Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Молекулярно-генетический анализ недостаточности 21-гидроксилазы при врождённой гиперплазии коры надпочечников

Диссертация: Молекулярно-генетический анализ недостаточности 21-гидроксилазы при врождённой гиперплазии коры надпочечников
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Во многих странах Западной Европы уже доступны идентификации более 90−95% мутаций гена CYP21A2. Отсюда вполне реальным стало скринирование всех новорожденных (или тех, у кого отмечено повышение содержания 17-гидроксипрогестерона в крови) на наличие мутаций гена CYP21A2 для досимптоматической диагностики заболевания. Как показывают обширные эпидемиологические исследования во Франции и во многих… Читать ещё >

Молекулярно-генетический анализ недостаточности 21-гидроксилазы при врождённой гиперплазии коры надпочечников (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Биохимические и клинические аспекты врождённой гиперплазии коры надпочечников (ВГКН)
      • 1. 1. 1. Врожденная гиперплазия коры надпочечников: общее представление и клинические формы
      • 1. 1. 2. Частота недостаточности 21-гидроксилазы при ВГКН в различных популяциях
      • 1. 1. 3. История изучения ВГКН
      • 1. 1. 4. Биосинтез глкжокортикоидов и минералкортикоидов
        • 1. 1. 4. 1. Общая характеристика биосинтеза глюкокортикоидов и минералкортикоидов
        • 1. 1. 4. 2. Участие 21-гидроксилазы и биохимические нарушения системы синтеза кортизола и альдостерона
      • 1. 1. 5. 21-гидроксилаза — структура и функция белка
    • 1. 2. Молекулярная основа и генетический анализ недостаточности 21-гидроксилазы
      • 1. 2. 1. Структура и локализация генов CYP21A2 и CYP21A1P
      • 1. 2. 2. Анализ мутаций, обуславливающих недостаточность 21-гидроксилазы
        • 1. 2. 2. 1. Общая характеристика мутаций, обуславливающих недостаточность 21 -гидроксилазы
        • 1. 2. 2. 2. Конверсия гена как механизм возникновения «химерных генов»
        • 1. 2. 2. 3. Спектр мутаций, характерных для Европейских популяций
      • 1. 2. 3. Корреляция генотип — фенотип
      • 1. 2. 4. Генетическая диагностика недостаточности 21-гидроксилазы
  • 2. МАТЕРИНЫ И МЕТОДЫ
    • 2. 1. Реактивы, ферменты, оборудование
    • 2. 2. Характеристика группы обследуемых больных и популяционной выборки
    • 2. 3. Методы исследования
      • 2. 3. 1. Выделение ДНК из лейкоцитов периферической крови человека
      • 2. 3. 2. Выделение ДНК из пятен крови
      • 2. 3. 3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
      • 2. 3. 4. Рестрикционный анализ
      • 2. 3. 5. Гетеродуплексный анализ
      • 2. 3. 6. Проведение электрофореза и визуализация результатов
      • 2. 3. 7. Методы статистического анализа
  • 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
    • 3. 1. Частоты мутаций гена CYP21A2 в Северо-западном регионе России при классических формах недостаточности 21-гидроксилазы (СТФ-сольтеряющая и ПФ-простая формы)
    • 3. 2. Частоты мутаций гена CYP21A2 в Северо-западном регионе России у больных с подозрением на неклассическую форму (НФ) недостаточности 21-гидроксилазы
    • 3. 3. Идентификация новой «химерной» конструкции в локусе 6р
    • 3. 4. Анализ «химерных» генов в локусе 6р
    • 3. 5. Анализ корреляции генотип-фенотип
    • 3. 6. Анализ полиморфизма в экзоне 2 гена HLA-DQA
      • 3. 6. 1. Распределение аллельных вариантов гена HLA-DQA1 у пациентов с СТФ, ПФ, НФ недостаточности 21 -гидроксилазы и в популяционной выборке
      • 3. 6. 2. Частоты аллелей tqhzHLA-DQAI на хромосомах, несущих различные мутации в гене CYP21A
      • 3. 6. 3. Анализ частот генотипов по гену HLA-DQA1 в различных группах больных с недостаточностью 21-гидроксилазы и в популяционной выборке
    • 3. 7. Анализ GCT- повторов в гене MICA
      • 3. 7. 1. Распределение аллелей гена MICA у пациентов с СТФ, ПФ, НФ недостаточности 21-гидроксилазы и в популяционной выборке
      • 3. 7. 2. Частоты аллелей гена MICA на хромосомах, несущих различные мутации в гене CYP21A
      • 3. 7. 3. Анализ частот генотипов по гену MICA в различных группах больных с недостаточностью 21-гидроксилазы и в популяционной выборке
    • 3. 8. Диагностическая ценность полиморфных систем генов MICA и HLA-DQA1 и оценка перспективности их использования для пренатальной диагностики недостаточности 21-гидроксилазы
    • 3. 9. Принципиальная стратегия пренатальной диагностики в семьях с недостаточностью 21-гидроксилазы
  • 4. ЗАКЛЮЧЕН®
  • 5. ВЫВОДЫ

Актуальность проблемы.

Одной из актуальных проблем молекулярной генетики человека является создание национального банка данных о характере мутационных повреждений определённых генетических детерминант при наиболее распространённых наследственных патологиях.

Врождённая гиперплазия коры надпочечников (ВГКН) -распространённое аутосомно-рецессивное заболевание, обусловленное в 95% случаев дефицитом фермента 21-гидроксилаза. В Европейской популяции частота встречаемости ВГКН достаточно высока и составляет 1:2,5−10 000 новорожденных (Fitness J., 1999).

Недостаточность 21-гидроксилазы характеризуется выраженным генетическим и клиническим полиморфизмами. Наиболее тяжёлые клинические проявления наблюдаются у детей с сольтеряющей формой (СТФ) заболевания. Дети рождаются с выраженными расстройствами обмена веществ, вызванными нарушениями синтеза глюкокортикоидов и минералкортикоидов в коре надпочечников. У девочек, кроме того, имеется нарушение формирования наружных половых органов. При отсутствии своевременного и правильного лечения дети погибают на первых неделях жизни от надпочечниковой недостаточности. В связи с нерешённостью проблем ранней диагностики недостаточности 21-гидроксилазы большое медицинское и социальное значение имеет профилактика заболевания, ставшая возможной только с появлением молекулярно-генетических методов. Необходимость знания молекулярной природы мутационных повреждений гена 21-гидроксилазы при данном заболевании связана с тем, что биохимический метод диагностики (определение уровня 17-ОН прогестерона) не всегда точно отражает клиническую картину заболевания, и применение его в пренатальной диагностике недостаточности 21-гидроксилазы может привести к ошибочному диагнозу.

В настоящее время известно более 100 мутаций в гене CYP21A2, кодирующем белок 21- гидроксилазу. Проводившиеся последние годы во всем мире исследования локуса 6р21.3, в котором картирован ген CYP2IA2, выявили гетерогенность недостаточности 21-гидроксилазы на молекулярном уровне и определили целый спектр ВГКН-обуславливающих мутаций. После открытия неравновесия по сцеплению между ВГКН и HLA-локусом, внутри которого картирован ген CYP21A2, появилась возможность использовать HLA-типирование для пренатальной диагностики данного заболевания.

Для каждой отдельной популяции существует свой специфический спектр мутаций, знание которого, а так же знание особенностей полиморфизмов в генах, входящих в HLA-локус, таких как HLA-DQA1 и MICA являются необходимыми для проведения мероприятий по медико-генетическому консультированию пациентов и планированию семьи, а также для проведения скрининговых программ с целью выявления гетерозиготных носителей мутаций в гене CYP21A2.

Цель и задачи исследования

.

Разработать алгоритм молекулярной диагностики недостаточности 21-гидроксилазы на основе анализа гена CYP2IA2 и полиморфизмов генов HLA-DQA1 и MICA.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. Проанализировать частоты мутаций в гене CYP2IA2 у больных с недостаточностью 21-гидроксилазы при различных клинических формах заболевания.

2. Проанализировать полиморфизм генов HLA-DQA1 и MICA в группах больных с сольтеряющей, простой вирильной (ПФ) и неклассической формами (НФ) заболевания.

3. Проанализировать неравновесие по сцеплению между мутациями гена CYP21A2 и аллелями генов HLA-DQA1 и MICA.

4. Определить значимость полиморфизмов генов HLA-DQA1 и MICA для диагностики недостаточности 21-гидроксилазы.

5. Разработать на основе полученных данных оптимальную схему молекулярной диагностики недостаточности 21-гидроксилазы.

Научная новизна работы.

В результате проведённого исследования впервые определён спектр мутационных повреждений гена CYP21A2 у больных с недостаточностью 21-гидроксилазы Северо-западного региона России. Разработан метод идентификации мутации P453S на основе рестрикционного анализа с использованием эндонуклеазы рестрикции Rsal. Описан новый «химерный» ген, включающий в себя 5' -участок гена CYP21A2 и 3' -участок псевдогена CYP21AIP (тип 2) и разработана методика его выявления. Выявлена ассоциация между «идиопатической» андрогенизацией и наличием у данных больных «химерных» генов типа I и типа 2. У больных с неклассической формой недостаточности 21-гидроксилазы выявлены «химерные» конструкции ген/псевдоген (тип 2). Впервые проведен анализ частот аллелей и генотипов по гену MICA у больных с различными формами недостаточности 21-гидроксилазы. Впервые определена информативность GCT-повторов гена MICA для диагностики недостаточности 21-гидроксилазы. Выявлено неравновесие по сцеплению между мутациями в гене CYP21A2 и аллелями гена MICA. Выявлены достоверные отличия в распределении генотипов по гену MICA между группой больных с НФ недостаточности 21-гидроксилазы и популяционной выборкой и между группой больных с ПФ и популяционной выборкой. Впервые проведена оценка информативности семей с высоким риском рождения ребёнка с недостаточностью 21-гидроксилазы, основанная на комплексном исследовании мутаций в гене CYP21A2 и полиморфизмов генов HLA-DQA1 и MICA.

Практическая значимость.

В результате исследования спектра мутаций в гене CYP2IA2 и полиморфизмов генов HLA-DQA1 и MICA разработана оптимальная схема молекулярного обследования семей, попадающих в группу риска по рождению ребёнка с ВГКН. Определен тип мутационных повреждений и проведена пренатальная диагностика недостаточности 21-гидроксилазы в 35 семьях, имеющих детей с ВГКН. Полученные результаты явились материалом для подготовки методических рекомендаций по пренатальной диагностике ВГКН.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Показано, что для каждой клинической формы недостаточности 21-гидроксилазы характерен свой специфический спектр мутаций в гене CYP2IA2.

2. Показано, что клиническое проявление недостаточности 21-гидроксилазы зависит от «тяжести» молекулярного дефекта в гене CYP21A2. Так, при «тяжелых» мутациях соответствие фенотипа генотипу равно 94%, при «легких» — 100% и в группах с мутациями «средней тяжести» — 87,5%.

3. Описана новая «химерная» конструкция (тип 2), состоящая из последовательности гена и псевдогена. Выявлена ассоциация между «идиопатической» андрогенизацией и наличием у данных больных химерных" генов типа 1 и типа 2. У больных с неклассической формой недостаточности 21-гидроксилазы «химерные» конструкции ген/псевдоген (тип 2) выявлены с частотой в 2,5 большей, чем в популяционной выборке.

4. Выявлены достоверные отличия в распределении частот аллелей гена HLA-DQA1 между группой больных с СТФ недостаточности 21-гидроксилазы и популяционной выборкой.

5. Выявлены статистически значимые различия между группой больных с СТФ и популяционной выборкой по частотам аллелей гена MICA.

6. Показано, что комплексный анализ полиморфизмов в генах HLA-DQA1 и MICA позволяет повысить информативность семей для пренатальной диагностики до 98%.

Апробация работы. Результаты работы представлены на 9-м международном семинаре по клинической генетике (Кипр, 1998), на Международной конференции по реабилитации детей-инвалидов с редкими генетическими заболеваниями: «Врачи мира-пациентам» (С.-Пб, 1998), на Конференции по прогрессу в профилактике наследственных болезней (Прага, 1999), на Европейском конгрессе по генетике человека (Вена, 2001), на 4-м Всероссийском конгрессе эндокринологов (С.-Пб, 2001), на конференции «Врачи мира пациентам» (С-Пб., 2003), на Европейском конгрессе по генетике человека (Мюнхен, 2004) и (Прага, 2005), на конф. «Современное состояние и новые подходы в дородовой профилактике наследственных болезней и врождённых пороков развития» (С.-Пб, 2005), на конф. «Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике» (Новосибирск, 2006), на конф. «Молекулярные методы диагностики моногенных заболеваний: возможности и перспективы» (Москва, 2006), на конф. «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2006).

Диссертация апробирована на научных семинарах Лаборатории пренатальной диагностики наследственных и врождённых болезней ГУ НИИАГ им. Д. О. Отта.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 16 работ. Объём и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 143 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (материалы и методы), описание результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 146 ссылок. Диссертация иллюстрирована 20 Таблицами и 15 рисунками.

5. ВЫВОДЫ.

1. Анализ мутаций в гене CYP21A2 позволяет определить молекулярный дефект, приводящий к развитию недостаточности 21-гидроксилазы в 84% мутантных хромосом при СТФ, в 70% мутантных хромосом при ПФ и в 41% хромосом при НФ заболевания.

2. Для каждой клинической формы недостаточности 21-гидроксилазы характерен свой специфический спектр мутаций в гене CYP21A2 .

3. Описан новый «химерный» ген, включающий в себя 5' -участок гена CYP21A2 и 3' -участок псевдогена CYP21A1P.

4. Делеция гена CYP21A2 имеет неравновесие по сцеплению с аллелями *0201*0601 гена HLA-DQA1 и *А6 гена MICA.

5. Существует ассоциация между «идиопатической» андрогенизацией и наличием у данных больных «химерных» генов типа 1 и типа 2. У больных с неклассической формой недостаточности 21-гидроксилазы «химерная» конструкция ген/псевдоген встречается с частотой в 2,5 большей, чем в популяционной выборке.

6. При комплексном семейном анализе с учетом мутационных нарушений и особенностей полиморфизмов генов MICA и HLA-DQA1 информативность семей для молекулярной диагностики недостаточности 21-гидроксилазы составляет 98%.

7. Разработана схема молекулярной диагностики в семьях, входящих в группу риска по рождению ребёнка с недостаточностью 21-гидроксилазы.

4.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Врождённая гиперплазия коры надпочечников и в частности недостаточность 21-гидроксилазы является достаточно распространённым аутосомно-рецессивным заболеванием. Из-за высокой частоты встречаемости, особенно неклассических форм (до 1% в популяции) недостаточность 21-гидроксилазы представляет большую медико-социальную проблему. Одной из важных задач для диагностики этого заболевания является знание характера мутационных повреждений в отдельных популяциях.

Во многих странах Западной Европы уже доступны идентификации более 90−95% мутаций гена CYP21A2. Отсюда вполне реальным стало скринирование всех новорожденных (или тех, у кого отмечено повышение содержания 17-гидроксипрогестерона в крови) на наличие мутаций гена CYP21A2 для досимптоматической диагностики заболевания. Как показывают обширные эпидемиологические исследования во Франции и во многих других странах, раннее досимптоматическое выявление недостаточности 21-гидроксилазы, безусловно, оправдано, так как позволяет начать лечение задолго до появления клинических симптомов, и гарантирует более благоприятное течение болезни. Наличие передовых молекулярных технологий в диагностике позволило в ряде стран Западной Европы приступить к скринированию всей популяции на носительство мутаций гена CYP21A2, с тем, чтобы выявлять гетерозиготных носителей и проводить эффективную профилактику этого заболевания.

В 2006 году в России недостаточность 21-гидроксилазы вошла в ряд заболеваний, на которые проводится скрининг новорожденных, поэтому возросла актуальность исследования спектра и распространённости мутаций в гене CYP21A2 в Российской популяции.

Решающим преимуществом молекулярной диагностики по сравнению с другими методами исследований является то, что объектом исследования является непосредственно ДНК больного, поэтому, диагностику можно проводить не только на тех тканях, где экспрессируется соответствующий ген, но практически на любых клетках организма, из которых можно выделить ДНК. Более того, ДНК-диагностика возможна практически на любой стадии развития организма.

Результаты наших исследований свидетельствуют о том, что для сольтеряющей и для простой вирильной формы недостаточности 21-гидроксилазы характерен свой спектр диагностически значимых мутаций. Согласно полученным данным при сольтеряющей форме недостаточности 21-гидроксилазы наиболее частыми мутациями являются делеция гена и мутация сплайсинга во втором интроне гена CYP21A2. Тогда как при простой вирильной форме ведущими являются мутация сплайсинга и мутация в интроне 4 — I172N. Делеция гена по своей распространенности у больных с ПФ занимает третье место. В целом, при СТФ и ПФ заболевании диагностически наиболее значимыми являются четыре из двенадцати исследованных мутаций. Это — делеция гена, мутация сплайсинга в интроне 2, мутация в экзоне 4 — I172N и мутация Q318X в экзоне 8.

У больных с неклассической формой при тщательном отборе по клиническим признакам, базальному и стимулированному уровням 17-гидроксирогестерона различные типы мутаций были идентифицированы в 41% мутантных хромосом.

Наши результаты свидетельствует о высокой значимости комплексного анализа, включающего идентификацию частых мутаций, характеристику клинической картины заболевания и проведение пробы с АКТГ в диагностике неклассической формы недостаточности 21-гидроксилазы при врожденной гиперплазии коры надпочечников.

В настоящем исследовании помимо ранее описанной «химерной» конструкции 1-го типа выявлен новый «химерный» ген, включающий в себя 5' -конец гена CYP21A2 и 3' -конец псевдогена CYP21A1P. Мы предполагаем, что выявленные нами «химерные» конструкции 2-го типа, кодируют фермент 21-гидроксилазу с незначительными нарушениями функциональной активности. По-видимому, именно по этой причине данное нарушение чаще определяется у больных с более мягкими симптомами недостаточности 21-гидроксилазы и у женщин с «идиопатической» андрогенизацией. При анализе спектра мутаций в гене 21-гидроксилазы выявлено наличие «химерных» генов 1-го и 2-го типов более чем у половины больных с «идиопатической» андрогенизацией, что может указывать на наличие у них латентной формы недостаточности 21-гидроксилазы.

Состояние репродуктивной системы у женщин с латентной формой недостаточности 21-гидроксилазы практически не исследовано. Это можно объяснить тем, что данную форму заболевания, как правило, выявляют случайно при семейных обследованиях. Значительную часть женщин с латентной формой заболевания представляют собой гетерозиготные носители, имеющие в геноме один мутантный аллель гена CYP21A2. Эти лица считаются практически здоровыми. Их обычно выявляют в семьях, где родился ребенок с классической формой недостаточности 21-гидроксилазы. Клиническим аспектам гетерозиготного носительства мутантного гена CYP21A2 внимания почти не уделялось. Отдельные исследования свидетельствуют о достаточно высоком проценте гетерозиготных носителей среди больных с гирсутизмом. Мы предполагаем, что во многих случаях у женщин с латентной формой или среди больных с гирсутизмом возможно наличие «химерных» генов типа 2, которые и могут оказывать опосредованное влияние на клиническую картину заболевания.

Наличие мутантных аллелей гена CYP21A2 в гетерозиготном состоянии может сопровождаться дисфункцией коры надпочечников, которая у женщин фенотипически проявляется в виде нарушений репродуктивной функции. На этом основании женщин — гетерозиготных носителей мутантных аллелей по гену CYP21A2 следует относить к группе высокого риска по возникновению осложнений в системе репродукции, особенно в период ее становления и при беременности.

Было установлено, что аллели и генотипы по гену HLADQA1 системы HLA и гену MICA, картированным на коротком плече хромосомы 6 обладают неравновесием по сцеплению с отдельными клиническими формами недостаточности 21-гидроксилазы. Работы в этой области могут помочь уточнению возраста и происхождения отдельных мутаций. Использование полиморфных систем HLADQA1 и MICA может существенно повысит информативность молекулярной диагностики в семьях, попадающих в группу риска и имеющих ребёнка, больного с недостаточностью 21-гидроксилазы. Так, по нашим данным, информативность семей по системе HLA-DQA1 составила 55%, по системе MICA — 53% и общая информативность по обеим системам составила 94%.

В настоящее время молекулярно-генетическое исследование широко используют для уточнения диагноза у новорожденных с умеренно повышенным уровнем 17-гидроксипрогестерона, с целью пренатальной диагностики и при медико-генетическом консультировании для выявления носителей мутации среди родственников. Хотелось бы подчеркнуть, что пренатальная диагностика данного заболевания имеет первостепенное значение в семьях, где уже имеются дети с классическими формами недостаточности 21-гидроксилазы. Поэтому актуальным для ранней пренатальной диагностики является непосредственное определение мутаций в гене CYP21A2. У женщин с подозрением на неклассическую форму заболевания большое значение приобретает анализ «химерных» генных конструкций с целью уточнения диагноза и дальнейшего планировния лечения. Учитывая важную медицинскую и социальную значимость проблемы недостаточности 21-гидроксилазы, молекулярные исследования этого гена, безусловно, актуальны как для медицинской генетики, так и для генетики человека. Информация о спектре мутаций для каждой отдельной популяции является необходимой для проведения мероприятий по медико-генетическому консультированию пациентов и планированию семьи, а также для проведения скрининговых программ с целью выявления гетерозиготных носителей недостаточности 21-гидроксилазы.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Н.В., Дерябина Е. Г. Неклассическая врожденная дисфункция коры надпочечников в практике акушера-гинеколога // Российский вестник акушера-гинеколога.-2005.- Т.З.- С.14−18.
  2. Бондаренко А.Л. HLA и болезни.-Киров.- 1999.- 194 с.
  3. В.М. Конверсия гена // Соросовский образовательный журнал.- Биология.- 2000.-Т. 6, № 1.-С. 23−30.
  4. С. Медико-биологическая статистика // М.: Практика.-1999.-459 с.
  5. И.И., Семичева Т. В., Петеркова В. А. Половое развитие детей: норма и патология, — М.-2002.- С. 119−130.
  6. Г. Г. Гирсутный синдром у женщин детородного возраста. -1981.- дисс. на соискание ученой степени канд. мед. наук.
  7. Т.Э., Асеев М. В., Баранов B.C. Методы молекулярной диагностки генных болезней // Мед.лаб.технологии (справочник).-Спб.: Интермедика.- 1999.- Т.2.- С. 603−617.
  8. Клиническая эндокринология: Руководство / Под ред. Н. Г. Старковой.- М: Медицина.-1991.
  9. Н.А., Соловьев В. В., Рогозин И. Б. Молекулярный механизм соматического гипермутагенеза в генах иммуноглобулинов // Докл. АН СССР.-1985, — Т.281, N 4, — С. 994−999.
  10. М.Н., Патология репродуктивной функции системы в период её становления // Кн: Руководство по эндокринной гинекологии / Под ред. Е. М. Вихляевой.- М: Медицинское информационное агенство.- 1997.
  11. Е.В., Карева М. А., Колесникова Г. С., Яровая И. С. и др. Неклассическая форма врождённой дисфункции коры надпочечников у девочек-подростков // Проблемы эндокринологии.-2006, — Т.52, № 5.- С. 26−31.
  12. В.В. Эндокринология/М.: Медицина.-1999, — С. 471−537.
  13. О.Ю. Статистический анализ медицинских данных / Москва.- 2003.
  14. М., Берг П. Гены и геномы/М.: Мир.-1998.-Т 1.-С.100−111.
  15. Amor M., Parker K.L., Globerman H., New M.I., White P.C. Mutation in the CYP21B gene (lie-172—Asn) causes steroid 21-hydroxylase deficiency // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1988, — V.85, № 5.- P. 16 001 604.
  16. Baltimore D. Gene conversion: some implications for immunoglobulin genes//Cell.-1981,-V.24.- P. 595−596.
  17. Barbat В., Bogyo A., Raux-Demay M.C. et al., Screening of CYP21 gene mutations in 129 French patients affected by steroid 21-hydroxylase deficiency // Hum. Mutat.- 1995.- V.5, № 2.- P. 126−130.
  18. Bobba A., Iolascon A., Giannattasio S. et al. Characterisation of САН alleles with non-radioactive DNA single strand conformation polimorphism analysis of the CYP21 gene // J. Med. Genet.- 1997.-V.34.- P. 223−228.
  19. Brentano S.T., Picado-Leonard J., Mellon S.H., Moore C.C.D., Miller W.L. Tissue-specific, cAMP-induce, and phorbol ester repressed expression from the human P450cl7 promoter in mouse cells // Mol.Endocrinol.- 1990.- V.4.-P. 1972−1979.
  20. Brosnan P.G., Brosnan C.A., Kemp S.F., Domek D.B., Jelley D.H., Blackett P.R., Riley W.J. Effect of newborn screening for congenital adrenal hyperplasia // Arch. Pediatr. Adolesc. Med.- 1999- V.153.-P.l 272—1278.
  21. Bongiovanni A.M., Root A.M. The adrenogenital syndrome // N.Engl., J. Med.-1963, — V.268.-P. 1283−1289.
  22. Campbell R.D., Trowsdale J. Map of the human MHC // Immunol. Today.- 1993.- V.14.- P. 349−352.
  23. Carrera P., Bordone L., Azzani Т., Brunelli V., Garancini M.P., Chiumello G., Ferrari M. Point mutations in Italian patients with classic, non-classic, and cryptic forms of steroid 21-hydroxylase deficiency // Human Genetics.- 1996.- V.98.- P. 662−665.
  24. Childs В., Grumbach M.M., Van Wyk J.J. Virilizing adrenal hyperplasia: a genetic and hormonal study//J.Clin.Invest.-1956.- V.35.- P.213.
  25. S.H., Ни M.C., Chung B.C. A missense mutation at lie 172—Asn or Arg356—Trp causes steroid 21-hydroxylase deficiency // J. Biol. Chem.- 1990.- V.265.- P. 3549−3552.
  26. Cucca F., Lampis R, Congia M. et al. A correlation between the relative predisposition of MHC class II alleles to type 1 diabetes and the structure of their proteins//Hum. Mol. Genet.-2001, — V.10.-P. 2025−2037.
  27. Cutfield W.S., Webster D. Newborn screening for congenital adrenal hyperplasia in New Zealand // J. Pediatr.- 1995, — V.126.- P. 118−121.
  28. Di Martino-Nardi J., Stoner E., О Connell A., New M.I. The effect of treatment of final height in classical congenital adrenal hyperplasia (САН)//Acta. Endocrinol. Suppl.-1986.- V.279.- P.305.
  29. Dupont В., Oberfield S.E., Smithwick E.M. et al. Close genetic linkage between HLA and congenital adrenal hyperplasia (21-hydroxylase deficiency) // Lancet.- 1977, — V.2.- P.1309.
  30. Evgrafov 0., Polyakov A., Dzenis I., Baharev V. Preliminary Investigation of Mutations in 21-Hydroxylase Gene in Patients With Congenital Adrenal Hyperplasia in Russia // Hum. Mutat.- 1995.- V.5.-P. 131−136.
  31. Ezquietta В., Oliver A., Gracia R., Gancedo P.G. Analysis of steroid 21-hydroxylase gene mutations in Spanish population // Human Genetics.-1995.- V.96.-P. 198−204.
  32. Galal, O.M. Rudd B.T. Drayer N.M. Evaluation of deficiency of 21-hydroxylation in patients with congenital adrenal hyperplasia // Arch. Dis. Child.- 1968,-V. 43.- P. 410−414.
  33. Gitelman S.E., Bristow J., Miller W.L. Mechanism and consequences of the duplication of the human C4/P450c21/gene x locus // Mol. Cell. Biol.- 1992.-V.12.- P. 2124−2134.
  34. Globerman H., Amor M., Parker K.L., New M.I., White P.C. Nonsense mutation causing steroid 21-hydroxylase deficiency // J. Clin. Invest.,.-1988.- V.82, № 1.- P. 139−144.
  35. Gourmelen M., Gueux В., Pham H.T.M., Fiet J., Raux-Demay M.C., Girard F. Detection of heterozygous carriers for 21-hydroxylase deficiency by plasma 21-deoxycortisol measurement // Acta. Endocrinol. (Copenh.).- 1987.-V.116.- P. 507−512.
  36. Helmberg A., Tusie-Luna M.T., Tabarelli M., Kofler R., White P.C. R339H and P453S: CYP21 mutations associated with nonclassic steroid 21-hydroxylase deficiency that are not apparent gene conversions // Mol. Endocrinol.- 1992.-V.6.-P. 1318−1322.
  37. Higashi Y., Tanae A., Inoue H., Fudjii-Kuriyama Y. Evidence for frequent gene conversion in the steroid 21-hydroxylase P-450(C21) gene: implication for steroid 21-hydroxylase deficiency // Am. J. Hum. Genet.-1988.-V.42.-P. 17−25.
  38. Hsu N.C., Guzov V.M., Hsu L.C. et al. Characterization of the consequence of a novel Glu-380 to Asp mutation by expression of functional P450c21 in Escherichia coli. II Biochim. Biophys. Acta.-1999.- V.1430.- P. 95−102.
  39. Hughes I. A., Dyas J., Riad-Fahmy D., Laurence К. M. Prenatal diagnosis of congenital adrenal hyperplasia: reliability of amniotic fluid steroid analysis // J. Med. Genet.- 1987.- V.24.- P. 344−347.
  40. Klingensmith G.J., Garcia S.C., Jones H.W., Migeon C.J., Blizzard R.M. Glucocorticoid treatment of girls with congenital adrenal hyperplasia: effects on height, sexual maturation, and fertility // J. Pediatr.-1977.-V.90.- P. 996−1004.
  41. Ко T. M, Kao C. H, Ho H. N, Tseng L.H. et al. Congenital adrenal hyperplasia. Molecular characterization // J. Reprod. Med.- 1998, — V.43, № 4.- P. 379−386.
  42. Kominami S., Ochi H., Kobayashi Y. et al. Studies on the steroid hydroxylation system in adrenal cortex microsomes: Purification and characterization of cytochrome P-450 specific for steroid C-21 hydroxylation//J.Biol.Chem.- 1980.- V.255.- P. 3386.
  43. Lee H., Chao H., Ng H., Choo K., Direct molecular diagnosis of CYP21 mutations in congenital adrenal hyperplasia // J. Med. Genet.- 1996,-V.33.- P. 371−375.
  44. Lee, H.-H., Niu D.-M., Lin R.-W., Chan P., Lin C.-Y. Structural analysis of the chimeric CYP21P/CYP21 gene in steroid 21-hydroxylase deficiency // J. Hum. Genet.- 2002.- V.47.-P. 517−522,.
  45. Lejeune-Lenain C., Cantraine F., Dufrasnes M., Prevot F., Wolter R., Franckson J.R. An improved method for the detection of heterozygosity of congenital virilizing adrenal hyperplasia // Clin. Endocrinol. (Oxf.).-1980.- V.12.- P. 525−535.
  46. Levine L. S., Zachmann M., New M. I., Prader, A.- Pollack, M. S., O’Neill G. J., Yang S. Y., Oberfield S. E., Dupont B. Genetic mapping of the 21-hydroxylase-deficiency gene within the HLA linkage group // New. Eng. J. Med.- 1978, — V.299.-P. 911−915.
  47. Levine L. S., Dupont В., Lorenzen F. Cryptic 21-hydroxylase deficiency in families of patients witth classical congenital adrenal hyperplasia // J. Clin. Endocrinol. Metab.- 1980.- V.51.- P. 1316−1324.
  48. Lee H., Chao H., Ng H., Choo K. Direct molecular diagnosis of CYP2I mutations in congenital adrenal hyperplasia // J Med Genet.- 1996.-V.33.- P. 371−375.
  49. Lee H.H., Niu D.M. Lin R.W., Chan P., Lin C.Y. Structural analysis of the chimeric CYP21P/CYP21 gene in steroid 21-hydroxylase deficiency// J. Hum. Genet.- 2002, — V.47.- P. 517−522.
  50. Mellon S.H., Miller W.L. Extraadrenal steroid 21-hydroxylation is not mediated by P450c21 // J. Clin. Invest.- 1989.- V.84.- P. 1497−1502.
  51. Mercado A.B., Wilson R.C., Cheng K.C., Wei J.Q., New M.I. Prenatal treatment and diagnosis of congenital adrenal hyperplasia owing to steroid 21-hydroxylase deficiency // J. Clin. Endocrinol. Metab.- 1995.- V.80, № 7, — P. 2014−2020.
  52. Merke D.P., Chrousos G.P., Eisenhofer G., Weise M., Keil M.F., Rogol A.D., Van Wyk J.J., Bornstein S.R. Adrenomedullary dysplasia and hypofunction in patients with classic 21-hydroxylase deficiency // N. Engl. J. Med.- 2000.- V.343.- P. 1362−1368.
  53. Meselson M., Radding C. A general model for genetic recombination // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1975.- V.72.- P. 358−361.
  54. Migeon C.J., Donohoue P.A. Congenital adrenal hyperplasia caused by 21-hydroxylase deficiency- its molecular basis and its remaining problems // Endocrinology and Metabolism Clinics of North America.-1991.- V. 20, № 2,-P. 277−296.
  55. Miller W.L., Levine L.S. Molecular and clinical advances in congenital adrenal hyperplasia//J. Pediatr.- 1987.- V.lll.-P. 1−17.
  56. Miller W.L. Congenital adrenal hyperplasias // Endocrinol. Metab. Clin. North. Am.-1991.- V.20, № 4.- P. 721−749.
  57. Miller W.L. Phenotypic heterogeneity associated with the splicing mutation in congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency//J. Clin. Endocr. Metab.- 1997.- V.82.- P. 1304 .
  58. Molinero L.L., Marcos C.Y., Mirbaha F., Fainboim L., Stastny P., Zwirner N.W. Codominant expression of the polymorphic MICA alloantigens encoded by genes in the HLA region. // Eur J Immunogenet. 2002. -V.29, № 4.- P. 315−319.
  59. Moore C.C.D., Miller W.L. The role of transcriptional regulation in steroid hormone biosynthesis // J. Steroid Biochem.-1991, — V.40.- P. 517 522.
  60. Moore C.C.D., Brentano S.T., Miller W.L. Human P450scc gene transcription is induced by cyclic AMP and repressed by 12−0-tetradecanolyphorbol-13-acetate and A23180 by independent cis-elements // Mol.Cell.Biol.- 1990.- V.10.- P. 6013−6023.
  61. Morel Y., Miller W.L. Clinical and molecular genetics of congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency.// Adv. Hum. Genet.-1991, — V.20.-P.l-67.
  62. Morel Y., Bertrand J., Rappaport R. Disorder of Hormonosynthesis // Endocr. Rev.- 1992.- V.22.- P. 305−331.
  63. Mornet E. Gibrat J-F. A 3D model of human P450c21: study of the putative effects of steroid 21-hydroxylase gene mutations // Hum. Genet.-2000.- V.106.- P. 330−339.
  64. Mullis K. B, Faloona F.A. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction // Methods Enzymol.- 1987, — V.155.-P. 335−350.
  65. New M.I., Peterson R.E. Disorders of aldosterone secretion in childhood // Pediatr. Clin. North. Am.- 1966.- V.13.- P. 43−58.
  66. New M.L., White P.C., Pang S., Dupont В., Speiser P. The adrenal hyperplasias // In: The metabolic basis of inherited disease, 6th edn.(eds. Scriver C.R., Beaudet A.L., Sly W.S., Valle D.), New York: McGraw-Hill.-1989.-P. 1881−1917.
  67. Nikoshkov, A., Lajic S., Hoist M., Wedell A., Luthman H. Synergistic effect of partially inactivating mutations in steroid 21-hydroxylase deficiency//J. Clin. Endocr. Metab.- 1997.- V.82.- P. 194−199.
  68. Ohlsson G., Muller J., Skakkebaek N.E., Schwartz M. Steroid 21-Hydrxylase Deficiency: Mutational Spectrum in Denmark, Three Novel Mutations, in Vitro Expression Analysis // Human Mutation.- 1999.-V.13.- P. 482−486.
  69. Ohta T. Allelic and nonallelic homology of a supergene family // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1983.- V.220.-P. 157−162.
  70. Orta-Flores Z., Cantu J. M., Dominguez О. V., Reciprocal interactions of progesterone and 17-alpha-OH-progesterone as exogenous substrates for rat adrenal 21-hydroxylase. J. Steroid Biochem.- 1976.- V.7.- P. 761−767.
  71. Owerbach D., Sherman L., Ballard A.L., Azziz R. Pro-453 to Ser mutation in CYP21 is associated with nonclassic steroid 21- hydroxylase deficiency//Mol. Endocrinol.- 1992,-V.6.-P. 1211−1215.
  72. Pang S., Clark A. Congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency: Newborn screening and its relationship to the diagnosis and treatment of the disorder// Screening.- 1993.- V.2.- P. 105.
  73. Pociot F., McDermott M.F. Genetics of type 1 diabetes mellitus // Genes and Immunity.- 2002.- V.3.- P. 235−249.
  74. Prader A., Anders G.J.P.A., Habich H. Zur Genetik des kongenitalen adrenogenitalen Syndroms (virilisierende Nebennierenhyperplasia) // Helv. Paediat. Acta.- 1962.- V.17.- P. 271−284.
  75. Risch N. Assessing the role of HLA-linked and unlinked determinants of disease // Am. J. Hum. Genet.- 1987.- V. 40.- P. 1−14.
  76. Robins Т., Barbara M., Lajic S., Wedell A. Not all amino acid cluster E6 mutation in CYP21 cause congenital adrenal hyperplasia // J. Clin Endocrinol. Metab.- V. 90, № 4.- P. 2148−2153.
  77. Rodrigues N.R., Dunham L., Yu C.Y., Carroll M.C., Porter R.R., Campbell R.D. Molecular characterization of the HLA-linked steroid 21-hydroxylase В gene from an individual with congenital adrenal hyperplasia//EMBO J.- 1987.-V.6, № 6.- P. 1653−1661.
  78. Rosier A., Levine L.S., Schneider В., Novogroder M., New M.I. The interrelationship of sodium balance, plasma renin activity and ACTH incongenital adrenal hyperplasia // J. Clin. Endocrinol. Metab.- 1977.-V.45.- P. 500−512.
  79. Ruuls S.R., Sedgwick J.D. Unlinking tumor necrosis factor biology from the major histocompatibility complex: Lessons from human genetics and animal models//Am. J. Hum. Gen.- 1999.- V. 65, — P.294−301.
  80. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning. A laboratory manual.-2-ed. / Cold Spring Harbor Laboratory Press.-1989, — 1885 p.
  81. Sherman S.L., Aston C.E., Morton N.E., Speiser P.W., New M.I. A segregation and linkage study of classical and nonclassical 21-hydroxylase deficiency // Am. J. Hum. Genet.-1988.- V.42.- P. 830−838.
  82. Simopoulos A.P., Marshall J.R., Delea C.S., Bartter F.C. Studies on the deficiency of 21-hydroxylationin patients with congenital adrenal hyperplasia // J. Clin. Endocrinol. Metab.-1971.- V.32.- P. 438−443.
  83. Speiser P. W., Dupont В., Rubinstein P., Piazza A., Kastelan A., New M. I. High frequency of nonclassical steroid 21-hydroxylase deficiency // Am. J. Hum. Genet.- 1985.- V.37.- P. 650−667.
  84. Speiser P.W., New M.I. Genotype and hormonal phenotype in nonclassical 21-hydroxylase deficiency // J. Clin. .Endocrinol. Metab.-1987.- V.64.-P. 86−91.
  85. Speiser P.W., New M.I., White P.C. Molecular genetic analysis of nonclassic steroid 21-hydroxylase deficiency associated with HLA-B14, DR1 // N. Engi. J. Med.- 1988.- V.319.- P. 19−23.
  86. Speiser P.W., Agdere L., Ueshiba H., White P.C., New M.I. Aldosterone synthesis in salt-wasting congenital adrenal hyperplasia with completeabsence of adrenal 21-hydroxylase // N. Engl. J. Med.- 1991.- V.324.-P.145−149.
  87. Suemizu H., Radosavljevic M., Kimura M., Sadahiro S., Yoshimura S, Bahram S., Inoko H. A basolateral sorting motif in the MICA cytoplasmic tail // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.- 2002.- V.99, № 5.- P. 2971−2976.
  88. Suwa S. Nationwide survey of neonatal mass-screening for congenital adrenal hyperplasia in Japan// Screening.- 1994.- V.3.- P. 141−151.
  89. Todd J.A. Genetic analysis of type 1 diabetes using whole genome approaches // Proc. Natl Acad. Sci. USA.- 1995, — V.92.- P. 8560−8565.
  90. Todd J.A. Genetics of type 1 diabetes // Pathol Biol.- 1997, — V.45.- P. 219−227.
  91. Townsend S., Dallman M.F., Miller W.L. Rat insulin-like growth factor -I and -II mRNAs are unchanged during compensatory adrenal growth but decrease during AHTG-induced adrenal growth // J.Biol. Chem.- 1990.-V.265.-P. 22 117−22 122.
  92. Tusie-Luna M.T., Traktman P., White P.C. Determination of functional effects of mutations in the steroid 21-hydroxylase gene (CYP21) using recombinant vaccinia virus // J. Biol. Chem.- 1990.- V.265.- P. 20 916— 20 922.
  93. Tusie-Luna M.T., Speiser P.W., Dumic M., New M.I., White P.C. A mutation (Pro-30 to Leu) in CYP21 represents a potential nonclassic steroid 21-hydroxylase deficiency allele // Mol. Endocrinol.- 1991.- V.5.-P. 685−692.
  94. Tusie-Luna M. T, White P.C. Gene conversions and unequal crossovers between CYP21 (steroid 21-hydroxylase gene) and CYP21P involve different mechanisms // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1995, — V.92.- P. 10 796−10 800.
  95. Wassmuth R., Lernmark A., The genetics of susceptibility to diabetes // Clin. Immunol. Immunopathol.- 1989.- V.53, № 3.- P. 358−399.
  96. Waterman M.R., Simpson E.R. Regulation of steroid hydroxylase gene expression is multifactorial in nature // Recent Prog. Horm. Res.- 1989.-V.45.-P. 533−566.
  97. Wedell A., Luthman H. Steroid 21-hydroxylase deficiency: two additional mutations in salt-wasting disease and rapid screening of disease-causing mutations // Hum. Mol, Genet.- 1993.- V.2.- P. 499−504.
  98. Wedell A. An update on the molecular genetics of congenital adrenal hyperplasia: diagnostic and therapeutic aspects // J. Pediat. Endocr. Metab.- 1998.- V.ll.- P. 581−589.
  99. White P.C., New M.I., Dupont B. Structure of human steroid 21-hydroxylase genes // Proc. Natl. Acad. Sci.USA.- 1986, — V.83.- P. 51 115 115.
  100. White P.C., Speiser P.W. Congenital Adrenal Hyperplasia due to 21-Hydroxylase Deficiency // Endocrine Reviews.- 2000, — V.21, № 3.- P. 245−291.
  101. Wilson R.C., Mercado A.B., Cheng K.C., New M.I. Steroid 21-hydroxylase deficiency: genotype may not predict phenotype // J. Clin. Endocrinol. Metab.- 1995.- V.80.- P. 2322−2329.
  102. Witchel S. F., Bhamidipati D. K., Hoffman E. P., Cohen J. B. Phenotypic heterogeneity associated with the splicing mutation in congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency // J. Clin. Endocr. Metab.-1996.- V.81.- P. 4081−4088.
  103. Witchel S.F., Lee P.A. Identification of heterozygotic carriers of 21-hydroxylase deficiency: sensitivity of ACTH stimulation tests // Am. J. Med. Genet.- 1998, — V.76.-P. 337−342.
  104. Wu D.A., Chung B.C. Mutations of P450c21 (steroid 21-hydroxylase) at Cys428, Val281, and Ser268 result in complete, partial, or no loss of enzymatic activity, respectively // J. Clin. Invest.- 1991.- V.88.- P. 519 523.
  105. Wu D.A., Ни M.C., Chung Be. Expression and functional study of wild-type and mutant human cytochrome P450c21 in Saccharomyces cerejsiae. DNA//Cell. Biol.-1991.- V.10.- P.201−209.
  106. Yamamoto K., Fujiyama Y., Andoh A., Bamba Т., Okabe H. Oxidative stress increases MICA and MICB gene expression in the human colon carcinoma cell line (CaCo-2) // BiochiMICA et Biophisica Acta.- 2001.-P. 10−12.
  107. Т., Simpson E.R., Waterman M.R. 17a-Hydroxylase/17,20-lyase deficiency: from clinical investigation to molecular definitio // Endocr. Rev.-1991, — V.12.- P. 91−108.
  108. Zwirner N.W., Fernades-Vina M.A., Statsny P. MICA, a new polymorphic HLA-related antigen, is expressed mainly by kerstinocytes, endothelial cells and monocytes // Immunogenetics.- 1998.- V.47.- P. 139−148.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!