Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Функциональные свойства продуктов генетического локуса киназы легких цепей миозина

Диссертация: Функциональные свойства продуктов генетического локуса киназы легких цепей миозина
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Получены специфические антитела к уникальному N-концевому домену КЛЦМ-210 и разработан метод аффинной очистки этого белка. Впервые показано, что КЛЦМ-210 имеет сравнимую с КЛЦМ-108 каталитическую активность и способна взаимодействовать с актином и миозином. Впервые продемонстрировано связывание экспрессированной N-концевой части КЛЦМ-210 с актином и кератином in vitro, а также возможность… Читать ещё >

Функциональные свойства продуктов генетического локуса киназы легких цепей миозина (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ
  • ГЛАВА 1. МИОЗИН М-ОГО ТИПА
    • 1. Строение и особенности функционирования немышечного и 11 гладкомышечного миозина 11-ого типа
      • 1. 1. Строение миозина 11-ого типа
        • 1. 1. 1. Молекула миозина — гексамер
        • 1. 1. 2. Регуляторные легкие цепи миозина
        • 1. 1. 3. Существенные легкие цепи миозина
      • 1. 2. Конформационные состояния молекулы миозина
        • 1. 2. 1. 10S и 6S конформации
        • 1. 2. 2. Зависимость преобладания 10S или 6S конформаций 17 миозина от внешних условий
      • 1. 3. Полимеризация миозина
        • 1. 3. 1. Структуры молекулы миозина, участвующие в 18 формировании межмолекулярных связей в филаменте
        • 1. 3. 2. Динамика формирования филаментов
        • 1. 3. 3. Строение миозиновых филаментов
        • 1. 3. 4. Дефосфорилированный миозин поддерживает 23 филаментарную структуру in vivo
        • 1. 3. 5. Возможные механизмы стабилизации филаментов 24 дефосфорилированного миозина
  • ГЛАВА 2. КАЛЬДЕСМОН — БЕЛОК РЕГУЛЯТОР СОКРАТИТЕЛЬНОГО АППАРАТА НЕМЫШЕЧНЫХ ТКАНЕЙ И ГЛАДКИХ МЫШЦ
    • 2. 1. Введение
    • 2. 2. Экспрессия кальдесмона в различных тканях
    • 2. 3. Внутриклеточная локализация изоформ кальдесмона
    • 2. 4. Физико-химические свойства кальдесмона
    • 2. 5. Доменная организация и функциональные свойства 28 молекулы кальдесмона
      • 2. 5. 1. Общий план доменной организации молекулы кальдесмона
      • 2. 5. 2. Функционально значимые участки С-концевого домена 31 кальдесмона
        • 2. 5. 2. 1. Участки взаимодействия с актином
        • 2. 5. 2. 2. Связывание с тропомиозином
        • 2. 5. 2. 3. Взаимодействие с комплексом Са2±кальмодулин
      • 2. 5. 3. Функционально значимые участки N-концевого домена 33 кальдесмона
        • 2. 5. 3. 1. Миозин-связывающие центры
    • 2. 6. Тропомиозин-зависимое ингибирование АТФ-азы актомиозина
    • 2. 7. Кальдесмон как структурный компонент сократительного 35 аппарата
  • ГЛАВА 3. ПРОДУКТЫ ГЕНЕТИЧЕСКОГО ЛОКУСА КЛЦМ
    • 3. 1. Введение
    • 3. 2. Строение генетического локуса киназы легких цепей миозина
      • 3. 2. 1. Ген KRP
        • 3. 2. 1. 1. Строение гена KRP
        • 3. 2. 1. 2. Сравнение устройства гена KRP человека и курицы
      • 3. 2. 2. Строение гена КЛЦМ
    • 3. 3. Тканевое распределение продуктов генетического локуса 44 КЛЦМ в эмбриогенезе и во взрослом организме
      • 3. 3. 1. Экспрессия KRP регулируется промотором, специфичным 44 для гладких мышц
      • 3. 3. 2. Экспрессия изоформ КЛЦМ в разных тканях в различные 47 периоды онтогенеза
        • 3. 3. 2. 1. Экспрессия изоформ КЛЦМ в мышечных тканях
        • 3. 3. 2. 2. Экспрессия изоформ КЛЦМ в немышечных тканях и 48 клеточных культурах
        • 3. 3. 2. 3. Внутриклеточная локализация изоформ КЛЦМ
    • 3. 4. Строение и функциональные свойства продуктов 51 генетического локуса киназы легких цепей миозина
      • 3. 4. 1. Строение КЛЦМ
        • 3. 4. 1. 1. Физико-химические свойства КЛЦМ
        • 3. 4. 1. 2. Доменное строение КЛЦМ
      • 3. 4. 2. Функциональные свойства КЛЦМ
        • 3. 4. 2. 1. Роль КЛЦМ в функционировании немышечных тканей и 53 гладких мышц
        • 3. 4. 2. 2. Механизм регуляции активности КЛЦМ
        • 3. 4. 2. 3. Ингибиторное действие КЛЦМ-108 на подвижность 57 актомиозиновых нитей in vitro
        • 3. 4. 2. 4. Связывание КЛЦМ-108 с актином 58 3.4.2.4.1. Участки связывания КЛЦМ с актином
        • 3. 4. 2. 5. Взаимодействие КЛЦМ-108 с миозином
        • 3. 4. 2. 6. Фосфорилирование КЛЦМ как способ регуляции ее 62 активности
        • 3. 4. 2. 6. 1. Фосфорилирование КЛЦМ Са /кальмодулин-зависимой 62 ПКИ
        • 3. 4. 2. 6. 2. Фосфорилирование
  • КЛЦМ ПК-С
    • 3. 4. 2. 6. 3. Фосфорилирование
  • КЛЦМ ПК-А
    • 3. 4. 2. 6. 4. Фосфорилирование
  • КЛЦМ МАП-киназой и циклин- 65 зависимой киназами-1и 2 (cdk-1,2)
    • 3. 4. 2. 6. 5. Аутофосфорилирование КЛЦМ
    • 3. 4. 3. Строение и функциональные особенности КЛЦМ
      • 3. 4. 3. 1. Первичная структура КЛЦМ
      • 3. 4. 3. 2. Функциональные свойства КЛЦМ
    • 3. 5. Структура и свойства KRP
      • 3. 5. 1. Строение молекулы KRP
        • 3. 5. 1. 1. Физико-химические свойства KRP
        • 3. 5. 1. 2. Третичная структура молекулы KRP
      • 3. 5. 2. Гетерогенность KRP
      • 3. 5. 3. Функциональные свойства KRP 75 3.5.3.1. Взаимодействие KRP с миозином
        • 3. 5. 3. 1. 1. Участки молекулы KRP, ответственные за связывание 76 миозина
        • 3. 5. 3. 1. 2. Участки связывания с KRP на молекуле миозина
        • 3. 5. 3. 1. 3. ККР стабилизирует развернутую конформацию миозина
      • 3. 5. 4. КР1Р ингибирует активность КПЦМ
  • ГЛАВА 4. МЕТОДЫ
    • 4. 1. Биохимические и физико-химические методы
      • 4. 1. 1. Определение концентрации белков
      • 4. 1. 2. Электрофорез и денситометрия
      • 4. 1. 3. Выделение белков
      • 4. 1. 4. Электронная микроскопия белков
      • 4. 1. 5. Дифференциальное ультрацентрифугирование
      • 4. 1. 6. Определение активности КЛЦМ и фосфорилирование 86 миозина
      • 4. 1. 7. Фосфорилирование фрагментов КЛЦМ
      • 4. 1. 8. Приготовление образцов тканей для электрофореза
    • 4. 2. Иммунохимические методы
      • 4. 2. 1. Получение и характеристика антител к уникальному 88 домену КЛЦМ
      • 4. 2. 2. Иммуноблоттинг
    • 4. 3. Молекулярно-биологические методы
      • 4. 3. 1. Генетическое конструирование фрагментов N934 и N875 90 КЛЦМ-210 для экспрессии в клетках Е. соН
      • 4. 3. 2. Генетическое конструирование фрагмента N875 для 91 экспрессии в эукариотической бакуловирусной системе- экспрессия и выделение продукта
      • 4. 3. 3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
    • 4. 4. Статистический анализ
  • РЕЗУЛЬТАТЫ
  • ГЛАВА 5. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА КЛЦМ-210 И ЕЕ 94 УНИКАЛЬНОЙКОНЦЕВОЙ ОБЛАСТИ
    • 5. Введение
      • 5. 1. Выделение КЛЦМ-210 и изучение ее функциональных 94 свойств
        • 5. 1. 1. Выделение КЛЦМ-210 из ткани аорты курицы
        • 5. 1. 2. Функциональные свойства КЛЦМ
          • 5. 1. 2. 1. Каталитическая фосфотрансферазная активность КЛЦМ
          • 5. 1. 2. 2. Связывание КЛЦМ-210 с актином и миозином
      • 5. 2. Изучение функциональных свойств уникальной ^ 101 концевой области КПЦМ
        • 5. 2. 1. Создание генетических рекомбинантных фрагментов, 101 соответствующих уникальной части КЛЦМ-210, и экспрессия кодируемых ими полипептидов
        • 5. 2. 2. Связывание фрагментов N934 и N875 с актином и 103 миозином
        • 5. 2. 3. Связывание уникальных доменов КЛЦМ-210 с актином 103 приводит к образованию пучков Ф-актина
        • 5. 2. 4. Связывание фрагмента N875 с кератином
        • 5. 2. 5. Фосфорилирование уникальных доменов КЛЦМ-210 109 протеинкиназой А
        • 5. 2. 6. Фосфорилирование уникальных доменов КЛЦМ-210 110 протенкиназой, А ослабляет их связывание с актином и кератином
      • 5. 3. ОБСУЖДЕНИЕ
        • 5. 3. 1. КЛЦМ-210 иКЛЦМ-108 проявляют схожие 113 функциональные свойства
        • 5. 3. 2. Уникальный домен КЛЦМ-210 связывается с актином и 115 приводит к формированию пучков Ф-актина
        • 5. 3. 3. Уникальный домен КЛЦМ-210 связывается с кератином
        • 5. 3. 4. Фосфорилирование уникальных доменов КЛЦМ-210 120 протеинкиназой А
        • 5. 3. 5. Доменная организация КЛЦМ-210 и КЛЦМ-подобных 121 киназ
  • ГЛАВА 6. ПОЛИМЕРИЗАЦИЯ МИОЗИНА ПОД КОНТРОЛЕМ KRP 122 ИКАЛЬДЕСМОНА
    • 6. 1. Введение
    • 6. 2. Результаты
      • 6. 2. 1. KRP препятствует агрегации миозиновых филаментов
      • 6. 2. 2. Сравнение эффектов KRP и кальдесмона на Мд2± 123 зависимую полимеризацию миозина в присутствии АТФ
      • 6. 2. 3. 17кДа миозин-связывающий фрагмент кальдесмона 130 воспроизводит эффект целого белка на седиментацию миозина
      • 6. 2. 4. Электронная микроскопия миозина в присутствии KRP и 130 кальдесмона
      • 6. 2. 5. Совестное действие KRP и кальдесмона на 134 полимеризацию миозина
      • 6. 2. 6. Совместное связывание KRP и кальдесмона с миозином
    • 6. 3. Обсуждение
      • 6. 3. 1. Факторы, оказывающие влияние на сборку миозиновых 138 филаментов
      • 6. 3. 2. KRP стабилизирует филаменты миозина в присутствии 142 АТФ
      • 6. 3. 3. Кальдесмон не индуцирует образование филаментов 143 миозина
      • 6. 3. 4. Возможные механизмы деполимеризующего действия 144 кальдесмона
      • 6. 3. 5. Управляемая сборка миозиновых филаментов при 147 участии KRP и кальдесмона
  • ЗАКЛЮЧЕНИЕ
  • ВЫВОДЫ
  • Список цитируемой литературы
  • Список сокращений, встречающихся в тексте диссертации
  • Apr аргинин
  • АТФ аденозин-б'-трифосфат цАМФ циклический аденозин — 3':5'- монофосфат
  • БСА бычий сывороточный альбумин
  • ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография
  • Г-актин глобулярный актин
  • Ф-актин фибриллярный актин гм/нм гладкомышечная/немышечная
  • ГМК гладкомышечная клетка
  • ГММ гладкомышечный миозин
  • ДСН додецилсульфат натрия
  • ДТТ дитиотрейтол
  • КаМ кальмодулин
  • КаД кальдесмон
  • КЛЦМ киназа легких цепей миозина
  • KRP Kinase-related Protein
  • РЛЦ регуляторная легкая цепь миозина
  • СЛЦ существенная легкая цепь миозина
  • ЛММ легкий меромиозин
  • Лиз лизин
  • ЛЦ легкие цепи
  • МАП киназа (МАПК) митоген-активируемая протеинкиназа
  • MOPS морфолинпропансульфоновая кислота мРНК матричная РНК
  • ПААГ полиакриламидный гель
  • ПК-А цАМФ-зависимая протеинкиназа
  • ПК-С протеинкиназа С
  • ПЦР полимеразная цепная реакция
  • S-1 субфрагмент 1 миозина
  • S-2 субфрагмент 2 миозина
  • Сер серин
  • Тир тирозин
  • Тре треонин
  • Трис трис (гидроксиметил) аминометан
  • ТХУ трихпоруксусная кислота
  • ИСК Ма-р-тозил-1-лизинхлорометилкетон
  • ТРСК М-тозил-1-фенилаланинхлорометилкетон
  • ТММ тяжелый меромиозин
  • ФСБ фосфатный солевой буфер
  • ФМСФ фенилметилсульфонилфторид
  • ФЛЦМ фосфатаза легких цепей миозина
  • Фн неорганический фосфат
  • ЭГТА этиленгликоль бис (Р-аминоэтиловый эфир)
  • МД^Ы'-тетрауксусной кислоты ЭДТА этилендиаминотетрауксусная кислота
  • Обозначение аминокислот
  • Алании, А Глицин в Лейцин Ь Валин V
  • Аргинин К Гистидин Н Метионин М Серин Б
  • Аспарагин N Изолейцин I Тирозин У Пролин Р
  • Аспарагиновая к-та Р Триптофан Л/ Треонин Т Лизин К
  • Глутаминовая к-та Е Глутамин О Фенилаланин Р Цистеин С
  • ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
  • ВВЕДЕНИЕ

Энергозависимое продвижение миозиновых филаментов относительно актиновых нитей составляет основу сократительной активности как мышечных, так и немышечных тканей. Сократительная активность скелетных и гладких мышц регулируется различным образом. На молекулярном уровне регуляция процесса сокращения в скелетной мускулатуре осуществляется Са2±зависимым белковым комплексом, тесно связанным с тонкими, актиновыми филаментами и получившим название тропонинового комплекса. Регуляция сократительной активности гладких мышц и немышечных тканей, напротив, в большей степени связана с толстыми, миозиновыми филаментами (Рис.1), так как регулируется обратимым фосфорилированием самой миозиновой молекулы, а точнее — ее регуляторных легких цепей.

Фермент, катализирующий эту ключевую регуляторную реакцию, получил название киназа легких цепей миозина (КЛЦМ). Таким образом, КЛЦМ -основной регуляторный фермент, контролирующий активность гладкомышечного и немышечного миозинов 11-ого типа.

Научные исследования минувшего десятилетия показали, что ген КЛЦМ имеет необычное устройство, так как кодирует одновременно три различных беловых продукта — КЛЦМ-108, КЛЦМ-210 и KRP (Collinge et al., 1992- Watterson et al., 1995- Gallagher and Herring, 1991) — каждый из которых, по всей видимости, принимает участие в работе акгомиозинового сократителного аппарата.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЙ Целью настоящей диссертационной работы явилось: изучение функциональных свойств белков — продуктов генетического локуса КЛЦМ.

ЗАДАЧИ РАБОТЫ В работе были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияния миозин-связывающих белков KRP и кальдесмона на процесс полимеризации гладкомышечного миозина in vitro.

2. Разработать метод выделения КЛЦМ-210 из гладких мышц аорты и исследовать ее функциональные свойства.

3. Изучить взаимодействие уникального домена КЛЦМ-210 с белками цитоскелета и возможность регуляции этих взаимодействий фосфорилированием.

Са2+вне

Са2+внутри

Шю-киназа

Дефосфорилирование РЛЦ

-РАССЛАБЛЕНИЕ Ф осфорилирование РЛЦ -СОКРАЩЕНИЕ Рис. 1. Регуляция работы сократительного аппарата немышечных и гладкомышечных клеток киназой легких цепей миозина

Вход ионов Са2+ приводит к образованию комплекса Са2±Кальмодулин, который с высокой аффинностью связывается с киназой легких цепей миозина (КЛЦМ) и активирует ее. Активная КЛЦМ фосфорилирует регуляторные легкие цепи миозина и, тем самым, активирует актин-зависимую АТФазу миозина. Активированные миозиновые филаменты взаимодействуют с Ф-актином — развивается процесс сокращения.

ВЫВОДЫ.

На основании полученных в результате работы даных сделаны следующие выводы:

1. Миозин-связывающие белки KRP и кальдесмон разнонаправленно влияют на филаментообразование гладкомышечного миозина в присутствии АТФ. KRP стимулирует сборку филаментов с боковой полярностью и препятствует их агрегации. Кальдесмон способствует нуклеации филаментов, но тормозит их рост. Действуя совместно, KRP и кальдесмон могут регулировать количество и размер полимеров миозина в условиях, приближенных к физиологическим.

2. Получены специфические антитела к уникальному N-концевому домену КЛЦМ-210 и разработан метод аффинной очистки этого белка. Впервые показано, что КЛЦМ-210 имеет сравнимую с КЛЦМ-108 каталитическую активность и способна взаимодействовать с актином и миозином.

3. Впервые продемонстрировано связывание экспрессированной N-концевой части КЛЦМ-210 с актином и кератином in vitro, а также возможность регуляции этих взаимодействий путем фосфорилирования Сер-127 и Сер-140 уникального домена цАМФ-зависимой протеинкиназой.

Заключение

.

Актиновый и миозиновый цитоскелет эукариотических организмов приспособлен к выполнению широкого спектра функций, связанных с подвижностью. Полученные нами экспериментальные данные указывают на то, что все продукты генетического локуса КЛЦМ самым непосредственным образом вовлечены в регуляцию работы и динамических перестроек актомиозинового цитоскелета.

Актин и миозин скелетных и сердечных мышечных волокон собраны в саркомеры, которые имеют строго упорядоченное строение. Скорость обмена белков в саркомерах невелика, видимо поэтому, миозин этих тканей нелегко перевести в мономерную форму, и он не растворяется в присутствии АТФ. Строго упорядоченная саркомерная структура поперечнополосатых мышечных волокон не требует постороннего вмешательства в свою работу. Однако для формирования саркомеров в эмбриогенезе, а также при регенерации поврежденных мышечных волокон возникает необходимость в белке-организаторе, способном скоординировать взаимодействие различных факторов, необходимых для построения саркомеров. КЛЦМ, по всей видимости, и является таким белком-организатором. В эмбриональной сердечной мышце, а также в сердечных мышцах при гепертрофии наблюдается высокий уровень ее экспрессии, а в скелетных мышцах КЛЦМ появляется в процессе их регенерации, то есть во всех тех случаях, когда возникает необходимость в формировании саркомеров de novo.

Актомиозиновый цитоскелет гладких мышц тоже имеет упорядоченную организацию, однако он значительно более пластичен и подвержен динамическим перестройкам. В отношении пластичности сократительного аппарата гладкие мышцы занимают промежуточное положение между скелетными мышцами и немышечными клетками. Они значительно более «чувствительны», чем скелетные мышцы, и способны отвечать не только на электрические импульсы, но и на широкий спектр гуморальных факторов, тонко регулирующих сократительную активность. Миозин гладких мышц значительно более приспособлен к динамическим перестройкам и в дефосфорилированном виде может быть легко переведен в мономерную форму в присутствии АТФ. Высокий уровень упорядоченности цитоскелета гладких мышц, наряду со способностью к динамическим трансформациям, достигается, по-видимому, благодаря совместному действию на полимерный миозин АТФ, KRP и КЛЦМ. Действительно, KRP способен стабилизировать дефосфорилированный миозин в полимерном состоянии в покоящихся клетках, а КЛЦМ — в активно работающих клетках, препятствуя противоположно направленному действию АТФ. Молекула KRP содержит несколько участков фосфорилирования различными протеинкиназами. Возможно, благодаря фосфорилированию KRP по этим участкам происходит тонкая регуляция динамического равновесия между полимерной и мономерной формами миозина.

Наконец, актомиозиновый цитоскелет немышечных клеток наиболее пластичен и чувствителен к влиянию внешних факторов. Он характеризуется непрекращающимися процессами формирования и разборки: формирования.

151 там, где в нем возникает необходимость, и разборки, как только эта необходимость пропадает. Видимо поэтому, из трех продуктов генетического локуса КЛЦМ в немышечных клетках экспрессируется преимущественно КЛЦМ-210, тогда как К1ЧР в них не обнаруживается совсем. Благодаря множественным протяженным участкам связывания с актином КЛЦМ-210 стабилизирует актиновый цитоскелет, а, фосфорилируя РЛЦ миозина, она обеспечивает сборку миозиновых филаментов. Таким образом формируются функционально активные актомиозиновые волокна. Фосфорилирование КЛЦМ-210 другими протеинкиназами, например ПКА, может приводить к ослаблению связывания КЛЦМ-210 с актином и к растворению под действием АТФ полимерного миозина, который будет вновь собран в полимеры, как только в этом появится необходимость.

Полученные результаты позволяют предполагать, что генетический локус КЛЦМ посредством трех своих белковых продуктов контролирует формирование актомиозинового цитоскелета во всех типах тканей и, кроме того, осуществляет контроль над активностью и целостностью актомиозинового цитоскелета в гладких мышцах и немышечных тканях.

1. Гусев, Н.Б., Воротников, А.В., Бирюков, К.Г., Ширинский, В.П., Кальдесмон и кальпонин белки, участвующие в регуляции взаимодействия миозина и актина в немышечных клетках и гладких мышцах. Биохимия, 56, 13 471 368, 1991.

2. Левицкий, Д.И., Легкие цепи миозина и их роль в регуляции мышечного сокращения. Успехи биологической химии 27, 74−100, 1986.

3. Abe, М., Hasegawa, К., and Hosoya, Н., Activation of chicken gizzard myosin light chain kinase by Ca2+/calmodulin is inhibited by autophosphorylation. Cell Struct.Funct. 21, 183−188, 1996.

4. Adelstein, R.S., Conti, M.A., Hathaway, D.R., and Klee, C.B., Phosphorylation of smooth muscle myosin light chain kinase by the catalytic subunit of adenosine 3': 5'-monophosphate-dependent protein kinase. J.Biol.Chem. 253, 8347−8350,1978.

5. Adelstein, R.S. and Klee, C.B., Purification and characterization of smooth muscle myosin light chain kinase. J.Biol.Chem. 256, 7501−7509, 1981.

6. Adelstein, R.S. and Klee, C.B., Purification of smooth muscle myosin light-chain kinase. Methods Enzymol. 85 Pt B, 298−308, 1982.

7. Adelstein, R.S. and Sellers, J.R., Myosin structure and function. In «Biochemistry of smooth muscle contraction» (M. Barany and K. Barany, Eds.), pp. 3−19, Acad. Press, 1996.

8. Aksoy, M.O., Mras, S., Kamm, K.E., and Murphy, R.A., Ca2+, cAMP, and changes in myosin phosphorylation during contraction of smooth muscle. Am. J.Physiol. 245, C255-C270, 1983.

9. Aoki, H., Sadoshima, J., Izumo, S., Myosin light chain kinase mediates sarcomere organization during cardiac hypertrophy in vivo. Nature med. 6, 183−188,2000.

10. Applegate, D. and Pardee, J.D., Actin-facilitated assembly of smooth muscle myosin induces formation of actomyosin fibrils. J. Cell Biol. 117, 1223−1230, 1992.

11. Bagchi, I.C., Kemp, B.E., and Means, A.R., Myosin light chain kinase structurefunction analysis using bacterial expression. J.Biol.Chem. 264, 15 843−15 849, 1989.

12. Benian, G.M., Kiff, J.E., Neckelmann, N., Moerman, D.G., and Waterston, R.H., Sequence of an unusually large protein implicated in regulation of myosin activity in C. elegans. Nature 342, 45−50, 1989.

13. Bissonnette, M., Kuhn, D., and de Lanerolle, P., Purification and characterization of myosin light-chain kinase from the rat pancreas. Biochem. J. 258,739−747,1989.

14. Bogatcheva, N.V., Vorotnikov, A.V., Birukov, K.G., Shirinsky, V.P., and Gusev, N.B., Phosphorylation by casein kinase II affects the interaction of caldesmon with smooth muscle myosin and tropomyosin. Biochem. J. 290, 437−442, 1993.

15. Bretscher, A., Smooth muscle caldesmon. Rapid purification and F-actin cross-linked properties. J.Biol.Chem. 259,12 873−12 880,1984.

16. Bretscher, A. and Lynch, W., Identification and localization of immunoreactive forms of caldesmon in smooth and nonmuscle cells: a comparison with the distribution of tropomyosin and alpha-actinin. J. Cell Biol. 100, 1656−1663, 1985.

17. Bretscher, A., Thin filament regulatory proteins of smoothand non-muscle cells. Nature 321, 726−727, 1986.

18. Bryan, J., Imai, M., Lee, R., Moore, P., Cook, R.G., and Lin, W.-G., Cloning and expression of a smooth muscle caldesmon. J.Biol.Chem. 264, 13 873−13 879, 1989.

19. Bushueva, T.L., Teplova, M.V., Bushuev, V.N., Kudriashov, D.S., Vorotnikov, A.V., and Shirinskii, V.P., Stability of the structure of KRP (kinase related protein) protein., Mol Biol (Mosk) 33,227−236,1999.

20. Cande, W.Z. and Ezzell, R.M., Evidence for regulation of lamellipodial and tail contraction of glycerinated chicken embryonic fibroblasts by myosin light chain kinase. Cell Motil Cytoskeleton 6, 640−648, 1986.

21. Castellino, F., Ono, S., Matsumura, F., and Luini, A., Essential role of caldesmon in the actin filament reorganization induced by glucocorticoids. J. Cell Biol. 131, 1223−1230, 1995.

22. Chacko, S., Conti, M.A., and Adelstein, R.S., Effect of phosphorylation of smooth muscle myosin on actin activation and Ca2+ regulation.

23. Proc.Natl. Acad.Sci.USA 74, 129−133, 1977.

24. Chalovich, J.M., Hemric, M.E., and Velaz, L., Regulation of ATP hydrolysis by caldesmon. A novel change in the interaction of myosin with actin. Ann. N-Y Acad.Scl. 599, 85−99, 1990.

25. Chandra, T.S., Nath, N., Suzuki, H., and Seidel, J.C., Modification of thiols of gizzard myosin alters ATPase activity, stability of myosin filaments, and the 610 S conformational transition. J.Biol.Chem. 260, 202−207, 1985.

26. Conti, M.A. and Adelstein, R.S., The relationship between calmodulin binding and phosphorylation of smooth muscle myosin kinase by the catalytic subunit of 3':5' cAMP-dependent protein kinase. J.Biol.Chem. 256, 3178−3181, 1981.

27. Craig, R., Smith, R., and Kendrick-Jones, J., Light-chain phosphorylation controls the conformation of vertebrate non-muscle and smooth muscle myosin molecules. Nature 302, 436−439, 1983.

28. Cross, R.A., Cross, K.E., and Sobieszek, A., ATP-linked monomer-polymer equilibrium of smooth muscle myosin: the free folded monomer traps ADP.Pi. EMBO J. 5, 2637−2641, 1986.

29. Cross, R.A., Geeves, M.A., and Kendrick-Jones, J., A nucleation-elongation mechanism for the self-assembly of side polar sheets of smooth muscle myosin. EMBO J. 10, 747−756, 1991.

30. D’Angelo, E.K., Singer, H.A., and Rembold, C.M., Magnesium relaxes arterial smooth muscle by decreasing intracellular Ca2+ without changing intracellular Mg2+. J Clin Invest 89, 1988;1994, 1992.

31. Dabiri, G.A., Turnacioglu, K.K., Sanger, J.M., and Sanger, J.W., Myofibrillogenesis visualized in living embryonic cardiomyocytes. Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94, 9493−9498, 1997.

32. Dabrowska, R., Aromatorio, D., Sherry, J.M., and Hartshorne, D.J., Composition of the myosin light chain kinase from chicken gizzard. Biochem.Biophys.Res. Commun. 78, 1263−1272, 1977.

33. Earley, J.J., Su, X., and Moreland, R.S., Caldesmon inhibits active crossbridges in unstimulated vascular smooth muscle: An antisense oligodeoxynucleotide approach. Circ.Res. 83, 661−667, 1998.

34. Eilertsen, K.J., Kazmierski, S.T., and Keller, T.C., Cellular titin localization in stress fibers and interaction with myosin II filaments in vitro. J. Cell Biol. 126, 1201−1210, 1994.

35. Fisher, S.A. and Ikebe, M., Developmental and tissue distribution of expression of nonmuscle and smooth muscle isoforms of myosin light chain kinase. Biochem.Biophys.Res. Commun. 217, 696−703, 1995.

36. Foyt, H.L., Guerriero, V.J., and Means, A.R., Functional domains of chicken gizzard myosin light chain kinase. J.Biol.Chem. 260, 7765−7774, 1985.

37. Gallagher, P.J. and Herring, B.P., The carboxyl terminus of the smooth muscle myosin light chain kinase is expressed as an independent protein, telokin. J.Biol.Chem. 266, 23 945−23 952, 1991.

38. Gallagher, P.J., Herring, B.P., Griffin, S.A., and Stull, J.T., Molecular characterization of a mammalian smooth muscle myosin light chain kinase published erratum appears in J Biol Chem 1992 May 5−267(13):9450., J.Biol.Chem. 266, 23 936−23 944, 1991.

39. Gallagher, P.J., Garcia, J.G., and Herring, B.P., Expression of a novel myosin light chain kinase in embryonic tissues and cultured cells. J.Biol.Chem. 270, 29 090−29 095, 1995.

40. Gallagher, P.J. and Stull, J.T., Localization of an actin binding domain in smooth muscle myosin light chain kinase. Mol. Cell Biochem. 173, 51−57, 1997.

41. Garcia, J.G., Verin, A.D., Schaphorst, K., Siddiqui, R., Patterson, C.E., Csortos, C., and Natarajan, V., Regulation of endothelial cell myosin light chain kinase by Rho, cortactin, and p60(src). Am. J.Physiol. 276, L989-L998, 1999.

42. Garcia, J.G.N., Lazar, V., Gilbert-McClain, LI., Gallagher, P.J., and Verin, A.D., Myosin light chain kinase in endothelium: molecular cloning and regulation. Am. J.Respir. Cell Mol.Biol. 16, 489−494, 1997.

43. Gerthoffer, W.T. and Murphy, R.A., Ca2+, myosin phosphorylation, and relaxation of arterial smooth muscle. Am. J.Physiol. 245, C271-C277, 1983.

44. Gerthoffer, W.T. and Murphy, R.A., Myosin phosphorylation and regulation of cross-bridge cycle in tracheal smooth muscle. Am. J.Physiol. 244, C182-C187, 1983.

45. Gilbert-McClain, LI., Verin, A.D., Shi, S., Irwin, R.P., and Garcia, J.G., Regulation of endothelial cell myosin light chain phosphorylation and permeability by vanadate. J. Cell Biochem. 70, 141−155, 1998.

46. Gillis, J.M., Cao, M.L., and Godfraind-De Becker, A., Density of myosin filaments in the rat anococcygeus muscle, at rest and in contraction. II. J. Muscle Res. Cell Motil. 9, 18−29, 1988.

47. Graceffa, P., Wang, C.L.A., and Stafford, W.F., Caldesmon. Molecular weight and subunit composition by analytical ultracentrifugation. J.Biol.Chem. 263, 14 196−14 202, 1988.

48. Gusev, N.B. and Vorotnikov, A.V., Effect of phosphorylation and Ca-binding proteins on functioning of caldesmon, thin filament linked regulator of smooth muscle and non-muscle motility. Sov.Sci.Rev.D.Physicochem.Biol. 11, 1XXEP: 53, 1993.

49. Haeberle, J.R., Trybus, K.M., Hemric, M.E., and Warshaw, D M., The effects of smooth muscle caldesmon on actin filament motility. J.Biol.Chem. 267, 2 300 123 006, 1992.

50. Harpaz, Y. and Chothia, C., Many of the immunoglobulin superfamily domains in cell adhesion molecules and surface receptors belong to a new structural set which is close to that containing variable domains. J. Mol.Biol. 238, 528−539, 1994.

51. Hayashi, K., Kanda, K., Kimizuka, F., Kato, I., and Sobue, K., Primary structure and functional expression of h-caldesmon complementary DNA.

52. Biochem. Biophys. Res. Commun. 164, 503−511, 1989.

53. Heierhorst, J., Probst, W.C., Kohanski, R.A., Buku, A., and Weiss, K.R., Phosphorylation of myosin regulatory light chains by the molluscan twitchin kinase. EurJBiochem. 233, 426−431, 1995.

54. Hemric, M.E. and Chalovich, J.M., Characterization of caldesmon binding to myosin. J.Biol. Chem. 265, 19 672−19 678, 1990.

55. Herring, B.P. and Smith, A.F., Telokin expression is mediated by a smooth muscle cell-specific promoter. Am. J.Physiol. 270, C1656-C1665, 1996.

56. Herring, B.P. and Smith, A.F., Telokin expression in A10 smooth muscle cells requires serum response factor. Am. J.Physiol. 272, C1394-C1404, 1997.

57. Hnath, E.J., Wang, C.L., Huber, P.A., Marston, S.B., and Phillips, G.N.J., Affinity and structure of complexes of tropomyosin and caldesmon domains. Biophys J 71,1920;1933, 1996.

58. Holden, H.M., Ito, M., Hartshorne, D.J., and Rayment, I., X-ray structure determination of telokin, the C-terminal domain of myosin light chain kinase, at 2.8 A resolution. J.Mol.Biol. 227, 840−851, 1992.

59. Horowitz, A., Trybus, K.M., Bowman, D.S., and Fay, F.S., Antibodies probe for folded monomeric myosin in relaxed and contracted smooth muscle. J. Cell Biol. 126, 1195−1200, 1994.

60. Hosoya, H., Yamashiro, S., and Matsumura, F., Mitosis-specific phosphorylation of myosin light chain kinase. J.Biol.Chem. 266, 22 173−22 178, 1991.

61. Hosoya, N., Hosoya, H., Yamashiro, S., Mohri, H., and Matsumura, F., Localization of caldesmon and its dephosphorylation during cell division. J. Cell Biol. 121, 1075−1082, 1993.

62. Huber, P.A., Fraser, I.D., and Marston, S.B., Location of smooth-muscle myosin and tropomyosin binding sites in the C-terminal 288 residues of human caldesmon. Biochem.J. 312 (Pt 2), 617−625, 1995.

63. Ikebe, M., Inagaki, M., Kanamaru, K., and Hidaka, H., Phosphorylation of smooth muscle myosin light chain kinase by Ca2±activated, phospholipid-dependent protein kinase. J.Biol.Chem. 260, 4547−4550, 1985a.

64. Ikebe, M. and Hartshorne, D.J., Phosphorylation of smooth muscle myosin at two distinct sites by myosin light chain kinase. J.Biol.Chem. 260, 10 027−10 031, 19 856.

65. Ikebe, M., Hartshorne, D.J., and Elzinga, M., Identification, phosphorylation, and dephosphorylation of a second site for myosin light chain kinase on the 20,000-dalton light chain of smooth muscle myosin. J.Biol.Chem. 261, 36−39, 1986.

66. Ikebe, M., Stepinska, M., Kemp, B.E., Means, A.R., and Hartshorne, D.J., Proteolysis of smooth muscle myosin light chain kinase. Formation of inactive and calmodulin-independent fragments. J.Biol.Chem. 262, 13 828−13 834, 1987.

67. Ikebe, M. and Reardon, S., Binding of caldesmon to smooth muscle myosin. J.Biol.Chem. 263, 3055−3058, 1988.

68. Ikebe, M., Phosphorylation of a second site for myosin light chain kinase on platelet myosin. Biochem. 28, 8750−8755, 1989.

69. Ikebe, M., Ikebe, R., Kamisoyama, H., Reardon, S., Schwonek, J.P., Sanders, C.R.2., and Matsuura, M., Function of the NH2-terminal domain of the regulatory light chain on the regulation of smooth muscle myosin. J.Biol.Chem.269, 28 173−28 180, 1994.

70. Ishikawa, R., Yamashiro, S., Kohama, K., and Matsumura, F., Regulation of actin binding and actin bundling activities of fascin by caldesmon coupled with tropomyosin. J.Biol.Chem. 273, 26 991−26 997, 1998.

71. Ito, M., Dabrowska, R., Guerriero, V., Jr., and Hartshorne, D.J., Identification in turkey gizzard of an acidic protein related to the C-terminal portion of smooth muscle myosin light chain kinase. J.Biol.Chem. 264, 13 971−13 974, 1989.

72. Jiang, M.J. and Morgan, K.G., Intracellular calcium levels in phorbol ester-induced contractions of vascular muscle. Am. J.Physiol. 253, H1365-H1371, 1987.

73. Kamm, K.E. and Stull, J.T., The function of myosin and myosin light chain kinase phosphorylation in smooth muscle. Annu.Rev.Pharmacol. Toxicol. 25, 593−620, 1985.

74. Katayama, E., Scott-Woo, G.C., Ikebe, M., and Scott-Woo, G., Effect of caldesmon on the assembly of smooth muscle myosin. J.Biol. Chem. 270, 3919−3925, 1995.

75. Katoch, S.S., REegg, J.C., and Pfitzer, G., Differential effects of a K+ channel agonist and Ca2+ antagonists on myosin light chain phosphorylation in relaxation of endothelin-1-contracted tracheal smooth muscle. Pflug.Arch. 433, 472−477, 1997.

76. Kemp, B.E. and Pearson, R.B., Spatial requirements for location of basic residues in peptide substrates for smooth muscle myosin light chain kinase. J.Biol.Chem. 260, 3355−3359, 1985.

77. Kemp, B.E., Pearson, R.B., Guerriero, V.J., Bagchi, I.C., and Means, A.R., The calmodulin binding domain of chicken smooth muscle myosin light chain kinase contains a pseudosubstrate sequence. J.Biol. Chem. 262, 2542−2548, 1987.

78. Kendrick-Jones, J., Smith, R.C., Craig, R., and Citi, S., Polymerization of vertebrate non-muscle and smooth muscle myosins. J.Mol.Biol. 198, 241−252, 1987.

79. Klemke, R.L., Cai, S., Giannini, A.L., Gallagher, P.J., de Lanerolle, P., Cheresh, D.A., and de-Lanerolle, P., Regulation of cell motility by mitogen-activated protein kinase. J. Cell Biol. 137, 481−492, 1997.

80. Kojima, S., Mishima, M., Mabuchi, I., and Hotta, Y., A single Drosophila melanogaster myosin light chain kinase gene produces multiple isoforms whose activities are differently regulated. Genes. Cells. 1, 855−871, 1996.

81. Krauze, K., Makuch, R., Stepka, M., and Dabrowska, R., The first caldesmon-like protein in higher plants. Biochem.Biophys.Res.Commun. 247, 576−579, 1998.

82. Krueger, J.K., Olah, G.A., Rokop, S.E., Zhi, G., Stull, J.T., and Trewhella, J., Structures of calmodulin and a functional myosin light chain kinase in the activated complex: a neutron scattering study. Biochem. 36, 6017−6023, 1997.

83. Krueger, J.K., Olah, G.A., Rokop, S.E., Zhi, G., Stull, J.T., and Trewhella, J., Structures of calmodulin and a functional myosin light chain kinase in the activated complex: a neutron scattering study. Biochem. 36, 6017−6023, 1997.

84. Kudryashov, D.S., Chibalina, M.V., Birukov, K.G., Lukas, T.J., Sellers, J.R., Van Eldik, L.J., Watterson, D.M., Shirinsky, V.P., Unique sequence of a high molecular weight myosin light chain kinase is involved in interaction with actin.

85. AII i|— I—I LL A O r*~J —I A A rrruyiusKeieiun. rnoo isu. <�"QO, O/-/ i,.

86. Laemmli, U.K., Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227, 680−685, 1970.

87. Lamb, N.J., Fernandez, A., Mezgueldi, M., LabbB, J.P., Kassab, R., and Fattoum, A., Disruption of the actin cytoskeleton in living nonmuscle cells by microinjection of antibodies to domain-3 of caldesmon. Eur J Cell Biol. 69, 3644, 1996.

88. Lazar, V. and Garcia, J.G., A single human myosin light chain kinase gene (MLCKMYLK). Genomics 57, 256−267, 1999.

89. Lehman, W., Denault, D., and Marston, S., The caldesmon content of vertebrate smooth muscle. Biochim.Biophys.Acta 1203, 53−59, 1993.

90. Li, L., Eto, M., Lee, M.R., Morita, F., Yazawa, M., Kitazawa, T.J., Possible involvement of the novel CPI-17 protein in protein kinase C signal transduction of rabbit arterial smooth muscle. Physiol (Lond). 508, 871−881, 1998.

91. Lin, J.J., Lin, J.L., Davis-Nanthakumar, E.J., and Lourim, D., Monoclonal antibodies against caldesmon, a Ca++/calmodulinand actin-binding protein of smooth muscle and nonmuscle cells. Hybridoma 7, 273−288, 1988.

92. Lowry, J.H., Rosenbrough, N.J., Farr, A.L., Randall, R.J., Protein measurement with thefolin phenol reagent. J. Biol. Chem. 193, 261−275, 1951.

93. Lukas, T.J., Burgess, W.H., Prendergast, F.G., Lau, W., and Watterson, D M., Calmodulin binding domains: characterization of a phosphorylation and calmodulin binding site from myosin light chain kinase. Biochem. 25, 14 581 464, 1986.

94. Lukas, T.J., Mirzoeva, S., and Watterson, D.M., Calmodulin-regulated protein kinases. In «Calmodulin and signal transduction» (L.J. Van Eldik and D.M. Watterson, Eds.), pp. 65−168, Acad. Press, London, 1998.

95. Mabuchi, K., Li, Y., Tao, T., and Wang, C.L., Immunocytochemical localizationui oaiucsi iiui i ai iu uaijjui 1111 111 ui nurei i yi/.z.ai u si i iuuii i mu&oie, j. iviusuic?

96. Res. Cell Motil. 17, 243−260, 1996.

97. Marston, S.B., The regulation of smooth muscle contractile proteins. Prog.Biophys. Mol.Biol. 41, 1XXEP: 41, 1983.

98. Marston, S.B. and Redwood, C.S., The molecular anatomy of caldesmon. Biochem. J. 279, 1−16, 1991.

99. Marston, S.B., Pinter, K., and Bennett, P., Caldesmon binds to smooth muscle myosin and myosin rod and crosslinks thick filaments to actin filaments.

100. J. Muscle Res. Cell Motil. 13, 206−218, 1992.

101. Marston, S.B. and Redwood, C.S., The essential role of tropomyosin in cooperative regulation of smooth muscle thin filament activity by caldesmon. J.Biol.Chem. 268, 12 317−12 320, 1993.

102. Marston, S.B. and Huber, P.A.J., Caldesmon. In «Biochemistry of smooth muscle contraction» (M. Barany and K. Barany, Eds.), pp. 77−90, Acad Press, 1996.

103. Masato, T., Numata, T., Katoh, T., Morita, F., and Yazawa, M., Crosslinking of telokin to chicken gizzard smooth muscle myosin. J.Biochem. 121, 225−230,1997.

104. Matsu-ura, M. and Ikebe, M., Requirement of the two-headed structure for the phosphorylation dependent regulation of smooth muscle myosin. FEBS Lett. 363,246−250,1995.

105. Matsumura, F., Ono, S., Yamakita, Y., Totsukawa, G., and Yamashiro, S., Specific localization of serine 19 phosphorylated myosin II during cell locomotion and mitosis of cultured cells. J. Cell Biol. 140, 119−129, 1998.

106. Means, A.R. and George, S.E., Calmodulin regulation of smooth-muscle myosin light-chain kinase. J Cardiovasc Pharmacol 12 Suppl 5, S25-S29, 1988.

107. Medvedeva, M.V., Kolobova, E.A., Huber, P.A., Fraser, I D., Marston, S.B., and Gusev, N.B., Mapping of contact sites in the caldesmon-calmodulin complex. Biochem. J. 324 (Pt 1), 255−262, 1997.

108. Mills, J.C., Stone, N.L., Erhardt, J., and Pittman, R.N., Apoptotic membrane blebbing is regulated by myosin light chain phosphorylation. J. Cell Biol. 140, 627−636, 1998.

109. Murphy, R.A., Special topic: contraction in smooth muscle cells. Annu.Rev. Physiol. 51, 275−283, 1989.

110. Nishikawa, M., Shirakawa, S., and Adelstein, R.S., Phosphorylation of smooth muscle myosin light chain kinase by protein kinase C. Comparative study of the phosphorylated sites. J.Biol.Chem. 260, 8978−8983, 1985.

111. Okamoto, Y., Sekine, T., Grammer, J., and Yount, R.G., The essential light chains constitute part of the active site of smooth muscle myosin. Nature 324, 78−80, 1986.

112. Okayama, N., Joh, T., Miyamoto, T., Kato, T., and Itoh, M., Role of myosin light-chain kinase and protein kinase C in pepsinogen secretion from guinea pig gastric chief cells in monolayer culture. Dig Dis Sci 39, 2547−2557, 1994.

113. Olson, N.J., Pearson, R.B., Needleman, D.S., Hurwitz, M.Y., Kemp, B E., and Means, A.R., Regulatory and structural motifs of chicken gizzard myosin light chain kinase. Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87, 2284−2288, 1990.

114. Ozawa, K, Masujima, T., Ikeda, K, Kodama, Y., and Nonomura, Y., Different pathways of inhibitory effects of wortmannin on exocytosis are revealed by video-enhanced light microscope. Biochem.Biophys.Res.Commun. 222, 243 248, 1996.

115. Park, C.S., Chang, S.H., Lee, H.S., Kim, S.H., Chang, J.W., and Hong, C D., 1. hibition of renin secretion by Ca2+ through activation of myosin light chain kinase. Am. J.Physiol. 271, C242-C247,1996.

116. Pearson, R.B., Jakes, R., John, M., Kendrick-Jones, J., and Kemp, B E., Phosphorylation site sequence of smooth muscle myosin light chain (Mr = 20 000). FEBSLett. 168, 108−112, 1984.

117. Pearson, R.B., Floyd, D.M., Hunt, J.T., Lee, V.G., and Kemp, B.E., Hydroxyamino acid specificity of smooth muscle myosin light chain kinase. Arch Biochem Biophys 260, 37−44, 1988.

118. Phillips, S.V., Scott-Woo, G.C., Walsh, M.P., and Kargacin, G.J., Comparison of the caldesmon content of cardiac and smooth muscle. J Mol Cell Cardiol 31, 1413−1417, 1999.

119. Rasmussen, H., Forder, J., Kojima, I., and Scriabine, A., TPA-induced contraction of isolated rabbit vascular smooth muscle.

120. Biochem.Biophys.Res.Commun. 122, 776−784, 1984.

121. Rasmussen, H., Takuwa, Y., and Park, S., Protein kinase C in the regulation of smooth muscle contraction. FASEB J. 1, 177−185, 1987.

122. Richardson, M.R., Taylor, D.A., Casey, M.L., MacDonald, P.C., and Stull, J.T., Biochemical markers of contraction in human myometrial smooth muscle cells in culture. In Vitro Cell Dev Biol 23, 21−28, 1987.

123. Ruegg, J.C., Vertebrate smooth muscle. In «Calcium in Muscle Activation» (Anonymouspp. 201−238, 1986.

124. Rusconi, F., Potier, M.C., Le Caer, J.P., Schmitter, J.M., and Rossier, J., Characterization of the chicken telokin heterogeneity by time-offlight massspectrometry. Biochem. 36, 11 021−11 026, 1997.

125. Russo, M.A., Guerriero, V.J., and Means, A.R., Hormonal regulation of a chicken oviduct messenger ribonucleic acid that shares a common domain with gizzard myosin light chain kinase. Mol.Endocrinol. 1, 60−67, 1987.

126. Samizo, K., Okagaki, T., and Kohama, K., Inhibitory effect of phosphorylated myosin light chain kinase on the ATP-dependent actin-myosin interaction. Biochem.Biophys.Res. Commun. 261, 95−99, 1999.

127. Schulman, H., The multifunctional Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase. Adv Second Messenger Phosphoprotein Res 22, 39−112, 1988.

128. Scott-Woo, G.C., Walsh, M.P., Ikebe, M., and Kargacin, G.J., Identification and localization of caldesmon in cardiac muscle. Biochem. J. 334 (Pt 1), 161−170, 1998.

129. Sellers, J.R., Eisenberg, E., and Adelstein, R.S., The binding of smooth muscle heavy meromyosin to actin in the presence of ATP. Effect of phosphorylation. J.Biol.Chem. 257, 13 880−13 883, 1982.

130. Sellers, J.R. and Pato, M.D., The binding of smooth muscle myosin light chain kinase and phosphatases to actin and myosin. J.Biol.Chem. 259, 7740−7746, 1984.

131. Sellers, J.R., Mechanism of the phosphorylation-dependent regulation of smooth muscle heavy meromyosin. J.Biol.Chem. 260, 15 815−15 819, 1985.

132. Sellers, J.R. and Goodson, H.V., Motor proteins 2: myosin. Protein Profile, 1995.

133. Sellers, J.R., Goodson, H.V., and Wang, F., A myosin family reunion. J. Muscle Res. Cell Motil. 17, 7−22, 1996.

134. Shirinsky, V.P., Bushueva, T.L., and Frolova, S.I., Caldesmon-calmodulin interaction: study by the method of protein intrinsic tryptophan fluorescence. Biochem. J. 255, 203−208, 1988.

135. Shirinsky, V.P., Birukov, K.G., Vorotnikov, A.V., and Gusev, N.B., Caldesmon150, caldesmon77 and skeletal muscle troponin T share a common antigenic determinant. FEBS Lett. 251, 65−68, 1989.

136. Silver, D.L., Vorotnikov, A.V., Watterson, D.M., Shirinsky, V.P., and Sellers,.

137. D Qifflc rvf ly? r-" o o? a mlot^rJ r"rr+o?n onrl cmnrvth rvi i io^Iqj. i ., vjii^o w i ii i i^i auuui i k^^ivv^^i i r11 iaot/ i ciaicu pi w ici1 i ai iu oi i ivjvju i i i iuouicmyosin. J.Biol.Chem. 272, 25 353−25 359, 1997.

138. Small, J.V. and Sobieszek, A., Contractile and structural proteins of smooth muscle. In: «Biochemistry of smooth muscle» (Stefens, N.L. ed.) 85−140, CRC Press, 1983.

139. Smith, A.F., Bigsby, R.M., Word, R.A., and Herring, B.P., A 310-bp minimal promoter mediates smooth muscle cell-specific expression of telokin.

140. Am. J.Physiol. 274, C1188−95- discussion C1187, 1998.

141. Smith, L., Su, X., Lin, P., Zhi, G. and Stull, T.J. Identification of a novel actin binding motif in smooth muscle myosin light chain kinase. J. Biol. Chem. 274, 29 433−29 438,1999.

142. Sobieszek, A., Cross-bridges on self-assembled smooth muscle myosin filaments. J.Mol.Biol. 70, 741−744, 1972.

143. Sobieszek, A., Ca-linked phosphorylation of a light chain of vertebrate smooth-muscle myosin. Eur.J.Biochem. 73, 477−483, 1977.

144. Sobieszek, A. and Small, J.V., Regulation of the actin-myosin interaction in vertebrate smooth muscle: activation via a myosin light-chain kinase and the effect of tropomyosin. J.Mol.Biol. 112,559−576,1977.

145. Sobue, K, Muramoto, Y., Fujita, M., and Kakiuchi, S., Purification of a calmodulin-binding protein from chicken gizzard that interacts with F-actin. Proc.Natl.Acad.Sci. USA 78, 5652−5655, 1981.

146. Sobue, K., Tanaka, T., Kanda, K, Ashino, N., and Kakiuchi, S., Purification and characterization of caldesmon (77): a calmodulin-binding protein thatinteracts with actin filaments from bovine adrenal medula. Proc.Natl.Acad.Sci. USA 82,5025−5029, 1985.

147. Sobue, K., Kanda, K., Tanaka, T., and Ueki, N., Caldesmon: a common actin-linked regulatory protein in the smooth muscle and nonmuscle contractile system. J. Cell Biochem. 37, 317−325, 1988.

148. Somlyo, A.V., Butler, T.M., Bond, M., and Somlyo, A.P., Myosin filaments have non-phosphorylated light chains in relaxed smooth muscle. Nature 294, 567 569,1981.

149. Spudich, J.A. and Watt, S., The regulation of rabbit skeletal muscle contraction. I. Biochemical studies of the interaction of the tropomyosintroponin complex with actin and the proteolytic fragments of myosin. J.Biol.Chem. 246, 48 664 871,1971.

150. Stull, J.T., Tansey, M.G., Tang, D.-C., Word, R.A., Kamm, K.E., and Tang, D.C., Phosphorylation of myosin light chain kinase: a cellular mechanism for Ca2+desensitization. Mol. Cell Biochem. 127/128,229−237, 1993.

151. Stull, J.T., Krueger, J.K., Kamm, K.E., Gao, Z.-H., Zhi, G., and Padre, R.C., Myosin Light Chain Kinase. In «Biochemistry of Smooth Muscle Contraction» (Anonymouspp. 119−129, Academic Press, Inc., 1996.

152. Surgucheva, I. and Bryan, J., Over-expression of smooth muscle caldesmon in mouse fibroblasts. Cell Motil Cytoskeleton 32, 233−243, 1995.

153. Suzuki, H., Onishi, H., Takahashi, K., and Watanabe, S., Structure and function of chicken gizzard myosin. J.Biochem. 84, 1529−1542, 1978.

154. Sweeney, H.L., Bowman, B.F., and Stull, J.T., Myosin light chain phosphorylation in vertebrate striated muscle: regulation and function. Am.J.Physiol. 264, C1085−95, 1993.

155. Szymanski, P.T., Ferguson, D.G., and Paul, R.J., Polylysine activates smooth muscle myosin ATPase activity via induction of a 10S to 6S transition.

156. Am. J. Physiol. 265, C379-C386, 1993.

157. Szymanski, P.T., Chacko, T.K., Rovner, A.S., and Goyal, R.K., Differences in contractile protein content and isoforms in phasic and tonic smooth muscles. Am. J.Physiol. 275, C684-C692, 1998.

158. Tansey, M.G., Hori, M., Karaki, H., Kamm, K.E., and Stull, J.T., Okadaicacid uncouples myosin light chain phosphorylation and tension in smooth muscle. FEBS Lett. 270, 219−221, 1990.

159. Taylor, D.A. and Stull, J.T., Calcium dependence of myosin light chain phosphorylation in smooth muscle cells. J.Biol.Chem. 263, 14 456−14 462,1988.

160. Tokui, T., Ando, S., and Ikebe, M., Autophosphorylation of smooth muscle myosin light chain kinase at its regulatory domain. Biochem. 34, 5173−5179, 1995.

161. Towbin, H., Staehelin, T., and Gordon, J., Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. PNAS 76, 4350−4354, 1979.

162. Trinick, J., Titin and nebulin: protein rulers in muscle? Trends Biochem Sci 19, 405−409, 1994.

163. Trybus, K.M., Huiatt, T.W., and Lowey, S., A bent monomeric conformation of myosin from smooth muscle. Proc.Natl.Acad.Sci. USA 79, 6151−6155, 1982.

164. Trybus, K.M. and Lowey, S., The regulatory light chain is required for folding of smooth muscle myosin. J.Biol.Chem. 263, 16 485−16 492, 1988.

165. Trybus, K.M., Filamentous smooth muscle myosin is regulated by phosphorylation. J. Cell Biol. 109, 2887−2894, 1989.

166. Trybus, K.M., Assembly of cytoplasmic and smooth muscle myosins. Curr. Opin. Cell Biol. 3, 105−111, 1991.

167. Tullio, A.N., Accili, D., Ferrans, V.J., Yu, Z.X., Takeda. K., Grinberg, A., Westphal, H., Preston, Y. AJ, Adelstein, R.S., Nonmuscle myosin ll-B is required for normal development of the mouse heart. Proc Natl Acad Sci U S A 94, 12 407−12 412, 1997.

168. Umemoto, S., Bengur, A.R., and Sellers, J.R., Effect of multiple phosphorylations of smooth muscle and cytoplasmic myosins on movement in an in vitro motility assay. J.Biol.Chem. 264, 1431−1436, 1989.

169. Verin, A.D., Lazar, V., Torry, R.J., Labarrere, C.A., Patterson, C.E., and Garcia, J.G., Expression of a novel high molecular-weight myosin light chain kinase in endothelium. Am J Respir Cell Mol Biol 19, 758−766, 1998a.

170. Verin, A.D., Gilbert-McClain, LI., Patterson, C.E., and Garcia, J.G., Biochemical regulation of the nonmuscle myosin light chain kinase isoform in bovine endothelium. Am J Respir Cell Mol Biol 19, 767−776, 19 986.

171. Vorotnikov, A.V., Silver, D.L., Sellers, J.R., Watterson, D.M., and Shirinsky, V.P., Kinase-related protein is phosphorylated both in vitro and in smooth muscle by mitogen-activated and cyclic AMP-dependent protein kinases.

172. J. Muscle Res. Cell Motil. 17, 153a, 1996.

173. Wagner, P.D. and Stone, D.B., Myosin heavy chain-light chain recombinations and interactions between the two classes of light chains. J.Biol.Chem. 258, 8876−8882, 1983.

174. Walsh, M.P., Limited proteolysis of smooth muscle myosin light chain kinase. Biochem. 24, 3724−3730, 1985.

175. Warren, K.S., Shutt, D.C., McDermott, J.P., Lin, J.L., Soil, D.R., and Lin, J.J., Overexpression of microfilament-stabilizing human caldesmon fragment, CaD39, affects cell attachment, spreading, and cytokinesis. Cell.

176. Motil. Cytoskel. 34, 215−229, 1996.

177. Warrick, H.M. and Spudich, J.A., Myosin structure and function in cell motility. Annu.Rev. Cell Biol. 3, 379−421, 1987.

178. Watterson, D.M., Collinge, M.A., Lukas, T.J., Van-Eldik, L.J., Birukov, K.G., Stepanova, O.V., and Shirinsky, V.P., Multiple gene products are produced from a novel protein kinase transcription region. FEBS Lett. 373, 217−220, 1995.

179. Wysolmerski, R.B. and Lagunoff, D., Involvement of myosin light-chain kinase in endothelial cell retraction. Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87, 16−20, 1990.

180. Xie, X., Harrison, D.H., Schlichting, I., Sweet, R.M., Kalabokis, V.N., Szent-GyOrgyi, A.G., and Cohen, C., Structure of the regulatory domain of scallop myosin at 2.8 A resolution see comments. Nature 368, 306−312, 1994.

181. Yamakita, Y., Yamashiro, S., and Matsumura, F., In vivo phosphorylation of regulatory light chain of myosin II during mitosis of cultured cells. J. Cell Biol.1. A A ^ on HO-7 A rf A.

182. Yamashiro, S. and Matsumura, F., Mitosis-Specific Phosphorylation of Caldesmon Possible Molecular Mechanism of Cell Rounding During Mitosis. Bioessays 13, 563−568, 1991.

Показать весь текст
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!