1. Актуальность проблемы.
Одним из ведущих методов в комплексном лечении злокачественных новообразований является химиотерапия.
К настоящему моменту в клинической практике используется более 50 1 противоопухолевых лекарственных средств. Это препараты платины (цис-платин, карбоплатин, цикл оплатам и другие), акилирующие агенты (цикло-фосфан, сарколизин, эмбихин тиофосфамид и другие), антиметаболиты (ме-тотрексат, 5-фторурацил, меркаптопурин и другие), антибиотики (адриами-цин, блеомицин, дактиномицин и другие), вещества растительного происхождения и ферменты (винбластин, винкристин, виндезин, кампто и другие), гормональные препараты (тамоксифен и другие), а также синтетические ци-тостатики относящиеся к различным классам (дакарбазин, натулан, милтекс, спиробромин и другие) [67].
Принято считать, что в настоящее время нет оснований надеяться открыть препарат против рака, который был бы эффективен при всех видах злокачественных опухолей. Действительно, существует более 200 типов злокачественных опухолей человека и между опухолями даже одного органа имеются различия в гистологическом строении, в особенностях роста, во взаимодействии с организмом и т. д. Как правило, спектр действия того или иного цитостатика ограничивается несколькими, а иногда только одной опухолью или ее морфологическим вариантом. В то же время в современной химиотерапии можно усмотреть тенденцию к созданию противоопухолевых препаратов имеющих широкий спектр противоопухолевого действия.
Применение химиотерапии лимитировано высокой токсичностью противоопухолевых препаратов, которое обуславливает поражение не только ткани опухоли, но и поражение нормальных тканей, и, прежде всего тканей, обладающих высокой пролиферативной активностью: костного мозга, желудочно-кишечного тракта, лимфатической системы, тканей репродуктивных органов [13, 242].
Разработка путей повышения эффективности химиотерапии опухолей развивается по разным направлениям. Главными из них является создание новых, более избирательно действующих на опухолевые клетки препаратов, разработка комбинированного применения двух и более цитостатиков (полихимиотерапия), оптимизация методик применения противоопухолевых агентов, совершенствование химиотерапии, как звена или этапа комплексного и комбинированного лечения больных со злокачественными опухолями, применение других фармакологических средств с целью уменьшения побочного действия противоопухолевых препаратов и т. д. Большое внимание уделяется изучению механизмов действия цитостатиков, их фармакокинетике и фарма-кодинамике. На основе полученных данных разрабатываются рациональные методы использования известных противоопухолевых лекарственных средств и определяются пути создания новых эффективных противоопухолевых препаратов.
Новая стратегия в терапии опухолей предполагает использование оригинальных, нетрадиционных подходов. Одним из таких подходов является бинарная терапия опухолей, включающая два компонента, необходимых для получения терапевтического эффекта, каждый из которых в отдельности не проявляет противоопухолевого действия. К этому виду лечения относится фото динамическая терапия, сочетающая применение фотосенсибилизатора с местным лазерным облучением [69]. Данный метод противоопухолевой терапии основан на образовании высокореактивных продуктов (активных форм кислорода (АФК) и других свободных радикалов (СР), обладающих цитоток-сическими и цитостатическими свойствами), при взаимодействии фотосенсибилизатора с лазерным излучением определенных длин волн [35]. Этот метод лечения проходит клиническую апробацию во всем мире.
Новое направление в бинарной терапии опухолей было предложено в 1995 г академиком М. Е. Вольпиным, член-кореспондентом РАН Г. Н. Воржцовым и мэром г. Москва Ю. М. Лужковым. Этими учеными-химиками в качестве потенциальных противоопухолевых агентов были предложены бинарные каталитические системы (БКС), которые эффективно генерировали АФК и СР при взаимодействии двух химических соединений, одно из которых является катализатором (металлокомплексы (Мк) переходных металлов), а другое восстановителем [21]. В дальнейшем этот потенциальный метод противоопухолевой терапии получил название — бинарная каталитическая терапия (БКТ). Теоретически этому виду терапии могут быть доступны опухоли любой локализации.
Разработка этого метода противоопухолевого лечения проводится, кооперированно рядом научно-исследовательских институтов: ФГУП «ГНЦ «НИОПИК», ИНЭОС РАН, МНИОИ им. П. А. Герцена, РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН и других.
В России, в ИНЭОС РАН и ФГУП «ГНЦ «НИОПИК» на протяжении последних двадцати лет ведутся исследования каталитических свойств широкого круга комплексов переходных металлов в реакциях окисления природных восстановителей (аскорбиновая кислота, тиолы и др.) с целью поиска новых комплексов переходных металлов (кобальта, железа, марганца и других), проявляющих активность в биологических системах. Эти исследования позволили выявить новые источники АФК и СР среди комплексов кобальта и железа с макроциклическими и хелатирующими лигандами и комплексов ор-ганокобальта с тридентантными основаниями Шиффа [12, 16, 57, 244].
Поскольку одним из механизмов цитотоксического и цитостатического действия таких методов консервативной противоопухолевой терапии, как лучевая терапия [41, 73, 77], фотодинамическая терапия [35, 37] и химиотерапия при использовании ряда препаратов (блеомицин, антрациклиновые антибиотики) [25, 29], является поражение структурных элементов опухолевой ткани АФК и CP, то бинарные каталитические системы «Металлокомплекс + Аскорбиновая кислота» были исследованы в бесклеточных химических системах на способность вызывать деструкцию различных биомолекул (ДНК, РНК, Сахаров и др) и апробированы в системе in vitro на опухолевых клетках человека в качестве цитотоксических агентов. В этих тест-системах было показано, что бинарные каталитические системы «Металлокомплекс + Аскорбиновая кислота» вызывают деградацию ДНК, РНК, углеводов и других биомолекул [12] и обладают цитотоксическими свойствами. Выявленная in vitro высокая цитотоксическая активность бинарных каталитических систем свидетельствовала о целесообразности всестороннего изучения их противоопухолевых свойств in vivo на животных с опухолями в качестве потенциальных противоопухолевых агентов.
2. Цель исследования.
Целью исследования являлось изучение противоопухолевых и токсических свойств бинарных каталитических систем на основе комплексов кобальта и аскорбиновой кислоты на экспериментальных моделях in vivo.
3. Задачи исследования. Для достижения поставленной цели сформулированы следующие задачи:
1. провести скрининг бинарных каталитических систем «металлокомплекс + аскорбиновая кислота» in vivo;
2. разработать методические подходы к изучению противоопухолевых свойств бинарных каталитических систем in vivo: на мышах с перевиваемыми опухолями изучить зависимость противоопухолевой эффективности бинарных каталитических систем «Металлокомплекс + Аскорбиновая кислота» от дозы металлокомплекса, молярного соотношения металлокомплекса и аскорбиновой кислоты, временного интервала между их применением, а также последовательности введения животным металлокомплекса и аскорбиновой кислоты- 3. провести доклиническое изучение бинарной каталитической системы «Оксикобаламин + Аскорбиновая кислота»: изучить противоопухолевую эффективность бинарной каталитической системы на основе оксикобаламина на животных с перевиваемыми опухолями различного гистогенеза и с различной формой опухолевого роста в монорежиме и схемах полихимиотерапииизучить общетоксическое действие (безвредность) бинарной каталитической системы «Оксикобаламин-лио + Аскорбиновая кислота» и препарата оксикобаламин-лио на мелких лабораторных животных — мышах и крысах («острую» токсичность и «хроническую» токсичность).
• ч • i.
3. Научная новизна исследования.
В результате проведенных исследований показано, что бинарные каталитические системы на основе комплексов кобальта с фталоцианиновыми лигандами, корриновыми лигандами, тридентантными основаниями Шиффа в сочетании с аскорбиновой кислотой обладают выраженной противоопухолевой активностью in vivo.
Впервые на животных с асцитной (АОЭ) и солидной (Са-755) опухолях на примере двух бинарных каталитических систем: «Оксикобаламин + Аскорбиновая кислота» и «ЭТФ + Аскорбиновая кислота» разработаны методические подходы к изучению противоопухолевых свойств бинарных каталитических систем in vivo. Показано, что противоопухолевая эффективность бинарных каталитических систем «Металлокомплекс + Восстановитель» зависит от дозы металлокомплекса и дозы восстановителя, их молярного соотношения, временного интервала между введением, металлокомплекса и восстановителя, последовательности их применения, а также от пути и длительности введения бинарной каталитической системы животным.
На мышах и крысах с перевиваемыми опухолями — Р-388, L-1210, АОЭ, Са-755, LLC, В-16 и Рс-1 изучена противоопухолевая эффективность бинарной каталитической системы «Оксикобаламин + Аскорбиновая кислота» в монорежиме и схемах полихимиотерапии:
— определены терапевтические дозы и схемы применения бинарной каталитической системы для лечения животных с асцитными опухолями, солидными опухолями и гемобластозами;
— определен спектр опухолей, чувствительных к лечению бинарной каталитической системой;
— установлено, что бинарная каталитическая система «Оксикобаламин + Аскорбиновая кислота» обладает химиомодифицирующими свойствами, усиливая противоопухолевую эффективность препарата цисплатин.
Проведено доклиническое изучение общетоксического действия (безвредности) бинарной каталитической системы «Оксикобаламин-лио + Аскорбиновая кислота» и препарата оксикобаламин-лио на мелких лабораторных животных — мышах и крысах:
— дана количественная и качественная характеристика токсического и побочного действия препарата оксикобаламин-лио и бинарной каталитической системы на его основе при однократном и многократном применений животным;
— установлена зависимость токсического действия бинарной каталитической системы «Оксикобаламин-лио + Аскорбиновая кислота» и препарата оксикобаламин-лио от дозы и пути введения животным;
— выявлен наиболее чувствительный вид животных к токсическому действию бинарной каталитической системы и препарата оксикобаламин-лио;
— установлено токсическое и побочное действие бинарной каталитической системы «Оксикобаламин-лио + Аскорбиновая кислота» на периферическую кровь, почки", сосудистую систему и ЦНС животных;
— на основании данных по количественной токсичности бинарной каталитической системы «Оксикобаламин-лио + Аскорбиновая кислота» рекомендована безопасная («стартовая») доза бинарной каталитической системы для человека при ее клиническом изучении по I фазе.
4. Научно-практическая значимость. Научно-практическая значимость работы заключается в методическом совершенствовании подходов к изучению противоопухолевых свойств бинарных каталитических систем «Металлокомплекс + Восстановитель» ш vivo.' ' .
Проведено полное доклиническое изучение бинарной каталитической системы на основе препарата оксикобаламин-лио. На основании данных, полученных при изучении противоопухолевых и общетоксических свойств (безвредности), бинарная каталитическая система «Оксикобаламин-лио + Аскорбиновая кислота» была рекомендована для проведения клинических испытаний. Полученные в работе данные вошли в отчеты по специфической противоопухолевой активности и общетоксическому действию (безвредности) бинарной каталитической системы «Оксикобаламин-лио + Аскорбино-. 'i вая кислота» и препарата «Оксикобаламин-лио», представленные в ФК МЗ РФ с целью получения разрешения на I фазу клинического изучения указанных лекарственных средств. В настоящее время проводится клиническое изучение бинарной каталитической системы «Оксикобаламин-лио + Аскорбиновая кислота» по II фазе.
5. Апробация работы.
Материалы диссертации были доложены на семинарах отделения модификаторов и протекторов противоопухолевой терапии МНИОИ им.
П.А.Герцена, XVI Менделеевском съезде в Санкт-Петербурге (1998) — межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной онкологии» в Москве (1999) — Ninth International Congress on Anti-Cancer Treatment, Paris (1999) и V Всероссийском съезде онкологов в Казани (2000). • ч б.Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 9 работ среди них — два патента на изобретение № 2 114 623 и № 2 000 110 353, в которых изложены основные положения проведенного исследования.
7. Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 164 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 2 разделов и 6 глав собственных исследований и обсуждения полученных результатов, заключения,, выводов и списка литературы.
Список литературы
включает 244 источника. Работа иллюстрирована 23 рисунками, 20 таблицами и 2 схемами.
выводы Бинарные каталитические системы (БКС) «Металлокомплекс (Мк) + Аскорбиновая кислота (Ак)» на основе терафтала (Тф), пропиленгликолевого эфира терафтала (ЭТФ), оксйкобаламина (Ок) и ипрокола (Ипк) in vivo обладают противоопухолевой активностью, убывающей в следующем ряду: «Ок + Ак» > «ЭТФ + Ак» > «Тф + Ак» ««Ипк + Ак». Металлокомплексы и аскорбиновая кислота вне бинарной каталитической системы не оказывают противоопухолевого действия. Противоопухолевая эффективность бинарных каталитических систем зависит от дозы металлокомплекса, дозы аскорбиновой кислоты, молярного соотношения металлокомплекса и аскорбиновой кислоты, временного интервала между их применением, а также последовательности введения металлокомплекса и аскорбиновой кислоты. Оптимальными режимами введения компонентов БКС «Оксикобаламин + Аскорбиновая кислота» и «ЭТФ + Аскорбиновая кислота» являются:
Мк, 1 -15 минут -*Ак (молярное соотношение Мк: Ак — 1:30) — для легния животных с асцитными опухолями;
Мк, 60 минут -«Ак (молярное соотношение Мк: Ак — 1:10 и 1:30) — для лечения животных с солидными опухолями. Оптимальными схемами применения бинарной каталитической системы «Оксикобаламин-лио + Аскорбиновая кислота» в монорежиме при лечении животных с различными опухолями являются: а) внутрибрюшинно ежедневно в течение 3-х дней в разовой дозе (по оксикобаламину), равной 75 мг/кг, при молярном соотношении окси-кобаламина и аскорбиновой кислоты — 1:30, и временном интервале между их введением, соответствующем 15 минутам (АОЭ и Р-388, асцитный вариант) — б) внутривенно ежедневно в течение 3-х дней в разовой дозе (по оксикобаламину), равной 50 мг/кг, при молярном соотношении оксикобала-мина и аскорбиновой кислоты — 1:10, и временном интервале между их введением, соответствующем 1 часу (Са-755, LLC, Рс-1 и Р-388, солидный вариант). Бинарная каталитическая система «Оксикобаламин + Аскорбиновая кислота» имеет широкий спектр противоопухолевого действия и среднюю противоопухолевую эффективность. Чувствительность перевиваемых опухолей мышей и крыс к этой бинарной каталитической системе убывает в следующем ряду: АОЭ > Р-388 (привитый под кожу) > Р-388 (привитый в брюшную полость) > Са-755 > LLC = Рс-1 «В-16 = L-1210. Включение бинарной каталитической системы «Оксикобаламин + Аскорбиновая кислота» в схемы традиционной противоопухолевой терапии повышает эффективность лечения мышей с опухолями по показателю средней продолжительности жизни (СПЖ) при АОЭ на 280±39% (БКС + «Цисплатин») — при Са-755 на 22±3% (БКС + «Цисплатин») и на 17+5% (БКС + «5-Фторурацил»),, На основе количественных и качественных характеристик токсического и побочного действия препарата «Оксикобаламин-лио» (Ок-лио) и бинарной каталитической системы «Оксикобаламин-лио + Аскорбиновая кислота» при однократном и многократном применении животным определены их индексы кумуляции, обратимость токсического эффекта, коэффициенты видовой чуствительности и степень опасности. БКС «Ок-лио + Ак» классифицирована как умеренно опасное (острое токсическое действие) и малоопасное (хроническое токсическое действие) лекарственное средствопрепарат «Ок-лио» по степени опасности относится к малоопасным лекарственным средствам, независимо от характера токсического действия. Сферами избирательной токсичности бинарной каталитической системы «Оксикобаламин-лио + Аскорбиновая кислота» и препарата «Оксикобаламин-лио» при Их применении в токсических дозах являются эритроцит ты, тромбоциты, почки, сосудистая система и центральная нервная система.
Бинарная каталитическая система «Оксикобаламин-лио + Аскорбиновая кислота» не вызывает токсической лейкопениии гранулоцитопении. Отсутствует интестинальная токсичность и анорексия.). Определена начальная безопасная («стартовая») доза бинарной каталитической системы «Оксикобаламин-лио + Аскорбиновая кислота» для человека при проведении I фазы клинического изучения: а) для интраперитонеального применения — 33 мг/м (по Ок-лио;
Ок-лио:Ак — 1:30- Ок-лио, 15 минут + Ак) л б) для внутривенного применения — 59 мг/м (по Ок-лиоОклио :Ак — 1:10- Ок-лио, 60 минут + Ак).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
.
Работа посвящена экспериментальному изучению противоопухолевых г токсических свойств бинарных каталитических систем на основе комплек—ов кобальта и аскорбиновой кислоты — источников активных форм кислоро-са (АФК) и других свободных радикалов (СР).
Являясь высоко реакционными частицами, АФК и СР обладают высо-:им цитотоксическйм потенциалом — вступая во взаимодействие с различными биологическими субстратами в клетке (белками, нуклеиновыми кисло-ами, липидами, углеводами) АФК и СР приводят к структурным и биохими-[еским изменениям в клетке и в большинстве случаев к ее гибели. В силуысочайшей реакционной способности эти химические частицы не могут >ыть получены и использованы как обычные лекарственные средства. Для [ечения больных со злокачественными новообразованиями разработаны и [спользуются методы генерации АФК и других высокоактивных окислите-[ей непосредственно в опухолевой ткани — лучевая и фото динамическая те->апия. Однако эти методы консервативной противоопухолевой терапии ис-юльзуются только для локального или л око-регионарного лечения.
АФК и СР участвуют также и в реализации цитотоксического и цито-татического действия ряда противоопухолевых препаратов и, в частности, нтрациклиновых антибиотиков (доксорубицин, фарморубицин, дауноруби-[ина и других) и антибиотиков относящихся к классу флеомицинов (блеоми-рин, блеомицитин). Однако в отличии от лучевой терапии и фотодинамиче-кой терапии выброс АФК и СР в зоне опухоли при использовании этих хи-[иотерапевтических препаратов не столь мощный.
В 1987 г появилась работа Полинга с соавт в которой авторы изучали ротивоопухолевые свойства каталитических систем на основе комплексов ереходных металлов и Ак, генерирующих АФК и СР. Однако разработать акую систему применительно к терапии рака не удалось по причине того, то выбранные Мк были неустойчивы в физиологических условиях, а про.
• 'i укты их распада оказались очень токсичными для организма животных.
В России эти исследования были начаты в конце восьмидесятых годов ЮД руководством академика М. Е. Вольпина [21] и продолжены в последую-цем как в ИНЭОСе, так и ФГУП «ГНЦ «НИОПИК» под руководством чл-:ор. РАНГ.Н.Ворожцовым [16, 57 $ЦЧ].
В ФГУП «ГНЦ «НИОПИК» и ИНЭОС РАН было синтезировано более 10 комплексов кобальта и железа с макроциклическими и хелатирующими [игандами, а также комплексов органокобальта с тридентантными основаиями Шиффа, которые в сочетании с восстановителем — Ак эффективно ге.
• 'i ерировали АФК и СР.
Наиболее активные в катализе Мк, а их оказалось более 40, были пересаны в МНИОИ им. П. А. Герцена и РОНЦ им. Н. Н. Блохина для изучения их [ротивоопухолевых свойств в составе БКС «Мк + Ак» в скрининговой тест-истеме in vitro.
Основными критериями при отборе субстанций Мк для дальнейшего вучения их противоопухолевых свойств в составе БКС в скрининговой тест-истеме in vivo являлись высокая цитотоксическая активность БКС in vitro и (тсутствие таковой для отдельных ее компонентов. Кроме того, учитывались шзико-химические свойства Мк, которые в той или иной степени определя-эт его биосовместимость (растворимость, стабильность в водных растворах [ хидких средах организма), а также технологичность получения.
Исходя из вышесказанного пятнадцать БКС «Мк + Ак» на основе ком-шексов кобальта и железа с фталоцианиновым лигандом, корриновым ли-андом и тридентантными основаниями Шиффа были отобраны для даль-[ейшего изучения противоопухолевых свойств.
В нашей работе были исследованы четыре БКС на основе натриевой оли окта-4,5-карбоксифталоцианина кобальта (терафтала), его производного пропиленгликолевого эфира окта-4,5-карбоксифталоцианина кобальта.
ЭТФ) — Coa — [a — (5,6 — диметилбензимидазолил)] - CoP — оксикобамида гид-юхлорида (оксикобаламина) и изо-пропил-мер-|К-(2-аминоэтил)-ацетил аце-илидениминато] кобальт (+1) бромида (ипрокола).
На мышах с АОЭ установлено, что тестируемые Мк и Ак вне БКС не (бладают собственной противоопухолевой активностью. В то время как БКС Тф + Ак", «ЭТФ + Ак» и «Ок + Ак» оказывали выраженное противоопу-:олевой действие значительно увеличивая продолжительность жизини швотных с опухолью. Причем противоопухолевая активность этих БКС бы-ia сопоставима с таковой для официнального препарата цисплатин. БКС на юнове ипрокола в этой биологической системе оказалась менее ффективной.
Проведенные исследования (in vitro и in vivo) подтвердил идею, выска-анную академиком’М. Е. Вольпиным, о возможности использования БКС на юнове Мк переходных металлов в качестве потенциальных противоопухоле-, ых средств. На основании полученных данных для доклинического изучения противоопухолевых свойств на экспериментальных моделях in vivo были «тобраны три БКС: «Тф + Ак», «ЭТФ + Ак» и «Ок + Ак».
Первые два комплекса кобальта являются производными окта-4,5-:арбоновой кислоты фталоцианина кобальта — терафтал является ее натриевой солью, а ЭТФ — ее пропиленгликолевым эфиром. Наличие восьми карбоксильных групп в молекуле терафтала придает этому соединению ряд не-[0CTá-TK0B, среди которых особо следует отметить агрегацию молекул тераф-ала в водных растворах и жидких средах организма (что приводит к сниже-[ию его каталитической активности) и способность связывать ионы 2-х ва-?ентных металлов и, в первую очередь, ионы кальция и магния (что может [риводить к нежелательным побочным токсическим эффектам при введении того соединения животным). В отличие от терафтала, ЭТФ является эфиром.)тсутствие активных гидроксильных групп придает этому соединению ряд [риимуществ по сравнению с терафталом. Так, молекулы ЭТФ не агрегирузт в водных растворах и жидких средах орагнизма и не являются комплек-онами. Однако субстанция ЭТФ предстовляет собой смесевой продукт следствие различного количества оксиэтильных групп в эфирной компонен-е молекулы (рис .4 Б), что создает определенные трудности при создании тандартной субстанции.
Третий комплекс кобальта — оксикобаламин (ОН-СЫ, Ок) относится к — 'i риродным корринам. Наряду с цианкобаламином," метилкобаламином и аде-[озинкобаламинамином, оксикобаламин входит в группу структурно и био-югически родственных соединений — кобаламинов. В отличии от фталоциа-[иновых комплексов кобальта — терафтала и ЭТФ, кобаламины являются эн-[обиотиками и относятся к витаминным препаратам группы В12, которые интезируются в организме человека и животных микрофлорой кишечника и аироко представлены в тканях человека и животных.
Следует отметить, что клетки различных тканей имеют различную экс-[рессию рецепторов к транскобаламину II. Наибольшее количество этих ре-[епторов находится на клетках интенсивно пролиферирующих тканей, в том меле и на опухолевых, что обуславливает определенную исбирательность «пухолевых клеток для кобаламинов [79,100,186].
В связи с тем, что БКС «Металлокомплекс + Восстановитель» в каче—тве противоопухолевых средств изучаются впервые, то первоочередной задачей являлось разработка методических подходов к изучению их противо-«пухолевых свойств ш vivo на животных с перевиваемыми опухолями.
Поскольку цитотоксические и цитостатические АФК и CP образуются фи взаимо действии двух химических соединений — катализатора (комплек—а кобальта) и субстрата окисления (восстановителя, Ак) необходимо было юдобрать оптимальные режимы введения катализатора и востановителя животным с опухолью при которых, терапевтическая эффективность БКС была) ы максимальной.
В связи с этим, на двух экспериментальных опухолевых моделях — мо-, ели асцитной опухоли (мыша АОЭ) и модели солидной опухоли (мыши с? а-755) изучена зависимость противоопухолевого эффекта двух БКС — «Ок + ис» и «ЭТФ + Ак» от дозы Мк, молярного (дозового) соотношения Мк и Ак, ременного интервала между их применением, а также последовательности ведения Мк и Ак животным. Установлено, что эффективность исследуемых ¡-КС как при внутрибрюшинном (мышам с АОЭ), так и при внутривенном мышам с Са-755) применении повышалась с увеличением дозы Мк при фик-ированом молярном соотношении Мк и Ак и молярного соотношения Мк и ус при фиксированной дозе Мк.
Противоопухолевая эффективность исследуемых БКС при внутри-рюшинном применении мышам с АОЭ в большей степени зависит от мо-ярного соотношения Мк и Ак, чем от дозы Мк. Максимальная эффектив-юсть БКС «Ок + Ак» и «ЭТФ + Ак» при внутрибрюшинном введении ком-тентов БКС была отмечена при их молярном соотношении, равном 1:30 щс'^Щ. При внутривенном применении БКС на основе оксикобаламина мы-1ам с Са-755 ее противоопухолевая эффективность в равной степени зависи-а как от дозы Ок, тйк и от молярного соотношения Ок и Ак (табл. 2).
Очень важным для реализации противоопухолевого эффекта БКС ока-ался временной интервал между введением катализатора и восстановителя, ак, внутрибрюшинное введение мышам с АОЭ Мк с последующим, через 1 15 минут, введением Ак было наиболее эффективным. Увеличение времен-:ого интервала между введениями Ок или ЭТФ и Ак с 30 минут до 1 часа ффективность этих БКС резко снижалась и увеличивалась их токсичность рис.). При внутривенном применении БКС «Ок + Ак» мышам с Са-755 аблюдали обратную зависимость терапевтического и токсического эффек-ов этой БКС от временного интервала между введением ее компонентов, ак, последовательное применение Ок и Ак с временным интервалом между х введением от 1 минуты до 15 минут было не эффективным и токсичным.
Максимальный противоопухолевый эффект БКС на основе Ок при внутри-енном применении животным был достигнут только при временном интер-але между введением Ок и Ак, равным 1 часу (рис$).
Установленная зависимость противоопухолевого эффекта БКС «Ок + ус» и «ЭТФ + Ак» от интервала времени между введением катализатора и осстановителя связана с различиями в биодоступности и фармакокинетике) к, ЭТФ и Ак при внутрибрюшинном и внутривенном путях их введения.
При изучении противоопухолевой эффективности БКС «Ок + Ак» и ЭТФ + Ак" в зависимости от последовательности введения животным ме-аллокомплекса и восстановителя эффективным оказался только один режим: начале введение металлокомплекса, затем восстановителя.
В результате этих исследований определены оптимальные режимы нутрибрюшинного и внутривенного введения Мк (Ок и ЭТФ) и Ак для ле-ения животных с асцитными и солидными опухолями, соответственно:
Мк, 0−15 минут-«Ак (молярное соотношение Мк: Ак-1:30);
Мк, 60 минут ->Ак (молярное соотношение Мк: Ак — 1:10 и 1:30).
Высокая противоопухолевая активность БКС «Мк + Ак» выявленная в крининговой тест-системе in vivo послужила основанием для принятия решения о проведении полного доклинического изучения БКС на основе Тф,)ТФ и Ок в качестве, оригинальных противоопухолевых средств.
Доклиническое изучение противоопухолевых и токсических свойств ¡-КС «Тф + Ак» проведено в РОНЦ им. Н. Н. Блохина. Другая, эффективная в [ротивоопухолевом отношении БКС «ЭТФ + Ак» находится на стадии разработки стандартной субстанции и лекарственного препарата на ее основе в [>ГУП «ГНЦ «НИОПИК» и МНИОИ им. П. А. Герцена. В нашей лаборатории ¡-ыло проведено доклиническое изучение противоопухолевых и токсических совместно с РОНЦ им. Н.Н.Блохина) свойств БКС на основе Ок.
Доклиническое изучение противоопухолевой эффективности БКС «Ок — Ак» в монотерапии было проведено на мышах и крысах с перевиваемыми.
Пухолями различного гистогенеза и формой опухолевого роста — АОЭ, Р-88, L-1210, Са-755, LLC, В-16 и Рс-1.
На первом этапе этих исследований на двух опухолевых моделях — мо—ели асцитной опухоли (мыши с АОЭ) и модели солидной опухоли (мыши с «а-755) определен диапазон терапевтических доз БКС «Ок + Ак» при внут-ибрюшинном и внутривенном, соответственно, введении оксикобаламина и скорбиновой кислоты для лечения животных с асцитными и солидными пухолями (рис. 13 и W).
Далее на мышах и крысах с асцитными и солидными опухолями, а акже гемобластозами была изучена противоопухолевая эффективность БКС Ок + Ак" в режиме монотерапии в зависимости от количества ее введений сивотным. Показано, что с увеличением количества введений животным IKC увеличивается не только ее противоопухолевая эффективность, но и ток-ичность. В результате проведенных исследований были установлены тера-евтические дозы и схемы применения БКС «Ок + Ак» для лечения живот-:ых с асцитными опухолями, солидными опухолями и гемобластозами:
— внутрибрюшинно ежедневно в течение 3-х дней в разовой дозе (по Ок), равной 75 мг/кг (суммарная доза 225 мг/кг) при молярном соотношении Ок и Ак, равном 1:30 — для лечения животных с опухолями, привитыми в брюшную полость (асцитные опухоли и гемобластозы привитые в брюшную полость);
— внутривенно ежедневно в течение 3-х дней в разовой дозе (по Ок), равной 50 мг/кг (суммарная доза 150 мг/кг) при молярном соотношении Ок и Ак, равном 1:10 — для лечения животных с солидными опухолями и гемобластозами привитыми под кожу.
Используя оптимальные терапевтические дозы и режимы введения Ок Ак определен спектр перевиваемых опухолей мышей и крыс чувствитель-ых к лечению БКС «Ок + Ак». Показано, что эта БКС оказывала выражен-ое противоопухолевое действие в отношении 5 из 7 изученных опухолей сивотных. Наиболее чувствительными опухолями к терапии БКС на основе к были АОЭ (УПЖ — 102%) и лимфолейкоз Р-388, привитый под кожу (ТРО, а уровне 85% - 57% сохранялось в течение 10 дней после лечения) — сред-юю чувствительность имели лимфолейкоз Р-388, привитый в брюшную по-ость (УПЖ — 25%) и солидные опухоли Са-755, LLC и Рс-1 (ТРО на уровне 7% - 51% сохранялось в течение 19 — 21 дня после лечения) — лимфолейкоз L-210, привитый в брюшную полость и солидная меланома В-16 оказались пухолямй не чувствительными к лечению БКС «Ок + Ак». Полученные анные свидетельствуют о том, что БКС «Ок + Ак» имеет широкий спектр ротивоопухолевого действия и среднюю противоопухолевую эффектив-ость. Следует отметить, что эффективность этой бинарной каталитической истемы у мышей с АОЭ и лимфолейкозом Р-388, привитым под кожу сопос-авима с эффективностью препарата цисплатин.
Широкий спектр противоопухолевого действия БКС на основе Ок сви-етельствует об отсутствии избирательности ее специфического действия.
В отличие от БКС, Ок и Ак не обладают противоопухолевой активно-тью в отношении большинства использованных в исследовании опухолевых ггаммов. Только лймфолейкоз Р-388, привитый под кожу оказалася опухо-ью, чувствительной к Ок. Так, многократное применение Ок в суммарных озах, равных 150 мг/кг и 250 мг/кг, приводило к статистически достоверно-[у ингибированию роста опухоли на 76% - 50%. Противоопухолевая актив-ость Ок в отношении лимфолейкоза Р-388, привитого под кожу, может быть бусловлена рядом обстоятельств. Так, клетки лимфолекоза Р-388 могут экс-рессировать относительно высокий (по сравнению с другими опухолями: ивотных) уровень рецепторов к транскобаламину II, что способствует акоплению Ок в этих опухолевых клетках. Кроме того, известно, что ргацизм мышей способен синтезировать эндогенную Ак. В результате чего) к может катализировать окисление Ак непосредственно в клетках опухоли образованием цитотоксических количеств АФК и СР. Помимо этого, можно редположить, что в клетках лимфолейкоза Р-388 недостаточна активность ндогенных антиоксидантов элиминирующих АФК и CP, что также способтвует накоплению — цитотоксических количеств АФК и других активных кислителей, образующихся в результате каталитического окисления эндо-енной Ак в клетках лимфолейкоза Р-388.
Современная химиотерапия — интенсивный вид противоопухолевого ечения, сочетающий применение нескольких противоопухолевых препара-ов одновременно или в различной последовательности, что приводит к по-ышению эффективности проводимого лечения.
Для повышения результатов лечения животных с опухолями БКС «Ок Ак» была изучена ее противоопухолевая эффективность в сочетании с тра-иционными цитостатическими препаратами по схеме «БКС + Цитостатик».следования были проведены на двух экспериментальных опухолевых мо-елях — асцитной опухоли (мыши с АОЭ) и солидной опухоли (мыши с Са-55). Наиболее эффективным оказалось внутрибрюшинное комбинированное рименение БКС «Ок + Ак» и препарата цисплатин мышам с АОЭ. Так, со-етанное применение БКС и цисплатина приводило к увеличению продолжи-ельности жизни мышей с этой опухолью на 234% - 340% и полному излече-ию от опухоли 17% - 30% животных.
Внутривенное комбинированное применение БКС «Ок + Ак» и циспла-ина, а также БКС и 5-фторурацила мышам с Са-755 повышало эффектив-ость лечения на 22% и 17%, соответственно, по сравнению с эффективно-тью этих противоопухолевых препаратов используемых в монотерапии.
Ярко выраженный синергизм противоопухолевого действия комбини-ованного применения БКС «Ок + Ак» и препарата цисплатин позволяет редположить наличие у этой БКС химиомодйфицирующих свойств в отно-1ении противоопухолевой активности этого цитостатика.
Ок вне БКС как при внутрибрюшинном, так и при внутривенном вве-ении мышам с АОЭ и Са-755, соответственно, не оказывал влияния на тера-евтическую эффективность доксорубицина, циклофосфана и 5-«торурацила. Однако комбинированное применение Ок и цисплатина у мы.
1ей с АОЭ повышало эффективность проводимого лечения на 22% по срав-ению с эффективностью этого цитостатика, используемого в монотерапии.
В настоящее время нами проводятся исследования по изучению хи-[иомодифицирующих свойств БКС «Ок + Ак», направленные на снижение оз высокотоксичных противоопухолевых препаратов. По предварительным анным включение этой БКС в схему лечения животных с опухолями препа-атом цисплатин позволяет снизить дозу высокотоксичного цитостатика в 2 -раза без снижения эффективности проводимого лечения. Химиомодифици-ующие свойства в отношении противоопухолевой активности цисплатина ыли выявлены и у других БКС — «Тф + Ак» и «ЭТФ + Ак».
Свободнорадикальный механизм противоопухолевого действия БКС, а акже синергизм противоопухолевого действия БКС на основе Ок, Тф и ЭТФ цисплатина послужили основанием к изучению этих лекарственных редств в качестве модификаторов лучевой терапии поскольку поиск эффек-ивных радиомодификаторов также является одной из актуальнейших про-лем клинической онкологии. Эти исследования проводятся совмесно с [ТЭБ РАН в рамках Московской Программы «Борьба со злокачественными овообразованиями». Предварительные данные, полученные в ИТЭБ РАН видетельствуют о синергизме противоопухолевого действия БКС на основе ф и Ок и лучевой терапии. Установлено, что эти БКС в сочетании с лучевой грапией значительно увеличивают выживаемость мышей с опухолями, в то ремя как лучевая терапия или БКС в отдельности практически не оказывали ечебного действия.
Широкий спектр противоопухолевого действия, а также синергизм ротивоопухолевого действия БКС «Ок + Ак» и традиционных цитостатиче-ких препаратов и, прежде всего, препарата цисплатин свидетельствовали о елесообразности апробации этой БКС в клинике. В связи с этим было пройдено доклиническое изучение общетоксического действия (безвредности) КС «Ок + Ак». Предклинические токсикологические исследования БКС «Ок Ак» были проведены с использованием новой лекарственной формы Ок репарата оксикобаламин-лио (Ок-лио), который был разработан в МНИОИ м. П. А. Герцена.
Параллельно с изучением общетоксического действия (безвредности) КС «Ок-лио + Ак» была изучена безвредность препарата «Ок-лио» в новой екарственной форме — оксикобаламина лиофилизированного предназначен-ого для парентерального применения в высоких дозах.
При предклиническом токсикологическом изучении БКС «Ок-лио + ло> строго учитывались рекомендуемые в клинику способ и режим введения >к-лио и Ак:
— в брюшную полость, ежедневно в течение 3-х днейОк-лио, 15 минут Ак, Ок-лио: Ак — 1:30;
— внутривенно, ежедневно в течение 3-х днейОк-лио, 60 минут + Ак, >к-лио:Ак- 1:10.
В нашей работе было изучено общетоксическое действие (безвред-ость) БКС «Ок-лио + Ак» и препарата «Ок-лио» на мелких лабораторных квотных — мышах и крысах («острая» токсичность и «хроническая» ток-нчность). Исследования на крупных животных — кроликах и собаках, а так-:е изучение местно-раздражающего действия и аллергогенности БКС «Окно + Ак» и препарата «Ок-лио» были проведены в РОНЦ им. Н. Н. Блохина в аборатории фармакологии и токсикологии лекарств [28].
В результате изучения «острой» токсичности БКС «Ок-лио + Ак» и репарата «Ок-лио» на мелких лабораторных животных (мыши, крысы) дана эличественная оценка токсичности этих лекарственных средств при одно-ратном внутрибрюшинном и внутривенном применении по критериям рас-зтных доз: ЬБ10 (МПД), IX")6,1Ю50 и (табл. 10 -12).
При анализе данных по количественной токсичности БКС «Ок-лио + к» определены «широкая» широта токсического и смертельного действия КС. Показано, что БКС «Ок-лио + Ак» при внутрибрюшинном применение элее токсична, чем при внутривенном. Установлено отсутствие зависимости жсичности БКС «Ок-лио + Ак» от пола животных.
Сопоставляя данные по количественной токсичности БКС «Ок-лио +, к» на грызунах, установлено, что наиболее чувствительным видом из мел-их грызунов к токсическому действию БКС при внутривенном применении дозах, расчитанных как на массу тела, так и на поверхность тела, являются ыши. При внутрибрюшинном применении БКС «Ок-лио + Ак» в дозах, рас-итанных на массу тела мыши и крысы, одинаково чувствительны к токсиче-кому действию бинарной каталитической системы, а в дозах, расчитанных, а поверхность тела, мыши являются более чувствительным видом живот-ых, чем крысы. В' лаборатории фармакологии и токсикологии лекарств ОНЦ им. Н. Н. Блохина при изучении «острой» токсичности на собаках было становлено, что собаки более чувствительны к БКС при ее внутривенном рименении, чем мыши в дозах, расчитанных на массу тела, и менее чувствй-зльны, чем мыши и крысы при применении в дозах, расчитанных на по-зрхность тела (ВТД (МПД) — 150 мг/кг или 3000 мг/м2).
При сопоставлении данных по количественной токсичности, на разных [ивотных (мышах, крысах, и собаках) определен коэффициент видовой чув-гвительности (КВЧ) БКС «Ок-лио + Ак». Коэффициент видовой чувстви-гльности БКС «Окглио + Ак» определен как отношение 1ЛЗю для крыс к ТД (МПД) для собак при однократном внутривенном применении и соста-нл величину, равную 1,8 (из расчета на массу тела животных), что соответ-гвует невыраженным различиям в видовой чувствительности животных к КС «Ок-лио + Ак». КВЧ бинарной каталитической системы «Ок-лио + Ак» ри ее внутривенном применении животным в дозах, расчитанных на по-зрхность тела, составил величину, равную 5 (отношение ЫЗю для мышей к ТД (МПД) для собак), что соответствует средневыраженным различиям в адовой чувствительности животных к БКС. Полученные данные дают осно-ание полагать, что ожидать особую видовую чувствительность человека к КС «Ок-лио + Ак» нет оснований.
В результате проведенных исследований установлена причина смерти эызунов от однократного внутрибрюшинного и внутривенного применения.
КС «Ок-лио + Ак» в летальных дозах. Данные клинической картины инток-икации и результату патологоанатомического исследования погибших жи-отных свидетельствуют о том, что причиной смерти грызунов (мышей и рыс) от однократного применения БКС «Ок-лио + Ак» в летальных дозах вляется сердечно-сосудистая недостаточность. Летальные дозы БКС «Окно + Ак» для собак установлены не были.
Учитывая широту токсического и смертельного действия и индекс ши-оты терапевтического действия (1Х)50/ТД) БКС «Ок + Ак» по степени опас-ости острого токсического действия можно классифицировать как умеренно пасное лекарственное средство.
В отличие от БКС «Ок-лио + Ак», препарат «Ок-лио» вне БКС по сте-ени опасности острого токсического действия относится к малоопасным ле-арственным средствам. При изучении «острой» токсичности препарата «Окно» на различных видах животных (мышах, крысах, кроликах и собаках) аиболее чувствительными оказались крысы (табл. 12).
При изучении «хронической» токсичности БКС «Ок-лио + Ак» и пре-арата «Ок-лио» на крысах установлено токсическое и побочное действие гих лекарственных средств на органы и системы организма животных при ногократном применении (ежедневно в течение 15 дней). Определены три ровня токсических доз для БКС «Ок-лио + Ак» (ВТД = МПД, НТД и ВНТД) два уровня токсических доз для Ок-лио (НТД и ВНТД), характеризующих жсичность БКС «Ок-лио + Ак» и препарата «Ок-лио» при многократном рименении (табл. 13 и 18).
В результате проведенных исследований установлено, что сферами из-нрательной токсичности БКС «Ок-лио + Ак» при однократном и многоратном применении крысам являются: эритроциты, тромбоциты, почки, тсуды и ЦНС. В связи с этим выявлены специфические токсические и по-эчные осложнения у животных при применении БКС «Ок-лио + Ак», кото-ые имели дозозависимый и обратимый характер. Это прежде всего токсиче-сое действие БКС на сосудистую систему, которое проявлялось расширеним периферических сосудов, нарушением проницаемости сосудистой стенки, азвитием гемморрагического синдрома (кровоизлияния в паренхиму легких почек). Отмечено неблагоприятное влияние БКС «Ок-лио + Ак» на почки.
Нефротоксическое действие БКС возможно обусловлено специфиче-ким повреждением’активными формами кислорода и свободными радика-ами структурно-функциональной единицы почек — нефрона. К клиническим роявлениям нефротоксичности относились увеличение суточного диуреза эазвитие полиурии) и увеличение количества мочевины и креатинина в сы-оротке крови животных.
Отмечено токсическое действие БКС «Ок-лио + Ак» на перифериче-кую кровь, связанное с высокой тропностью оксикобаламина к эритроцитам тромбоцитам. Влияние БКС «Ок-лио + Ак» на периферическую кровь ха-актеризуется снижением числа эритроцитов, количества гемоглобина и воз-икновением ранней тромбоцитопении. Зафиксирована также тенденция к величению общего числа лейкоцитов за счет увеличения абсолютного и от-осительного числа нейтрофилов (нейтрофилез) и кратковременной абсо-ютной и относительной лимфоцитопении.
Установлено токсическое влияние БКС «Ок-лио + Ак» в высоких ток-ических дозах при однократном и многократном применении на централь-ую нервную систему (ЦНС) животных, которое проявлялось развитием у их гиподинамии, адинамии, миорелаксации, атаксии с креном влево и катаепсии различной степени выраженности (I или III степени), потерю болевой.
-. ' > увствительности задних конечностей, что позволяет предположить угне-ающее влияние БКС на ЦНС.
Все вышеописанные токсические и побочные эффекты БКС «Ок-лио + 1К» были выявлены только при введении БКС «Ок-лио + Ак» животным в етальных, высоких токсических и низких токсических дозах. Функциональ-ая обратимость токсических и побочных эффектов после однократного и ногократного применения БКС «Ок-лио + Ак» составляла 15−60 дней.
Применение БКС «Ок-лио + Ак» в высоких нетоксических дозах не вы-ывало токсических эффектов у животных. '.
Проведенные исследования безвредности БКС «Ок-лио + Ак» позволи-и констатировать отсутствие пневмотоксичности, гатроинтестинальной ток-нчности и кардиотоксичности.
Полученные данные по «хронической» токсичности БКС «Ок-лио + .к» на крысах позволили сопоставить их с данными по «острой» токсично-ги на крысах и расчитать индекс кумуляции (1к) БКС «Ок-лио + Ак»: 1к — [(МПД! — МПДП) / ((п-1) х (МПДП))] х 100% где, МПД — максимальнопереносимая доза при однократном и п-кратном ведении.
1к = [(81 — 1080) / (14×1080)] х 100% = -7.
Расчитанная величина 1к (-7) свидетельствует об отсутствии кумуля-явных свойств у БКС и обратимости ее токсических эффектов. Учитывая дозовый уровень токсического действия, индекс кумуляции обратимость токсических и побочных эффектов, БКС «Ок-лио + Ак» по гепени опасности «хронического» токсического действия можно классифи-ировать как малоопасное лекарственное средство.
Анализ данных по предклиническому изучению токсичности БКС «Окно + Ак» на различных видах животных (мыши, крысы, кролики, собаки) ыявил отсутствие повреждающего действия этой БКС на нормальные ткани выраженной пролиферативной активностью. За исключением небольшого эличества, все противоопухолевые цитостатики, используемые в клинике, ызывают угнетение гемопоэза и диспепсический синдром. БКС «Ок-лио + .к» не вызывала токсической лейкопении, гранулоцитопении, лимфоцито-ении. Отсутствовала также интестинальная токсичность и анорексия.
Данные по количественной токсичности препарата «Ок-лио» на крысах оказали, что препарат «Ок-лио» при многократном применении менее ток-нчен, чем БКС на его основе примерно в 2 раза.
Применение препарата «Ок-лио» в низкой токсической дозе приводило усилению белоксинтезирующей функции печениувеличинению числа гйкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов и количества гемоглобина в перифе-ической крови животных.
Однократное и многократное применение препарата «Ок-лио» в ле-эльных и максимально переносимых оказывало токсическое действие на |НС животных преимущественно угнетающего характера (вялость, адина-ия, гиподинамия, миорелаксация, атаксия, каталепсия). В лаборатории фар-акологии и токсикологии РОНЦ им. Н. Н. Блохина установлено, что препа-ат «Ок-лио» при внутривенном введении крысам оказывает дозозависимое пияние на артериальное давление животных, вызывая умеренное гипотен-звное действие. Функциональная обратимость токсических и побочных эф-екгов после однократного и многократного применения препарата «Окно» составляла 15−60 дней.
Применение этого препарата не оказывало токсического действия на ункции сердца, почек, печени и желудочно-кишечного тракта.
Применение Ок-лио в высоких нетоксических дозах не вызывло токси-зских и побочных эффектов у животных.
На основании данных по количественной токсичности БКС «Ок-лио + .к», расчитана начальная безопасная (стартовая) доза для человека при ее циническом изучении по I фазе у больных со злокачественными новообра-званиями (схема 2)[123]: для интраперитонеального применения — 33 мг/м2 ю Ок-лиоОк-лио:Ак — 1:30) — для внутривенного применения — 59 мг/м2.(по 'к-лиоОк-лио :Ак — 1:10), с последующей эскалацией доз по модифициро-шному методу Fibonacci [101].
СХЕМА УСТАНОВЛЕНИЯ НАЧАЛЬНОЙ (СТАРТОВОЙ) БЕЗОПАСНОЙ ДОЗЫ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА на I фазу клинических испытаний [123 ].
Мыши.
Собаки.
Эквивалентная доза.
Эквивалентная 1Л)10, (МЕЫ)ю V.
1/10 МЕЬБю мг/м2.
Эквивалентная доза.
Человек.
I фаза: стартовая доза 1/10 МЕЬБ10.
Начальная (стартовая) безопасная доза препарата «Оксикобаламин-лио» в составе БКС при I фазе клинических испытаний составляет: -дляинтраперптонеайьногоприменения — 33 мг/м (по Ок-лиоОк-лио: Ак — 1:30- Ок, 15 минут —> Ак) — -для внутривеноого применения — 59 мг/м2 (по 0Эк-лиоОк-лио :Ак- 1:10- Ок, 60 минут .-> Ак).
Таким образом, в работе экспериментально обоснована возможностьпользования БКС на основе Мк переходных металлов в качестве потенци-1ьных противоопухолевых средств для лечения больных со злокачествен->ши опухолями.
Разработаны методические подходы к изучению противоопухолевой ¡-зфективности БКС «Мк + Ак» в эксперименте. Совместно с РОНЦ им. .Н.Блохина проведено полное доклиническое изучение БКС на основе пре-зрата «Ок-лио», включающее изучение специфической противоопухолевой [)фективности на животных (мышах и крысах) с перевиваемыми опухолями токсичности (безвредности) на различных видах животных (мышах, кры-IX, морских свинках, кроликах и собаках). Полученные в работе данные воли в отчеты по специфической противоопухолевой активности и общеток-иескому действию (безвредности) БКС «Ок-лио + Ак» и препарата «Ок-ю», представленные в ФК МЗ РФ с целью получения разрешения на клини—ские испытания по I фазе этих лекарственных средств у онкологических шьных.