Антимикробная активность и лечебная эффективность фуракрона при колибактериозе, сальмонеллезе и бронхопневмонии поросят

желудочно-кишечные болезни поросят из-за их широкой распространенности представляют собой значительною проблему для ветеринарной науки и практики. На их доя®приходится 60−70 $ от общего числа заболеваний поросят (В.Ф.Романенко, 1984).

Клинический синдром гастроэнтеритов развивается при многих незаразных и инфекционных болезнях. Известно несколько инфекционных агентов, вызывающих гастроэнтериты: эшерихии, сальмонеяяы, хяамидии, грибы, вирусы и др. СВ. ИДрбан с соавт., 1984; М. А. Сидоров с соавт., 1986). Однако большое число случаев острых кишечных расстройств (до 80 $) остаются этиологически недостаточно расшифрованными, хотя клинические и ©-низоотологические иеследования свидетельствуют об их инфекционной природе (В.М.Нах-мансон с соавт., 1990).

Наряду с желудочно-кишечными болезнями значительный удельный вес в общей заболеваемости свиней занимает и респираторная патология. Пневмонии свиней — обширная группа сравнительно малоизученных заболеваний незаразной и инфекционной этиологии, характеризующаяся, в основном, поражением респираторного тракта (А.Г.Шахов с соавт., 1986).

Особую опасность п©ряду причин представляют инфекционные пневмонии свиней. Ведущая роль в их возникновении отводится хяамидйям (Р.В.Душук, 1982), ассоциации эшерихий, протея и палочки сине-зеленого гноя (А.М.Миланко, 1990), миконлазмам, вирусам гриппа (А.Г.Шахов с соавт., 1990), аденои энтеровирусам СВ.#.Романенко, 1984), респираторному коронавируеу (В.Ф.Ро-манемко, 1992), возбудителю репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Вышеприведенное создает определенные трудности при установлении диагноза и приведении оздоровительных мероприятий, усугубляющиеся отсутствием средств специфической профилактики СА.Ж.Миланк©, 199(c)).

Для терший животных, больных желудочно-кишечными и респираторными болезнями, предложены и широк®используются антибиотики, сульфаниламида и др.

1ир (c)кое" чает©без определения антибиотикограммы, применение антибиотиков и сульфаниламидных препаратов снизил©их эффективность из-за изменения биологических свойств микроорганизмов и появления множественной резистентности яри многократном пассировании через организм больных животных и повышением их вирулентных свойств. Устойчивые формы возбудителей, как новая биологическая популяция, циркулируют в природе и происходит инфижирование ими животных, что существенно затрудняет химиотерапию СВ. еДоменк© с соавт., 1985; Л. М. Ефанова, 1997).

В связи с создавшейся ситуащей при проведении терапии больных животных, особое значение приобретает антимикробные препараты, обладающие иным, чем антибиотики и сульфаниламиды, механизмом действия на микробную клетку. К таким препаратам относятся нитрофураны. 1екарственная устойчивость к ним развивается медленно и не достигает высоких пределов (В.СДоменко с соавт., 1988). Поэтому разработка новых эффективных средств из этой группы является перспективным научным направлением.

Цель©настоящих исследований является разработка нового отечественного нитрофуранового препарата фуракрона для лечения поросят при желудочно-кишечных и респираторных болезнях бактериальной этиологии. Препарат фуракрон был изготовлен в октябре-ноябре 1995 Гв в Научно-исследовательском институте химии.

Саратовского государственного университета".

Для достижения этой цели бали. поставлены следующие, задачи: 1. 'Изучить ¡-п уИго антимикробную активность фуракрона в отношении потенциальных бактериальных возбудителе! желудочно-кишечных: и респираторных: болезней поросят" 2″. Изучить специфическую активность фуракрона на моделях эшерюшозной и сальмонеллезной инфекций белых мышей. 3″ Изучить влияние-препарата-на ультраструктуру бактерий" 4″ Изучить лечебную активность фуракрона нрж колибактерио-зе". сальмонеллезе и бронхопневмонии поросят.

Изучить, влияние фуракрона на общую не специфическую' резне тентность поросят.

Научно-исследовательская работа по теме: диссертации проведена в 1.996 — 199.8 IV г. при выполнении плановой тематики Всероссийского НИВЫ патологии* фармакологии и терапии по заданию (54*02., Российской НИХ фундаментальных и приоритетных прикладных исследовании № Разработать общую теорию патологии животных и на ее основе создать экологически чистую систему их ветеринарной защита «V I гос.- регистрации С1.9,.40Д)и?588^ и тематики кафедры эпизоотологии ж вирусологии Воронежского государственного агро-университета имени КДДйинки „Разработать и внедрить научно обоснованные,“, экологически безопасныеметоды диагностики», лечения и профилактики массовых болезней животных в условиях Центральной Черноземной Зоны.

Научная новизна". Впервые: изучены и) /{го и на моделях инфекций белых мышей антимикробная активность нового отечественного препарата фуракрона*.его влияние на ультраструктуру эшерихий и сальмонелл*, морфологические и ишунобиюшмические показатели крови животных, лечебная эффективность при же луд очно—кишечных и респираторных болезнях поросят бактериальной этиологии.

Практическая значимость. В ветеринарную практику для этио-тропной терапии поросят при желудочно-кишечных и респираторных болезнях, предложен новый отечественный препарат фуракрон. Материалы диссертации вошли в Нормативно-техническую документацию на препарат фуракрон (НТД рассмотрена и одобрена решением ученого совета ВНЙВШФиТ, протокол 1 8 от 7 октября 1998 г.).

На защиту вшосятся следующие основные положения:

1. Об антимикробной активности фуракрона в отношении потенциальных бактериальных возбудителей желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят,.

2. О лечебной эффективности фуракрона при колибактериозе, сальмонеллезе и бронхопневмонии поросят,.

3. О стимулирующем влиянии фуракрона на общую неспецифичее-кую резистентность больных желудочно-кишечными и респираторными болезнями поросят.

Z. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2,5.

Заключение

.

Приведенный обзор литературы показывает, что желудочно-кишечные и респираторные болезни поросят продолжают представлять большую актуальность как в практическом, так и в теоретическом отношении. Наибольший экономический ущерб указанные болезни наносят крупным свиноводческим хозяйствам, развивающимся на про-мшшенной основе. Из желудочно-кишечных болезней в таких хозяйствах, наряду с колибактериозом, сальмонеллезом, дизентерией, широкое распространение получили ассоциированные бактериальные и вирусные инфекции, которые часто вызывают патологию на фоне стрессового снижения резистентности организма.

Пневмонии у свиней также, в большинстве случаев, являются полиэтиологическими заболеваниями, в возникновении которых участвуют факторы, снижающие естественную резистентность организма и различные патогенные и условно-патогенные бактерии, микоплазмы и вирусы.

В процессе изучения желудочно-кишечных и респираторных болезней свиней исследователями большое внимание уделено разработке эффективных средств и методов борьбы с ними. Одним из методов, направленных на ограничение их распространения и снижение до возможного минимума наносимых ими потерь, является химиопро-филактика и терапия. Для этой цели разработаны и во многих случаях успешно применяются различные антибиотики, сульфаниламидные препараты и другие средства. Однако, широкое, часто бессистемное применение указанных антибактериальных препаратов не всегда даёт желаемый результат из-за сравнительно быстрого развития к ним резистентности у возбудителей,.

В связи с этим большое значение приобретает разработка новых антимикробных средств, в том числе препаратов нитрофурано-вого ряда. Последние, как правило, обладают широким спектром противобактериаяьного действия, эффективны в отношении антибио-тикои сульфаниламидоустойчивых штаммов микроорганизмов, привыкание к ним развивается медленно и не достигает высоких показателей.

Исхода из изложенного перед нами была поставлена цельразработать показания к применению нового отечественного нитро-фурановог© препарата фуракрона при желудочно-кишечных и респираторных болезнях поросят бактериальной этиологии.

3. материалы и методы ИССЛЕДОВАНИЙ.

Настоящая работа выполнена в лаборатории микпобиоиогии, вирусологии и иммунологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фашакалогии и терапии в 19 961 998 г. г. при выполнении плановой тематики Всероссийского ниви патологии, фармакологии и терапии по заданию 04.02. Российской НТП фундаментальных и приоритетных прикладных исследований «Разработать общую теорию патологии животных и на её основе создать экологически чистую систему их ветеринарной защиты» ,№ гос. регистрации 01.9.40 7 588,и тематики кафедры эпизоотологии и вирусологии Воронежского государственного агроуниверситета им. К.Д. I яинки «Разработать и внедрить научно-обоснованные, экологически безопасные методы диагностики, лечения и профилактики массовых болезней животных в условиях Центральной Черноземной Зоны» .

Препарат фуракрон синтезирован в научно-исследовательском институте химии Саратовского Ордена Трудового Красного Знамени государственного университета им. Н. Г. Чернышевского. Паспортные данные: кристаллы цвета бордо, температура плавления I2II22°C, растворимость — в воде и этиловом спирте при нагревании.

Антимикробную активность фуракрона, изучали методом серийных разведений в жидкой питательной среде. В качестве тест-культур использовали референтные и полевые штаммы потенциальных возбудителей желудочно-кишечных и респираторных болезней свиней. Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) определяли методом серийных разведений в МПВ, минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) путем высева из пробирок с содержащих препарат в МВсК на плотные питательные среды. Результаты учитывали в течение 7 дней.

Для электронно-микроскопического изучения действия фуракрона в опытах i*1 'vitro использовали культуры S. cboleree nie и I*ooli Сштамм 0141) в фазе логарифмического роста, выращенные на МПБ в условиях усиленной аэрации на качалке из расчета 200 тыс. микробных клеток на I мл среды. Фуракрон добавляли к 6-часовой культуре в концентрациях, превышающих 1МБцК в 6 и 8 раз.

Контролем служили культуры без препарата. Опытные и контрольные образцы отбирали через 3 и 6 часов, центрифугировали 10 минут при 3000 об./мин. на центрифуге ОПн-3 УХЛ 4.2. Осадок 8−10 раз отмывали в физиологическом растворе. Затем бактериальные клетки помещали на I час в 2,5% глутаральдегид на sколли-диновом буфере, центрифугировали в течение Ю минут при 3000 об./мин., отмывали осадок 10 $ раствором сахарозы 5 раз по 20 минут. Постфиксацию проводили четырехокисью осмия. Фиксированный материал обезвоживали в восходящих концентрациях этилового спирта, после чего осадок заключали в смесь эпоновых смол. Срезы готовили на ультратоме 4КВ-.380А и контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца. Просмотр проводили в электронном микроскопе tesla-500 при ускоряющем напряжении 90 квт. В качестве растворитеяя фуракрона использовали диметилсуяьфоксид (ДМС0) из расчета: на 16 мг фуракрона — 2 мл ДМС0 и 18 мл дистиллированной воды.

Изучение адаптации эшерихий и сальмонелл к фуракрону проводили путем культивирования бактерий на мясо-пептонном бульоне, содержащем возрастающие суббактериоетатические концентрации препарата. Всего было проведено 60 пассажей.

Степень повыаения устойчивости микроорганизмов оценивали по коэффициенту резистентности — отношению максимальной, не препятствующей росту бактерий концентрации препарата, к ис ходной.

Специфическая активность препарата была изучена на моделях эшерихиозной и сальмонеллезной инфекций белых мышей, массой тела 18−20 г, после проверки их на носительство сальмонелл. Б предварительных опытах определяли минимальную летальную дозу С) суточных культур. Для определения специфичности гибели белых мышей проводили бактериологическое исследование крови севдца, печени, селезенки и почек. Индекс защиты (эффективности) фура-крона определяли по формуле В.Д.Б@яякова (1961),.

Опыты по изучению лечебной эффективности препарата при колибактериозе проведены на поросятах 3−10 дневного возраста, при сальмонеллезе и бронхопневмонии на поросятах 2−4 месячного возраста в зимне-весенний периоды в хозяйственных условиях содержания и кормления в ТОО «Вишневское» Верхнехавского района и ТОО «Тихий Дон* Острогожского района Воронежской области.

Поросята-сосуны содержались совместно со свиноматками в станках типовых свинарников-маточников. Поросята старших возрастов содержались группами по 10−15 голов в станках, безвы гульно, в типовых помещениях. Микроклиматические условия не всегда отвечали зоогигиеническим нормам. Кормление механизированное, сухим кормом, водопой вволю. Рационы сбалансированы по основным питательным веществам, витаминам, макрои микроэлементам, согласно существующим нормам.

Опыты проводили в соответствии с требованиями к врачебно—биологическому эксперименту (И.Т.Фролов, 1965) по постановке контроля, подбору аналогов, соблюдения одинаковых условий кормления и содержания животных в период исследования. Для исключения случайных результатов опыты проведены в нескольких пов торностях. Для характеристики, клинического состояния у животных измеряли температуру тела Сректально), определяли частоту пульса, дыхания, характер носовых выделений, частоту дефекаций и характеристику фекалий.

Изучение действия фуракрона на морфологические и иммуно-биохимические показатели крови и общую неспецифическую резистентность организма было проведено на больных сальмонеллезом и бронхопневмонией поросятах 2−4 месячного возраста. В крови определяли содержание эритроцитов и лейкоцитов на счетчике частиц Культер Каунтер (Франция), количество гемоглобина — гемоглобин-цианидным методом. Определение лейкограммы проводили путем подсчета 200 лейкоцитов, окрашенных по Романовскому Гимза, с вычислением процентного содержания каждого вида.

Для оценки уровня неспецифической резистентности определяв ли: бактерицидную активность сыворотки крови по методу О. В. Смирновой и Т. А. Кузьминой (1966), комплементарную активность — по Г. Ф. Вагнеру (1963), лизоцимную активность — по О. В. Бухарину (1974), фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число — по В. С. Гостеву (С.Й.Пдщенко с соавт.,.

1979). Общий белок — рефрактометрически, белковые фракции — методом Олла и Маккорда в модификации С. А. Карпюка (1962), качественное определение иммуноглобулинов по Манчини (1974). Содержание суммарных иммуноглобулинов по, А .Д.Мак Юан с соавт. (1970).

Диагноз на колибактериоз и сальмонеллез устанавливали в соответствии с Методическими рекомендациями по выделению и идентификации условно-патогенных энтеробактерий и сальмонелл «при острых кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных (Москва, 1990).

Для исследования на колибактериоз, сальмонеяяез и дифференциальной диагностики отбирали печень с желчным пузырем, селезенку, почку, мезентериальные лимфатические узлы, трубчатую кость, слепую кишку с содержимш.

Диагноз на пневмонии и их этиологию устанавливали комплексно на основании эпиз (c)отологических, клинических, патологоанато-мических данных с учетом бактериологических, вирусологических и серологических исследований.

Для проведения бактериологических исследований использовали пораженные легкие, кровь из сердца, печень, селезенку, почки от Ю убитых с диагностической целью животных и 20 проб носовых выделений от больных пневмонией поросят. Пробы из носовой полости брали стерильными ватными тампонами и помещали в пробирки с питательной средой ВЙЭВ дня микоплазм. Патологический материал исследовали не позднее 4−6 часов после его взятия. Посевы патологического материала проводили на МПВ с глюкозой, МН4 с сывороткой крови лошади, мпа с Щ крови барана, казеиноугольный агар (нуа), среду Эндо. После 18−24*ошубацик при 37 °C учитывали характер роста микроорганизмов. По 3−5 типичных колоний каждого вида бактерий отсеивали на скошенный агар в пробирки с ША, с 10 $ сывороткой крови и 1% глюкозы для дальнейшего изучения.

У выделенных чистых культур бактерий изучали морфологические, тинкториальные, культурально-биохимические свойства общепринятыми в бактериологии методами. Патогенность выделенных культур определяли на белых мышах. Видовую принадлежность бактерий устанавливали с помощью определителя в^вегвеу.'з (1974).

Типизацию кокковой микрофлоры проводияи согласно «Рекомендациям по индикации и идентификации стафилококков и стрептококков» (1976), пастерелл и бордетелл «Методическим рекомендациям по лабораторной диагностике инфекционных пневмоний свиней, вызванных микоплазмами, пастереяяами и бордетеляами (1983). Идентификацию энтеробактерий проводили с учетом „Наставления по бактериологической диагностике колибактериоза сельскохозяйственных, промысловых животных и птиц“ (1974). Серологическую типизацию сальмонелл и эшерихий проводили в реакции агглютинации с 0» и Н-агглютинирующими сальмонеллезными сыворотками и 0-коли сыворотками согласно «Наставлению по применению агглютинирующих 0-коли сывороток» (1980) и «Методическим указаниям по применению сальмонеллезных монорецепторных 0- и Н-агглютинирующих адсорбированных сывороток для идентификации сальмонелл» (1978). Чувствительность выделенных культур к антибиотикам (пенициллин, стрептомицин, неомицин, пояимиксин, гентамицин, мономицин, тетрациклин, яевомицетин, эритромицин) определяли методом индикаторных бумажных дисков. Результаты оценивали по величине зоны задержки роста.

Исследование сыворотки крови от больных сальмонеллезом и бронхопневмонШ поросят проводили трехкратно с интервалом в 2 недели в реакции агглютинации с колибактериозным, сальмонел-яезным, пастереллезным и стафилококковым антигенами. Пастерел-лезный антиген готовили из референтных штаммов, полученных из Украинского НМВИ. Посевы указанной культуры проводияи на МПА с 10% сывороткой лошади, инкубировали в термостате 18−24 часа при 37 °C. После проведения микроскопии смывали стерильным 0,85 $ физиологическим раствором. По оптическому стандарту мутности концентрацию взвеси доводили до Ю млрд. м.к. Сальмонеллезный и эшерихиозный антигены готовили из культур эпизоотических штаммов. Посев сальмонелл и эшерихий проводили на МПА. Взвесь культур на физиологическом растворе доводили до 2 млрд. м.к. концентрами в X мл оо оптическому стандарту мутности.

Изучение токсичности препарата проведено в отделе патологии и фармакологии ВНМБИПФиТ. Была изучена острая и хроническая токсичность фуракрона, эмбриотоксическое и тератогенное действие.

Статистическая обработка полученных данных проведена общепринятыми методами (Е.К.Меркурьева, 1964).

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ООШТВШШ ИССЛЕДОВАНИЙ 4.1. Антимикробная активность фуракрона.

Антимикробная активность фуракрона изучена в опытах in vitro в отношении референтных и нолевых (патогенных) штаммов микроорганизмов, типичных, но морфологическим, тинкториаяь-ннм, куяьтураяьиым, биохимическим и серологическим свойствам.

Изучение антимикробной активности фуракрона проводили метов жидкой питательной среде. Из основного растворяли в I мя ДМСО и добавляли 8 мя стерияьной дистиллированной воды) готовияи последовательные двукратные разведения в мясо-пептошом бульоне в объёме 2 мя. В приготовленные разведения вносили суспензию тест-куяьтуры в изотоническом растворе натрия хлорида в количестве.

2. Ю5 микробных клеток наI мя среды. Посевы инкубировали при 37®0 в течение 24−48 часов. По истечении срока инкубации учитывали результат. Минимальной бактериостатической концентрацией Officio считали концентрацию, которая вызывала задержку роста культуры по сравнению с контролем. Для изучения бактерицидного действия препарата деяаяй высевы из пробирок с визуальным отсутствием роста на плотные питательные среды. Минимальной бактерицидной концентрацией считали концентрацию, при которой отмечали полное угнетение роста тест-культур при пересеве их на М1А, не содержащий препарата. Результаты проведенных исследований представлены в таблице I.

Мз таблицы I видно, что фуракрон обладает широким спектром антимикробного действия в отношении всех испытанных культур микроорганизмов.

Антимикробная активность фуракрона.

Наименование культур |Ш>еК (мкг/мл) ! МБцК (мкг/мл референтных и полевых штаммов |24 часа f 48 час. |24 часа 1 48 час *.

SseberieMa (c)oil 866 6,25 6,25 12,5 12,5.

Bse&e*i"Ma eoli 035 0,78 0,78 1,56 1,56.

SseiierieMss coli 0142 0,78 0,78 1,56 1,56.

Escherichia eoli A20 1,56 3,12 3,12 6,25.

Escherichia eoli 0141 1,56 1,56 6,25 12,5.

Escherichia (c)oll 0141 (ТОО йВшневскоей) 0,39 0,39 1,56 1,56.

Escherichia coli 0147 (ТОО йВишневскоей) 0,78 1,56 1,56 3,12.

Escherichia eoli 0149 (ТОО «Вишневское») S. tuphimuri®m 0,78 0,78 3,12 3,12.

6,25 6,25 25,0 25,0.

Sebresla-a 1,56 3,12 6,25 6,25.

S*choierae sais 6,25 6,25 12,5 12,5.

Petsteurella mulioeida 6,25 12,5 12,5 25,0.

Staph," аюгеие 1,56 1,56 3,12 3,12.

Фуракрон в концентрации 6,25 мкг/мл задерживает реет культуры референтного штамма шерихии 866. В отношении музейных штаммов кишечной палочки C0I4I, 0142, 035, A2G) и патогенных культур, вщеяенных от больных колибактериозом поросят, бакте-риостатическая концентрация препарата была значительно ниже (0,78−1,56 мкг/мл). Активность фуракрона в отношении большинства культур эшерихий, за исключением в" coli А20 и патогенной культуры, выделенной от больных поросят из ТОО «Вишневское», через 48 часов не снижалась.

Сальмонеллы также были чувствительны к фуракрону. Концентрация препарата, задерживающая их рост, колебалась от 1,56 С в отношении S. breslau) до 6,25 мкг/мл С S^choleraesais и s. typMBerian). Через 48 часов снижение активности препарата в отношении S*choleraв sals и S#typhimurium не наблюдалось, а для S"bresla" она снижалась в 2 раза.

Наиболее устойчивыми к фуракрону оказались культуры l. eoll 866, S*typh±m"ritira и S^choleraesuis. Для задержки их роста была необходима концентрация препарата в 6,25 мкг/мл. Для Basteerella nmXtoeidta бактериостатическая концентрация составила 6,25 мкг/мл, через 48 часов она увеличилась до 12,5 мкг/мл, что характеризует пастереллу как среднеустойчивую культуру к фуракрону.

Наиболее высокую чувствительность к препарату проявляла кокковая микрофлора. Минимальная бактериостатическая концентрация фуракрона в отношении стафилококков составила 1,56 мкг/мл. Бактерицидное действие препарата в отношении изучаемых культур проявилось в концентрациях, в 2−4 раза превшающих бактериоста-тические. Препарат действовал бактерицидно на музейные и референтные штаммы эшерихий в концентрации 1,56Л5,6 мкг/мл, а на полевые в дозе 1,56−3,12 мкг/мл. Минимальная бактерицидная концентрация для культур сальмонелл составила 6,25−25,0 мкг/мл. Бактерицидное действие фуракрона на пастереллу проявилось в разведении 12,5 мкг/мл, через 48 часов оно увеличилось до 25,0 мкг/мл. В отношении стафилококков минимальная бактерицидная концентрация составила 3,12 г ,.

Результаты проведенных исследований показали, что фуракрон обладает широким спектром антимикробного действия. Наиболее высокую чувсавигельность к препарату проявляли культуры эшерихий, ввдеяенные от поросят из ТОО «Вщшевское* - 1,56−3,12 мкг/мл. Активность фуракрона в отношении музейных штаммов эшерихий колебалась ©-т 1,56 д©- 12,5 мкг/мл.

Как было отмечено, вше для растворения фуракрона и приготовления рабочего раствора препарата был использован диметилсуяьфоксид (ДМСО), обладающий, по данным литературы, незначитеяь ним антимикробным действием. Для объективной оценки бактериостатической и бактерицидной активности фуракрона мы провели изучение антимикробных свойств ДЩЗ в отношении эшерихий, сальмонелл, пастереяя и стафилококка, использованных в опытах по испытанию нитрофуранового препарата. Разведения ДОСО и фуракрона быяи анаяогичндаи. Данные по бактериостатическому и бактерицидному действию дао на культуры микроорганизмов приведены в таблице 2.

Мз таблицы 2 видно, что ДМСО обладает низкой бактериоста-тической и бактерицидной активностью в отношении потенциаяьно—патогенных возбудителей желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят.

Следовательно, применение ДМСО в качестве растворителя фуракрона существенно не вяияет на показатели антимикробной активности фуракрона.