранних стадиях, например, при раке молочной железы — примерно 30% (Крохина О.В. и соавт., 2008; Alpers I., Brandt В., 2008). Несомненно, эта группа больных представляется наиболее перспективной для разработки методов адоптивной терапии, основанных на применении естественных антител к изолактозамину с учетом экспрессии данного антигена на опухоли и титров естественных антител в сыворотке крови.

Таким образом, представленные нами данные с учетом большой литературы, накопленной в последние годы по этому вопросу, можно отнести к числу перспективных направлений исследований в области естественного гуморального иммунитета в онкологии на основе точного соотнесения антительной специфичности с профилем антигенной экспрессии опухолевых клеток и иммунологического стадирования для профилактики метастазов.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Г. Анализ таблиц сопряженности. // Москва. Финансы и статистика. 1982.-143С.
  2. Е.В. Иммунологическая микрогетерогенность рака молочной железы. // Автореф. дис. канд. мед. наук, Москва, Онкологический научный центр РАМН, 1992.-28с.
  3. Е.В. Роль иммунофенотипирования опухолевых клеток в диагностике и прогнозе рака молочной железы. // Автореф. дис. докт. мед. наук., Москва, 47 С., 2003.
  4. Е.В., Кадагидзе З. Г., Летягин В. П., Ермилова В. Д., Огнерубов Н. А., Тупицын Н. Н. Экспрессия трансферрина (CD71) клетками рака молочной железы. // Медицинская иммунология. 2003. Т. 1. № 2. С. 143−148.
  5. Е.В., Кадагидзе З. Г., Летягин В. П., Манзюк Л. В., Шинкарев С. А., Гадецкая Н. А., Тупицын Н. Н. От теории к практике: MUC-1 -новая мишень для терапии злокачественных опухолей. // Иммунология гемопоэза. Т.З.- 1- 2006. С. 56.
  6. Е.В., Огнерубов Н. А., Тупицын Н. Н., Летягин В. П. Рак молочной железы: иммунологические факторы прогноза. // Москва. 2005.217 С.
  7. Е.В., Тупицын Н. Н., Огнерубов Н. А., Кадагидзе З. Г. Экспрессия мономорфных детерминант молекул главного комплекса гистосовместимости I и II классов клетками рака молочной железы. // Иммунология, 2005- № 5- С.284−287.
  8. А.Ю. Взаимоотношения опухоли и иммунной системы организма. // Вестник онкологии. 2003. № 5. С. 13−17.
  9. А.Ю. Моноклональные антитела в биотерапии рака. // Мат.1 Всерое. Научно-практ. Конф. «Биотерапия рака». Москва, 18−20 июня 2002 г. — С. 15−17.
  10. А.Ю., Тоневицкий А. Г. Моноклональные антитела в лаборатории и клинике. // Москва, типография ВНИТЦ.-1997. -С.99−105.
  11. О.Б., Тюляндин С. А. и др. Клинические значения определения циркулирующих опухолевых клеток в крови больных распространенным раком молочной железы. // Иммунология гемопоэза, 2008 г, с. 72−102.
  12. М.Б. Иммунофенотипическая характеристика рака молочной железы и ее клиническое значение: Автореф. дисс. на соиск. ученой ст. канд. мед. наук. // Рос. онкол. науч. центр. Москва, 2001.- С. 23.
  13. М.И., Аксель Е. М. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2005г. // Вестник РОНЦ им. Н. Н. Блохина, Т18, № 2 (прилож.1). 2007.
  14. М.И., Летягин В. П. Практическое руководство по клинической маммологии. // Москва 2004. С. 88.
  15. Т.А., Немцова Е. Р., Безбородова О. А., Якубовская Р. И. и соавт. Имутеран новый препарат для иммунотерапии рака. // Мат. 1 Всерос. Научно-практ. Конф. «Биотерапия рака». Москва, 18−20 июня 2002 г. — С.33−35.
  16. О.В. Иммуноцитологическая диагностика микрометастазов рака молочной железы в костный мозг. // Иммунология гемопоэза. 1/2008. Т.4. С. 116.
  17. О.В. Микрометастазы рака молочной железы в костный мозг. //Иммунологическая диагностика. Дисс. к.м.н. Москва. 2003.
  18. Н.Е., Портной С. М., Лактионов К. П., Рак молочной железы. // РАМН, 2005, 480с.
  19. В.П. Опухоли молочной железы (клиника, диагностика, лечение, прогноз). // Москва, 2000. С. 45.
  20. С.В., Давыдов М. И., Тупицын Н. Н., Артамонова Е. В. Иммуноморфологическое обоснование расширенных лимфодиссекций при раке желудка. //Онкология и радиология Казахстан, 2002. -том 1, № 2. -С. 42−48.
  21. В.Ф., Голубева О. М. и соавт. Адъювантная химиотерапия рака молочной железы. //Вопр.онкол. 2003. Т.38, № 10, С.1187−1194.
  22. Н.Н., Кадагидзе З. Г., Блохина Н. Г. и др. Экспрессия лейкоцитарных и родственных им антигенов на клетках рака молочной железы человека. // Эксперим. онколог.- 1990.- Т. 12.- № 2. С 54−58.
  23. Н.Н. Гематогенно диссеминированный операбельный рак ранних стадий — одна из главных проблем онкологии // Иммунология гемопоэза 1/2008, с.6−14.
  24. Н.Н., Васильев М. Б., Огнерубов Н. А. Клиническое значение экспрессии трансферринового рецептора на клетках рака молочной железы. // Новое в онкологии под ред. И. В. Поддубной, Н. А. Огнерубова. Воронеж, 2001. Выпуск 5, с. 197−209.
  25. Н.Н., Галанина О. Е., Бовин Н. В. и соавт. Снижение уровня специфических антител к углеводному антигену Lec убольных раком молочной железы. // Иммунология, том 29, № 2, 2008 г., с. 94
  26. С.А. Прогностическая роль маркера LU-BCRU-G7 при ранних стадиях рака молочной железы pTl-2N0M0. // Дис. канд. мед. наук. М. -2003 -158С.
  27. Р.И., Казачкина Н. И., Кармакова Т. А. и др. Изучение интегрального антигена мембран жировых глобул женского молока. // Эксперим. онкология. -1990. -Т.12. -N4. С.61−65.
  28. Р.И., Кармакова Т. А., Барышников А. Ю. и др. // Архив патологии.- 1991. -№ 6.- С. 11−16.
  29. Alpers I., Brandt В. Minimal residual disease in cancer of solid tumors. // Hemotopoiesis immunology, 2008, p. 15−39.
  30. Baldam A., Howell A., Barnes A., Redford J., Healy K., Swindell R., Sellwood R. Expression of differentiation antigens within human mammary tumours is related to response to endocrine therapy and survival. // Int.J.Cancer.- 1988. V.42, N1.- P. 154−158.
  31. Barclay A.N., Birkeland M.L., Drown M.H. et al. In: The leucocyte antigen facts book (ed. A.N. Barclay et al.). // Academic Press, London, 1993,-pp. 258−259.
  32. Brandlein S., Beyer I., Eck M., Bernhardt W., Hensel F., Muller-Hermelink. H. K., and Vollmers H. P. CF. R-1, a new marker for precancerous epithelial lesions defined by the human monoclonal antibody PAM-I. // Cancer Res. 63, 2052−2061, 200.
  33. Brandlein S., Pohle Т., Ruoff N. et al. // Cancer Research. -2003. -V.63. -P.7995−8005.
  34. Briggs S., Price M.R., Tendler S.B.J. Fine specificity of antibody recognition of breast carcinoma-associated epithelial mucins: Antibody binding to synthetic peptode epitopes. // Eun.J.Cancer.-1993.- V.29A.-P.230−237.
  35. Burchell J., Gendler S., Taylor-Papadimitriou J. et al. Development and characterization of breast reactive monoclonal antibodies directed to the core protein of the human milk mucin. // Cancer Res. -1987. -V.47,N20. -P.5476−5482.
  36. Burchell J., Taylor Papadimitrion J., Boshell M. et al. A short seguence within the amino acid tandem repeat of a cancer-associated mucin contains immune-dominant epitopes. // Int.J.Cancer.-1989.- V.44.-P.691−696.
  37. Carter P. Improving the efficacy of antibody-based cancer therapies. //Nature reviews cancer. -2001. -V.l. -P. 118−129.
  38. Carter P., Smith L., Ryan M. Identification and validation of cell surface antigens for antibody targeting in oncology. // Endocrine-related cancer. -2004.-V.l 1. -659−687.
  39. Cavanaugh P.G., Jia L., Zon Y. et al. Transferrin receptor overexpression enchances transferrin responsiveness and metastatic growth of rat mammary adenocarcinoma cell lines. // Breast Cancer Res. Treat. 1999.
  40. Cooper H. S, Malecha M. J, Bass C, Fagel P. L, Steplewski Z. Expression of blood group antigens H-2, Ley, and sialylated-Lea in human colorectal carcinoma. // Am J Pathol 1991−138:103−10.
  41. Corcoran D., Walker R.A., Rapid Reversion of Sequence Polymorphisms Dominates Early Human Immunodeficiency Virus Type 1 Evolution. // 1990, American Society for Microbiology.
  42. Cordon-Cardo C., Reuter V.E., Finstad C.L., Sheinfels J., Lloyd K.O., Fair W.R., et al. Blood group-related antigens in human kidney: modulation of Lewis determinants in renal cell carcinoma. // Cancer Res 1989−49:212−8.
  43. Coronella J.A., Spier C., Welch M. et al. Antigen-driven oligoclonal expansion of tumor-infiltrating B-cells in infiltrating ductal carcinoma of the breast // J. Immunol. -2002. -V. 169. -P. 1829−1836.
  44. Coronellla-Wood Y., Hersch E.M. Naturally occurring B-cell responses in breast cancer. //Cancer Immunology, Immunotherapy. -2003. -V.52, № 12. -P.715−738.
  45. Crose M.V., Colussi A.G., Price M.R., Segal-Eiras A. Expression of tumor-associated antigens in normal, benign and malignant human mammary epithelial tissue: a comparative immunohistochmical study. // Anticancer Res.- 1997.- V. 17, N 6D.- P.4287−4292.
  46. Facheris P. Astatine-211 -labeled Antibodies for Treatment of Disseminated Ovarian Cancer. // 1992, American Association for Cancer Research
  47. Fey M.F. Principles of Molecular Oncology. //Ann.Onc., Jan 2005- 16: 175−176.
  48. Garcher E., Bara J., Bron A. et al. Expression of mucin peptide and blood group ABH- and Lewis-related carbohydrate antigens in normal human conjunctiva. //Investigative ophthalmology and visual science. -1994.-V.35, № 3.-P.l 184−1191.
  49. Glennie M.J., van de Winkel J.G. Renaissance of cancer therapeutic antibodies. // Drug discovery today. -2003. -V.8. -P.503−510.
  50. Goldenberg D.M., Nabi H.A. Breast cancer imaging with radiolabeled antibodies. // Semin.Nucl.Med.- 1999.- V.I.- P.41−48.
  51. Guckel В., Rentzsch С., Stumm S. et al. Cellular vaccination strategies in the treatment of breast cancer. // An.0ncol.-2002.- V.13, Suppl.5 -P.58.
  52. Gwin J.L., Klein-Szanto A.J., Zhang S.Y., Agarwal P., Rogatko A., Keller S.M. Loss of blood group antigen A in non-small cell lung cancer // Ann Surg Oncol 1994−1:423−7.
  53. Hadden J.M. The immunology and immunotherapy of breast cancer: an update. // Int.J.Immunopharmacol.- 1999.- V21, N2, -P.79−101.
  54. Hanish F.G., Hanski C., Hasegawa A. Sialyl Lewisx antigen as denned by monoclonal antibody AM-3 is a marker of dysplasia in the colonic adenoma-carcinoma sequence.// Cancer Res 1992−52:3138−44.
  55. Hannisch F.-G., Muller S. MUC-1: the polymorphic appearance of human mucin. //Glycobiology. -2000. -V.10, № 5. -P.439−449.
  56. Hilkens J., Ligtenberg M.J.L., Vos H.L., Litvinov S.V. Cell membraneassoeiated mucins and their adhesion -modulating property. // Trends Biochem. Sci.-1992.- V.17.- P.359−363.
  57. Hilkens, J., et al.: MAM-6 antigen, a new serum marker for breast cancer monitoring. // Cancer Research, 1986
  58. Huflejt M., Bovin N. et al. Anti-carbohydrate antibodies of normal sera: Findings, surprises and challenges. // Molecular Immunology 46, 2009, p. 3037−3049.
  59. Imai S., Haga S. and Kiyozuka Y. Epitope characterization of MUC-1 antibodies. // Tumor Biology.- 1998.- V.19, suppl.l.- P.30−34.
  60. Inoue Т., Cavanaugh P.G., Steek P.A. Differences in transferring response and numbers of transfferin receptors in rat and human mammary carcinoma lines of different metastatic potentials. // J.Cell.Physiol.- 1993.- Vol.156. -P.212−217.
  61. Kadagidze Z.G., Tupitsyn N.N., Baryshnikov A.Yu. et al. / K-20 and ICO-IO monoclonal antibodies (gpl20/200- Thy 1): immunophenotyping of human solid tumors. // Br. J. Cancer. -1995. V 61. -P.215−217.
  62. Kim Y.S., Gum J.R., Byrd J.C., Toribara N. The structure of human intestinal apomucins. // Am.Rev.Respir.Dis.-1991.-V.144.-S.10-S.14.
  63. Kollias J., Pinder S.E., Denley H.E., Ellis I., et al. Phenotypic similarities in bilateral breast cancer. // Breast Cancer Res. and Treat. (ЭИ).- 2004.85, № 3. C. 255−261.
  64. Kovar J., Seligman P., Gelfand E.W. Lymphacyte lines under iron depriving conditions: transferring receptor expression related to various growth responses. // Immunology Letters.- 1994.- V.42. -P.123−127.
  65. Kurtenkov O., Klaamas K., Mensdorff-Pouilly S. et al. Humoral immune response to MUC1 and to the Thomsen-Friedenreich (TF) glycotope in patients with gastric cancer: relation to survival. //Acta Oncol. -2007. -V.46, № 3. -P.316−323.
  66. Machetti A., Buttitta F., Bertacca A. et al. mRNA markers of breast cancer nodal metastases: comparison between mammoglobin and carcinoembryonic antigen in 248 patients. // J.Pathol.-2001.-V.195, N2.-P.186−190.
  67. Matsumoto H., Muramatsu H., Shimotakahara Т., Yanagi M., Nishijima H., Mitani N., et al. Correlation of expression of ABH blood group carbohydrate antigens with metastatic potential in human lung carcinomas. // Cancer 1993−72:75−81.
  68. Nunes R., Magenau J., Zamorano S., Lostumbo A. Immunophenotyping of solid tumors, a new approach for molecular profiling solid tumors. // ASCO Meeting Abstracts, Jun 2006- 24: 10 057.
  69. Nzula S., Going J.J., Stott D.I. Antigen-driven clonal proliferation, somatic hypermutation, and selection of B-lymphocytes infiltrating human ductal breast carcinomas // Cancer Research. -2003. -V.63. -P.3275−3280.
  70. Old L.J., Chen Y.T. New paths in human cancer serology // J.Exp.Med. -1998. -V.l87, N8.-P.l 163−1167.
  71. Parkin D., Pisani P., Ferley J. Global cancer statistics. // CA Cancer J. Clin., 1999. Vol.49., P.33−64.
  72. Patersson A., Harris A.L. Molecular chemotherapy for breast cancer. // Drugs Aging.- 1999.- V.14, N2.- P.75−90.
  73. Petrakou E., Murray A., Price M.R. Epitope mapping of anti- MUC-1 Mucin protein core monoclonal antibodies. // Tumor Biology. -1998.-V19, suppl. 1.- P.21−29.
  74. Price M.R., Hudezc F.O., Sullivan C. et al. Immunological and structural features of the protein core of human polymorphic epithelial mucin. // Mol.lmmunol. -1990. -V.27.-P. 795−802.
  75. Price M.R., Petrakou E., Sekowski M., Murray A. Immunogenicity of the hydrophilic region of the MUC-1 mucin protein core. // Oncol. Report. 1997.-V.4.- P.337−339.
  76. Price M.R., Rye P.D., Petrakou E. et al. Summary report on the ISOBM TD-4 Workshop: analysis of 56 monoclonal antibodies against the MUC-1 mucin. // Tumor Biologi. 1998.-V.19, suppl.l.- P. 1−20.
  77. Price M.R., Tendler S.J.B. Polymorphic epithelial mucins: Molecular characteristics and association with breast cancer. // Breast.- 1993.-V.2.-P.3−7.
  78. Randen I., Mellbye O.J., Forre O. et al. The identification of germinal centers and follicular dendritic cell networks in rheumatoid synovial tissue. // Scand. J. Immunol. -1995. -V.41. -P.481−486.
  79. Rettig W., Cordon-Cardo C., Ng J.S.C. et al. High molecular weight glycoproteins of human teratocarcinoma defined by monoclonal antibodies to carbohydrate determinants. //Cancer Research. -1985. -V.45. -P.815−821.
  80. Rye P.D. and Walker R.A. Prognostic value of a breast cancer-associated glycoprotein detected by monoclonal antibody LU-BCRU-G7. // Eur. J. of Cancer. -1994. -V.30A. -№ 7. -P.1007−1012
  81. Rye P.D., Bovin N.V., Vlasova E.V. et al. // Glycobiology. -1995. -V.54. -P.385−389.
  82. Rye P.D., McGuckin M.A./MUC-l:antibodies and immunoassays. // Tumor Biology.-2001.-V.22, N4.- P.269−272.
  83. Rye P.D., Price M.R. (eds.) ISOBM TD-4 International workshop on monoclonal antibodies against MUC1. // Tumor Biology. -1998. -V.19, Suppl.l. -P.l-152.
  84. Rye P.D., Price M.R. (eds.) ISOBM TD-4 International workshop on monoclonal antibodies against MUC1. // Tumor Biology. -1998. -V.19, Suppl.l.-P.l-152.
  85. Rye P.D., Walker R.A. // Eur. J. Cancer. -1994. -V.30A. -P.1007−1012
  86. Rye R.D., Bell S.C., Walker R.A. Immunohistochemical expression of tumor-associated glycoprotein and polymorphic epithelial mucin in the human endometrium during menstrual cycle. //J. Reprod. Fertil. -1993. -V.97, № 2. -P.551−556.
  87. Scanlan M.J., Chen Y.T., Williamson B. et al. Characterization of human colon carcinoma antigens recognized by autologous antibodies // Int. J. Cancer. -1998. -V.76. -P.652−658.
  88. Scanlan M.J., Gordan C. M, Williamson B. et al. Antigens recognized by autologous antibody in patients with renal-cell carcinoma // Int. J. Cancer. -1999. -V.83. -P.456−464.
  89. Scanlan M.J., Gout I., Gordon C.M. et al. Humoral immunity to human breast cancer: antigen definition and auantitative analysis of mRNA expression. // Cancer Immunity. -2001. -V. 1. -P.4
  90. Scanlon M.J., Mortey S.D., Jackson D.E., et al. Structural and computational investigation of the conformation of antigens peptode fragments of human polymorphic epithelial mucin. // Biochem.J.-1992.-V.284.-P. 137−144.
  91. Scholl D., Meulenbroek M., Snijdewint F. et al. // Tumor Biology.-1998.- V.19, suppl.l.- P. 35−45.
  92. Scholl S.M., Pierga J.Y., Asselain B. et al. Breast tumour response to primary chemotherapy predicts local and distant control as well as survival//Eur. J. Cancer.1995. Vol.32A, N12. P.1969−1975.
  93. SEREX database. URL: htip://www. 1 icr. оrg/SEREX.htm 1
  94. Sims G.P., Shiono H., Willcox N. et al. Somatic hypermutation and selection of B-cells in thymic germinal centers responding to acetylcholine receptor in myasthenia gravis. // J. Immunol. -2001. -V.167. -P.1935−1944.
  95. Singal A., Hakomori S-I. Molecular changes in carbohydrate antigens associated with cancer. // Bioessays.-1990.- V.12.- P. 223−230.
  96. Singh G., Singh D.P., Gupta D., Muralikrishna B.V. Neoadjuvant chemotherapy in locally advanced breast cancer // J. Surg. Oncol. 1996. Vol.61, N1. P. 38−41.
  97. Singhal A.K., Orntoft T.F., Nudelman E., Nance S., Schibing L., Stroud M.R., et al. Profiles of Lewisx-containing glycoproteins and glycolipids in sera of patients with adenocarcinoma. // Cancer Res 1990−50:1375−80.
  98. Stott D., Hiepe F., Hummel M. et al. Antigen-driven clonal proliferation of B-cells within the target tissue of an autoimmune disease. The salivary glands of patients with Sjogren’s syndrome // J. Clin. Investig. -1998. -V.102. -P.938−946.
  99. Taylor-Papadimitriou J. Report on the First International Workshop on Carcinoma-Associated Mucin. // Int.J.Cancer. -1991. V.49. — P. l-5.
  100. Topalian S.L., Rivoltini L., Mancini M. et al. //Human CD4 T-cells specifically recognize a shared melanoma-associated antigen encoded by the tyrosinase gene. // Proc Natl Acad Sci USA. -1994. -V.91. -P.9461−9465.
  101. Vitale M., Rezzani R., Rodella L. et al. HLA clas I antigen and transporter associatrd with antigen processing (TAP-1 and TAP-2) down-regulation in high grade primary breast carcinoma lesions. // Cancer Research.-1998.- V.58, N4.- P.737−742.
  102. Vollmers H. P. and Briindiein S. Nature’s best weapons to fight cancer: reloading human monoclonal IgM antibodies. // Hum. Antibodies, 131 142, 2002.
  103. Vollmers H. P., Dammrich J., Ribbert H., Wozniak E. and Muller-Hermelink H. K. Apoptosis of stomach carcinoma cells induced by a human monoclonal antibody. // Cancer (Phila.), 76: 550−554, 1995.
  104. Vollmers H. P., Hensel F., Hermann R., Dammrich J., Zimmenrtann U. and Muller-Hermelink H. K. Specific apoptotic activity of the human monoclonal antibody SC-1 on the human stomach cancer cells in vitro. // Immunobiology, 179: 394, 1997.
  105. Vollmers H. P., O’Connor R., Muller J., Kirchner T. and Muller-Hermelink H, K. SC-1 a functional human monoclonal antibody against autologous stomach carcinoma cells. // Cancer Res., 49: 2471−2476, 1989.
  106. Walker P.A., Zuk J.A. Immunohistochemical analysis of HLA antigens and mononuclear infiltrates in benign and malignant breast. // J. Pathol., 1987, V.152, N4, pp.275−285.
  107. Walker R.A., Day S.J. Transferrin receptor expression in non-malignant and malignant human breast tissue. // J. Pathol., 1986., V.148, N3, P.217−224.
  108. Walker R.A., Zuk J.A., HLA class II sublocus expression in benign and malignant breast epithelium. // J.Pathol., 1988, V.155, N4, P.301−309.
  109. Wang R.F., Wang X., Atwood A.C. et al. Cloning genes encoding MHC class II restricted antigens: mutated CDC27 as a tumor antigen. // Science. -1999. -V.284. -P.1351−1354.
  110. Wang R.F., Wang X., Rosenberg S.A. Identification of a novel major histocompatibility complex class II-restricted tumor antigen resulting from a chromosomal rearrangement recognized by CD4(+) T-cells // J. Exp. Med. -1999. -V.189. -P. 1659−1668.
  111. D.C., Jiang X.P., Elliott R.L., Head J.F. /Inhibition of growth of human breast carcinoma cells by an antisense oligonucleotide targeted to the transferring receptor gene. // Anticancer-Res.- 2001. May-Jun.-21(3B). P.1777−1787.
  112. Yang D.C., Wang F., Elliott R.L., Head J.F. Expression of transferrin receptor and ferritin H-chain mRNA are associated with clinical andhistopathological prognostic indicators pi breast cancer. // Anticancer Res. -2001.-V.21, Nib.-P.541−549.
  113. Yuan M., Itzkowitz S.H., Palekar A., Shamsuddin A.M., Phelps P.C., Trump B.F., et al. Distribution of blood group antigens A, B, H, Lewis a, and Lewis b, in human normal, fetal, and malignant colonic tissue. // Cancer Res 1985−45:4499−511.
  114. Zarour H.M., Kirkwood J.M., Kierstead L.S. et al. //Melan A/Mart-1 (51−73) represents an immunogenic HLA-DR4-restricted epitope recognized by melanoma-reactive CD4(+) T-cells. // Proc Natl Acad Sci USA. -2000. -V.97. -P.400−405
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!