Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Изучение комплекса протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов в грене тутового шелкопряда

Диссертация: Изучение комплекса протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов в грене тутового шелкопряда
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Методом изоэлектрофокусирования в слое ультродекса в грене тутового шелкопряда обнаружено наличие пяти зон ингибиторной активности по отношению к папаину с р1 равными 5,10, 5,96, 6,43, 7,27 и 7,54. Одновременно нами была установлена гетерогенность ингибиторов папаина по молекулярной массе. Так, разделение препарата растворимых белков грены методом гель-фильтрации через Т8К-НЛ/-55 позволило… Читать ещё >

Изучение комплекса протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов в грене тутового шелкопряда (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • Глава I. ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ И ИХ БЕЛКОВЫЕ ИНГИБИТОРЫ У НАСЕКОМЫХ (обзор литературы)
    • I. 1. Запасные белки и протеолитические ферменты яиц насекомых
    • I. 1. 1. Запасные белки — главные субстраты пептидогидролаз яиц насекомых
    • I. 1.2. Протеолитические ферменты яиц насекомых
      • I. 2. Белковые ингибиторы протеиназ насекомых
      • I. 3. Белковые ингибиторы протеиназ тутового шелкопряда
  • Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
    • II. 1. Материал
    • II. 2. Получение препаратов растворимых белков из грены тутового шелкопряда
    • II. 3. Выделение субклеточных фракций из грены тутового шелкопряда
    • II. 4. Определение эндогенной протеолитической активности в гомогенатах и субклеточных фракциях грены тутового шелкопряда
    • II. 5. Определение подклассовой принадлежности протеолитических ферментов
    • II. 6. Определение активности эндогенных ингибиторов протеолитических ферментов в гомогенатах и субклеточных фракциях грены тутового шелкопряда спектрофотометрическим методом
    • II. 7. Электрофоретическое фракционирование растворимых белков грены тутового шелкопряда
    • II. 8. Методы выделения и очистки цистеиновых протеиназ и белковых ингибиторов папаина
    • II. 8.1. Гель-фильтрация
      • II. 8. 2. Высокоэффективная жидкостная хроматография (HPLC)
      • II. 8. 3. Препаративное изоэлектрофокусирование цистеиновых протеиназ и белковых ингибиторов папаина в слое ультродекса фирмы «1КВ»
      • II. 9. Изучение физико-химических характеристик протеолитических ферментов и белковых ингибиторов пептидогидролаз
        • 11. 9. 1. Определение молекулярной массы протеолитических ферментов и белковых ингибиторов протеиназ
          • 11. 9. 1. 1. Определение молекулярной массы цистеиновых протеиназ и ингибиторов папаина из грены тутового шелкопряда методом гель-фильтрации
          • 11. 9. 1. 2. Определение молекулярной массы цистеиновых протеиназ и ингибиторов папаина методом SDS-электрофореза в полиакриламидном геле
    • II. 9.2. Изучение субстратной специфичности цистеиновых протеиназ грены тутового шелкопряда
      • II. 10. Статистическая обработка результатов эксперимента
  • Глава III. ИССЛЕДОВАНИЕ КОМПЛЕКСА ЭНДОГЕННЫХ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ И КОМПЛЕКСА БЕЛКОВЫХ ИНГИБИТОРОВ ПЕПТИДОГИДРОЛАЗ ГРЕНЫ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА
    • III. 1. Гетерогенность эндогенного протеолитического комплекса грены тутового шелкопряда
    • III. 2. Гетерогенность комплекса белковых ингибиторов пептидогидролаз в грене тутового шелкопряда
  • Глава IV. ДИНАМИКА ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ И ИХ БЕЛКОВЫХ ИНГИБИТОРОВ В ЭМБРИОГЕНЕЗЕ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА
  • Глава V. СУБКЛЕТОЧНАЯ ЛОКАЛИЗАЦИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ И ИХ БЕЛКОВЫХ ИНГИБИТОРОВ В ЯЙЦАХ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА
  • Глава VI. ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОТЕИНАЗЫ С ОПТИМУМОМ рН 3,0 ИЗ ГРЕНЫ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА
    • VI. 1. Очистка протеиназы с оптимумом рН 3,0 из грены тутового шелкопряда
    • VI. 2. Определение молекулярной массы протеиназы с оптимумом рН 3,0 методами электрофореза в полиакриламидном геле и гель-фильтрации через TSKгель
    • VI. 3. Определение подклассовой принадлежности протеазы с оптимумом рН 3,0 из грены тутового шелкопряда
    • VI. 4. Определение субстратной специфичности цистеиновой протеиназы с оптимумом рН 3,
  • Глава VII. КОМПЛЕКС БЕЛКОВЫХ ИНГИБИТОРОВ ПАПАИНА В
  • ГРЕНЕ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА
    • VII. 1. Определение изоэлектрических точек белковых ингибиторов папаина грены тутового шелкопряда
    • VII. 2. Гетерогенность комплекса белковых ингибиторов папаина из яиц тутового шелкопряда по величине молекулярных масс
    • VII. 3. Определение субстратной специфичности частично очищенных ингибиторов папаина из грены тутового шелкопряда
    • VII. 4. Разделение фракций ингибиторов папаина, полученных методом гель-фильтрации, с помощью изоэлектрофокусирования в слое ультродекса

    VII. 5. Определение гомогенности и молекулярной массы ингибиторов папаина методами электрофокусирования. 117 VII. 6. Выявление возможной протеиназы-мишени для эндогенных белковых ингибиторов папаина грены тутового шелкопряда.

    Глава VIII. ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ И БЕЛКОВЫЕ ИНГИБИТОРЫ ПЕПТИДОГИДРОЛАЗ КАК МАРКЕРЫ ПРОДУКТИВНОСТИ И ЯВЛЕНИЯ ГЕТЕРОЗИСА У

    ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА.

    VIII. 1. Активность цистеиновых протеиназ и белковых ингибиторов папаина в грене различных по продуктивности пород тутового шелкопряда.

    VIII. 2. Активность цистеиновых протеиназ в грене родительских пород и гибридов тутового шелкопряда.

Актуальность темы

.

Развитие зародыша насекомых сопровождается крупномасштабными и тонко регулируемыми процессами перестройки белковых тел в ходе лизиса запасных белков яиц и построения тканей будущей личинки. Это обеспечивается наличием в яйцах как специфических пептидогидролаз, так и систем контроля их активности. Протеолиз — ключевой процесс эмбриогенеза насекомых. Благодаря запрограммированности процесса протеолиза судьба каждого из белковых компонентов желтка и развивающегося зародыша строго индивидуальна (Zhu et al., 1986, Liu et al., 1996).

Наиболее древним и широко распространенным механизмом контроля протеолиза является способность протеолитических ферментов образовывать комплексы с высокоспецифическими белковыми ингибиторами, в составе которых энзимы обратимо утрачивают свою активность (Laskowski, Kato, 1980; Мосолов, 1998). Основная функция белковых ингибиторов протеиназ состоит в регуляции протеолитических процессов, происходящих в растительных и животных клетках (Мосолов, 1994, 1998; Белозерский, Дунаевский, 1999; Валуева, Мосолов, 1999; Travis, Salresen, 1983). Однако, принимая участие в регуляции протеолитических ферментов, ингибиторы выполняют и защитную функцию, предохраняя внутриклеточные структуры от повреждающего действия эндогенных и экзогенных протеиназ (Куцый, 1999; Eguchi, 1993; Wei et al., 1994).

В последние годы опубликован ряд обзорных работ, посвященных протеолитическим ферментам и их белковым ингибиторам у растений, животных и человека, описывается их структура, механизмы действия, аспекты практического применения в качестве диагностирующих агентов при раковых заболеваниях, лекарственных препаратов и лигандов для аффинной хроматографии (Мосолов, 1983; Валуева, 1990; Knoch et al., 1994; Siewinski et al., 1996; Krepela et al., 1998).

В отличие от растений и позвоночных животных пептидогидролазы и их белковые ингибиторы у насекомых исследованы крайне неполно. Большинство исследований в этой области посвящено сериновым протеиназам и их белковым ингибиторам из гемолимфы, жирового тела и других тканей и органов насекомых (Тарасенко, 1999; Kang, Fuchs, 1974; Deng et al., 1990; Kanost, 1999).

Анализ литературных данных, свидетельствует о том, что особенно скудны сведения о протеиназах и их белковых ингибиторах в эмбриогенезе насекомых. В настоящее время установлено присутствие цистеиновых протеиназ в яйцах домовой мухи Musca domestica (Ribolla et al., 1993), рыжего таракана Blattella germanica (Liu et al., 1996), тутового шелкопряда Bombyx mori (Иванов, 1995; Takahashi et al., 1991; Yamamoto et al., 1994) и комара Aedes aegypti (Cho et al., 1999) — данные о протеолитических ферментах других подклассов в яйцах насекомых весьма немногочисленны. Проблемы регуляции пептидогидролаз при посредстве белковых ингибиторов протеиназ в яйцах насекомых находятся сейчас лишь в стадии первичной разработки (Тарасенко, 1999; Kang, Fuchs, 1980; Aratake et al., 1990).

Исходя из вышесказанного, мы предприняли попытку, исследовать протеолитический комплекс ферментов и их белковых ингибиторов в процессе эмбриогенеза у такого хозяйственно-полезного насекомого как тутовый шелкопряд.

Известно, что дифференцировка клеток и тканей, составляющая фундамент эмбрионального развития, сопровождается возникновением существенных различий в присущих им комплексах протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов (Нейфах, Тимофеева, 1977; Немова, 1996). В связи с этим, одним из ведущих методических подходов при изучении молекулярных механизмов развития можно считать исследование набора, уровня активности и локализации пептидогидролаз и их белковых ингибиторов на различных стадиях развития зародыша.

Исследование протеолитического комплекса ферментов и их белковых ингибиторов в грене тутового шелкопряда представляет интерес не только для выяснения их роли в эмбриональном развитии этого коконопрядущего насекомого, но важно и в практическом отношении. Это объясняется тем, что биохимическая оценка качества пород и гибридов тутового шелкопряда на стадии яйца представляет особую ценность, так как в этот период происходит закладка основ его будущей продуктивности. Однако как пептидогидролазы, так и их белковые ингибиторы в породногибридном аспекте на стадии яйца у тутового шелкопряда практически не исследованы.

На основании вышеизложенного изучение комплекса протеиназ в сочетании с исследованием комплекса белковых ингибиторов протеиназ в грене тутового шелкопряда представляет принципиальный интерес.

Цели и задачи исследования.

Целью работы является исследование протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов в эмбриогенезе тутового шелкопряда.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать эндогенный протеолитический комплекс грены тутового шелкопряда и оценить степень его гетерогенности.

2. Изучить состав комплекса белковых ингибиторов пептидогидролаз в грене тутового шелкопряда.

3. Проанализировать динамику активности протеолитического комплекса в течение эмбрионального развития тутового шелкопряда и сопоставить ее с изменениями активности комплекса белковых ингибиторов в аналогичных точках развития насекомого.

4. Изучить локализацию протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов в субклеточных фракциях грены тутового шелкопряда.

5. Осуществить выделение и очистку кислой цистеиновой протеиназ ы с оптимумом рН 3,0, входящую в состав протеолитического комплекса грены тутового шелкопряда. Охарактеризовать физико-химические свойства и субстратную специфичность очищенной протеиназы.

6. Выявить гетерогенность комплекса белковых ингибиторов папаина в грене по ряду параметров (значения изоточек и величины молекулярных масс) — осуществить очистку ингибиторов папаина из грены тутового шелкопрядаобсудить возможность присутствия в грене эндогенной протеиназы — мишени, специфической для одного из белковых ингибиторов папаина.

7. Изучить взаимосвязь между активностью эндогенных цистеиновых протеиназ и активностью белковых ингибиторов папаиноподобных протеиназ из грены тутового шелкопряда с хозяйственнополезными показателями некоторых его пород и гибридов с тем, чтобы на основании полученных данных выявить возможность раннего прогнозирования по биохимическим тестам основных хозяйственно — полезных показателей тутового шелкопряда.

Научная новизна работы.

Охарактеризован комплекс протеолитических ферментов, участвующих во внутриклеточной деструкции белков, в том числе и запасных, в диапазоне рН от 2,2 до 10,9 в яйцах тутового шелкопряда. Выявлена фазовая специфичность и подклассовая принадлежность пептидогидролаз, входящих в состав протеолитического комплекса грены исследуемого насекомого.

Впервые расшифрован состав комплекса белковых ингибиторов сериновых, цистеиновых и аспартильных протеиназ, обеспечивающих направленность процессов гидролиза белковых субстратов в грене тутового шелкопряда. Обнаружен комплекс белковых ингибиторов папаина в грене и изучена его гетерогенность по ряду физико-химических параметров (Мг и величина р1).

Впервые исследована динамика активности протеолитического комплекса ферментов в единстве с изменениями активности комплекса белковых ингибиторов на протяжении эмбрионального развития тутового шелкопряда. Выявлена дополнительность и взаимообусловленность характера динамики белковых ингибиторов и конкретных протеиназ.

Установлена субклеточная локализация протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов в грене тутового шелкопряда. Анализ динамики и субклеточной локализации пептидогидролаз и их белковых ингибиторов предоставил возможность конкретизировать функции белковых ингибиторов в эмбриогенезе насекомых.

Разработаны схемы выделения и очистки цистеиновой протеиназы с оптимумом рН 3,0 и двух белковых ингибиторов папаина (ингибитор I и II), позволяющие получать энзим и белковые ингибиторы в гомогенном состоянии.

Исследованы физико-химические свойства цистеиновой протеиназы с оптимумом рН 3,0 (р1, Мг, под классовая принадлежность, субстратная специфичность), совокупность которых позволила идентифицировать энзим как катепсино-Ьподобный фермент, высокоспецифичный по отношению к запасным белкам грены.

Изучены физико-химические свойства ингибиторов папаина (величина р1, Мг, субстратная специфичность). Определена возможная протеиназа-мишень ингибиторов папаина, что позволило отнести белковые ингибиторы цистеиновых протеиназ II (Мг 31 кДа) и III (Мг 15 кДа) к регуляторам процессов протеолиза запасных белков в грене тутового шелкопряда.

Практическое значение работы.

Полученные данные о высокой активности и многокомпонентности протеолитических ферментов в грене тутового шелкопряда доказывают решающую роль пептидогидролаз в процессах взаимопревращения белков в эмбриогенезе шелкопряда.

Анализ полученных результатов позволяет конкретизировать данные о биологических функциях исследованных пептидогидролаз и их белковых ингибиторов в ходе эмбрионального развития тутового шелкопряда.

Установление положительной корреляции между уровнем активности цистеиновых протеиназ в развивающейся грене с одной стороны и рядом хозяйственно-полезных показателей с другой, позволяет рекомендовать определение уровня активности цистеиновых протеиназ (оптимум рН 3,0, 3,6 и 8,6) в качестве биохимического теста для раннего прогнозирования потенциальной продуктивности пород тутового шелкопряда.

Установление положительной корреляции между уровнем активности кислых цистеиновых протеиназ в развивающейся грене родительских пород и гибридов с одной стороны и рядом хозяйственно-полезных показателей с другой, позволяет рекомендовать определение уровня активности кислых цистеиновых протеиназ (оптимум рН 3,0 и 3,6) в качестве биохимического теста для раннего прогнозирования гетерозиса у гибридов тутового шелкопряда.

Апробация работы.

Основные результаты диссертации доложены на научных сессиях по итогам научно-исследовательской работы МПГУ в 1999 и 2000 году.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 2 статьи и 2 находятся в печати.

Структура и объем работы.

Работа состоит из введения, обзора литературы, отражающего современные представления о протеолитических ферментах и их белковых ингибиторах у насекомых, описания материалов и методов исследования, результатов эксперимента и их обсуждения, заключения и выводов. Диссертационная работа изложена на 163 страницах машинописного текста, содержит 17 таблиц, 39 рисунков. Список цитируемой литературы включает 188 названий, из которых 139 на иностранных языках.

Выводы.

1. В составе растворимых белков грены тутового шелкопряда выявлены аспартильные (оптимум рН 3,0), цистеиновые (оптимум рН 3,0, 3,6, 6,2 и 8,6) и сериновые (оптимум рН 6,2, 7,2 и 9,0) протеиназы и комплекс их белковых ингибиторов, действующих при тех же значениях рН, что и конкретные пептидогидролазы.

2. Изменение активности протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов в процессе эмбриогенеза тутового шелкопряда взаимообусловлено, тонко коррелирует с процессами дифференцировки, органогенеза и клеточной пролиферации, что доказывает участие белковых ингибиторов пептидогидролаз в грене в регуляции активности эндогенных протеаз.

3. Локализация исследованных протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов в субклеточных фракциях грены четвертого дня постдиапаузного развития характеризуется: а) присутствием аспартильных и цистеиновых протеиназ в ядерной, митохондриальной, лизосомальной и постлизосомальной субклеточных фракциях, удельная активность которых убывает в ряду: лизосомы, митохондрии, ядра, постлизосомальная фракцияб) отсутствием активности сериновых протеиназ в этот период развития грены во всех исследованных клеточных компартментахв) максимальной активностью белковых ингибиторов пептидогидролаз в ядерной и митохондриальной фракциях, обеспечивающей протекторную функцию белковых ингибиторов в ядрах и митохондриях от повреждающего действия протеаз.

4. Из грены тутового шелкопряда выделаны две изоформы цистеиновой протеиназы (оптимум рН 3,0, молекулярная масса 50 кДа, изоэлектрические точки 5,95 и 6,43), высокоспецифичной по отношению к запасным белкам грены и не проявляющей активности к синтетическим субстратам, идентифицированной как катепсино-1-подобная протеиназа.

5. Комплекс белковых ингибиторов папаина в грене тутового шелкопряда представлен пятью компонентами: ингибитор I — Мг=35 кДа, р1 7,54- ингибитор II — Мг=31 кДа, р! 5,10, ингибиторы III, IV и V — Мг менее 15 кДа, pl 5,96, 6,43 и 7,27. Ингибиторы I и II, очищенные до гомогенного состояния, не обладают дополнительной специфичностью по отношению к пепсину, трипсину и химотрипсину.

6. Обратная зависимость динамики активности белковых ингибиторов папаина и цистеиновых протеиназ с оптимумом рН 3,0 в эмбриогенезе тутового шелкопряда, совпадение оптимумов рН фермента и ингибитора и прямые наблюдения торможения активности энзима ингибиторами в опытах in vitro, позволяют считать цистеиновую протеиназу с оптимумом рН 3,0 возможной мишенью действия ингибиторов II, III и IV грены тутового шелкопряда.

7. Установлена положительная корреляция между уровнем активности цистеиновых протеиназ в развивающейся грене с одной стороны и рядом хозяйственно-полезных показателей с другой, что позволяет рекомендовать определение уровня активности цистеиновых протеиназ (оптимум рН 3,0, 3,6 и 8,6) в качестве биохимического теста для раннего прогнозирования потенциальной продуктивности пород тутового шелкопряда.

8. Установлена положительная корреляция между уровнем активности кислых цистеиновых протеиназ в развивающейся грене родительских пород и гибридов с одной стороны и рядом хозяйственно-полезных показателей с другой, что свидетельствует о принципиальной возможности прогнозирования явления гетерозиса у гибридов тутового шелкопряда путем сопоставления протеолитической активности в их грене.

Заключение

.

Настоящая работа посвящена изучению протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов в грене на протяжении эмбрионального развития хозяйственно-полезного насекомого — тутового шелкопряда.

Приступая к выполнению работы, мы основывались на представлении о ключевой роли протеолиза в эмбриогенезе насекомых с одной стороны и весьма слабой степени изученности как пептидогидролаз, так и их белковых ингибиторов в яйцах насекомых — с другой. За последние 15 лет в литературе накоплена лишь незначительная информация о кислых цистеиновых протеиназах, участвующих в деструкции запасных белков. Только единичные данные известны о белковых ингибиторах из яиц насекомых, которые контролируют активность как собственных, так и чужеродных протеолитических ферментов.

Используя современные методы тестирования протеолитической активности с применением природных и модельных субстратов, мы показали, что эндогенные пептидогидролазы грены тутового шелкопряда представлены сложным комплексом ферментов, активных при кислых, нейтральных и щелочных значениях рН (наиболее эффективных при рН 3,0, 3,6, 6,2, 7,2, 8,6 и 9,0). Результаты ингибиторного анализа доказали, что протеиназы с оптимумом рН 3,0, 3,6, 6,2 и 8,6 являются цистеиновыми, с оптимумом рН 3,0 — аспартильными, с оптимумом рН 6,2, 7,2 и 9,0 — сериновыми пептидогидролазами. При этом сериновые протеиназы с оптимумом рН 7,2 представлены химотрипсиноподобными, а с оптимумом рНтрипсиноподобными протеазами. Выявленная многокомпонентность протеолитического комплекса ферментов в грене тутового шелкопряда может обеспечивать специфичность деструкции разнообразных белковых субстратов в эмбриогенезе насекомого.

Набор пептидогидролаз грены своеобразен. Протеолитический комплекс грены тутового шелкопряда включает, с одной стороны, ферменты, присущие другим стадиям и даже фазам развития насекомого (пептидогидролазы с оптимумом рН от 6,2 до 10,2), с другойспецифические энзимы (аспартильные и кислые цистеиновые протеиназы).

Уровень активности исследуемых ферментов в грене либо соответствует максимальной активности, либо превышает от 3 до 20 раз уровень конкретных пептидогидролаз в тканях и органах тутового шелкопряда.

Логическим продолжением изучения протеолиза в грене тутового шелкопряда при участии пептидогидролаз явилось исследование белковых ингибиторов этих гидролаз. В результате, мы обнаружили четкую приуроченность оптимумов рН действия белковых ингибиторов пепсина, папаина, трипсина и химотрипсина к таковым соответствующих аспартильных, цистеиновых и сериновых пептидогидролаз, что однозначно указывает на существование в грене тутового шелкопряда эндогенного комплекса ингибиторов. Можно полагать, что гетерогенность и специфичность протеолитического комплекса ферментов и их ингибиторов в грене обеспечивает строгую направленность процессов гидролиза белковых субстратов в ходе эмбриогенеза этого коконопрядущего насекомого.

Мы сочли, что существенную информацию о биологической роли протеаз и их ингибиторов может дать изучение динамики их активности по мере клеточной дифференцировки и морфогенеза, сопровождающих эмбриогенез, что и было осуществлено нами на следующем этапе работы. При этом установлено, что наиболее яркой чертой динамики тех и других является обратный, взаимообусловленный характер зависимости между активностью исследуемых ферментов и их ингибиторов, что позволило предположить наличие между ними функциональной связи.

Так, неоплодотворенные яйца тутового шелкопряда характеризуются невысоким уровнем активности как протеолитических ферментов, так и их белковых ингибиторов. Грена, извлеченная из бабочек, характеризуется низким уровнем белкового и нуклеинового обмена. В этот период развития в грене наблюдается низкое содержание свободных аминокислот (Толчинская, 1976), всех видов нуклеиновых кислот (Коничев, 1974) и ограниченный набор множественных форм ферментов (Толчинская, 1976). Функционирование аспартильных и кислых цистеиновых протеиназ обеспечивает, по-видимому, создание в неоплодотворенных яйцах определенного фонда аминокислот, необходимого для синтеза свободных нукпеотидов, содержание которых в грене в этот период максимально и которые используются в качестве источника энергии для обеспечения метаболических процессов в ходе последующего оплодотворения (Коничев, 1974).

Самые ранние стадии преддиапаузного развития зародыша тутового шелкопряда сопровождаются резким возрастанием уровня активности лишь аспартильных и цистеиновых протеиназ и их белковых ингибиторов (оптимум pH 3,0). Уровень активности остальных исследуемых пептидогидролаз и их ингибиторов либо уменьшается, либо практически не изменяется. Известно, что белоксинтезирующий аппарат зародыша на этом этапе развития насекомых еще окончательно не сформирован, а новообразование белков происходит только при участии мРНК, запасенной ранее (Pietruschka, Bier, 1972). Можно предположить, что возрастание после оплодотворения активности кислых протеиназ и их ингибиторов обеспечивается в грене за счет механизмов регуляции их активности, одним из которых может быть ограниченный протеолиз, в результате чего в грене создается фонд свободных аминокислот, необходимый на последующих стадиях развития зародыша.

Последующие этапы преддиапаузного развития грены характеризуются постепенным возрастанием активности как пептидогидролаз, так и их белковых ингибиторов. Максимального уровня активности протеазы достигают после прохождения зародышем стадии гаструлы, а ингибиторы — по завершении преддиапаузного развития и вхождения в диапаузу.

В период диапаузы в грене тутового шелкопряда снижены до минимума как анаболические, так и катаболические процессы, благодаря чему повышается способность зародыша выдерживать неблагоприятные для его развития условия. В этот период выявлена значительная активность белковых ингибиторов пептидогидролаз, которая поддерживает на низком уровне активность большинства протеолитических ферментов.

Биохимическая направленность постдиапаузного периода развития грены сводится к прогрессирующей деградации запасных белков желтка и новообразованию специфических белков зародыша. На ранних этапах органогенеза, характеризующихся возрастанием содержания белков, нуклеиновых кислот, свободных нуклеотидов (Коничев, 1974; Филиппович и др., 1974; Иванов, 1985), велика активность кислых цистеиновых и химотрипсиноподобных протеиназ, которые обеспечивают протеолиз запасных белков на начальных этапах постдиапаузного развития грены. На последующих этапах постдиапаузного развития периода развития наблюдается постепенное возрастание активности протеиназ и их белковых ингибиторов, большинство из которых достигает максимума на 6 — 7 дни весенней инкубации грены, что сопряжено с клеточной мультипликацией и процессами роста эмбриона. Особенно ярко в этот период выступает трипсиноподобная протеиназа (оптимум рН 9,0), активность которой в грене с 6-ого по 8-ой день ее весеннего развития превышает уровень остальных изученных энзимов от 3-х до 16-ти раз, что, вероятно, связано с развитием у зародыша кишечника и переходом личинок тутового шелкопряда на внешние источники питания, в деструкции которых значительная роль принадлежит щелочным сериновым протеиназам (Indrasith et al., 1988; Houseman et al., 1989; Xu, Qin, 1994).

Таким образом, выявленная взаимообусловленность характера динамики белковых ингибиторов и конкретных протеиназ показывает, что основная функция белковых ингибиторов в грене состоит в регуляции активности эндогенных протеиназ, предотвращая тем самым неуправляемый протеолиз, что позволяет считать изучение протеолитических ферментов и их ингибиторов важным методическим подходом для изучения молекулярных механизмов развития.

Существенную дополнительную информацию о функциональной роли белковых ингибиторов предоставило нам изучение субклеточной локализации пептидогидролаз и их белковых ингибиторов. С этой целью методом дифференциального центрифугирования были получены субклеточные фракции из грены, находящейся на четвертом дне постдиапаузного развития и определена активность ферментов и ингибиторов в них. При этом установлено, что максимальный уровень активности аспартильных и кислых цистеиновых протеиназ (оптимум рН 3,0, 3,6 и 6,2), присущ лизосомальной фракции грены. Гораздо меньший уровень активности характерен для ядерной (оптимум рН 3,0 и 3,6) и митохондриальной (оптимум рН 3,0, 3,6) фракций. Полученные нами результаты по субклеточной локализации указанных выше ферментов совпадают с литературными данными о наличии в лизосомах, митохондриях и ядрах исследованных ферментов (Назаров, 1993; Куцый, 1999; ТакаИаБЫ). В частности, в последнее время появились сообщения о том, что кислые протеиназы ядер и митохондрий могут играть ключевую роль в осуществлении апоптоза (Куцый, 1999). В отличие от аспартильных и цистеиновых протеиназ активность сериновых протеаз не обнаружена в субклеточных фракциях грены четвертого дня постдиапаузного развития зародыша, так как максимальная активность этих протеаз приходится на конец эмбриогенеза.

Белковые ингибиторы протеолитических ферментов обнаружены во всех субклеточных фракциях грены. Так, в ядрах выявлена активность белковых ингибиторов аспартильных, цистеиновых и сериновых протеиназ. Резкое преобладание активности белковых ингибиторов в ядерной фракции свидетельствует о возможном участии ингибиторов пептидогидролаз в поддержании структуры и целостности ядер. Наличие активности ингибиторов аспартильных и цистеиновых протеиназ в митохондриях, возможно связано с присутствием в этом компартменте соответствующих протеиназ и с защитой структурных и функциональных белков от протеолитического действия этих энзимов. Таким образом, данные о субклеточной локализации протеаз и их белковых ингибиторов в грене тутового шелкопряда позволили предположить, что основными функциями ингибиторов являются регуляция активности эндогенных протеиназ и защита внутриклеточных структурных и функциональных белков ядер и митохондрий от повреждающего действия протеаз.

Протеаза с оптимумом рН 3,0 максимально представленная в протеолитическом комплексе грены двумя изоформами (изоформа, А — р1 5,95 и изоформа В — р1 6,43), поэтому в дальнейшем мы предприняли попытку выделить и охарактеризовать данную пептидогидролазу из грены 4-го дня постдиапаузного развития. Методами гель-фильтрации, высокоэффективной жидкостной хроматографии и методом препаративного изоэлектрофокусирования в слое ультродекса фермент очищен до гомогенного состояния. Пептидогидролаза из грены тутового шелкопряда, имеющая оптимум рН 3,0, охарактеризована по ряду физико-химических свойств и субстратной специфичности. Молекулярная масса протеазы, определенная методом вОЗ-электрофореза в ПААГе составила 50 кДа.

Фермент относится к подклассу цистеиновых протеиназ. На основании результатов анализа субстратной специфичности энзима, исследуемая цистеиновая протеиназа, может быть охарактеризована как катепсино 1-подобный фермент, проявляющий максимальную активность по отношению к запасным белкам грены тутового шелкопряда и не гидролизующий синтетические субстраты.

Методом изоэлектрофокусирования в слое ультродекса в грене тутового шелкопряда обнаружено наличие пяти зон ингибиторной активности по отношению к папаину с р1 равными 5,10, 5,96, 6,43, 7,27 и 7,54. Одновременно нами была установлена гетерогенность ингибиторов папаина по молекулярной массе. Так, разделение препарата растворимых белков грены методом гель-фильтрации через Т8К-НЛ/-55 позволило выявить четыре зоны ингибиторной активности, различающиеся величинами их молекулярных масс. Ингибиторная активность тестировалась нами в зонах второго (Мг 35−40 «Да, ингибитор I), третьего (Мг 30−35 кДа, ингибитор II), седьмого и девятого (менее 15 кДа, ингибитор III и IV) белковых пиков, полученных после гель-фильтрации. При этом ингибиторы I, II и III не проявляли ингибиторной активности по отношению к химотрипсину, трипсину и пепсину. Применение метода препаративного изоэлектрофокусирования в слое ультродекса позволило разделить второй белковый пик, содержащий ингибитор папаина I (Мг 35−40 кДа), на пять фракций, лишь одна из которых (Иинг) с р1 7,54 обладала ингибиторной активностью. Третий белковый пик с молекулярной массой 30−35 кДа (ингибитор II), полученный после гель-фильтрации, также оказался неоднородным и был разделен на семь фракций, одна из которых (ШИнг) с р1 5,10 обладала ингибиторной активностью по отношению к папаину. Степень очистки белкового ингибитора папаина МИНг составила 52,60 раза, а ингибитора IИинг — 63,47 раза. Оба ингибитора были очищены до гомогенного состояния.

Поскольку ранее нам удалось выделить и охарактеризовать цистеиновую протеиназу грены с оптимумом рН 3,0, то мы предположили, что среди исследованных белковых ингибиторов грены (ингибитор I, II, III и IV) имеются те, которые регулируют активность данной пептидогидролазы. Сопоставление характера динамики изменения активности эндогенных цистеиновых протеиназ и ингибиторов папаина в эмбриогенезе тутового шелкопряда, выявило взаимную обусловленность динамики активности ингибиторов папаина и протеиназ с оптимумом рН 3,0. Совпадение оптимумов рН действия ингибиторов и данного фермента в узком диапазоне рН, позволило считать именно эту протеиназу с оптимумом рН 3,0 мишенью хотя бы одного из представителей комплекса белковых ингибиторов папаина грены. Специально поставленные эксперименты, заключающиеся в инкубации in vitro каждого из частично очищенных препаратов белковых ингибиторов папаина I, II, III и IV с очищенным препаратом цистеиновой протеиназы с оптимумом рН 3,0, позволило нам установить, что основное участие в регуляции активности этой цистеиновой протеиназы принимают ингибиторы II, III и IV, контролируя таким образом деградацию запасных белков в эмбриогенезе тутового шелкопряда.

Учитывая ведущую роль цистеиновых протеиназ в метаболизме запасных белков у насекомых, мы сочли необходимым на заключительном этапе работы исследовать активность цистеиновых пептидогидролаз с оптимумом рН 3,0, 3,6, 6,2 и 8,6 и белковых ингибиторов папаина в грене тутового шелкопряда в породно-гибридном аспекте с целью выяснения возможности раннего прогнозирования продуктивности и явления гетерозиса у этого коконопрядущего насекомого.

Полученные нами данные позволили установить положительную статистически достоверную корреляция между активностью цистеиновых протеиназ с оптимумом рН 3,0, 3,6 и 8,6 в грене контрастных по продуктивности пород тутового шелкопряда, с одной стороны, и шелконосностью сырых коконов и весом шелковой оболочки коконовс другой, а также между активностью протеиназ с оптимумом рН 3,0 и 8,6 в грене и средним весом кокона у исследуемых пород, что свидетельствует о тесной функциональной взаимосвязи между учитываемыми признаками.

Одновременно нам удалось зафиксировать обратную корреляционную зависимость между активностью ингибиторов папаина в грене и некоторыми хозяйственно-полезными показателями у различных по продуктивности пород тутового шелкопряда. Сопоставление значений коэффициентов корреляции белковых ингибиторов с таковыми соответствующих цистеиновых протеиназ и с хозяйственно-полезными.

144 признаками пород продемонстрировало взаимообусловленность этих величин.

Установление положительной корреляции между уровнем активности цистеиновых протеиназ в развивающейся грене с одной стороны и рядом хозяйственно-полезных показателей с другой, позволяет нам рекомендовать определение уровня активности цистеиновых протеиназ (оптимум рН 3,0, 3,6 и 8,6) в качестве теста для раннего прогнозирования потенциальной продуктивности пород тутового шелкопряда.

Результаты исследований активности цистеиновых протеиназ в грене прямых и обратных гибридов и исходных родительских пород демонстрируют принципиальную возможность раннего прогнозирования явления гетерозиса по проценту шелковой оболочки кокона у гибридов тутового шелкопряда на основе сравнения пептидогидролазной активности в их грене.

Показать весь текст

Список литературы

  1. В. К. Химия протеолиза. М. 1991. с.
  2. Т. Г. Динамика изменения содержания общего азота и аминокислот в развивающейся грене тутового шелкопряда II Биол. ж. Арм. 1973. Т. 26. № 3. С. 31−37.
  3. В.М. Ферменты аминокислотного обмена и некоторые метаболически связанные с ними энзимы в эмбриогенезе тутового шелкопряда Bombyx mori L. Дисс. канд. биол. наук. М. 1983. 152 с.
  4. А. Д., Хит Н. Ф. Лизосомы. Методы исследования. М: Мир. 1980. 157 с.
  5. М.А., Дунаевский Я. Е. Протеолитические ферменты и их ингибиторы в семенах гречихи // Физиол. растений. 1999. Т.46. № 3. С. 388−399.
  6. А. П. Характеристика дезоксирибонуклеаз яиц коконопрядущих насекомых. Дисс. канд. биол. наук. М. 1982. 194 с.
  7. Н. В. Протеолитические ферменты в организме дубового и тутового шелкопряда // Ученые записки МГПИ им. В. И. Ленина. 1938. Т. 34. В. 5. С. 65−84.
  8. В. Г., Филиппович Ю. Б. Обмен аминокислот в развивающейся грене тутового шелкопряда // Прикл. биохим. и микробиол. 1966. Т. 2. № 3. С. 227−231.
  9. Т.А. Структура и свойства белковых ингибиторов сериновых протеиназ и биоспецифические сорбенты на их основе // Автореф. дисс. докт. биол. наук. М. 1990. 54 с.
  10. Ю.Валуева Т. А., Мосолов В. В. Белки-ингибиторы протеиназ в семенах // Физиол. растений. 1999. Т.46. № 3. С. 347−387.
  11. Т. А., Васильева Л. Е., Насириллаев У. Н. О возможности использования эстеразного теста для целей генетической экспертизы // Биохимия насекомых. М. МГПИ. 1978. Вып. 20. С. 69−76.
  12. Т. А., Налетова Е. А., Шуршикова Н. В., Насириллаев У. Н. О перспективах использования эстераз в селекции тутового шелкопряда // Биохимия насекомых. М. МГПИ. 1980. Вып. 22. С. 76−82.
  13. Т. А., Остапенко В. И., Филиппович Ю. Б. Изучение активности некоторых ферментов гемолимфы и грены у родительских пород и гибридов тутового шелкопряда II Биохимия насекомых. М. МГПИ. 1977. Вып. 19. С. 29−35.
  14. Т. А., Санкина Т. М., Филиппович Ю. Б., Насириллаев У. Н. Опутях и методах повышения продуктивности тутового шелкопряда // Биохимия насекомых. М. МГПИ. 1977. Вып. 19. С. 3−8.
  15. Т.А. Ферментные системы тканей тутового шелкопряда Bombyx mori L. Св теоретическом и прикладном аспектах). Дисс. докт. биол. наук. М. 1983. 422 с.
  16. Д. П. Ингибитор сериновых протеиназ в кишечнике пепельно-серого таракана Nauphoeta cinerea II Журнал эволюц. биохим. и физиол. 1997. Т. 33. № 6. С. 592−598.
  17. В. Г. Белковый комплекс и протеолитические ферменты желточного содержимого грены тутового шелкопряда, Bombyx mori L. Дисс. канд. биол. наук. М. 1985. 179 с.
  18. С. М., Евтушенко В. П., Филиппович Ю. Б., Нуманов М. И. Активность трансаминаз в тканях некоторых пород тутового шелкопряда и их гибридов // Шелк. 1977. № 2. С. 11−12.
  19. С.М., Тарасенко Н. В., Киреева З. В. Изучение протеолитического комплекса ферментов в гемолимфе и шелкоотделительной железе тутового шелкопряда на заключительном этапе его личиночного развития // Биохимия насекомых. М.:МГПИ. 1987. С. 112−120.
  20. A.C. Обмен нуклеиновых кислот в эмбриогенезе тутового шелкопряда. Дисс. канд. биол. наук. М. 1974. 143 с.
  21. А. С., Водолеев А. С., Севастьянова Г. А., Филиппович Ю. Б. Рибонукпеазная активность в грене родительских пород и гетерозисных гибридов тутового шелкопряда // Биохимия насекомых. М. МГПИ. 1979. Вып. 21. С. 20−25.
  22. А. С., Филиппович Ю. Б., Шамшина Т. Н. Активность кислой фосфатазы в грене родительских пород и гетерозисных гибридов тутового шелкопряда// Биохимия насекомых. М. МГПИ. 1978. Вып. 20. С. 2−10.l
  23. Ю.Д. Свойства, локализация, роль и возможные пути регуляции активности протеиназ и аминотрансфераз в раннем онтогенезе рыб // Успехи соврем, биологии. 1986. Т. 101. № 3. С. 359−373.
  24. Г. А. Практическое руководство по энзимологии.// М. Высшая школа. 1980. 272 с.
  25. P.C. Определение активности цитохромоксидазы в суспензии митохондрий.// В кн. «Современные методы в биохимии» под ред. Ореховича В. Н. М.: Медицина. 1977. С.47−49.
  26. Н. П., Кузнецова Е. А., Газиев А. И. Участие протеаз в апоптозе // Биохимия. 1999. Т. 64. № 2. С. 149−163.
  27. Е.Е., Шангин-Березовский Г.М. Генетика с основами биометрии. М. 1983. С. 11−28.
  28. E.H. Грена. Ташкент: Госиздат, 1958. 155 с.
  29. В.П., Безбородова С. И. Кислая внеклеточная фосфомоноэстераза Aspergillus clavatus II Микробиология. 1972. Т. 12. № 3. С. 404−412.
  30. В. В., Валуева Т. А. Растительные белковые ингибиторы протеолитических ферментов. М: Ин-т Биохимии им. А. Н. Баха РАН. 1993. 208 с.
  31. В. В. Белковые ингибиторы как регуляторы процессов протеолиза // 36-е Баховские чтения. М.: Наука, 1983. 40 с.
  32. В. В. Ингибиторы белковой природы протеолитических ферментов // Биоорган, химия. 1994. Т.20. № 2. С. 153−161.
  33. В.В. Новое о природных ингибиторах протеолитических ферментов // Биоорган химия. 1998. Т. 24. № 5. С. 332−340.
  34. А.Ю. Характеристика протеолитического комплекса ферментов хроматина тутового шелкопряда. Дисс. канд. биол. наук. М. 1993. 159 с.
  35. A.A., Тимофеева М. Я. Молекулярная биология процессов развития. М.: Наука, 1977. 312 с.
  36. H. H. Внутриклеточные протеолитические ферменты у рыб. Петрозаводск: КНЦ РАН, 1996. 104 с.
  37. В. И., Егорова Т. А., Филиппович Ю. Б. Полиморфизм амилазы и гликогенфосфорилазы у родительских пород и гибридов тутового шелкопряда//Шелк. 1974. № 4. С. 9−11.
  38. H.A. Биометрия. Новосибирск. СОАН СССР. 1961. 364 с.
  39. Н. В. Исследование комплекса белковых ингибиторов протеолитических ферментов тканей и органов тутового шелкопряда на заключительном этапе его личиночного развития. Дисс. канд. биол. наук. М. 1999. 141с.
  40. В.Е. Свободные и связанные аминокислоты, растворимые белки и их функциональная активность в эмбриогенезе тутового шелкопряда Bombyx mon L.: Автореф. дис.. канд. биол. наук. М.:МГПИ. 1976. 18 с.
  41. Ю. Б., Егорова Т. А., Клунова С. М. Молекулярные основы гетерозиса у тутового шелкопряда. III. Всес. биохим. съезд (Рига, 1974). Тез. докл. Рига: АН СССР. 1974. Т. 1. С. 72.
  42. Ю. Б., Коничев А. С., Водолеев А. С. Изучение ДНКазной и РНКазной активности у личинок исходных пород и гетерозисных гибридов тутового шелкопряда// Биохимия насекомых. М. МГПИ. 1977. Вып. 19. С. 19−22.
  43. Ю.Б., Лаптева Т. И., Никитина И. Л. Основы биохимии тутового шелкопряда. М. 1992. 306 с.
  44. Ю.Б., Севастьянова Г. А., Видута О. Д. Характеристика структурного состояния ДНК в онтогенезе тутового шелкопряда. Докл. АН СССР, 1974. Т. 216. № 5. С. 1192−1194.
  45. Ю.Б., Щеголева Л. И. Исследование растворимых белков тканей тутового шелкопряда методом электрофореза вполиакриламидном геле //Доклады АН СССР. 1967. Т. 174. № 1. С. 240 242.
  46. А. К. Математическая обработка результатов химического анализа. Изд-во Химия. Л. 1984. С.22−26.
  47. М. Н., Кутузова Н. М. Изучение белков гемолимфы, обладающих амилазной активностью, у пород и гибридов тутового шелкопряда // Биохимия насекомых. М. МГПИ. 1980. Вып. 22. С. 95−105.
  48. Anson M.L. The estimation of pepsin, trypsin, papain and cathepsin with hemoglobin // J. Gen. Physiol. 1939. V. 22. № 1. P. 79−82.
  49. Aratake H., Deng Li Rong, Fujii H. Incorporation of a haemolymph a-chymotrypsin inhibitor in to eggs of Bombyx mori (Lepidoptera, Bombicidae) // Appl. Entomol. Zool. 1990. V. 25. № 1. P. 148−150.
  50. Ashida M., Sasaki T. A target protease activity of serpins in insect hemolymph // Insect Biochem. Molec. Biol. 1994. V. 24. Iss. 10. P. 1037−1041.
  51. Boigegrain R. A., Mattras H., Brehelin M., Paroutaud P. Insect immunity-2 proteinase-inhibitors from hemolymph of Locusta migratoria II Biochem. Biophys. Res. Commun., 1992, V. 189. Iss. 2. P. 790−793.
  52. Bose S. G., Raikhel A. S. Mosquito vitellogenin subunits originate from a common precursor// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1988. V. 155. Iss. 1. P. 436−442.
  53. Bownes M. The regulation of the yolk protein genes, a family of sexdifferentiation genes in Drosophila melanogaster I/ Bioessays. 1994. V. 16. Iss. 10. P. 745−752.
  54. Bradley J. T. Physiology of insect vitellogenesis. 1. Protein uptake and synthesis by the ovary II J. Ala. Acad. Sci. 1983. V. 54. Iss. 1. P. 33−47.
  55. Chapman H. A., Riese R. I., Shi G. P. Emerging roles for cysteine proteases in human biology//Ann. Rev. Physiol. 1997. V. 59. P. 63−88.
  56. Daskalova S. M. Identification, purification and partial characterization of vitellin from the eggs of Eurygaster integriceps Putton (Heteroptera, Pentatomidae) // Arch. Insect Biochem. Physiol. 1995. V. 29. Iss. 3. P. 227−242.
  57. Davis J. R. Disc electrophoresis. Method and application to human serum proteins//Ann. N-Y. Acad. Sci. 1964. V. 121. Iss. 2. P. 404−427.
  58. Deng L.R., Fujii H., Aratake H., Kawaguchi Y., Koga K. Isolation and properties of two allelic chymotrypsin inhibitors from the hemolymph of the silkworm Bombyx mori // Insect.Biochem. 1990. V.20. № 5. P. 531−536.
  59. Dittmer N. T., Raikhel A. S. Analysis of the Mosquito lysosomal aspartic protease gene an insect reousekeeping gene with fat body-enhanced expression // Insect Biochem. Molec. Biol. 1997. V. 27. Iss. 4. P. 323−335.
  60. Eguchi M. Protein protease inhibitors in insects and comparison with mammalian inhibitors//Comp. Biochem. Physiol. 1993. V. 105B. Iss. 3. P. 449 456.
  61. Eguchi M., Yamamoto Y. Comparison of serum protein inhibitors from various mammals, chicken and silkworms against four proteases // Comp. Biochem. Physiol. 1988. V. 91B. Iss. 4. P. 625−630.
  62. Eguchi M., Furukawa S., Iwamoto A. Proteolytic enzyme in the midgut of the pharate adult of the silkworm, Bombyx mori L. // J. Insect Physiol. 1972. V. 18. Iss. 9. P. 2457−2467.
  63. Eguchi M., Itoh M., Nishino K., Shibata H., Tanaka T, Kameihayashi K., Hara S. Amino acid sequence of an inhibitor from the silkworm (Bombyx mori) hemolymph against fungal protease // J. Biochem. 1994. V. 115. Iss. 5. P. 881 884.
  64. Eguchi M., Matsui Y., Matsumoto T. Developmental change and hormonal control of chymotrypsin inhibitors in the hemolymph of the silkworm, Bombyx moril. II Comp. Biochem. Physiol. 1986. V. 84B. Iss. 3. P. 327−332.
  65. Engelmann F. Food-stimulated synthesis of intestinal proteolytic enzymes in the cockroach Leucophaea maderae II J. Insect Physiol. 1969. V. 15. P. 217 225.
  66. Engelmann F., Geraerts W. P. M. The proteases and the protease inhibitor in the midgut of Leucophaea maderae/1 J. Insect Physiol. 1980. V. 26. Iss. 10. P. 703−710.
  67. Ferenz H. J., Heinje D., Elhadi F. A., Applebaum S. W. Desert locust vitellogenin characterization, properties and uptake by terminal oocytes II Invertebr. Reprod. Dev. 1995. V. 27. Iss. 3. P. 213−218.
  68. Ferenz H. Yolk protein accumulation in Locust oocytes // Proc. 19 Int. Congr. Entomol. Beijing. 1992. P. 69.
  69. Fujii H., Shirai K., Aratake H., Deng L. R., Kawaguchi Y., Kogai K., Doika H., Shinohara T., Aso Y. Biochemical genetics of chymotrypsin inhibitor of Bombyx moriII Pros. 19 th Int. Congr. Entomol. Beijing. 1992. P. 637.
  70. Gadallah A.I., Marei N. Changes in soluble protein dehydrogenases and esterases of unfertilized and fertilized eggs of Musca domestica II Insect Biochem. 1973. V.3. № 10. P. 163−169.
  71. Gburek J., Osada J., Siekierka M., Warwas M. Clearance of chicken cystatin from the rat circulation // Compar. Biochem. Physiol. B. 1995. V. 112. Iss. 4. P. 697−701.
  72. Giorgi F., Bradley J. T., Nordin J. H. Differential vitellin polypeptide processing in insect embryos // Micron. 1999. V. 30. Iss. 6. P. 579−596.
  73. Giorgi F., Yin L., Cecchettini A., Nordin J. H. The vitellin-processing protease of Blattella germanica is derived from a pro-protease of maternal origin // Tissue and Cell. 1997. V. 29. Iss. 3. P. 293−303.
  74. Gooding R. H. Digestive enzymes and their control in haematophagous Arthropods//Acta tropica. 1975. V. 32. Iss. 2. P. 96−111.
  75. Gooding R. H. Digestive processes of haematophagous insect. V. Inhibitors of trypsin from Glossina morsitans (Diptera: Glossinidae) // Can. Entomol. 1974. V. 106. Iss. 1. P. 39−44.
  76. Hagedorn H. H., Kunkel J. G. Vitellogenin and vitellin in insect // Ann. Rev. Entomol. 1979. V. 24. P. 475−505.
  77. H. 0., Borgstrom A., Ohlsson K. Porcine pancreatic cationic pro — elastase. Studies on the activation, turnover and interaction with plasma protein inhibitors//Biol. Chem. Hoppe-Seyler. 1991. V. 372. Iss. 7. P. 465−472.
  78. Handley H. L., Estridge B. H., Bradley J. T. Vitellin processing and protein-synthesis during cricket embryogenesis // Insect Biochem. Molec. Biol. 1998. V. 28. Iss. 11. P. 875−885.
  79. Henrikson P. A., Clever U. Protease activity and cell death during metamorphosis in the salivary gland of Chironomus tentansJ/ J. Insect Physiol. 1972. V. 18. Iss. 10. P. 1981−2001.
  80. Houseman J. Anterior midgut proteinase inhibitor from Glossina morsitans West. (Diptera: Glossinidae) and its effects upon tsetse digestive enzymes // Can. J. Zool. 1980. V. 58. Iss. 1. P. 79−87.
  81. Houseman J. G., Philogene B. J., Downe A. E. Patrial characterization of proteinase activity in the larval midgut of the european corn borer, Ostrinia nubilalis (Lepidoptera, Pyralidae) // Can. J. Zool. 1989. V. 67. Iss. 4. P. 864 868.
  82. Indrasith L. S., Furusawa T., Shikata M., Yamashita Ok. Limited degradation of vitellin and egg-specific protein in Bombyx eggs during embryogenesis // Insect Biochem. 1987. V. 17. Iss. 4. P. 539−545.
  83. Indrasith L.S., Sasaki T., Jamashita O. A unique protease responsible for selective degradation of a jolk protein in Bombyx mori II J. Biol. Chem. 1988. V. 263. Iss. 2. P. 1045−1051.
  84. Irie K., Suzuki K., Miya K. Change of carbohydrate during ovarian and embryonic development in emma field erichet Teleogryllus emma II Appl. Entomol. Zool. 1979. V. 14. Iss. 3. P. 278−284.
  85. Irie K., Yamashita O. Chenges in vitellin and ofher yolk proteins during embrionic development in the silkworm, Bombyx mori II J. Insect Physiol. 1980. V. 26. Iss. 12. P. 811−817.
  86. Irie K., Yamashita 0. Egg specific protein in the silkworm Bombyx mori: purification, properties, localization and titre changes during oogenesis and embryogenesis// Insect Biochem. 1983. V. 13. Iss. 1. P. 71−80.
  87. Izquierdopulido M. L., Haard T. A., Hung J., Haard N. F. Oryzacystatin and other proteinase-inhibitors in rice grain potential use as a fish processing aid // J. Agr. Food Chem. 1994. V. 42. Iss. 3. P. 616−622.
  88. Izumi S., Tomino S., Chino H. Purification and molecular properties of vitellin from the silkworm, Bombyx mori II Insect Biochem. 1980. V. 10. Iss. 2. P. 199 208.
  89. Izumi S., Yano K., Yamamoto Y., Takahashi S. Y. Yolk proteins from insect eggs structure, biosynthesis and programmed degradation during embryogenesis//J. Insect Physiol. 1994. V. 40. Iss. 9. P. 735−749.
  90. Jiang H. B., Kanost M. R. Characterization and functional analysis of 12 naturally occurring reactive-site variants of serpin-1 from Manduca sexta H J. Biol. Chem. 1997. V. 272. Iss. 2. P. 1082−1087.
  91. Jiang H. B., Kanost M. R. Expression and characterization of serpins from an insect Manduca sexta II FASEB J. 1995. V. 9. Iss. 6. P. A1434-A1434.
  92. Jiang H., Mulnix A. B., Kanost M. R. Expression and characterization of recombinant Manduca sexta serpin-1 B and site-directed mutants that change its inhibitory selectivity II Insect Biochem. Molec. Biol. 1995. V. 25. Iss. 10. P. 1093−1100.
  93. Johnson R., Narvaez J., An G., Ryan C. A. Expression of proteinase inhibitors I and II in transgenic tobacco plants: effects on natural defense against Manduca sexta larvae // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. V. 86. P. 98 719 875.
  94. Kageyama T., Takahahi S.V., Takahahi K. Occurance of tiol proteinases in the eggs of the silkworm, Bombyx mori II J. Biochem. 1981. V. 90. Iss. 3. P. 665−671.
  95. Kamboj R. C., Pal S., Raghav N., Singh H. A selective colorimetric assay for cathepsin L using Z Phe- Arg-4-Methoxy — Beta — Naphthylamide // Biochim. 1993. V. 75. Iss. 10. P. 873−878.
  96. Kambysellis M. P., Hatzopoulos P., Seo E. W., Craddock E. M. Noncoordinate synthesis of the vitellogenin proteins in tissues of Drosophila grimshawi II Dev. Genet. 1986. V. 7. Iss. 2. P. 81−97.
  97. Kang S. H., Fuchs M. S. The identification of two protease inhibitors in Drosophila melanogaster /1 Comp. Biochem. Physiol. 1973. Ser. B. V. 46. P. 367−374.
  98. Kang S.H., Fuchs M.S. Isolation of a chymotrypsin inhibitor from Drosophila melanogaster II Insect Biochem. 1974. V. 4. Iss. 1. P. 1−8.
  99. Kanost M. R. Serine protease inhibitors from the serpin gene family in Manduca sexta and Drosophila melanogaster II Molec. Insect Sci., ed. H. H. Hagedorn et al. Plenum press. NY. 1990. P. 139−146.
  100. Kanost M. R. Serine proteinase-inhibitors in Arthropod immunity // Develop. Comp. Immunol. 1999. V. 23. Iss. 4−5. P. 291−301.
  101. Kanost M. R., Prasad S. V., Huang Y. L., Willott E. Regulation of serpin gene-1 in Manduca sexta II Insect Biochem. Molec. Biol. 1995. V. 25. Iss. 2. P. 285−291.
  102. Kanost M. R., Prasad S. V., Wells M. A. Primary structure of a member of the serpin superfamily of proteinase inhibitors from an insect, Manduca sexta II J. Biol. Chem. 1989. V. 264. Iss. 2. P. 965−972.
  103. Kim H. R., Ko Y. G., Mayer R. T. Purification, characterization and synthesis of vitellin from the cabbage butterfly Pieris rapae L. // Arch. Insect Biochem. Physiol. 1988. V. 9. Iss. 1. P. 67−79.
  104. Kim H. R., Lee S. D. Purification and characterization of vitellin-2 from the ovary of the American Cockroach, Periplaneta americana II Comp. Biochem. Physiol. PT B. 1994. V. 108. Iss. 1. P. 135−145.
  105. Knoch H., Werle B., Ebert W., Spiess E. Imbalance between cathepsin B and cysteine proteinase inhibitors is of prognostic-significance in human lung-cancer// Int. J. Oncol. 1994. V. 5. Iss. 1. P. 77−85.
  106. Krepela E., Prochazka J., Karova B., Cermak J., Roubkova H. Cysteine proteases and cysteine protease inhibitors in nonsmall cell lung-cancer // Neoplasma. 1998. V. 45. Iss. 5. P. 318−331.
  107. Kucera M., Turner R.B. Purification and properties of protease inhibitors from developing embryos of Hemileuca oliviae II Biochim. Biophys. Acta. 1981. V. 662. Iss. 1. P. 72−76.
  108. Kuk-Meiri S., Lichtenstein N., Shulov A., Pener M. P. Cathepsine-type proteolytic activity in the developing eggs of the African migratory locust (Locusta migratoria). II Comp. Biochem. Physiol. 1966. V. 18. Iss. 4. P. 783 795.
  109. Kumar N. K, Ismail S. M., Dutta-Gupta A. Differential uptake of storage proteins by the fat body of rice moth, Corcyra cephalonica, during the larval-pupal development// Entomon. 1998. V. 23. Iss. 2. P. 83−90.
  110. Kunkel J.G., Nordin J.H. Jolk proteins // Comprehensive Insect Physiology, Biochemistry and Pharmacology. N. J.: Plenum Publishing, 1985. V.1. P. 83 111.
  111. Kurioka A., Yamazaki M., Hirano H. Primary structure and possible functions of a trypsin-inhibitor of Bombyx mori II Eur. J. Biochem. 1999. V. 259. Iss. 1−2. P. 120−126.
  112. Laskowski M. J., Kato I. Protein inhibitors of proteinases // Ann. Rev. Biochem. 1980. V. 49. P. 593−626.
  113. Lee S. D., Lee S. S., Kim H. R. Purification and characterization of yolk protein-2 from the fall webworm, Hyphantria cunea Drury II Arch. Insect Biochem. Physiol. 1995. V. 28. Iss. 2. P. 113−129.
  114. Leger R. J., Durrands P. K, Charnley A. K, Cooper R. M. Role of extracellular chymoelastase in the virulence of Metarhizium anisopliae for Manduca sexta II J. Invertebr. Pathol. 1988. V. 52. P. 285−293.
  115. Lemos F. J. A., Terra W. R. Properties and intracellular distribution of a cathepsin D- like proteinase active at the acid region of Musca domestica midgut // Insect Biochem. 1991. V. 21. Iss. 5. P. 457−465.
  116. Lemosy E. K, Kember D., Hashimoto C. Role of nudel protease activation in triggering dorsoventral polarization of the Drosophila embryo 11 Development. 1998. V. 125. Iss. 20. P. 4045−4053.
  117. Liu X. D., Mccarron R. C., Nordin J. H. A cysteine protease that processes insect vitellin-purification and partial characterization of the enzyme and the proenzyme // J. Biol. Chem. 1996. V. 271. Iss. 52. P. 33 344−33 351.
  118. Liu X., Nordin J.H. Localization of the proenzyme form of vitellin-processing protease in Blattella germanica by affinity-purified antibodies // Arch. Biochem. Physiol. 1998. V. 38. P. 109−118.
  119. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Rangall R.L. Protein measurement with the Folin phenol reagent// J. Biol. Chem. 1951. V. 193. Iss. 2. P. 265−275.
  120. Lu J., Warner A. H. Immunodetection of thiol proteinase levels in various populations of Artemia cysts and during development // Biochem. Cell Biol. 1991. V. 69. Iss. 2−3. P. 96−101.
  121. Mallya S.K., Partin J.S., Valdizan M.C., Lennars W.J. Proteolysis of the Major jolk glycoproteins is regulated by acidification of the platelets in sea urchin embryos//J. Cell. Biol. 1992. V. 117. Iss. 6. P. 1211−1221.
  122. Mari N., Yamashita O. Purification and characterization of a protease degrading 30 kDa yolk proteins of the silkworm, Bombyx mori II Insect Biochem. Molec. Biol. 1997. V. 27. Iss. 8−9. P. 721−728.
  123. Martin D., Piulachs M. D., Belles X. Production and extraovarian processing of vitellogenin in ovariectomized Blattella germanica L. (Dictyoptera, Blattellidae) // J. Insect Physiol. 1996. V. 42. Iss. 2. P. 101−105.
  124. Masetti M., Cecchettini A., Giorgi F. Monoclonal and polyclonal antibodies as probes to study vitellin processing in embryos of the stick insect Carausius morosus Br. II Comp. Biochem. Physiol. PT B. 1998. V. 120. Iss. 4. P. 625−631.
  125. Masetti M., Cecchettini A., Giorgi F., Estridge B., Bradley J. T. Resolution of polypeptide processing during yolk utilization in embryos of the stick insect Carausius morosus Br. //Amer. Zool. 1992. V. 32. Iss. 5. P. 79.
  126. Masound S.A., Ding X. F., Johnson L. B., White F. F., Reeck G. R. Expression of a corn bifunctional inhibitor of serine proteinases and insect alpha-amylases in transgenic tobacco plants // Plant Sci. 1996. V. 115. Iss. 1. P. 59−69.
  127. Mishio K., Akira W., Kazuo M. Purification and some properties of cathepsin like thiol protease from pupae of the blowfly Aldrichna grahami II Comp. Biochem. Physiol. 1984. V. B 78. Iss. 1. P. 279−286.
  128. Morita T., Kikkawa H. Protease inhibitors in insects // Zool. Mag. 1961. V. 70. Iss. 1. P. 53−54.
  129. Narumi T, Hishida T., Sasaki T., Feng D. F., Doolittle R. F. Molecular cloning of silkworm (Bombyx mori) antichymotrypsin a new member of theserpin superfamily of proteins from insects // Eur. J. Biochem. 1993. V. 214. Iss. 1. P. 181−187.
  130. Nordin J. H., Beaudoin E. L., Liu X. Acidification of yolk granules in Blattella germanica eggs coincident with proteolytic processing of vitellin // Arch. Insect Biochem. Physiol. 1991. V.18. Iss. 3. P. 177−192.
  131. Novillo C., Castanera P., Ortego F. Characterization and distribution of chymotrypsin-like and other digestive proteases in Colorado potato Beetle // Arch. Insect Biochem. Physiol. 1997. V. 36. Iss. 3. P. 181−201.
  132. Ohshita T., Kido H. Simple preparation of rat-brain lysosomes and their proteolytic properties II Anal. Biochem. 1995. V. 230. Iss. 1. P. 41−47.
  133. Pietruschka F., Bier K. Autoradiographische untersuchunden zur RNS- and protein-synthese in der fruhen embryogenese von Musca domestica II W. Roux’s Arch. Entwicklungsmech. Org. 1972. Bd. 169. № 1. S. 56−59.
  134. Polanowski A., Blum M. S., Whitman D. W., Travis J. Proteinase-inhibitors in the nonvenomous defensive secretion of Grasshoppers- antiproteolytic range and possible significance // Comp. Biochem. Physiol. PT B. 1997. V. 117. Iss. 4. P. 525−529.
  135. Polanowski A., Wilusz T., BlumS.M., Escoubas P., Schmidt J.O. and Travis J. Serine proteinase inhibitor profiles in the hemolymph of a wide range of insect species //Comp. Biochem. Physiol. 1992. V. 102B. Iss. 4. pp.757−760.
  136. Prasad S. V., Kanost M. R., Wells M. A. Primary sequense of a serine protease inhibitor from hemolymph of Manduca sexta II Proc. 18 th Int. Congr. Entomol. Vancouver. 1988. P. 142.
  137. Raikhel A.S., Dhadialla T.S. Accumulation of jolk proteins in insect oocytes //Annu. Rev. Entomol. 1992. V. 37. P. 217−251.
  138. Ribolla P. E. M., Debianchi A. G. Processing of procathepsin from Musca domestica eggs // Insect Biochem. Molec. Biol. 1995. V. 25. Iss. 9. P. 10 111 017.
  139. Rina M. D., Mintzas A. C. Biosynthesis and regulation of two vitellogenins in the fat body and ovaries of Ceratitis capitata (Diptera) // Rouxs Arch. Dev. Biol. 1988. V. 197. Iss. 3. P. 167−174.
  140. Rinaldi A.M., Parente A. Rate of protein synthesis in oocytes of Paracentrotus lividus II Devel. Biol. 1976. V. 49. Iss. 1. P. 260−267.
  141. Rubenstein E. C., Han J. Y. Yolk protein degradation during embryonic development in Hyalophora cecropia II Amer. Zool. 1992. V. 32. Iss. 5. P. 405.
  142. Ryan A. Protease inhibitors in plants: genes for improving defenses against insects and pathogens //Annu. Rev. Phytopathol. 1990. V. 28. P. 425−449.
  143. Sasaki T. Patchwork structure serpins from silkworm (Bombyx mori) larval hemolymph // Eur. J. Biochem. 1991. V. 202. Iss. 2. P. 255−261.
  144. Sasaki T. The reactive site of silkworm hemolymph antichymotrypsin is located at the COOH-terminal region of the molecule // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1985. V. 132. P. 320−326.
  145. Sasaki T., Kobayashi K. Isolation of two novel proteinase inhibitors from hemolymph of silkworm larva, Bombyx mori. Comparison with human serum proteinase inhibitors II J. Biochem. 1984. V. 95. P. 1009−1017.
  146. Sasaki S.H., Watanabe T., Kondo Y. Studies on the free amino acids and related compounds in the silkworm, Bombyx mori. I. On the free amino acids and related compounds in silkworm eggs // J. Sericalt. Sci. Jap. 1957. V. 26. Iss. 4. P. 291−297.
  147. Seo S. J., Kang Y. J., Cheon H. M., Kim H. R. Distribution and accumulation of storage protein-1 in ovary of Hyphantria cunea Drury. // Arch. Insect Biochem. Physiol. 1998. V. 37. Iss. 2. P. 115−128.
  148. Shumaker T. T. S., Cristofoletti P. T., Terra W. R. Properties and compartmentalization of digestive carbohydrases and proteases in
  149. Scaptotrigona bipunctata (Apidae: Meliponinae) larvae // Apidologie. 1993. V. 24. Iss. 1. P. 3−17.
  150. Siewinski M., Gutowicz J., Zarzycki A., Mikulewicz W. Role of cysteine endopeptidases in cancerogenesis // Cancer Biother. Radiopharm. 1996. V. 11. Iss. 3. P. 169−176.
  151. Snigirevskaya E. S., Hays A. R., Raikhel A. S. Secretory and internalization pathways of mosquito yolk protein precursors // Cell and Tissue Research. 1997. V. 290. Iss. 1. P. 129−142.
  152. Spiro-Kern A., Chen P. S. Isolation of a-chymotrypsin inhibitor from Culex pipiens by affinity chromatography// Insect Biochem. 1977. V. 7. P. 453−457.
  153. Stiles J. K., Wallbanks K. R., Molyneux D. H. The use of caseine substrate gels for determining trypsin-like activity in the midgut of Glossina palpalis II J. Insect Physiol. 1991. V. 37. Iss. 4. P. 247−254.
  154. Suzuki T., Natori S. Purification and characterization of an inhibitor of the cystein protease from the hemolymph of Sarcophaga peregrina larvae // J. Biol. Chem. 1985. V. 260. Iss. 8. P. 5115−5120.
  155. Suzuki T., Natori Sh. Changes in the amount of sarcocystatin A, a new cysteine proteinase inhibitor, during the development of adult Sarcophaga peregrinan Insect Biochem. 1986. V. 16. Iss. 4. P. 589−595.
  156. Takahashi S. Y., Jamamoto Y. Activation of cysteine proteinase of the silkworm Bombyx moriII Zool Sci. 1993. V. 10. Iss. 6. P. 14.
  157. Takahashi S. Y., Jamamoto Y., Kageyama T., Zhao X. Acid cysteine proteinase from the eggs of silkworm Bombyx mori II Zool. Sci. 1991. V. 8. Iss. 6. P. 1139.
  158. Takahashi S. Y., Yamamoto Y., Watabe S., Kageyama T. Autolytic activation mechanism of Bombyx acid cysteine protease (BCP) II Biochem. Mol. Biol. Int. 1997. V. 42. Iss. 3. P. 591−600.
  159. Takahashi S. Y., Yamamoto Y., Zhao X. F., Watabe S. Bombyx acid cysteine proteinase// Invertebr. Reprod. Dev. 1996. V. 30. Iss. 1−3. P. 265−281.
  160. Travis J., Salvesen G. S. Human plasma proteinase inhibitors // Ann. Rev. Biochem. 1983. V. 52. Iss. 3. P. 655−709.
  161. Vasilev A. V., Gutkin D. V., Dankova T. G., Vorobeichik T. A., Tutelyan V. A. Content of endogenons inhibitors of thiol dependent proteinases in subcellular — fractions of rat hepatocytes II Voprosy meditsinskoi khimii. 1991. V. 37. Iss. 6. P. 89−91.
  162. Wakayama T., Iseki Sh. Expression and localization of urinary trypsin inhibitor in the rat embryo // Acta Histochem. Cytochem. 1997. V. 30. Iss. 5−6. P. 557−565.
  163. Wei A. Z., Rubin H., Cooperman B. S., Cristianson D. W. Crystall structur of an uncleaved serpin revealed the conformation of an inhibitory reactive loop // Natur. Structur. Biol. 1994. V. 1. Iss. 4. P. 251−258.
  164. Xu G., Qin J. D. Extraction and characterization of midgut proteases from Heliothis armigera, H. assulta (Lepidoptera, Noctuidae) and their inhibition by tannic acid//J. Econ. Entomol. 1994. V. 87. Iss. 2. P. 334−338.
  165. Yamamoto Y., Eguchi M. Purification and characterization of chicken serum protein inhibitors against fungal protease // Comp. Biochem. Physiol. 1990. V. 95 B. Iss. 2. P. 347−353.
  166. Yamamoto Y., Suzuki A. C., Takahashi S. Y. An acid cysteine proteinase of the silkmoth, Bombyx mori: site of synthesis and primary structure II Zool. Sci.1993. V. 10. Iss. 6. P. 14.
  167. Yamamoto Y., Takahashi S. Y., Kageyama T., Zhao X. Acid cysteine proteinase from the eggs silkworm Bombyx mori: effect of vitellin phosphorylation on the susceptivity to the enzyme // 19 Int. Congr. Entomol. Beijing. 1992. P. 114.
  168. Yamamoto Y., Takimoto K., Izumi S., Toriyama-Sakurai M., Kageyama T., Takahashi S. Molecular cloning and sequencing of cDNA that encodes cysteine proteinase in the eggs of the silkmoth, Bombyx mori II J. Biochem.1994. V. 116. P. 1330−1335.
  169. Yamamoto Y., Watabe S., Kageyama T., Takahashi S. Y. A novel inhibitor protein for Bombyx cysteine proteinase is homologous to propeptide regions of cysteine proteinases // FEBS Lett. 1999. V. 448. Iss. 2−3. P. 257−260.
  170. Yamamoto Y., Watabe S., Kageyama T., Takahashi S. Y. Purification and characterization of Bombyx cysteine proteinase specific inhibitors from the hemolymph of Bombyx mori II Arch. Insect Biochem. Physiol. 1999. V. 42. Iss. 2. P. 119−129.
  171. Yamamoto Y., Zhao X. F., Suzuki A. C., Takahashi S. Y. Cysteine proteinase from the eggs of the silkmoth, Bombyx mori: site synthesis and a suggested role in yolk protein degradation // J. Insect Physiol. 1994. V. 40. Iss. 5. P. 447−484.
  172. Yamashita M., Eguchi M. Comparison of six genetically defined inhibitors from the silkworm hemolymph against fungal protease // Comp. Biochem. Physiol. 1987. V. 86B. Iss. 1. P. 201−208.
  173. Zhao X. F., Wang J. X., Wang J. C. Purification and characterization of a cysteine proteinase from eggs of the Cotton Boll Worm, Helicoverpa armigera II Insect Biochem. Molec. Biol. 1998. V. 28. Iss. 4. P. 259−264.
  174. Zhao X. F., Wang J. X., Yagi N., Yamamoto Y., Watabe S., Takahashi S. Y. Occurrence of a cathepsin B-like acid cysteine proteinase in the eggs of Silkworm Moth, Antheraea pernyi II Comp. Biochem. Physiol. PT B. 1996. V. 113. Iss. 1. P. 95−103.
  175. Zhao X., Kageyama T., Yamamoto Y., Takahashi S. Y. Acid cysteine proteinase from the eggs of silkworm, Bombyx mori. Purification, tissue distribution and synthesis//Zool. Sci. 1991. V. 8. Iss. 6. P. 1139.
  176. Zhivotovsky B., Nicotera P., Orrenius S. Mechanisms of the multistage cleavage of chromatin in apoptosis // Cell Proliferat. 1995. V. 28. Iss. 4. P. 172.
  177. Zhu J., Indrasith L.S., Jamashita O. Characterization of vitellin, egg-specific protein and 30 kDa protein from Bombyx mori eggs, and their fates during oogenesis and embryogenesis II Biochim. Biophys. Acta. 1986. V. 882. Iss. 3. P. 427−436.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!