Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Совершенствование биотехнологий высокоочищенной ?-циклодекстринглюканотрансферазы и ?-циклодекстринов на основе новых штаммов рода Paenibacillus

Диссертация: Совершенствование биотехнологий высокоочищенной ?-циклодекстринглюканотрансферазы и ?-циклодекстринов на основе новых штаммов рода Paenibacillus
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

На основе анализа данных, полученных экспериментальным путем, выявленных зависимостей накопления а-ЦГТ-азной активности штаммом Paenibacillus macerans 1АМБ от условий культивирования, параметров выделения и очистки, разработана технология ферментного препарата а-ЦГТ-зы Г20Х. На основании полученного путем скрининга нового штамма, продуцента термостабильной а-ЦГТ-азы, и экспериментально… Читать ещё >

Совершенствование биотехнологий высокоочищенной ?-циклодекстринглюканотрансферазы и ?-циклодекстринов на основе новых штаммов рода Paenibacillus (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Фермент микробного происхождения — циклодекстринглюкано-трансфераза
    • 1. 2. Циклодекстриногенные бактерии
      • 1. 2. 1. Paenibacillus macerans
      • 1. 2. 2. Bacillus circulans
      • 1. 2. 3. Алкалофильные бациллы
      • 1. 2. 4. Продуценты ЦГТ-азы, развивающиеся при нормальных значениях рН
      • 1. 2. 5. Термотолерантные циклодекстриногены
      • 1. 2. 6. Продуценты ЦГТ-аз, не относящиеся к порядку Bacillales
    • 1. 3. Выбор продуктивного штамма для процессов получения ЦГТ-азы
      • 1. 3. 1. Источники культур
      • 1. 3. 2. Накопительные среды
      • 1. 3. 3. Дополнительный анализ выделенных штаммов
    • 1. 4. Питательные среды для культивирования микроорганизмов-продуцентов ЦГТ-аз
      • 1. 4. 1. Источники углерода
      • 1. 4. 2. Источники азота
      • 1. 4. 3. Источники фосфора
    • 1. 5. Физико-химические свойства бактериальных ЦГТ-аз
    • 1. 6. Структура ЦГТ-аз
    • 1. 7. Реакции катализируемые ЦГТ-азами
      • 1. 7. 1. Реакция циклизации
      • 1. 7. 2. Реакция диспропорционирования
      • 1. 7. 3. Реакция связывания
      • 1. 7. 4. Гидролитическая (декстринизирующая) активность
      • 1. 7. 5. Суммарная схема реакции
    • 1. 8. Методы выделения и очистки ЦГТ-аз
      • 1. 8. 1. Ультрафильтрация
      • 1. 8. 2. Осаждение органическими растворителями
      • 1. 8. 3. Высаливание
    • 1. 9. Хроматографические методы очистки ЦГТ-аз
      • 1. 9. 1. Гидрофобная хроматография
      • 1. 9. 2. Ионообменная хроматография
      • 1. 9. 3. Металлохелат аффинная хроматография
      • 1. 9. 4. Аффинная хроматография. Синтез аффинных сорбентов с использованием ЦД
    • 1. 10. Строение, свойства, методы получения ЦД и комплексов включений
      • 1. 10. 1. Строение ЦД
      • 1. 10. 2. Свойства ЦД
      • 1. 10. 3. Методы получения ЦД
        • 1. 10. 3. 1. Типы субстратов для получения ЦД
        • 1. 10. 3. 2. Методы предобработки субстратов
      • 1. 10. 4. Комплексы-включения с ЦД
        • 1. 10. 4. 1. Получение комплексов в водных растворах ЦД
    • 1. 11. Применение ЦД в пищевой промышленности
  • ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТ
    • 2. 1. Объекты, материалы и методы исследований
      • 2. 1. 1. Объект исследования
      • 2. 1. 2. Питательные среды
      • 2. 1. 3. Крахмал, используемый для циклизации
      • 2. 1. 4. Ферментные препараты
      • 2. 1. 5. Ароматические вещества, используемые для получения комплексов включений с а-ЦД
      • 2. 1. 6. Препарат а-ЦД
      • 2. 1. 7. Приборы
      • 2. 1. 8. Методы
        • 2. 1. 8. 1. Определение вязкости растворов крахмала
        • 2. 1. 8. 2. Определение РВ по методу Шомодьи-Нельсона
        • 2. 1. 8. 3. Определение декстрозного эквивалента
        • 2. 1. 8. 4. Определение белка по методу Лоури
        • 2. 1. 8. 5. Определение содержания влаги в образцах навесок исследуемого вещества
        • 2. 1. 8. 6. Методы определения ферментативных активностей
        • 2. 1. 8. 6. 1. Качественное определение а-ЦГТ-азной активности методом Тильдена-Хадсона
        • 2. 1. 8. 6. 2. Количественный метод определения активности а-ЦГТ-азы
        • 2. 1. 8. 6. 3. Определение амилолитической активности фотоколориметрическим методом
        • 2. 1. 8. 6. 4. Измерение активности р-ЦГТ-азы фенолфталеиновым методом
        • 2. 1. 8. 6. 5. Определение протеолитической активности (модифицированный метод Ансона)
        • 2. 1. 8. 7. Концентрирование культуральной жидкости методом ультрафильтрации
        • 2. 1. 8. 8. Осаждение ферментов органическими растворителями
        • 2. 1. 8. 9. Получение лиофилизированных ферментных препаратов
        • 2. 1. 8. 10. Электрофорез
        • 2. 1. 8. 10. 1. Изучение степени чистоты фермента с помощью диск-электрофореза
        • 2. 1. 8. 11. Диализ
        • 2. 1. 8. 12. Методы определения физико-химических параметров а-ЦГТ-азы
        • 2. 1. 8. 12. 1. Определение рН-стабильности а-ЦГТ-азы
        • 2. 1. 8. 12. 2. Определение термостабильности а-ЦГТ-азы
        • 2. 1. 8. 12. 3. Определение рН — оптимумов действия а-ЦГТ-азы
        • 2. 1. 8. 12. 4. Определение температурного оптимума действия а-ЦГТ-азы
        • 2. 1. 8. 12. 5. Определение влияния ЭДТА и ионов металлов на активность а-ЦГТ-азы
        • 2. 1. 8. 12. 6. Определение аминокислотного состава белка
        • 2. 1. 8. 13. Хроматографические методы очистки а-ЦГТ-азы
        • 2. 1. 8. 13. 1. Гидрофобная хроматография
        • 2. 1. 8. 13. 2. Синтез аффинных сорбентов а-ЦД — сефароза 4В
        • 2. 1. 8. 13. 3. Аффинная хроматография а-ЦГТ-азы
        • 2. 1. 8. 14. Определение ЦД методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
      • 2. 1. 9. Оптимизация состава питательной среды с использованием метода аддитивно-решетчатого математического описания объекта
      • 2. 1. 10. Рецептура кондитерских изделий (конфеты «Помадка сахарная» и «Помадка сливочная»), приготовленных с добавлением комплексов включений
    • 2. 2. Результаты исследований и их обсуждение
      • 2. 2. 1. Скрининг ЦГТ-активных культур микроорганизмов из природных мест обитания
      • 2. 2. 2. Исследование фенотипических признаков бактериального штамма
      • 2. 2. 3. Филогенетические особенности штамма
      • 2. 2. 4. Питательные среды, оптимальные для культивирования, поддержания и хранения микроорганизма Paenibacillus macerans
        • 2. 2. 4. 1. Хранение и поддержание культуры Paenibacillus macerans
        • 2. 2. 4. 2. Выращивание культуры Paenibacillus macerans 1024 на жидких питательных средах
        • 2. 2. 4. 3. Изучение влияния рН исходной питательной среды на биосинтез а-ЦГТ-азы бактериями Paenibacillus macerans
        • 2. 2. 4. 4. Разработка способа получения посевного материала
        • 2. 2. 4. 5. Изучение динамики биосинтеза фермента а-ЦГТ-азы бактериями Paenibacillus macerans 1024 на оптимизированной по составу питательной среде
      • 2. 2. 5. Определение физико-химических свойств неочищенной а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans
        • 2. 2. 5. 1. Определение рН-стабильности а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans
    • 2. 2. 5. 2. Определение рН-оптимума а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans
    • 2. 2. 5. 3. Определение температурного оптимума действия а-ЦГТ-азы
  • Paenibacillus sp
    • 2. 2. 5. 4. Определение температурной стабильности а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans
    • 2. 2. 6. Разработка технологии получения ферментного препарата а-ЦГТ-азы Г20Х из культуральной жидкости продуцента Paenibacillus macerans 1АМБ
      • 2. 2. 6. 1. Подбор условий удаления балластных веществ из культуральной жидкости Paenibacillus macerans 1АМБ
      • 2. 2. 6. 2. Разработка условий ультрафильтрации для очистки и концентрирования культуральной жидкости Paenibacillus macerans 1АМБ
      • 2. 2. 6. 2. 1 .Подбор мембраны для проведения процесса ультрафильтрации культуральной жидкости
      • 2. 2. 6. 2. 2. Влияние рабочего давления на процесс ультрафильтрации культуральной жидкости Paenibacillus macerans 1АМБ
      • 2. 2. 6. 2. 3. Влияние степени концентрирования раствора а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ на процесс ультрафильтрации
      • 2. 2. 6. 3. Разработка условий получения осажденного ФП а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ
      • 2. 2. 6. 3. 1.Исследование влияния концентраций различных органических растворителей на выход препарата а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ
      • 2. 2. 6. 3. 2. Влияние различных концентраций этанола (об%) на выход препарата а-ЦГТ-азы из УК
      • 2. 2. 6. 3. 3. Влияние рН на осаждение а-ЦГТ-азы из УК культуральной жидкости Paenibacillus macerans 1АМБ
      • 2. 2. 6. 4. Лиофилизация препарата а-ЦГТ-азы
      • 2. 2. 6. 5. Исследование физико-химических характеристик ФП а-ЦГТ-азы Г20Х
      • 2. 2. 6. 5. 1 Г20Х
      • 2. 2. 6. 5. 2 Г20Х
    • 2. 2.
  • Определение рН-оптимума действия препарата а-ЦГТ-азы
  • Определение рН-стабильности препарата а-ЦГТ-азы
  • Определение температурного оптимума действия препарата а-ЦГТ-азы Г20Х
    • 2. 2. 6. 5. 4. Определение термостабильности препарата а-ЦГТ-азы Г20Х
      • 2. 2. 6. 6. Изучение динамики изменения а-ЦГТ-азной активности в процессе биоконверсии крахмала в а-ЦД
      • 2. 2. 6. 7. Анализ микрофлоры ФП а-ЦГТ-азы Г20Х
      • 2. 2. 7. Разработка хроматографических приемов очистки а-ЦГТ-азы
      • 2. 2. 7. 1. Влияние ионов металлов и этилендиаминтетраацетата на активность а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ
      • 2. 2. 7. 2. Очистка а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ с использованием гидрофобной хроматографии
      • 2. 2. 7. 3. Очистка а-ЦГТ-азы с использованием аффинной хроматографии
      • 2. 2. 7. 4. Изучение свойств а-ЩТ-азыPaenibacillus macerans 1АМБ
      • 2. 2. 7. 4. 1. Определение молекулярной массы фермента
      • 2. 2. 7. 4. 2. Определение аминокислотного состава белка высокоочищенного препарата а-ЦГТ-азы
      • 2. 2. 8. Разработка условий ферментативной конверсии крахмала вальфа-ЦД
      • 2. 2. 8. 1. Исследование поведения 2% растворов крахмала различного типа в процессе термообработки
      • 2. 2. 8. 2. Определение выхода а-ЦЦ из различных видов крахмалов под действием а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ
      • 2. 2. 8. 3. Исследование поведения картофельных крахмалов различных марок в процессе термообработки
      • 2. 2. 8. 4. Выбор метода разжижения для приготовления концентрированных растворов картофельного крахмала
      • 2. 2. 8. 4. 1. Химический гидролиз крахмала
      • 2. 2. 8. 4. 2. Предобработка крахмала ультразвуком
      • 2. 2. 8. 4. 3. Ферментативная предобработка крахмала в биотехнологии ЦД
      • 2. 2. 8. 4. 3.1.Предобработка крахмала ферментными препаратами а-амилаз
      • 2. 2. 8. 4. 3.2. Предобработка крахмала солодовой вытяжкой
      • 2. 2. 8. 4. 3.3. Предобработка крахмала а-ЦГТ-азами
      • 2. 2. 8. 5. Определение выхода а-ЦД из картофельного крахмала, предобработанного различными методами под действием а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ
      • 2. 2. 8. 6. Интенсификация процесса получения ЦД с использованием комплексной предобработки крахмала
      • 2. 2. 8. 6. 1. Последовательная предобработка крахмального клейстера УЗ и а-ЦГТ-азами {Paenibacillus macerans 1024 и Paenibacillus macerans 1АМБ)

      2.2.8.7. Лабораторная двухступенчатая схема получения а-ЦД с использованием УЗ и а-ЦГТ-азы Г10Х Paenibacillus macerans 1024 для предобработки крахмального клейстера и а-ЦГТ-азы Г20Х Paenibacillus macerans 1АМБ для циклизации.

      2.2.9. Получение комплексов включений ароматических веществ с а-ЦД.

      2.2.9.1 Получение комплекса включения а-ЦД с — кристаллическим ванилином.

      2.2.9.2 Получение комплекса включения а-ЦД с эфирным маслом апельсина.

      2.2.10. Апробация комплексов включений ароматообразователей с а-ЦД в технологии помадных конфет.

      2.2.10.1.Приготовление кондитерских изделий по традиционной технологии с применением комплексов включений.

      2.2.10.2. Характеристика кондитерских изделий при хранении.

Актуальность темы

.

Циклодекстрины (ЦД) относятся к классу углеводов, точнее олигосахаридов, получаемых ферментативным путем из крахмала. Являясь представителями одного гомологического ряда, они различаются количеством звеньев глюкозы в макроциклах, и обозначаются буквами греческого алфавитаа, (3, у, 5 и т. д. в сторону увеличения длины кольца.

Для биохимической трансформации крахмала в ЦД используется фермент, циклодекстринглюканотрансфераза (ЦГТ-аза), относящийся к подклассу микробных трансфераз (К.Ф.2.4.1.19), а именно, к циклизующим трансферазам, осуществляющим реакцию переноса и присоединения остатков Сахаров наОН группы других Сахаров.

Молекулы ЦД имеют гидрофильную внешнюю поверхность (обусловливающую хорошую растворимость циклических олигосахаридов в воде) и сквозную гидрофобную полость, по своим размерам сопоставимую с величиной многих органических и неорганических соединений. Последние, попадая в растворы ЦД, проникают в полость, остаются там, удерживаемые силами гидрофобных и других взаимодействий, и меняют свои физико-химические свойства: нерастворимые субстанции становятся растворимыми, обладающие горьким вкусом — безвкусными, пахучие — лишенными запаха, летучие — нелетучими, а нестабильные — стабильными. Вследствие уникального строения ЦД широко используются за рубежом в самых различных отраслях промышленности. В пищевой промышленности они применяются для введения в рецептуры пищевых продуктов витаминов и ароматических веществ, повышая их растворимость в воде.

Среди ведущих компаний на мировом рынке ЦД бесспорное первенство принадлежит китайским, японским (Hayashibara Biochem. Lab., Rikagaku Kenkyusho, Hako Co, Kikkoman Corp. и др.) и американским фирмам (Corn Products Сотр., СРС Intern. Inc., American Maize Techn. Inc., Genetics Inst, и др.) Наиболее дешевым продуктом является бета-ЦД промышленного производства, доступный по ценам от 7 до 25 долларов США за килограмм, а, а — и у-ЦД, имеют себестоимость (и, соответственно, цену) в десятки раз более высокую.

В России производство ЦД отсутствует, поэтому, разработка научно-обоснованных, высокоэффективных биотехнологий ЦГТ-аз и ЦД является актуальной проблемой.

Решению задач получения очищенного микробного ферментного препарата а-ЦГТ-азы, разработки биотехнологии ЦД и комплексов включений на их основе посвящена данная работа.

Цели и задачи исследования.

Основные цели диссертационной работы состояли в разработке технологии ферментного препарата а-ЦГТ-азы Г20Х с использованием штамма-продуцента Paenibacillus macerans 1АМБ, изучении его свойств и интенсификации биотехнологии а-ЦД на его1 основе с последующим получением комплексов включений с ароматическими веществами. Для достижения поставленных целей решались следующие задачи:

— скрининг микроорганизмов-продуцентов ЦГТ-аз, выделенных из природных мест обитания, с целью отбора термостабильного а-ЦГТ-активного штамма. Идентификация штамма-продуцента а-ЦГТ-азы на основании изучения совокупности его культуральных, морфологических, физиолого-биохимических и филогенетических особенностей;

— подбор оптимального состава питательной среды и условий культивирования с целью накопления максимальной активности а-ЦГТ-азы;

— разработка технологии получения ферментного препарата а-ЦГТ-азы Г20Х;

— изучение свойств фермента а-ЦГТ-азы;

— интенсификация биотехнологии а-ЦД;

— получение комплексов включений а-ЦД с ароматическими веществами и апробация полученных комплексов в технологии кондитерских изделий.

Работа выполнялась в рамках государственного контракта с Федеральным Агентством по науке и инновациям от 28 марта 2005 г № 02.434.11.3007 по теме: ЖС-12.4/004 «Ферментные системы и технологии получения цикло-декстринов».

Научная новизна работы.

На основе анализа данных, полученных экспериментальным путем, выявленных зависимостей накопления а-ЦГТ-азной активности штаммом Paenibacillus macerans 1АМБ от условий культивирования, параметров выделения и очистки, разработана технология ферментного препарата а-ЦГТ-зы Г20Х. На основании полученного путем скрининга нового штамма, продуцента термостабильной а-ЦГТ-азы, и экспериментально обоснованных зависимостей выхода а-ЦД от способов предварительной обработки крахмала, усовершенствована биотехнология получения а-ЦД. В результате экспериментально выявленных условий включения веществ в полость а-ЦД, получены комплексы а-ЦД с ароматическими веществами.

Для экспериментального и теоретического обоснования путей создания биотехнологий а-ЦГТ-азы Г20Х, а-ЦД и получения комплексов включений на их основе, было произведено следующее:

— Проведен скрининг микроорганизмов, выделенных из различных видов почв, и получен новый термостабильный (topt = 65°С) штамм продуцент с о максимальной а-ЦГТ-азной активностью 37,0 едЦгА/см .

— На основании изучения совокупности морфологических, культуральных, физиолого-биохимических и филогенетических характеристик исследуемой культуры, новый галофильный штамм, продуцирующий а-ЦГТ-азу, идентифицирован как Paenibacillus macerans 1024.

— В результате изучения физиолого-биохимических особенностей штамма Paenibacillus macerans 1024 определены: оптимальный состав питательной среды и условия культивирования для максимального накопления в культуральной жидкости а-ЦГТ-азы.

— На основании определенных ранее зависимостей накопления а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ в культуральной жидкости и выявления условий сохранения ее активности от параметров всех процессов разработана технологическая схема получения ферментного препарата а-ЦГТ-азы степени очистки Г20Х.

— Изучены свойства а-ЦГТ-азы (термостабильность, рН-стабильность, температурный и рН-оптимумы действия, аминокислотный состав белка, его молекулярная масса).

— В результате изучения поведения различных видов крахмалов в процессе обработки химическими, физическими и ферментативными методами усовершенствована биотехнология а-ЦЦ.

— На основании установленных параметров процессов включения различных веществ в полость а-ЦД разработаны условия получения комплексов включений а-ЦД с кристаллическим ванилином и эфирным маслом апельсина и их применения в технологии кондитерских изделий.

Практическая значимость и реализация результатов работы.

Расширена лабораторная коллекция кафедры «Биотехнология» МГУПП, за счет новых микроорганизмов секретирующих а-, ри у-специфичные ЦГТ-азы. Выделен новый термостабильный штамм продуцент а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1024. Для нового штамма оптимизированы условия процесса культивирования. Разработаны Лабораторный регламент получения а-ЦГТ-азы Г10Х и Технические условия на ферментный препарат а-ЦГТ-азу Г10Х. Осуществлена наработка препаратов а-ЦГТ-аз со степенью очистки 10Х в условиях опытного производства НТЦ «Лекбиотех». Полученные результаты подтверждены актом НТЦ «Лекбиотех».

Разработана технология получения, ферментного препарата а-ЦГТ-азы Г20Х с использованием ранее выделенного штамма Paenibacillus macerans 1АМБ. Разработаны Лабораторный регламент получения а-ЦГТ-азы Г20Х и Технические условия на ферментный препарат а-ЦГТ-азу Г20Х. Осуществлена наработка препаратов а-ЦГТ-аз со степенью очистки 20Х в условиях опытных производств НТЦ «Лекбиотех» и ОАО «Биохиммаш». Полученные результаты подтверждены актами НТЦ «Лекбиотех» и ОАО «Биохиммаш».

Усовершенствована биотехнология а-ЦД. Разработаны Технические условия на а-ЦД. Получена опытная партия препарата а-ЦД в условиях опытного производства НТЦ «Лекбиотех» (результаты подтверждены актом).

Разработаны Технические условия на комплексы включения а-ЦД с кристаллическим ванилином и эфирным маслом апельсина. Комплексы включения успешно прошли апробацию при изготовлении опытных партий кондитерских изделий на кафедре «Технология кондитерского производства» МГУПП. Полученные результаты подтверждены актом о приготовлении кондитерских изделий с добавлением в рецептуры комплексов включений.

Штамм бактерий Paenibacillus macerans 1АМБ — продуцент а-ЦГТ-азы, защищен патентом РФ № 2 303 062.

Проведен расчет экономической эффективности разработанных технологий а-ЦГТ-азы Г20Х и а-ЦД, который показал, что оптовая цена ферментного препарата находится на уровне мировых рыночных цен и1 составляет 1039,1 рублей за 1 кг. Цена а-ЦД при этом составила 656,6 рублей за 1 кг.

Апробация работы.

Основные положения работы докладывались на Российских и международных конференциях и симпозиумах: Всероссийской научно-технической выставке-конференции «Высокоэффективные пищевые технологии, методы и средства для их реализации» (Москва, 2005) — на Третьем международном симпозиуме «Микробные биокатализаторы и перспективы развития ферментных технологий в перерабатывающих отраслях АПК» (Москва, 2006) — V юбилейной школе-конференции с международным участием «Высокоэффективные пищевые технологии, методы и средства для их реализации» (Москва, 2007) — на Международной научно-практической конференции «Биотехнология. Вода и пищевые продукты» в рамках московского международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2008).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 13 работ, в том числе 1 патент РФ, где отражены основные положения диссертации.

Структура и объем диссертации

.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, библиографического списка, включающего 208 наименований, 13 приложений. Работа изложена на 221 странице компьютерного текста, включает 56 рисунков и 42 таблицы.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ:

1. Проведенный скрининг микроорганизмов, выделенных из природных источников, позволил отобрать новый термостабильный штамм 1024 с а-ЦГТ-азной активностью 37,0 едЦгА/см .

2. Изучение совокупности морфологических, культуральных, физиолого-биохимических характеристик исследуемого микроорганизма, подтвердило отношение галофильного бактериального штамма-продуцента а-ЦГТ-азы, к роду Paenibacillus виду macerans.

3. Проведен сиквенс 16S ribosomal RNA и построено филогенетическое дерево, с точностью 97% подтверждающее идентификацию бактериального штамма 1024 как Paenibacillus macerans 1024. :

4. На основании анализа экспериментальных данных сконструирован оптимальный состав питательной среды и подобраны условия культивирования, обеспечивающие максимальное накопление фермента термостабильной а-ЦГТ-азы штаммом Paenibacillus macerans 1024 в лабораторных условиях.

5. Разработаны оптимальные условия выделения и очистки а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ: методом ультрафильтрации с использованием мембраны УПМ-20 фирмы «Владипор" — осаждением этанолом (соотношение объемов 75% этанол: УК = 4:1).

6. На основе разработанного Лабораторного регламента проведена наработка препаратов а-ЦГТ-азы Г10Х штамма, Paenibacillus macerans 1024 с активностью 2550 едЦгА/г (оптимум действия препарата: рН 6,2- t = 65° С) в условиях опытного производства НТЦ «Лекбиотех». Полученные результаты подтверждены актом НТЦ «Лекбиотех». Составлен проект Технических условий на ФП а-ЦГТ-аза Г10Х штамма Paenibacillus macerans 1024.

7. На основе разработанного Лабораторного регламента проведена наработка препаратов а-ЦГТ-азы Г20Х штамма Paenibacillus macerans 1АМБ с активностью 3040 едЦгА/г (оптимум действия препарата: рН 6,2- t 40° С) в условиях опытных производств НТЦ «Лекбиотех» и ОАО «Биохиммаш». Полученные результаты подтверждены актами НТЦ «Лекбиотех» и ОАО «Биохиммаш». Составлен проект Технических условий на ФП а-ЦГТ-аза Г20Х штамма Paenibacillus macerans 1АМБ.

8. Изучены свойства фермента а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ (термои рН-стабильность, рНи температурный оптимумы действия), определены аминокислотный состав и молекулярная масса фермента’а-ЦГТ-азы (36 к Да).

9. Опытным путем определены оптимальные условия ферментативной биотрансформации крахмала в а-ЦД, обеспечивающие увеличение выхода целевого продукта на 50−60% по сравнению с непредобработанным сырьем (в качестве субстрата целесообразно использовать раствор крахмального клейстера, предобработанный последовательно с помощью УЗ и а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1024- синтез а-ЦД следует вести с использованием а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ). Составлены Технические условия на а-ЦД, произведена наработка препарата а-ЦД в условиях опытного производства НТЦ «Лекбиотех» (полученные результаты подтверждены актом).

10. Разработаны условия, согласно которым наработаны комплексы включения а-ЦД с кристаллическим ванилином и эфирным маслом апельсина, успешно прошедшие апробацию на кафедре «Технология кондитерского производства» МГУ 1111 при изготовлении помадных конфет. Полученные результаты подтверждены актом.

Показать весь текст

Список литературы

  1. РОСТ 12 575−86 Сахар. Методы определения редуцирующих веществ.
  2. ГОСТ 16 599–71 Ванилин. Технические условия.
  3. ГОСТ 20 264.1−89 Препараты ферментные. Методы определения органолептических, физико-химических и микробиологических показателей.
  4. ГОСТ 4570–93 Конфеты. Общие технические условия.
  5. В.А. Циклодекстрины: Получение и применение.- Ереван: Изд. Дом «Ван-Арьян», 2001.- 519 с.
  6. Авторское свидетельство SU 1 738 852 А1. Штамм бактерий Bacillus sp. -продуцент бета-циклодекстринтрансферазы. Усанов Н. Г., Логинов О. Н., Мелентьев А. И., 1990.
  7. Авторское свидетельство SU 18 143 313. Штамм бактерий Bacillus stearothermophilus продуцент циклодекстрингликозилтрансферазы и способ получения альфа-циклодекстрина. Абелян В. А. и др., 1989.
  8. Авторское свидетельство РФ 2 244 742. Метод выделения и селекции микроорганизмов-продуцентов циклодекстринглюканотрансфераз, штамм продуцент Bacillus circulans В-65, 2005.
  9. В.В., Кантере В. М. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза. М.: Наука, 1985.- 196 с.
  10. А.А. Матриксная функция биологических мембран.// Соросовский образовательный журнал, 2001, № 7, с. 2−8.
  11. П.Бутова С. Н., Типисева И. А., Эль-Регистан Г. И. Теоретические основы биотехнологии. Биохимические основы синтеза биологически активных веществ. М.:Элевар, 2003. — 554с.
  12. Р. А., Пейпман Э. М. Биосинтез и применение циклодекстринглюканотрансферазы.//В. кн.: Биосинтез ферментовмикроорганизмами. Тезисы докладов 4 всесоюзной конференции.-Ташкент, 1988.- с. 187−188.
  13. Д. А. Получение и изучение свойств высокоочищенной циклодекстринглюканотрансферазы из Bacillus sp.1070,модифицированных Р-циклодекстринов и комплексов включения на их основе.-Дисс.1санд.тех.наук.-М.:МГУПП, 2000.-100с.
  14. М.Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применения. М. :МИР, 2002. — 590с.
  15. Н.Б., Бабусенко Е. С., Горнова И. Б. Лабораторный практикум по общей микробиологии. -М.:ДеЛи принт, 2004. 144с.
  16. Ю.П., Плаксин Ю. М. Математические методы планиерования экспериментов. -М.: ДеЛи принт, 2005.- 296 с.
  17. И.М., Грачев Ю. П., Мосичев М. С. и др. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов.-М.:Легкая и пищевая промышленность, 1982.-240с.
  18. И.М., Кривова А. Ю. Технология ферментных препаратов.-М.: Элевар, 2000.-512 с.
  19. .В. Поведение бактерий.//Соросовский образовательный журнал, 1997, № 6.- с. 28−32.
  20. М.В., Минеева Л. А. Микробиология. Учебник для студ. Биол. специальностей вузов. 4-е изд., стер. — М.:Издательский центр «Академия», 2003. — 464с.
  21. Д.Г. Функциональная морфология клетки. Учебное пособие. — М.:Книжный дом «Университет», 2005. 320с.
  22. Г. Г. О числе пар объектов, связанных отношением Парето-доминирования //Институт системного анализа РАН. Электронный журнал «Исследовано в России», 2000.
  23. Т.Г. Структура бактериальных сообществ почв.- М.: Книжный дом «Университет», 2002.
  24. Р., Элиот Д. и др. Справочник биохимика. -М.:МИР- 1991. 543с.
  25. Л.А., Войно Л1И. Методические рекомендации к проведению лабораторных работ по технологии белковых препаратов, аминокислот и липидов.- М.: Издательский комплекс МГУ1111, 1985. 42 с.
  26. Л.А., Войно Л. И. и др. Методические рекомендации к проведению лабораторных работ по дисциплине «Технология биоконверсии растительного сырья». — М. гИздательский комплекс МГУПП, 2002. -66с.
  27. Л.А. и др. Ферментные системы и технологии получения циклодекстринов.//В мире науки, 2006, № 11, с. 37−41.
  28. О.В. Ферменты в производстве пищи и кормов. — М.:ДеЛи принт, 2002. — 336с.
  29. Д.Г., Мызина С. Д. Биологическая химия. М.:Высшая школа. 2000. — 479с.
  30. В.П., Шведова В. Н. Биохимия: Учебник для ВУЗов. — М.:Дрофа, 2004. 640с.
  31. Е.В., Гаврилин М. В., Ботезат-Белый Ю.К. и др. Исследование взаимодействия циклодекстринов с кортексонолом.//Хим.-фарм., 1990, т.2, с.81−82. ,
  32. Т. В. Разработка технологии ферментативного синтеза циклодекстринов. -Дисс. канд. тех. наук.- М., 1991. 160 с.
  33. В.Н. Получение и исследование соединения включения облепихового масла с бета-циклодекстрином.//Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2004, № 2, с.222−224.
  34. Е.Е. Разработка технологии высокоочищенной цикло-декстринглюканотрансферазы из Bacillus macerans 506.- Дисс. канд. тех. Наук.-М.:МГУПП, 1990.-181 с.
  35. О. Н. Физиолого-биохимические свойства представителей вида Bacillus macerans продуцентов циклодекстринглюканотрансфераз. Дисс. канд. биол. наук.- Киев, 1991.- 106 с.
  36. С.А., Варламов В. П., Рогожин С. В. Хроматографическое изучение участков связывания микробных рибонуклеаз с хелатированными ионами металлов.//Биотехнология, 1989, Т. 5(2).- с 183 188.
  37. С.А., Варламов В. П., Даванков В. А. Лигандообменная хроматография белков и ферментов.//Биоорганическая химия, 1990, Т. 16(6).-с 725−750.
  38. М.С., Складнев А. А., Котов В. Б. Общая технология микробиологических производств. — М. .'Легкая пищевая промышленность, 1982. 264с.
  39. В.А. Методические указания к выполнению курсового проекта на тему «Основные вопросы организации производства и планирования на предприятиях микробиологической промышленности» М: Издательский комплекс МГУПП, 1998.-18 с.
  40. Определитель бактерий Берджи./ под ред. Дж. Хоулта и др. 9-е изд. В 2-х томах. -М.: МИР, 1997.48.0стерман Л.А. Хроматография> белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985.-536 с.
  41. И.Г., Герасимов В. И., Топчиева И. Н. Структурообразование в системе а-циклодекстрин-полиэтиленоксид-вода.//ВМС сер. Б, Т.40(10), 1998, с. 1681−1686.
  42. К.Э., Дихтярев С. И., Сугробова Н. П. Особенности получения ЦД и образование комплексов включения. В кн.: Итоги науки и техники, сер. Микробиология. Циклодекстрины.- М., 1988, 21, с. 74−12 751 .Патент РФ № 2 244 742, кл С 12 N 1/20, 2000.
  43. Патент США № 6 184 001. Thermostable cyclodextrin glycosyl transferase and processes using it, 2001.
  44. Патент США № 6 472 192. Cyclodextrin glycosyl transferases for producing gamma-cyclodextrin, 2002.
  45. Патент США № 6 960 461. Gene coding for cyclodextrin glucanotransferase chiefly producing gamma -cyclodextrin and use thereof, 2005.
  46. Патент США № 6 924 136. Cyclodextrin glucanotransferase and its method of manufacture, 2005.
  47. Патент США № 6 780 624 B2. Glycosyl transferases for biosynthesis of oligosacchari-des, and genes encoding them, 2004.
  48. Патент США № 6 777 215 B2. Cyclomaltodextrin glucano-transferase variants, 2004.
  49. Патент США № 6 570 009. Region-selective method for preparing cyclodextrin C-6 monosulphonyl derivatives, 2003.
  50. Патент США № 6 482 622. Amylolytic enzyme variants, 2002.
  51. Патент ВОИС № 01/90 335. Nouvelle cyclodextrine glucanotransferase, tprocede de production de celle-ciet procede de production de cyclodextrine au moyen de cette enzyme, 2001.
  52. Патент ВОИС № 03/106 502. Procede de production de dextrines au mouen d’enzymes, 2003.
  53. А. Ю. Разработка биокаталитических процессов получения у-аминомасляной кислоты и (3-циклодекстрина. -Дисс. канд. тех. наук.-М., 1997.-111 с.
  54. Г. В., Чередниченко B.C., Римарева JI.B. Определение активности ферментов. Справочник. М.:ДеЛи принт, 2003. — 375с.
  55. Е.А., Терехова Е. Я., Усанов Н. Г. Измерение ферментативной активности ЦГТ-азы, К.Ф. 2.4.1.19.// Изучение и рациональное использование природных ресурсов. Тезисы докладов научной конференции.-Уфа, 1991.-е.108.
  56. .Н., Пожарская В. О., Казиев А. Х. Общая микробиология свирусологией и иммунологией (в графическом изображении). Учебное пособие. М.:Тонада — X, 2002. — 352с.
  57. Рис Э., Стернберг М. Введение в молекулярную биологию. М.:МИР, 2002. — 142с.
  58. А.С. Циклодекстрины — полифункциональные пищевые добавки. Кемерово: КТИПП, 1999.-147с.
  59. Т.П. «Лабораторный практикум по микробиологии пищевых прозводств». -М.: Легкая и пищевая пром., 1984.-208с.
  60. И.В., Кречетникова А. Н. Применение ультразвука в спиртовой1 промышленности.//Производство спирта и ликероводочных изделий.№ 2, 2004: — с.37−38.
  61. Сто лет хроматографии.-М.:Наука, 2003.-744с.
  62. С.С. Выделение продуцента альфа-специфичной циклодекстринглюканотрансферазы из природных источников и разработка технологии ферментного препарата на его основе. Дис.канд. тех. наук. — М.: МГУПП, 2006.- 218 с. '
  63. С.Н.Сычев, В. А. Гаврилина, Р. С. Музалевская. Высокоэффективная жидкостная хроматография как метод определения фальсификации и безопасности продукции. -М.:Де Ли принт, 2005.-148с.
  64. Е. Я. Выделение продуцентов бета-специфичной циклодекстринглюканотрансферазы и получение ферментных препаратов на их основе. -Дисс. канд. тех. наук.-Уфа, 1999. 110 с.
  65. Е.З., Шильникова В. К., Переверзева Г. И. Практикум по микробиологии: Учебное пособие для ВУЗов. М.:Дрофа, 2004. — 256с.
  66. Ю.А., Иванова Л. А., Кривова А. Ю. Методические указания к выполнению лабораторных работ по курсу «Специальная биохимия». -М.: Издательский комплекс МГУПП, 1993.- 66 с.
  67. Н.Г., Гильванова Е. А., Елизарьев Е. А., Мелентьев А. И. Новыйциклодекстрин-продуцирующий, штамм Paenibacillus campinasensis IB-417.//Ферменты микроорганизмов: структура, функция, применение: f
  68. Сборник докладов XIII международ, конф. 4−8 апреля, 2005, Казань. — с. I87.88.
  69. Н.Г., Логинов О. Н., Пруцакова Е. А., Терехова Е. Я. Получение бета-ЦД из картофельного крахмала./ Тезисы докладов Всесоюзной конференции. -Черновцы, 1991-т. 1-е. 122. а
  70. Н.Г., Е.А. Гильванова, П.А. Елизарьев, Е.А. Пруцакова, А. И. Мелентьев. Усовершенствованный метод фотометрического определения активности бета-циклодекстринглюканотрансферазы.// «Прикладная биохимия и микробиология», 2006.-C.21−25.
  71. Н.Г. «Цикл о декстрины: биотехнология и применение» В кн.: «Биотехнология биологически активных веществ». /Под редакцией д.б.н., проф. МГУПП И. М. Грачевой и д.т.н., проф. МГУПП Л. А. Ивановой. -М., изд. НПО «Элевар», 2006. с.89−121.
  72. Дж., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки. М.:Бином 2003. -268с.
  73. Циклодекстрины / Под ред. Егорова Н. С.- Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Серия Микробиология. 1988−1989. — Т. 20−21.
  74. Э.А., Войно Л. И. Методические рекомендации к выполнениюсамостоятельной работы по курсовому и дипломному проектированию1 t предприятий биотехнологической' промышленности. Ч.1.-М.:
  75. Издательский комплекс МГУПП, 2003.- 47 с.
  76. Г. Общая микробиология. -М.:МИР, 1987. 566с. t
  77. А.А. Циклодекстрины/ ЖВХО им. Менделеева, 1985, № 5.- с. 34−38.
  78. В.Г. Биохимия: Учебник для ВУЗов. СП.б.:ГИОРД, 2003. -438с.
  79. Borem Aluizio, Santos R. Fabricio, Bowen E. David. Understanding Biotechnology.//Prentice Hall PTR- US Ed edition. 2003. 220p.90:Anslyn V. Eric, Dennis A. Dougherty. Modern Physical Organic Chemistry.//University Science, 2005. ISBN 1−89 138−931−9.
  80. Bains William Biotechnology from A to Z.//Oxford University Press, USA- 3 edition. 2004. 424p.
  81. Basic Biotechnology/ Colin Ratledge (Editor), Bjorn. Kristiansen (Editor)// Cambridge University Press, 2006.
  82. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology. Vol. 1: The Archaea and the Deeply Branching and Phototrophic Bacteria. / George M. Garrity (Editor), David R. Boone (Editor)/ Springer- 2 edition, 2001, 721 p.
  83. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology, Vol. 2 (Parts А, В & С- Three-Volume Set) / George M. Garrity (Editor)/ Springer- 2 edition, 2005, 2816p.
  84. Biotechnology The Science and the Business. / Derek G. Springham (Editor), Vivian Moses (Editor), Ronald E. Cape (Editor)/ CRC, 1999.
  85. Biwer A., Antranikian G., Heinzle E. Mini-Review Enzymatic production of cyclodextrins.//Appl. Microbiol. Biotechnol., 2002 Vol.59 p.609−617.
  86. Bovetto L. J., Backer D. P., Villette J. R. et, al. Cyclomaltodextrin Glycosyltransferase from Bacillus circulans E 192. // Biotechnol. Appl. Biochem, 1992, V. 15, P. 48−58.
  87. Bron, S., Meijer, W., Holsappel, S., Haima, P. Plasmid instability and molecular cloning kbBacillus subtilis.//Res.Microbiol., 1992, V.142, p.875−883.
  88. Buschmann. H.-J., Knittel D., Schollmeyer. E. New Textile Applications of Cyclodextrins.//Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry, 2001, Vol.40 p. 169−172.
  89. Copeland R.A. Enzymes: A Practical Introduction to Structure, Mechanism, and Data Analysis. //Wiley-VCH, 2000, ISBN 0−47 135−929−7.
  90. Cyclodextrins and Their Complexes: Chemistry, Analytical Methods, Applications. / Helena Dodziuk (Editor)/ John Wiley & Sons, 2006, ISBN 352 731−280−3.
  91. De Pinto J. A, Campbell L. L. Purification and properties of the amylase of Bacillus macerans. // Biochemistry, 1968, V. 7, P. 114−120.
  92. Deb. K. Multi-Objective Optimization Using Evolutionary Algorithms./ John Wiley, 2001.
  93. Easton J. Christopher, Lincoln F. Stephen. Modified Cyclodextrins: Scaffolds and Templates for Supramolecular Chemistry.// World Scientific Publishing Company, 1999, ISBN 1−86 094−144−3.
  94. Egghe L., Rousseau R. A. Proposal to Define a Core of a Scientific Subject: A Definition Using Concentration and Fuzzy Sets. // Scientometrics. Vol'.54, No. l, 2002.-P.51−62.
  95. Ehrlich, S.D. Replication and expression from Staphylococcus aureus in Bacillus subtilis. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA74, 1977.-p. 1680−1682.
  96. Ehrlich, S.D., Janniere L., Gruss A. Plasmid replication and structural stability in Bacillus subtilis. // Res. Microbiol., 1992, V.142,p. 869−873.
  97. Felsenstein J. An alternating least squares approach to inferring phylogenies from pairwisedistances. //Syst Biol., 1998, V. 46, p. 101−111.
  98. Fijiwara S., Kakihara H., Sakagichi K. et. al. Analysis mutation in cyclodextrin glucanotransferase form Bacillus stearothermophilus which affect cyclization characteristics and thermostability. //J. Bacteriol. 1992, V. 174, P. 7478−7481.
  99. Fogarty W. M. Microbial amylases. //Microbial Enzymes and Biotechnology /Applied Science Publishers, Essex, U.K., 1983, P. 1−92.
  100. Fromming K., Szejtli J. Cyclodextrins in Pharmacy (Topics in Inclusion Science) / Springer, 2006, ISBN 0−79 232−139−1.
  101. Fuwa, H.//J. Biochem (Tokyo), 1954. V.41. — P. 5.
  102. Garces J.A., Gavin R.H. Using an inverse PCR strategy to clone large, contiguous genomic DNA fragments. //Methods Mol. Biol., 2001, V.161, p.3−8.
  103. Glick Bernard R., Pasternak Jack J. Molecular Biotechnology: Principles and Applications of Recombinant DNA.//ASM Press- 3rd edition, 2003. 760p.
  104. Gryczan T.J., Dubnau D. Construction and properties of chimeric plasmids in Bacillus subtilis. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75, 1978.-p. 1428−1432.
  105. Guerout-Fleury M., Frandsen N., Stragier P. Plasmids for ectopic integration' in Bacillus subtilis. //Gene, 1996, v. 180- p.57—61.
  106. Jamuna R., Saswathi N., Sheela R. et. al. Synthesis of cyclodextrin glycosyl transferase by Bacillus cereus for the production of cyclodextrins. // Appl. Biocem Biotechnol. 1993, V. 43, P. 163−176.
  107. Janecek S. Tracing the evolutionary lineages among a- amylases and cyclodextrin glycosytransferases: the question of so-called 'intermediary' enzymes.//Biologia (Bratislava), 1995, 50: 515−522.
  108. Janecek S. a-Amylase family: molecular biology and evolution.// Prog. Biophys. Mol. Biol., 1997, 67: 67−97.
  109. Janecek S. Structural features and evolutionary relationships in the a-amylase family. /Glycoenzymes, 2000, p. 19−54.
  110. Jorgensen S., Tangney M., Starnes RL. Cloning and nucleotide sequence of a thermostable cyclodextrin glycosyltransferase gene from Thermoanaerobacter sp. ATCC 53 627 and its expression in Escherichia coli.// Biotechnol. Lett'., 1997, 19: 1027−1030.
  111. Hall B. Phylogenetic Trees Made Easy: A How-To Manual, Second Edition.//Sinauer Associates, Inc., 2004, 22 lp.
  112. Hennig W., Davis D., Zangerl R. Phylogenetic Systematics. University of Illinois Press- New Ed edition, 1999, 280p.
  113. Horikoshi K. Enzymology and molecular genetics of cyclodextrin-forming enzymes. — In: 4th International Symposium on Cyclodextrins, Munich, 1988, p.7−17.
  114. Horikoshi K., Nakamura N., Matzuzawa N., Yamamoto M. Industrial production of cyclodextrins. In: 1st International Symposium on Cyclodextrins, Budapest, 1981, p.25−39.
  115. Hartl, В., Wehrl, W., Wiegert, Т., Homuth, G., Schumann, W. Development of a new integration site within the Bacillus subtilis chromosome andconstruction of compatible expression cassettes.// J. Bacterid., 2001, 183, 2696−2699.
  116. Kim S.H., Ahn J., Kwak H.S., Handbook of Glycosyltransferases and Related Genes. // Springer, 2002.
  117. Kitahata S., Okada S. Action of cyclodextrin glucanotransferase from Bacillus megaterium strain No 5 on starch.// Agr. Biol. Chem., 1974, v.38, N 12, p.2413−2417.
  118. Kitahata S., Tsuyama N., Okada S. Purification and some properties of cyclodextrin glycanotransferase from Bacillus stearothermophillus TC-60. J. Jap. Soc. Starch Sci., 1982., v. 29, N 1, p. 7−12.
  119. Kobayashi S., Kainuma K., Suzuki S. Purification and some properties of Bacillus macerans cycloamylose (cyclodextrin) glucanotransferase./ Carbohydr. Res., 1978, V. 61., N1., P. 229−238.
  120. Koizumi K., Utamura Т., Kuroyanagi T. Analyses of branched cyclodextrins by high performance liquid and yhin-layer chromatography. J.Chromatogr. (1986) v.360, p.397−406.
  121. Koneman Elmer W. Koneman’s Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. Lippincott Williams & Wilkins- 6th edition, 2005. 1736p.
  122. Kenton S, Lai HS, Lin SP, Qian Y, Jia HG, Najar FZ, Ren Q, Zhu H, Song L, White J, Yuan X, Clifton SW, Roe В A, McLaughlin R (2001) Complete genome sequence of an Ml strain of Streptococcus pyogenes. Proc Natl Acad Sci USA 98:4658−4663.
  123. Kimura К., Takano Т., Yamane K. Molecular cloning of the p-cyclodextrin synthetase gene from an alkalophilic Bacillus and its expression in Escherichia coli and Bacillus subtilis. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1987. — V.26, N 2. -P.149−153.
  124. Kitahata S., Okada S. Action of cyclodextrin glucanotransferase from Bacillus megaterium strain No 5 on starch.// Agr. Biol. Chem., 1974, v.38, N 12, p.2413−2417.
  125. Kitahata S., Tsuyama N., Okada S. Purification and some properties of cyclodextrin glycosyltransferase from strain of Bacillus species. // Agr. -Biol. Chem., 1974, v.38, N 2, p.387−393.
  126. Kobayashi S., Kainuma K., Suzuki S. Purification and some properties of Bacillus macerans cycloamylose (cyclodextrin) glucanotransferase./ Carbohydr. Res., 1978, V. 61., N1., P. 229−238.
  127. Kotz S., Balakrishnan N., Norman L. Johnson Continuous Multivariate Distributions, Volume 1, Models and Applications, end Edition. / Wiley, June 2000, ISBN: 0−471−18 387−3.
  128. Kwak H.S., Kim S.H., Kim J.H., Choi H.J., Kang J. CD’s.// Arch. Pharm. Res., 27, 873−877, 2004.
  129. Kwak H.S., Jung C.S., Shim S.Y., Ahn J., J. Some properties of cyclodextrin.//Agric. Food Chem., 50, 7293−7298, 2002.
  130. Larichev O.I. Measurement of Differences in Preferences Expressed by a Simple Additive Rule. / in M. Katwan, J. Sprouk, J. Wallenius (Eds.) /Essays in Decision Making, Springer Verlas.- Berlin, 1997.
  131. Lane A.G., Pirt S.J. Production of cyclodextrin glycosyltransferase of batch and chemostat culture of Bacillus macerans in chemically defined media. // J. Appl. Chem. Biotechnol., 1973, v.23, N 4, p.309−321.
  132. Larsen K.L. et. al: Purification andchsrscterisation of cyclodextrin glycosyltransferase from Paenibacillus sp. F8// Carbohydr. Pi.es., 1998, V.310,P.211−219. ,
  133. Manual of Industrial Microbiology and Biotechnology / editorsin chief, Arnold L. Demain, Julian E. Davies /ASM Press, 2001.
  134. Makela J. Mauri, Korpela K. Timo, Puisto Juhani, and Laakso V. Simo Nonchromatographic cyclodextrin assays: evaluation .of sensitivity, specificity, and conversion mixture applications.// J. Agric. Food Chem. 1988/Vol. 36 pp 83−88.
  135. Martin Del Valle E.M. Cyclodextrins and their uses: a review. //Process Biochemistry, 2004, v.39, p. 1033−1046.
  136. Middleton, R., Hofmeister, A. New shuttle vectors for ectopic insertion of genes into Bacillus subtilis. //Plasmid, 2004.- 51, 238−245.
  137. MacGregor EA, Janecek S, Svensson B' Relationship of sequence and: structure to specificity in the a-amylase family of enzymes.// Biochim. Biophys., 2001, Acta 1546: 1−20:
  138. Methods in Enzymology, Volume 358: Bacterial Pathogenesis, Part C: Identification, Regulation and Function of Virulence Factors (Methods in
  139. Enzymology) / Virginia L. Clark (Editor), Patrik M. Bavoil (Editor)/ Academic Press, 2002, 527p.
  140. Micro-organisms and Earth Systems (Society for General Microbiology Symposia) / Hilary Lappin-Scott (Editor), Geoff Gadd (Editor), Kirk Semple (Editor)/ Cambridge University Press, 2005, 388p.
  141. Molecular Identification, Systematics, and Population Structure of Prokaryotes./Erko Stackebrandt (Editor)/ Springer- 1 edition, 2005, 320p.
  142. Nakamura N., Horikoshi K. Characterization and some cultural conditions of a cyclodextrin glycosyltransferase-producing alcalophilic Bacillus species.//Agr. Biol. Chem., 1976, V. 40, N 4, P. 753−757.s
  143. Nomoto M., Chen Ch.-Ch., Shen D. Purification and characterization of cyclodextrin glucanotransferase from an alkalophilic bacterium of Taiwan. // Agr. Biol. Chem., 1986, v.50, N11, p.2701−2707.
  144. Nomoto M., Shew D.C., Chen S.J. et al. Cyclodextrin glucanotransferase from alkalophilic bacteria of Taiwan. // Agr. Biol. Chem., 1984, v.48, N 5, p.1337−1'338.
  145. Nakamura N., Horikoshi K. Purification and properties of Cyclodextrin Glycosyltransferase of an Alkaiophilic Bacillus sp.// Agric. Biol. Chem., 1976, V/40, (5), P.145−153.
  146. Nishijo J., Moriyama S., Shiota S., Chem. Pharm. Bull. (Tokio)., 51, 12 531 257,2003.
  147. Nomoto M., Chen Ch.-Ch., Shen D. Purification and characterization of cyclodextrin glucanotransferase from an alkalophilic bacterium of Taiwan. // Agr. Biol. Chem., 1986, v.50, N 11, p.2701−2707.
  148. Nomoto M., Shew D.C., Chen S.J. et al. Cyclodextrin glucanotransferase from alkalophilic bacteria of Taiwan. // Agr. Biol. Chem., 1984, v.48, N 5, p.1337−1338.
  149. Penninga D., Strokopytov В., Rozeboom H. L. et al. Site-Directed
  150. Mutation in Tyrosine 195 of Cyclodextrin Glycosyltransferase from Bacilluscirculans strain 251 Affect Activity and Product Specifisity. // Biochemistry. t1995, V. 34-P. 3368−3376.у
  151. Penninga D, van der Veen В A, Knegtel RMA, van Hijum SAFT, Rozeboom5
  152. HJ, Kalk KH, Dijkstra BW, Dijkhuizen L. The raw starch binding domain of cyclodextrin glycosyltransferasefrom Bacillus circulans strain 251.// J. Biol. Chem., 1996, 271: 32 777−32 784.
  153. Pongswasdi P., Yagisawa M. Purification and some properties of cyclomaltodextrin glucanotransferase. // Agr. Biol. Chem., 1988, v.52, N 5, p.1099−1103.
  154. Prescott Lansing M., Harley John P., Klein Donald A. Microbiology. McGraw./ZHill Science/Engineering/Math- 6 edition, 2004. 992p.
  155. Proceedings of the Ninth International Symposium on Cyclodextrins, Santiago de Compostela, Spain, May 31 June 3, 1998, J.J. Torres Labandeira and J.L. Vila-Jato (Eds.). // Kluwer Academic Publishers, 1999.
  156. Qi< Q., Zimmermann W. Cyclodextrin glucanotransferase: from gene to applications. // Appl. Microbiol. Biotechnol, 2005, 475−485.
  157. Ramakrishna S. V., Saswathi H., Sheela et al. Evaluation of solid, slurry and submerged fermentations for the production of cyclodextrin glycosyltransferase by Bacillus cereus //Enzyme Microb, Technol., 1994, V. 16, P. 441−444.
  158. Saito Y. et al.: Cyclodextrins in Chromatography. //Anal. Bioanal. Chem., 2004, v.379, p.6−7.
  159. Schmiedel, D., Hillen, W., A Bacillus subtilis 168 mutant with increased xylose uptake can utilize xylose as sole carbon source./ FEMS Microbiol. Lett., 1996, 135, 175−178.
  160. Schulz, A., Schwab, S., Versteeg, S., Schumann, W. The htpG gene ofi
  161. Bacillus subtilis belongs to class III heat shock genes and is under negative control.//J. Bacteriol., 1997, 10, 3103−3109.
  162. Schwimmer S., Garibaldi J.A. Further studies on the production, purification and properties of the Schardinger dextrintransferase of Bacillus macerans.// Cereal Chem., 1952, v.29, N 2, p.108−122.
  163. Seo Т., Kajihara Т., Iijima T.//Macromol. Chem., 188, 2071−2075, 1987.
  164. Shimotsu, H., Henner, D.J. Construction of a single-copy integration vector and its use in analysis of regulation of the trp operon of Bacillus subtilis.// Gene, 1986,43, 85−94.
  165. Shim S.Y., Ahn J., Kwak H.S., J. Dairy Science., 86, 2767−2772, 2003.
  166. Simon, D., Chopin, A. Construction of a vector plasmid family and its use formolecular cloning in Streptococcus lactis. lfQiochimiQ, 1988, 70, 559—566.i ¦
  167. Singh M., Sharma R., U.C. Banerjee Research review paper Biotechnological applications of cyclodextrins.//Biotechnology Advances, 2004, Vol.20 p.341−359 180:Suh J., Lee S.H., Zoh K.D. (3-cyclodextrin. //J. Am. Chem. Soc., 114, 79 167 921, 1992.
  168. Sumitra Т., Hidetoshi A., Fumitoshi H. Some pharmaceutical properties of new branched cyclodextrin 6−0-a (4−0-a-D-glucuronyl)-D-glucosil-P-CD.//Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry, 2002, 44, p. 391−394.
  169. Schmid G. Cyclodextrin glycosyltransferase production: yield enhancement by overexpression of cloned genes. // Trends Biotechnol. 1989. — V.7, N 9. — P. 244−248.
  170. Schwimmer, S. Evidence for the purity of Schardinger dextrinogenase.// Arch. Biochem. Biophys. 43 (1953) 108−117.
  171. Sicard P., Sanies M. Biosynthesis of cyclodextrin glycosyltransferase and obtention of its enzymic reaction products. In: Cyclodextrins and Their Industrial Uses.- Paris, 1987, p.75−103.
  172. Silva A.C. da, Ferro J.A., Reinach F.C., et al. Comparison of the genomes of two Xanthomonas pathogens with differing host specificities.// Nature, 2002, 417:459−463.
  173. Stanbury P.F., A. Whitaker, S. J: Hall. Principles of Fermentation Technology. //Butterworth-Heinemann, 1999.
  174. Svensson B. Protein* engineering in the a-amylase family: catalytic mechanism, substrate1 specificity, and stability.// Plant Mol. Biol., 1996, 25: 141−157.
  175. Szejtli J. Cyclodextrins and their inclusion complexes. Akademiai Kiado. Budapest. 1982.
  176. Szente L., Szejtli J. Cyclodextrins as food ingredients. Trends in Food Science & Technology (2004), vl5, p.137−142.
  177. Szeitli J. Cyclodextrins in the Textile Industry.// Starch/Starke (2003) v.55 p.191−196.
  178. Szeitli J. Cyclodextrin technology. //Kluwer academic publishers, 1989. 450 P
  179. Tamer, Uyar. Nanostructuring polymers with cyclodextrins ~ Dissertation // ProQuest / UMI (April 1, 2006), ISBN 0−54 238−965−7.
  180. Takano T, Fukuda M, Monma M, Kobayashi S, Kainuma K, Yamane К Molecular cloning, DNA nucleotide sequencing, and expression in Bacillus subtilis cells of the Bacillus macerans cyclodextrin glucanotransferase gene.// J Bacteriol, 1986, 1118- 1122.
  181. Tilden E.B., Hudson C.S. The conversion of starch of crystalline dextrins byithe action of a new type of amylase separated from culture Aerobacillus macerans. //J. Am. Chem. Soc., 1939, v.61, N 9, p.2900−2902.
  182. Tilden E.B., Hudson C.S. Preparation and properties of the amylases produced by Bacillus macerans and Bacillus polymixa. // J. Bacteriol., 1942, v.43, N 2, p.527−544.
  183. Tonkova A. Bacterial cyclodextrin glucanotransferase.// Enzyme Microb. Technol., 1998, 22: 678−686.
  184. Van der Veen B. A., Uitdehaag J. C, Penninga D. et al. Rational design of cyclodextringlycosyltransferase from Bacillus circulans strain 251 to increase alpha-cyclodextrin production. // J. Mol. Biol., 2000, V. 296 (4)< P. 1027−1038.
  185. Wilkins C., Lay J., Winefordner J. Identification of Microorganisms by Mass Spectrometry (Chemical Analysis: A Series of Monographs on Analytical Chemistry and Its Applications). Wiley-Interscience, 2005, 352p.
  186. Wong, S.-L. Advances in the use of Bacillus subtilis for the expression and secretion of heterologous proteins. //Curr.Opin. Biotechnol., 1995, 6, 517−522.
  187. Wu, S.C., Wong, S.-L. Engineering of a Bacillus subtilis strain with adjustable levels of intracellular biotin for secretory production of functional streptavidin. //Appl. Environ.Microbiol., 2002, 68, 1102−1108.
  188. Wu, X.-C., Lee, W., Tran, L., Wong, S.-L. Engineering a Bacillus subtilis expression-secretion system with a strain deficient in six extracellular proteases.//J. Bacterid., 1991, 173,4952−4958.
  189. Xu E., Aoki H., Misawa M. New a-cyclodextrin producing thermostable cyclodextrin glucanotransferase. //Appl. Microbiol. Biotechnol., 1988, v.28, N 4−5, p.377−379.
  190. Yong-Hoon Choi, Chul-Hak Yang, Hyun-Won Kim, Seunho Jung. Cyclodextrins.//Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry, 39,71−76,2001.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!