Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Распределение Р65 субъединицы транскрипционного фактора NF-kB и изоформ ?-актинина в связи с реорганизацией актинового цитоскелета в клетках А431

Диссертация: Распределение Р65 субъединицы транскрипционного фактора NF-kB и изоформ ?-актинина в связи с реорганизацией актинового цитоскелета в клетках А431
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Данные об участии актинового цитоскелета в регуляции NF-кВ, полученные в нашей лаборатории, свидетельствуют о том, что NF-кВ солокализуется в цитоплазме нормальных фибробластов вдоль стресс-фибрилл и в фокальных контактах. Методом аффинной хроматографии на колонках было подтверждено, что NF-klB может связываться с иммобилизованным F-актином и высказано предположение, что распределение NF-кВ… Читать ещё >

Распределение Р65 субъединицы транскрипционного фактора NF-kB и изоформ ?-актинина в связи с реорганизацией актинового цитоскелета в клетках А431 (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • 1. ВВЕДЕНИЕ
  • 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 2. 1. ХАРАКТЕРИСТИКА СТРУКТУР АКТИНОВОГО ЦИТОСКЕЛЕТА
    • 2. 2. РОЛЬ АКТИНОВОГО ЦИТОСКЕЛЕТА В ПРОВЕДЕНИИ СИГНАЛА И РЕГУЛЯЦИИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ
    • 2. 3. БЕЛКИ АКТИНОВОГО ЦИТОСКЕЛЕТА В ЯДРЕ
    • 2. 4. БЕЛКИ, СОДЕРЖАЩИЕ СПЕКТРИНОВЫЕ ПОВТОРЫ, В ЯДРЕ
    • 2. 5. АКТИНСВЯЗЫВАЮЩИЙ БЕЛОК — а-АКТИНИН
      • 2. 5. 1. Фрагменты а-актинина
    • 2. 6. АДГЕЗИЯ КЛЕТОК К ВНЕКЛЕТОЧНОМУ МАТРИКСУ
      • 2. 6. 1. Комплексы адгезии
      • 2. 6. 2. Сигналы, активируемые клеточной адгезией
      • 2. 6. 3. Изменение экспрессии генов в результате адгезии
    • 2. 7. ТРАНСКРИПЦИОННЫЙ ФАКТОР №кВ
      • 2. 7. 1. Характеристика кВ-специфических ДНК-белковых комплексов
    • 2. 8. ЭПИДЕРМАЛЬНЫЙ ФАКТОР РОСТА (ЭФР) И ЕГО РЕЦЕПТОР
      • 2. 8. 1. Сигнальные пути в клетке, активируемые ЭФР
    • 2. 9. ДАННЫЕ, ПОЛУЧЕННЫЕ В ПРЕДЫДУЩИХ РАБОТАХ ЛАБОРАТОРИИ БИОЛОГИИ КЛЕТКИ В КУЛЬТУРЕ
  • 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
    • 3. 1. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ КЛЕТОК А
    • 3. 2. АДГЕЗИЯ КЛЕТОК НА ФИБРОНЕКТИНЕ
      • 3. 2. 1. Обработка клеток ЭФР и цитохалазином Д
    • 3. 3. ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИЯ
    • 3. 4. АНТИТЕЛА, ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ В РАБОТЕ ДЛЯ НЕПРЯМОЙ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ И ИММУНОБЛОТИНГА
    • 3. 5. СУБКЛЕТОЧНОЕ ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ
      • 3. 5. 1. Получение цитоплазматической и ядерной фракций белков
      • 3. 5. 2. Получение ядерных подфракций по методу Двайера и Блоубела с модификациями
      • 3. 5. 3. Фракционирование с помощью коммерческого набора
    • 3. 6. ИММУНОБЛОТИНГ БЕЛКОВЫХ ЭКСТРАКТОВ КЛЕТОК
    • 3. 7. ПОЛУЧЕНИЕ МЕЧЕНЫХ ДВУЦЕПОЧЕЧНЫХ ДНК ЗОНДОВ
    • 3. 8. АНАЛИЗ ДНК-СВЯЗЫВАЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ ЯДЕРНЫХ ЭКСТРАКТОВ МЕТОДОМ ТОРМОЖЕНИЯ ПОДВИЖНОСТИ ДНК-БЕЛКОВЫХ КОМПЛЕКСОВ В ГЕЛЕ
    • 3. 9. СОЧЕТАНИЕ МЕТОДОВ ТОРМОЖЕНИЯ ПОДВИЖНОСТИ ДНК-БЕЛКОВЫХ КОМПЛЕКСОВ В ГЕЛЕ И ВЕСТЕРН-БЛОТ-АНАЛИЗА
    • 3. 10. МЕТОД GST-PULLDOWN
    • 3. 11. ПОЛУЧЕНИЕ СВОБОДНЫХ N-ИЛИ С- КОНЦЕВЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ Р65 В РАСТВОРЕ ПОСЛЕ ПЕРЕВАРА ТРОМБИНОМ СЕФАРОЗЫ С ИММОБИЛИЗОВАННЫМИ N-ИЛИ С- КОНЦЕВЫМИ ДОМЕНАМИ Р65 СУБЪЕДИНИЦЫ
    • 3. 12. АНАЛИЗ ДНК-СВЯЗЫВАЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ ВЫДЕЛЕННЫХ БЕЛКОВ МЕТОДОМ ТОРМОЖЕНИЯ ПОДВИЖНОСТИ ДНК В ГЕЛЕ (IN VITRO BAND-SHIFT)
    • 3. 13. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА ДАННЫХ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ЭЛЕКТРОФОРЕГРАММ
  • 4. РЕЗУЛЬТАТЫ
    • 4. 1. РЕОРГАНИЗАЦИЯ АКТИНОВОГО ЦИТОСКЕЛЕТА В КЛЕТКАХ А431 ПОД ВЛИЯНИЕМ ЭФР
    • 4. 2. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ КЕЬА/Р65 В КЛЕТКАХ А
      • 4. 2. 1. Иммунофлуоресцентный анализ совместной локализации 11е1А/р65 и Б-актина в клетках, распластанных на фибронектине, и после воздействии ЭФР
      • 4. 2. 2. Влияние адгезии на распределение 11е1А/р65 в субклеточных фракциях
      • 4. 2. 3. Влияние ЭФР на распределение 11е1А/р65 в клетках, культивируемых на пластике и клетках, распластанных на фибронектине
    • 4. 3. ВЛИЯНИЕ ЦХ Д НА РАСПРЕДЕЛЕНИЕ КЕЬА/Р65 В КЛЕТКАХ А
      • 4. 3. 1. Реорганизация актинового цитоскелета после воздействия цитохалазина Д и последующего добавления ЭФР
      • 4. 3. 2. Иммунофлуоресцентный анализ распределения Ые1А/р65 в клетках А431 под влиянием ЦХ Д
      • 4. 3. 3. Вестерн-блот-анализ распределения 11е1А/р65 в субклеточных фракциях под влиянием ЭФР в клетках, актиновый цитоскелет которых разрушен ЦХ Д
    • 4. 4. АНАЛИЗ АКТИН-СОДЕРЖАЩИХ ОБЛАСТЕЙ ДИСКРЕТНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ ЯЕЬА/Р65 В ЦИТОПЛАЗМЕ
    • 4. 5. а-АКТИНИНЫ В КЛЕТКАХ А
      • 4. 5. 1. Иммунофлуоресцентный анализ распределения а-актининов в клетках А
      • 4. 5. 2. Особенности распределения изоформ а-актинина в субклеточных фракциях
      • 4. 5. 3. Сравнение методов субклеточного фракционирования для выявления а-актинина-1 и а-актинина-4 в клетках А
        • 4. 5. 3. 1. Оценка целостности ядер после клеточного лизиса
        • 4. 5. 3. 2. Выявление а-актинина-1 и а-актинина-4 в субклеточных фракциях, выделенных из предварительно замороженных клеток и клеток без предварительного замораживания
        • 4. 5. 3. 3. Распределение а-актининов в ядерных подфракциях
    • 4. 6. СОВМЕСТНОЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЕ а-АКТИНИНА-1, а-АКТИНИНА-4 И Р65 СУБЪЕДИНИЦЫ NF-кВ В КЛЕТКАХ А
      • 4. 6. 1. Иммунофлуоресцентный анализ областей солокализации RelA/p65 с а-актинином-1 или а-актинином-4 в клетках А431, распластанных на фибронектине
      • 4. 6. 2. RelA/p65, а-актинин-1 и а-актинин-4 в субклеточных фракциях
    • 4. 7. ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРЯМОГО ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ RELA/P65 И а-АКТИНИНОВ МЕТОДОМ GST PULL-DOWN
      • 4. 7. 1. Характеристика а-актинина, очищенного из желудков цыпленка, и а-актинина, очищенного из почек свиньи при окрашивании антителами к а-актинину-1 и а-актинину
      • 4. 7. 2. Исследование возможности прямого взаимодействия р65 и а-актининов
    • 4. 8. ВОЗМОЖНОСТЬ УЧАСТИЯ а-АКТИНИНА-4 В РЕАКЦИИ ДНК-СВЯЗЫВАНИЯ NF-кВ С КОНСЕНСУСНЫМИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЯМИ кВ
      • 4. 8. 1. Конкурентный анализ с антителами к RelA/p65, р50 или а-актинину
      • 4. 8. 2. Анализ состава комплексов при использовании сочетания вестерн-блот-анализа и торможения ДНК-белковых комплексов в геле (shift-western)
        • 4. 8. 2. 1. Подвижность белков в нативном геле
        • 4. 8. 2. 2. Анализ состава кВ-специфичных комплексов при сочетании методов торможения ДНК-белковых комплексов в геле и вестерн-блотинга
      • 4. 8. 3. Возможность участия а-актинина-4 в реакции ДНК-связывания NF-кВ с консенсусными последовательностями кВ
  • 5. ОБСУЖДЕНИЕ
    • 5. 1. Реорганизация актинового цитоскелета сопровождает ядерную транслокацию и перераспределение в цитоплазме р65 субъединицы NF-кВ и активацию NF-кВ
    • 5. 2. Особенности распределения RelA/p65, а-актинина-1 и а-актинина-4 в клетках А431 при распластывании на фибронектине и под влиянием ЭФР
    • 5. 3. Сравнение субклеточного распределения изоформ а-актинина
    • 5. 4. Взаимодействие изоформ а-актинина и р65 и участие а-актинина-4 в образовании кВ-специфичных ДНК-белковых комплексов
  • 6. ВЫВОДЫ

Актиновые филаменты вместе с микротрубочками и промежуточными филаментами образуют динамическую сеть в цитоплазме клеток, называемую цитоскелет, которая определяет форму клетки и лежит в основе клеточной миграции, участвует в межклеточной адгезии и адгезии клеток с матриксом (Bershadsky, Vasiliev, 1988; Hynes, 1999; Clark et al., 2002). Последнее время появились работы, подтверждающие возможность участия актинового цитоскелета в регуляции активности генов (Sotiropoulos et al., 1999, Fazal et al., 2007; Kustermans et al., 2008). Сигнальные процессы в клетке запускаются под влиянием внеклеточных сигналов, таких как адгезия к белкам внеклеточного матрикса, межклеточная адгезия и воздействие ростовых факторов. Влияние этих факторов сопровождаются пространственной реорганизацией актиновых филаментов (Karin et al., 1997; May, Gosh, 1998; Schoenwaelder, Burridge, 1999).

Имеются данные, свидетельствующие об участии актинового цитоскелета в процессах проведения внутриклеточного сигнала. В частности, некоторые сигнальные молекулы способны непосредственно взаимодействовать с белками актинового цитоскелета на определенных этапах передачи сигнала от клеточной мембраны к ядру (Yamada, Geiger, 1997; Otey, Carpen, 2004; Legrand-Poels et al., 2007). Однако, по-прежнему, остаются невыясненными точные механизмы, с помощью которых актиновый цитоскелет принимает участие в сигнальных каскадах и регуляции экспрессии генов.

Ряд данных говорит о том, что реорганизация актинового цитоскелета может приводить к изменению активности транскрипционных факторов (Sotiropoulos et al., 1999, Posern et al., 2002; Hofrnann et al., 2004; Kustermans et al., 2008). Реорганизация актинового цитоскелета происходит под влиянием ростовых факторов, межклеточной адгезии и адгезии клеток к субстрату, осуществляемой, главным образом, интегриновыми рецепторами. В то же самое время, факторы, вызывающие реорганизацию актинового цитоскелета, регулируют также активность транскрипционных факторов (Karin et al.,.

1997; May, Gosh, 1998). Вероятно, реорганизация актинового цитоскелета сопровождается перегруппировкой белков актинового цитоскелета, входящих в состав сигнальных комплексов и взаимодействующих с транскрипционными факторами. Таким транскрипционным фактором, регуляция которого может осуществляться в связи с реорганизацией актинового цитоскелета, является NF-кВ (Fazal et al., 2007, Nemeth et al., 2004). Показано также, что актиновый цитоскелет важен на посттранскрипционном уровне регуляции, обеспечивая позиционирование РНК в цитоплазме (Ornelles et al., 1986; Hesketh, 1996).

Дополнительными фактами, указывающими на участие актинового цитоскелета в регуляции экспрессии генов, является открытие внутриядерных функций актина и актинсвязывающих белков. Однако эти вопросы остаются, по-прежнему мало изученными. Одним из таких белков, способных взаимодействовать с транскрипционными факторами, является а-актинин (Poch et al., 2004; Chakraborty et al., 2006; Goffart et al., 2006).

К семейству а-актипинов принадлежат четыре генных продукта, описанные впервые как актинсвязывающие белки. а-Актинин-1 и 4 характерны для немышечных клеток, а а-актинип-2 и 3 — для мышечных. Функция немышечного а-актинина заключается в сшивании актиновых филаментов. Позднее было показано, что а-актинин взаимодействует не только с актином, но и с большим числом молекулярных партнеров (Otey, Carpen, 2004). а-Актинин работает как скаффолд, связывая цитоскелет с различными трансмембранными белками в контактах разного типа, и соединяет цитоскелет с разнообразными сигнальными молекулами (Otey, Carpen, 2004). Поскольку а-актинин локализуется вблизи трансмембранных белков и актиновых филаментов, он является одной из основных мишеней регуляции сигнальных путей, особенно тех, что связаны с интегринами.

Аминокислотная последовательность а-актинина-1 и а-актинина-4 гомологична на 86%, однако функции их в клетках различаются. В отличие от а-актинина-1, а-актинин-4 способен транслоцироваться в ядро и взаимодействовать с факторами транскрипции (Poch et al., 2004; Chakraborty et al., 2006; Goffart et al., 2006). Партнерами а-актинина-4 в ядре являются р-катенин и NF-Y факторы транскрипции, DEAD box содержащий белок Bat 1 и гистондеацетилазы (HDAC). а-Актинин является одним из кандидатов на роль партнера транскрипционного фактора NF-tcB.

Семейство транскрипционных факторов NF-icB/Rel принимает участие в регуляции экспрессии большого числа генов, среди которых гены, ответственные за иммунный ответ, противовоспалительные реакции, организацию цитоскелета и другие гены (Tian et al., 2005). Транскрипционные факторы семейства NF-кВ регулируются большим числом внеклеточных сигналов, среди которых ультрафиолет, факторы роста, фактор некроза опухолей, вирусы, при действии которых NF-кВ активируется в цитоплазме, после чего транспортируется в ядро (May, Ghosh, 1998). Эпидермальный фактор роста (ЭФР) также является одним из регуляторов NF-кВ (Sun, Carpenter, 1998). Одним из малоизученных вопросов остаются механизмы его перераспределения в цитоплазме и пути транспорта в ядро.

Данные об участии актинового цитоскелета в регуляции NF-кВ, полученные в нашей лаборатории, свидетельствуют о том, что NF-кВ солокализуется в цитоплазме нормальных фибробластов вдоль стресс-фибрилл и в фокальных контактах. Методом аффинной хроматографии на колонках было подтверждено, что NF-klB может связываться с иммобилизованным F-актином и высказано предположение, что распределение NF-кВ в цитоплазме происходит в зависимости от состояния актина (Are et al., 2000). Поиск белков, которые могут взаимодействовать как с актином, так и с р65 субъединицей NF-кВ указал на а-актинин, поскольку имеются данные о том, что киназа МЕКК1, которая является одним из активаторов NF-кВ, способна напрямую взаимодействовать с а-актинином in vitro (Christerson et al., 1999). Исследования нашей лаборатории показали солокализацию р65 субъединицы NF-кВ и а-актининов в цитоплазме клеток А431, в особенности в области дорзальных раффлов, кроме того, а-актинин-4 был обнаружен в ядре. Несмотря на солокализацию обоих а-актининов и р65 в цитоплазме, в мультибелковых комплексах ядерных и цитоплазматических экстрактов после реакции иммунопреципитации с антителами к р65 субъединице NF-кВ выявлялся только а-актинин-4 (Бабаков, 2004). Поэтому возникла необходимость детального сравнения областей солокализации, а также сравнения распределения в субклеточных фракциях а-актинина-1, а-актинина-4 и р65. Кроме того, обнаружение а-актининов и р65 в одних и тех же белковых комплексах не является доказательством того, что это взаимодействие прямое.

Работа была проведена на клетках А431, распластанных на фибронектине, для которых хорошо охарактеризованы структуры актинового цитоскелета и реорганизация под влиянием ЭФР (Are et al., 2001; Петухова и др., 2005). Эти морфологические особенности создают удобную модель для исследования перераспределения факторов, связанных с F-актипом, при различных способах стимуляции клеток. Одним из стимулов, воздействие которого связано с реорганизацией актинового цитоскелета, является ЭФР.

Каким образом происходит перераспределение р65 в связи с реорганизацией актинового цитоскелета и важны ли актиновые структуры для транслокации р65 в ядро, до сих пор исследовано не было.

Цель настоящей работы заключалась в выяснении участия актинового цитоскелета в перераспределении р65 субъединицы NF-кВ, а также в сравнительной оценке участия а-актинина-1 и а-актинина-4 в событиях, связанных с активацией NF-kB.

В работе были сформулированы следующие задачи:

1. Исследовать возможность транслокации р65 в ядро в условиях разрушения актинового цитоскелета после обработки клеток цитохалазином Д (ЦХ Д).

2. Исследовать влияние ЭФР, вызывающее реорганизацию актинового цитоскелета, на распределение р65, F-актина, а-актинина-1 и а-актинина-4 в цитоплазме и охарактеризовать области солокализации.

3. Определить совместное присутствие р65, а-актинина-1 и а-актинина-4 в различных субклеточных фракциях, соответствующих разным компартментам.

4. Исследовать возможность прямого взаимодействия а-актининов и NF-кВ in vitro с использованием метода аффинной хроматографии (GST-pull-down).

5. Исследовать возможность участия а-актинина-4 в реакции связывания NF-кВ с консенсусными последовательностями кВ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

6. выводы.

1. В клетках А431 воздействие ЭФР, приводящее к реорганизации актинового цитоскелета, стимулирует накопление р65 в ядре, причем, ядерная транслокация р65 наблюдается в условиях разборки актинового цитоскелета и не требует присутствия стресс-фибрилл и раффлов.

2. В цитоплазме под воздействием ЭФР наблюдается как связанное с Р-актином перераспределение р65 (раффлы, стресс-фибриллы, пэтчи), так и независимое. Актин-содержащие зоны дискретной локализации р65 в цитоплазме (пэтчи), включающие а-актинин-1, а-актинин-4, винкулин и паксиллин, описаны впервые.

3. Изоформы а-актинина различаются между собой по локализации в разных компартментах клетки. Особенностью а-актинина-1 является его локализация в перинуклеарной области, а а-актинина-4 — на концах стресс-фибрилл и в ядре. На биохимическом уровне различия заключаются в выявлении разного набора укороченных форм а-актининов, узнаваемых антителами к этим белкам, в цитоплазматических и ядерных подфракциях. В ядре а-актинин-4 выявляется во всех ядерных подфракциях, тогда как а-актинин-1 обнаруживается во фракции белков ядерной оболочки.

4. а-Актинин является функциональным партнером р65 субъединицы №-кВ в клетках А431, поскольку эти белки способны непосредственно взаимодействовать друг с другом, солокализуются в цитоплазме, могут обнаруживаться в одних и тех же подфракциях, и а-актинин-4 может принимать участие в регуляции ДНК-связывающей активности №-кВ.

7. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Емельянов А. Н., А. В. Большакова, О. А. Петухова, JI.B. Туроверова, И. В. Кропачева, Г. П. Пинаев. 2005. Особенности распределения р65 субъединицы транскрипционного фактора NF-кВ в клетках А431, распластанных на фибронектине, ламипине или антителах к рецептору ЭФР. Цитология. 47 (9): 808.

2. Petukhova О., A. Emelyanov, A. Bolshakova, L. Turoverova, V. Babakov, I. Kropacheva, K-E. Magnusson, G.Pinaev. 2005. Effect of EGF on redistribution of p65 NF-KB/RelA in A431 cells spread on immobilized ligands. Abstracts the American Society for Cell Biology, 45 th Annual Meeting. 2005. p. 100a.

3. Большакова A., E. Емельянов, О. Петухова, В. Бабаков, Л. Туроверова, Д. Тентлер, К.-Е. Магнуссон, Г. П. Пинаев. 2006. Перераспределение р65 субъединицы транскрипционного фактора NF-кВ в клетках А431 при восстановлении актинового цитоскелета и стимуляции ЭФР. Цитология. 48 (9): 746.

4. Большакова А., О. Петухова, В. Бабаков, Л. Туроверова, Д. Тентлер, К.-Е. Магнуссон, Г. П. Пинаев. 2006. Распределение изоформ альфа-актинина 1 и 4 в клетках А431. Цитология. 48 (9): 747.

5. Bolshakova А., О. Petukhova, L. Turoverova, V. Babakov, D. Tentler K-E. Magnusson, G. Pinaev. 2006. Adhesion induced actinin 1 and actinin 4 re-distribution in A431 spread on fibronectin and laminin 2/4. Abstracts the American Society for Cell Biology, 46-th Annual Meeting.

6. Большакова А., О. Петухова, Л. Туроверова, Д. Тентлер, К.-Е. Магнуссон, Г. П Пинаев. 2007. Структурно не связанный и связанный альфа-актинин в клетках А431. Цитология. Т49. С. 719−720.

7. Большакова А., О. Петухова. 2007. Анализ субклеточного распределения р65 субъединицы NF-кВ при воздействии ЭФР и адгезии клеток А431 к фибронектину.

Материалы 11-й пущинской международной школы-конференции молодых ученых, 29 октября-2 ноября, Пущино. С. 71−72.

8. Bolshakova А., О. Petukhova, L. Turoverova, V. Babakov, D. Tentler, K-E. Magnusson, G. Pinaev. 2007. Extra-cellular matrix proteins induce re-distribution of alpha-actinin-1 and alpha-actinin-4 in A431 cells. Cell Biol. Int. 31. P. 360−365.

9. Bolshakova A., O. Petukhova, L. Turoverova, D. Tentler, K-E. Magnusson, G. Pinaev.

2007. EGF influences the sub cellular distribution of alpha actinins and NFkB in A431 cells spread on fibronectin. The American Society for Cell Biology Meeting Abstracts. Mol. Biol. Cell 18 (suppll): 484.

10.Petukhova O., Bolshakova A., Turoverova L., Tentler D., Magnusson K.-E., Pinaev G.

2008. The distribution of RelA/p65 in the cytoplasm is actin cytoskeleton-dependant but not its nuclear translocation in A431 cells stimulated with EGF. Abstracts of 33rd FEBS Congress and 11th IUBMB Conference. Athens, Greece, June, 29th -3rd July, PP4D-14, p.254.

11 .Babakov, O. Petukhova, L. Turoverova, I. Kropacheva, D. Tentler, A. Bolshakova, E. Podolskaya, K-E. Magnusson, G. Pinaev. 2008. RelA/NF-кВ transcription factor associates with a-actinin-4. Exp. Cell Res. 314. P. 1030−1038.

12. Большакова А. В., Петухова О. А., Магнуссон K.-E., Пинаев Г. П. 2008. Альфа актинины и NF-кВ совместно перераспределяются в клетках А431 в разных субклеточных компартментах. Материалы 4-го съезда биохимиков и молекулярных биологов. Новосибирск, 11−15 мая. С. 16 (№ 269).

13. Большакова А., Петухова О. 2008. Альфа актинин 4 взаимодействует с N-концевой последовательностью RelA/p65 in vitro и может принимать участие в формировании специфических ДНК-белковых комплексов. Сборник тезисов 12-й Пущинской международной школы-конференции Молодых ученых, 10−14 ноября, Пущино. С. 8−9.

14. Большакова А. В., О. А. Петухова, Г. П. Пинаев, К.-Е. Магнуссон. 2009. Сравнительный анализ способов субклеточного фракционирования для выявления а-актинина 1 и а-актинина 4 в клетках А431. Цитология. 51 (2): 122−129.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Результаты иммунофлуоресцентной микроскопии и биохимического анализа субклеточных фракций демонстрируют существование в цитоплазме как связанного с актиновыми структурами пула р65, так и несвязанного (диффузного). На всех этапах реорганизации актинового цитоскелета, вызванных как адгезией к фибронектину, так и воздействием ЭФР, рб5 в цитоплазме обнаруживался в связи с F-актином, в области стресс-фибрилл и раффлов. Помимо этого, р65 выявлялся в дискретных актин-содержащих областях, названных пэтчами, в которых присутствовали также белки, характерные для комплексов, связанных с фокальной адгезией. Накопление р65 под влиянием ЭФР в областях, связанных с фокальной адгезией, свидетельствует в пользу того, что присутствие р65 в этих областях является одним из этапов активации NF-кВ в клетках А431. Накопление р65 в ядре через 30 мин воздействия ЭФР, по-видимому, не связано с присутствием в клетках А431 стресс-фибрилл и раффлов. В чем заключаются различия между пулом р65, направляемым в ядро, и пулом р65, ассоциированным с актин-содержащими структурами в цитоплазме, остается пока не выясненным.

Данные о том, что а-актинин-4 может взаимодействовать в реакции in vitro с N-концевой последовательностью RelA/p65, солокализуется с RelA/p65 в области стресс-фибрилл, раффлов и пэтчей на всех стадиях реорганизации актинового цитоскелета, а также выявление этих белки в одних и тех же субклеточных фракциях, присутствие а-актинина-4 в ядре, где он может принимать участие в формировании кВ-специфичного ДНК-белкового комплекса, позволяет утверждать, что а-актинин-4 является функциональным партнером р65 субъедипицы NF-кВ и сопровождает RelA/p65 в процессе активации в цитоплазме и в ядре. Выявленные особенности локализации и распределения а-актинина-1, его солокализация с р65 в цитоплазме, а также возможность прямого взаимодействия этих белков позволяется предположить, что а-актинин-1 может участвовать в процессах, связанных с активацией NF-kB. Однако вопрос о том, почему в мультибелковых комплексах после реакции иммунопреципитации с антителами к р65 выявлялся только а-актинин-4, как это было продемонстрировано ранее в нашей лаборатории, остается невыясненным и требует дальнейших исследований.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Арэ А.Ф. 2000. Взаимодействие поверхностных рецепторов клетки с различными иммобилизованными и свободными лигандами определяет структуру актинового цитоскелета. Диссертация на соискание ученой степени канд. биол. наук. С.Петербург.
  2. В.Н. 2004. Взаимодействие изоформ а-актинина с транскрипционным фактором RelA/NF-кВ. Диссертация на соискание ученой степени канд. биол. наук. С.Петербург.
  3. В.Н., Кропачева КВ., Петухова O.A., Туроверова Л. В., Пинаев Г. П. 2004. Внутриклеточное распределение актинсвязывающих белков, фосфорилированных по тирозину, при распластывании клеток А431 на разных лигандах. Цитология. 46(12): 1055−1063.
  4. Н. В., Киселева Е. В. 2007. Структурная организация и функции ядерной оболочки. Цитология. 49 (4): 257−269.
  5. А. Н., Петухова О. А., Туроверова JI. В., Кропачева И. В., Пинаев Г. П. 2006. Динамика ДНК-связывающей активности факторов транскрипции в процессе распластывания клеток А431 на иммобилизованных лигандах. Цитология. 48(11): 935 947.
  6. А.Н. 2006. Изменения ДНК-связывающей активности транскрипционных факторов при реорганизациях актинового цитоскелета клеток А431. Диссертация на соискание ученой степени канд. биол. наук. С.-Петербург.
  7. Т., ФричЭ., СэмбрукДж. 1984. Методы генной инженерии. Молекулярное клонирование, перевод с англ. под ред. Баева A.A. и Скрябина К. Г. М: Мир, 480 с.
  8. У. и Хуан Р. 1987. Транскрипция и трансляция. Методы. Под ред. Б. Хейлеса и С.Хигинса. гл. 4. Транскрипция РНК в изолированных ядрах. М: Мир. С. 111−115.
  9. Н.Н., Сорокин А. Д., Сорокин А. Б. 1987. Эпидермальный фактор роста. Л: Изд-во Наука. С. 200.
  10. О. А., Туроверова Л. В., Кропачёва И. В., Пинаев Г. П. 2004. Анализ морфологических особенностей популяции клеток эпидермоидной карциномы А431, распластанных на иммобилизованных лигандах. Цитология. 46(1): 5−15.
  11. А.Е., Hogan В.P., Тотеи J., Juliano R.L. 2002. Cell adhesion differentially regulates the nucleocytoplasmic distribution of active MAP kinases. J Cell Sci. 115: 27 812 790.
  12. N., Egamia Y., Watanabe Y., Hataea T. 2007. Phosphoinositide metabolism during membrane ruffling and macropinosome formation in EGF-stimulated A431 cells. Exp. Cell Res. 313: 1496−1507.
  13. Araki N., Hatae Т., Yamada Т., Hirohashi. 2000. Actinin-4 is preferentially involved in circular ruffling and macropinocytosis in mouse macrophages: analysis by fluorescence ratio imaging. Journal of Cell Science. 113: 3329−3340.
  14. Are A.F., Galkin V.E., Pospelova T.V., Pinaev G.P. 2000. The RelA/p65 subunit of NF-kB interacts with actin-containing structures. Exp. Cell Res. 256: 533−544.
  15. Are A.F., Pinaev G.P., Burova E., Lindberg U. 2001. Attachment of A-431 cells on immobilized antibodies to the EGF receptor promotes cell spreading and reorganization of the microfilament system. Cell Motility and the Cytoskeleton. 48: 24−36.
  16. BaekM.K., Kim M.H., Jang H.J., Park J.S., Chung I. J., Shin B.A., Ahn B. W., Jung Y.D. 2008. EGF stimulates uPAR expression and cell invasiveness through ERK, AP-1, and NF-kappaB signaling in human gastric carcinoma cells. Oncol Rep. 20(6): 1569−1575.
  17. Т., Gazel A., Blumenberg M. 2005. Pathway-specific profiling identifies the NF-kB-dependent TNFa-regulated genes in epidermal keratinocytes. J. Biol. Chem. 280: 1 897 318 980.
  18. G., Singer R.H. 1997. mRNA and cytoskeletal filaments. Current opinion in Cell Biology. 9: 109−115.
  19. Bassell G.J., Oleynikov Y, Singer R.H. 1999. The travels of mRNAs through all cells large and small. FASEB J. 13(3): 447−454.
  20. C.L., Woodward A.M., Crouch D.H. 2004. Nuclear ERM (ezrin, radixin, moesin) proteins: regulation by cell density and nuclear import. Experimental Cell Research. 296: 208−222.
  21. Benecke B.-J., Ben-Zeev A., Penman S. 1978. The control of mRNA production, translation and turnover insuspended and reattached anchorage-dependent fibroblasts. Cell. 14:931−939
  22. A., Scott M., Poupon V., Marullo S. 2003. Nuclear functions for plasma membrane-associated proteins? Blackwell Munksgaard. 4: 503−511.
  23. M. J. 1993. Cell signalling. A tale of two messengers. Nature. 365: 388−9.
  24. A.L., Yamada K.M. 2007. Cell-matrix adhesion. J Cell Physiol. 213(3): 565−573.
  25. Bershadsky, A.D., Vasiliev, J.M. 1988. Cytoskeleton. New York. Plenum Press: 298.
  26. Birbach A., Gold P., Binder B.R., Hofer E., de Martin R., Schmid J.A. 2002. Signaling molecules of the NF-kappa B pathway shuttle constitutively between cytoplasm and nucleus. J Biol Chem. 277 (13): 10 842−10 851.
  27. C.A., Ugrinova G.T., Goodson H. V. 2004. Actin and ARPs: action in the nucleus. Trends in Cell Biology. 14(8): 435−442.
  28. G., Potter V.R. 1966. Nuclei from rat liver: isolation method that combines purity with high yield. Science. 154: 1662−1665.
  29. Botteri F.M., Ballmer-Hofer K., Rajput B., Nagamine Y. 1990. Disruption of cytoskeletal structures results in the induction of the urokinase-type plasminogen activator gene expression. J Biol Chem. 265(22): 13 327−34.
  30. G., Gimona M. 2004. Actin cytoskeleton remodelling via local inhibition of contractility at discrete microdomains. J. Cell Sci. 117: 223−231.
  31. F., Dower S.K., Qwarnstrom E.E. 2000. Dinamic shuttling of nuclear factor kB between the nucleus and cytoplasm as a consequence of inhibitor dissociation. The journal of biological chemistry. 275 (52): 41 028−41 034.
  32. G. 1992. Receptor tyrosine kinase substrates: src homology domains and signal transduction. FASEB J. 6: 3283−9.
  33. Chakraborty S, Reineke E.L., Lam M" LiX., Liu Y., Gao C" Khurana S" Kao H.Y. 2006. Alpha-actinin 4 potentiates myocyte enhancer factor-2 transcription activity by antagonizing histone deacetylase 7. J. Biol. Chem. 281: 35 070−35 080.
  34. N.R., Webster G.A., Gillespie P.J., Wilson B.J., Crouch D.H., Perkins N.D. 2002. A novel form of the RelA nuclear factor kappab subunits is induced by and forms a complex with the proto-oncogene c-Myc. Biochem. J. 366: 459−69.
  35. Chiang E.T., Lim M.J., Patton W.F., Shepro D. 2000. NFkappaB translocation in human microvessel endothelial cells using a four-compartment subcellular protein redistribution assay. J Biochem Biophys Methods. 2000. 46: 53−68.
  36. L.B., Vanderbilt C.A., Cobb M.H. 1999. MEKK1 interacts with alpha-actinin and localizes to stress fibers and focal adhesions. Cell Motil Cytoskeleton. 43:186−198.
  37. Clark K.A., McElhinny A.S., Beckerle M.C., Gregorio C.C. 2002. Striated muscle cytoarchitecture: an intricate web of form and function. Ann. Rev. Cell Dev. Biol. 18: 637 706.
  38. T.G., Merriam R.W. 1977. Diffusible and bound actin nuclei of Xenopus laevis oocytes. Cell. 12: 883−991.
  39. S. 1962. Isolation of a mouse submaxillary gland protein accelerating incisor eruption and eyelid opening in the newborn animal. J. Biol. Chem. 237: 1555−1562.
  40. Communal C., Sumandea M., de Tombe P., Narula J., Solaro R.J., Hajjar. 2002. Functional consequences of caspase activation in cardiac myocytes. PNAS. 99: 6252−6256.
  41. J.A. 1987. Effects of cytochalasin and phalloidin on actin. J Cell Biol. 105(4): 1473−1478.
  42. S., Bitterman H., Rahat M.A., Kinarty A., Rosenzweig D., Nitza L. 2003. Hipoxia activates inducible nitric oxide synthase in mouse macrophages by disrupting its interaction with alpha-actinin 4. Journal immunology. 171: 3225−3232.
  43. S., Harbers M., Vennstrom B. 1993. Identification and analysis of all components of gel retardation assay by combination with immunoblotting. Proc.Natl.Acad.Sci. 90: 2574−2578.
  44. C.L., Smith M.D., Latchman D.S. 1999. The DNA-mobility shift assay. Transcription factors, a Practical Approach Second Edition. Ed. Latchman D.S. Oxford. University Press.
  45. N., Reddy E. P. 1998. Signaling by dual specificity kinases. Oncogene. 17: 1447−1455.
  46. J., Farmer S.R. 1990. Regulation of al (I)-collagen gene expression in response to cell adhesion in swiss 3T3 fibroblasts. The Journal of Biological Chemystry. 265 (16): 9015−9015.
  47. L.E., Farmer S.R. 1998. Cell adhesion induces expression of growth-associated genes in suspension-arrested fibroblasts. Cell Biology. 85: 6792−6796.
  48. N., Blobel G. 1976. A modified procedure for the isolation of pore comlex-lamina fraction from rat liver nuclei. The J. Cell Biol. 70: 581−591.
  49. Fazal F., Minhajuddin M., Bijli K.M., McGrath J.L., Rahman A. 2007. Evidence for actin cytoskeleton-dependent and independent pathways for RelA/p65 nuclear translocation in endothelial cells. J Biol Chem. 282(6): 3940−3950.
  50. J.R., Burridge K. 1980. A rapid purification of alpha-actinin, filamin, and a 130,000-dalton protein from smooth muscle. J Biol Chem. 255: 1194−1199.
  51. Fermentas: catalogue and product application guide. 1998. Ed. A. Urbelis. Vilnius: Baricada.
  52. Fey E.G., Wan KM., Penman S. 1984. Epithelial cytoskeletal framework and nuclear matrix-intermediate filament scaffold: three-dimensional organization and protein composition. J. Cell Biol. 98:1973−1984.
  53. T.S., Pereira C.B., Tran T.C., Singleton C., Greenwood J. A. 2005. Phosphoinositide binding regulates alpha-actinin dynamics: mechanism for modulating cytoskeletal remodeling. J Biol Chem. 280(15): 15 479−82.
  54. Fricker M., Hollinshead M, White N., Vaux D. 1997. Interphase nuclei of many mammalian cell typer contain deep, dynamic, tubular membrane-bound invaginations of the nuclear envelope. J. Cel Biol. 136: 531−544.
  55. S.M., Screaton RA. 2001. Anoikis mechanisms. Current Opinion in Cell Biology. 13: 555−562.
  56. B., Bershadsky A., Pankov R., Yamada K.M. 2001. Transmembrane crosstalk between the extracellular matrix-cytoskeleton crosstalk. Nat Rev Mol Cell Biol. 2(11): 793 805.
  57. E., Schuppan D., Lichtner R.B. 1996. Signaling by epidermal growth factor differentially affects integrin-mediated adhesion of tumor cells to extracellular matrix prpteins. J. Mol. Med. 74: 609−616.
  58. Gettemans J., Van Impe K., Delanote V., Hubert T., Vandekerckhove J., De Corte V. 2005. Nuclear actin-binding proteins as modulators of gene transcription. Traffic. 6(10): 84 757.
  59. S., Karin M. 2002. Missing pieces in the NF-kappaB puzzle. Cell. 109 Suppl: S81−96.
  60. Gluck U., Ben-Ze'ev A. 1994. Modulation of alpha-actinin levels affects cell motility and confers tumorigenicity on 3T3 cells. J cell Sci. 107: 1773−1782.
  61. S., Franko A., Clemen C.S., Wiesner R.J. 2006. Alpha-actinin and BAT 1 interaction with Cytochrome c promoter upon skeletal muscle differentiation. Current Genetics. 49: 125−135.
  62. GuayJ., Lambert H, Gingras-Breton G., Lavoie J.N., HuotJ., Landry J. 1997. Regulation of actin filament dynamics by p38 map kinase-mediated phosphorylation of heat shock protein 27. J Cell Sci. 110: 357−368.
  63. Habib A.A., Chatterjee S., ParkS-K., Ratan R.R., Lefebvre S., Vartanian T. 2001. The epidermal growth factor receptor interacting protein and nuclear factor -kB (NF-kB)-inducing kinase to activate NF-kB. J Biol Chem. 276: 8865−8874.
  64. Hamasaki M, Araki N., Hatae T. 2004. Association of early endosomal autoantigen 1 with macropinocytosis in EGF-stimulated A431 cells. Anat. Rec. 277: 298−306.
  65. Hara T., Honda K., Shitashige M., Ono M., Matsuyama H, Naito K., Hirohashi S., Yamada T. 2007. Mass Spectrometry Analysis of the Native Protein Complex Containing Actinin-4 in Prostate Cancer Cells. Molecular & Cellular Proteomics. 6: 479−491.
  66. E.O., Smeglin A., Newton J., Ballard G., Rounds S. 2001. Protein tyrosine phosphatase-dependent proteolysis of focal adhesion complexes in endothelial cell apoptosis. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol.Physiol. 280: 342−353.
  67. J.C., Henegouwen P.M., Verkleij A.J., Boonstra J. 1992. The EGF receptor is an actin-binding protein. The Journal of Cell Biology. 119(2): 349−355.
  68. Heo W.D., Meyer T. 2003. Switch-of-function mutants based on morphology classification of Ras superfamily small GTPases. Cell. 113: 315−28.
  69. J.E. 1996. Sorting of messenger RNAs in the cytoplasm: mRNA localization and the cytoskeleton. Experimental cell research. 225: 219−236.
  70. Honda K, Yamada T., Endo R., Ino Y., Gotoh M., Tsiida H., Yamada Y., Chiba H., Hirohashi S. 1998. Actinin-4, a novel actin-bundling protein associated with cell motility and cancer invasion. The Journal of Cell Biology. 140(6): 1383−1393.
  71. Howe A., AplinA.E., Alahari S.K., Juliano R.L. 1998. Integrin sugnalling and cell growth control. Current Opinion in Cell Biology. 10: 220−231.
  72. Huang T.T., Kudo N., Yoshida M" Myamoto S. 2000. A nuclear export signal in the Nterminal regulatory domain of Ikappa B a controls cytoplasmic localization of inactive NF kappa B/ Ikappa B a complexes. Proc. Natl. Acad. Sci. 97: 1014−1019.
  73. Hui H., Fernando M.A., Heaney A.P. 2008. The alphal-adrenergic receptor antagonist doxazosin inhibits EGFR and NF-kappaB signalling to induce breast cancer cell apoptosis. Eur J Cancer. 44(1): 160−6.
  74. Hynes R.0.1999. Cell adhesion: old and new questions. Trends Cell Biol. 9(12): 33−37.
  75. R.O. 2002. Integrins: bidirectoral, allosteric signaling machines. Cell. 110: 673 687.
  76. Immure M., Endo T., Kuroda M., Tanaka 71, Masaki T. 1988. Substructure and higher structure of chicken smooth muscle a-actinin molecule. J. Biol. Chem. 263: 7800−7805.
  77. D.E. 2002. Mechanical signaling and the cellular response to extracellular matrix in angiogenesis and cardiovascular physiology. Circ Res. 91(10): 877−887.
  78. G.L., Lapadat R. 2002. Mitogen-activated protein kinase pathways mediated by ERK, JNK, and p38 protein kinases. Science. 298(5600): 1911−1912.
  79. KangK-H., Lee K-H, Kim M-Y., Choi K-H. 2001. Caspase-3 mediated cleavage of the NF-kB subunit p65 at the NH2 terminus potentiates naphtoquinone analog-induced apoptosis. J. Biol. Chem. 276: 3629−3639.
  80. Karin M., Liu Z.-G., Zandi E. 1997. AP-1 function and regulation. Curr. Opin. Cell Biol. 9: 240−246.
  81. I., Stradal T.E., Gimona M. 2003. Podosome formation in cultured A7r5 vascular smooth muscle cells requires Arp2/3-dependent de-novo actin polymerization at discrete microdomains. J. Cell Sci. 116: 4915−4924.
  82. Kustermans G., El Benna J., Piette J, Legrand-Poels S. 2005. Perturbation of actin dynamics induces NF-kappa B activation in myelomonocytic cells through an NADH oxidase-dependent pathway. Biochem. J. 387: 531−540.
  83. Kustermans G., El Mjiyad N., Horion J., Jacobs N., Piette J., Legrand-Poels S. 2008a. Actin cytoskeleton differentially modulates NF-kappaB-mediated IL-8 expression in myelomonocytic cells. Biochem Pharmacol. 76(10): 1214−1228.
  84. Kustermans G., Piette J., Legrand-Poels S. 20 086. Actin-targeting natural compounds as tools to study the role of actin cytoskeleton in signal transduction. Biochem. Pharmacol. 76(11): 1310−22.
  85. LaCasse E.C., MahoneyD.J., CheumgH. H, Plenchette S., BairdS., KornelukR.G. 2008. IAP-targeted therapies for cancer. Oncogene. 27(48): 6252−6275.
  86. U.K. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of the bacteriophage T4. Nature. 227: 680−685.
  87. R.M., Bernier S.M., Yamada KM. 1998. Adhesion to Fibronectin or collagen 1 gel induces rapid, extensive, biosynthetic alterations in epithelial cells. Journal of cellular physiology. 175: 163−173.
  88. Lallena M.J., Diaz-Meco M.T., Bren G., Paya C. V., MoscatJ. 1999. Activation of IkappaB kinase beta by protein kinase C isoforms. Mol Cell Biol. 3: 2180−2188.
  89. Legrand-Poels S., Kustermans G., Bex F., Kremmer E., Kufer T. A., Piette J. 2007. Modulation of Nod2-dependent NF-kB signaling by the actin eytoskeleton. Journal of Cell Science. 120: 1299−1310.
  90. B., Scatena M., Giachelli C.M., Ross R., Raines E. W. 1999. Apoptosis overrides survival signals throught a caspase-mediated, dominant-negative NF-kB loop. Nature Cell Biol. 1:227−233.
  91. Linder S" Aepfelbacher M. 2003. Podosomes: adhesion hot-spots of invasive cells. Trends in Cell Biol. 13: 376−385.
  92. Liu B.-L., McGrath J. 2005. Response of eytoskeleton of murine osteoblast cultures to two-step freezing. Acta biochim. biophys. 37: 814−818.
  93. Lock J.G., Wehrle-Haller B., Stromblad S. 2008. Cell-matrix adhesion complexes: master control machinery of cell migration. Semin Cancer Biol. 18(1): 65−76.
  94. LuikartS., Masri M., Wahl D., Hinkel T., Beck J.M., Gyetko M.R., Gupta P., Oegema T. 2002. Urokinase is required for the formation of mactinin, an alpha-actinin fragment that promotes monocyte/macrophage maturation. Biochim Biophys Acta. 1591: 99−107.
  95. R., Valleley E.M., Sharpe P.T., Hewitt J. E. 1994. An alternatively spliced transcript, p65 delta 2, of the gene encoding the p65 subunit of the transcription factor NF-kappaB. Gene. 138(1−2): 265−266.
  96. M. 2001. Cell adhesion: Ushering in a new understanding of myosin VII. Curr Biol. 11(8): 315−317.
  97. Massague J, Pandiella A. 1993. Membrane-anchored growth factors. Ann. Rev. Biochem. 62: 515−41.
  98. May M.J., Ghosh S. 1998. Signal transduction through NF-kB. Immunology today. 19(2): 80−88.
  99. McMahon L.W., Sangerman J., Goodman S.R., Kumaresan K., Lambert M.W. 2001. Human alpha spectrin II and the FANCA, FANCC, and FANCG proteins bind to DNA containing psoralen interstrand cross-links. Biochemistry. 40: 7025−7034.
  100. McMahon L.W., Walsh C.E., Lambert M.W. 1999. Human alpha spectrin II and the Fanconi anemia proteins FANCA and FANCC interact to form a nuclear complex. Biol. Chem. 274: 32 904−32 908.
  101. F., Manning A.M. 1999. Multiple signals converging on NF-kB. Current Opinion in Cell Biology. 11: 226−232.
  102. Meredith JJr, Mu Z, Saido T, DuX. 1998. Cleavage of the cytoplasmic domain of the integrin beta3 subunit during endothelial cell apoptosis. J. Biol. Chem. 273: 19 525−19 531.
  103. Michaud J.L., Hosseini-Abardeh M., FarahK., Kennedy C.R. 2009. Modulating alpha-actinin-4 dynamics in podocytes. Cell Motil Cytoskeleton. 66(3): 166−178.
  104. R., Klement J.F., Ruben S.M., Higgins K.A., Rosen C.A. 1992. Identification of naturally occuring transformibg variant of the p65 subunit of NF-kB. Science.256: 367 370.
  105. Ohisubo M., Ta/cayanagi A., GamouS., Shimizu N. 2000. Interruption ofNFkB-Statl signaling mediates EGF-induced cell-cycle arrest. Journal of cellular physiology. 184: 131 137.
  106. Olave I.A., Reek-Peterson S.L., Crabtree G. R 2002. Nuclear actin and actin-related proteins in chromatin remodeling. Annu Rev Biochem.71: 755−781
  107. Ornelles D.A., Fey E.G., Penman S. 1986. Cytochalasin releases mRNA from the cytoskeletal framework and inhibits protein synthesis. Molecular and cellular biology. 5: 1650−1662.
  108. C.A., Carpen O. 2004. Alpha-actinin revisited: A fresh look at an old player. Cell Motil. Cytoskeleton. 58: 104−111.
  109. H.R., Quadroni M., Bienvenut W., Buerki C., Hottiger M.O. 2005. Identification of novel and cell type enriched cofactors of the transcription activation domain of RelA (p65 NF-kB). J. of Proteome Research. 4: 1381−1390.
  110. Pavalko F.M., Chen N.X., Turner C.H., Burr D.B., Atkinson S., Hsieh Y.-F., Qui J., Duncan R.L. 1998. Fluid shear-induced mechanical signaling in MC3T3-E1 osteoblasts requires cytoskeleton-integrin interactions. Am. J. Physiol. 275: 1291−1601.
  111. T., Aebi U. 2002. Actin in the nucleus: what form and what for? J. Struct. Biol. 140: 3−9.
  112. P., Visa N. 2006. Molecular functions of nuclear actin in transcription. J Cell Biol. 172(7): 967−971.
  113. P., Zhao J., Pope B., Weeds A., Lindberg U., Daneholt B. 2001 Actin bound to the heterogeneous nuclear ribonucleoprotein hrp36 is associated with Balbiani ring mRNA from the gene to polysomes. J Cell Biol. 153: 229−236.
  114. Poch M. T., Al-Kassim L., Smolinski S.M., Hines R.N. 2004. Two distinct classes of CCAAT box elements that bind nuclear factor-Y/a-actinin-4: potential role in human CYP1A1 regulation. Toxicol. Applied Pharmacol. 199: 239−250.
  115. T.D., Cooper J. A. 1986. Actin and actin-binding proteins. A critical evaluation of mechanisms and functions. Annu Rev Biochem. 55: 987−1035.
  116. Porjiri E., McCormick F. 1996. Regulation of epidermal growth factor receptor signaling by phosphorylation of the ras exchange factor hSOSl. J. Biol. Chem. 271: 58 715 877.
  117. G., Sotiropoulos A., Treisman R. 2002. Mutant Actins Demonstrate a Role for Unpolymerized Actin in Control of Transcription by Serum Response Factor. Molecular Biology of the Cell. 13: 4167−4178.
  118. Qwarnstrom E.E., Ostberg C.O., TurkG.L., Richardson C.A., BomsztykK. 1994. Fibronectin attachment activates the NF-kappa B p50/p65 heterodimer in fibroblasts and smooth muscle cells. J Biol Chem. 269(49):30 765−30 768.
  119. Ravi R., BediA., Fuchs E.J., BediA. 1998. CD95 (Fas)-induced caspase-mediated proteolysis of NF-kappaB. Cancer Res. 58(5): 882−886.
  120. Reyes-Reyes M., MoraN., ZentellaA., Rosales C. 2001. Phosphatidylinositol 3-kinase mediates integrin-dependent NF-kappaB and MAPK activation through separate signaling pathways. J Cell Sci. 114: 1579−1589.
  121. RheeS. G., Bae Y. S. 1997. Regulation of phosphoinositide-specific phospholipase C isozymes. J. Biol. Chem. 272: 15 045−1548.
  122. A.J., Hall A. 1992. The small GTP-binding protein rho regulates the assembly of focal adhesion and actin stress fibers in response to growth factors. Cell. 1992. 70: 389−399.
  123. Riese D. J" Stern D. F. 1998. Specificity within the EGF family/ErbB receptor family signaling network. Bioessays. 20(1): 41−48.
  124. M.J., Cobb M.H. 1997. Mitogen-activated protein kinase pathways. Curr Opin Cell Biol. 9(2): 180−186.
  125. Ruben S.M., Narayanan R., Klement J.F., Chen C-H., Rosen C.A. 1992. Functional characterization of the NF-kB p65 transcriptional activator and an alternatively spliced derivative. Mol.Cell.Biol. 12: 444−454.
  126. P., Pollard T.D. 1991. Effects of cytochalasin, phalloidin, and pH on the elongation of actin filaments. Biochemistry. 30(7): 1973−1980.
  127. S.K., Burridge K. 2002. Focal adhesions: a nexus for intracellular signaling and cytoskeletal dynamics. Exp Cell Res. 261(1): 25−36.
  128. Savage C. R., Inagami T, Cohen S. 1972. The primary structure of epidermal growth factor. J. Biol. Chem. 247(23): 7612−21.
  129. J. 1990. Mutation analisis of epidermal growth factor-receptor kinase. Biochem. Soc. Symp. 61(2): 203−212.
  130. A., Hall M.N. 1998. Signaling to actin cytoskeleton. Annu.Rev.Cell Develop.Biol. 14: 305−338.
  131. S.M., Burridge K. 1999. Bidirectional signaling between the cytoskeleton and integrins. Current Opinion in Cell Biology. 11: 274−286.
  132. Schutze S, Nottrott S, Pfizenmaier K, Kranke M. 1990. Tumor necrosis factor signal transduction. Cell-type-specific activation and translocation of protein kinase C. J. Immunol. 144: 2604−2608.
  133. J.L., Corbett S.A., Wenk M.B., Schwarzbauer J.E. 1998. Modulation of cell-extracellular matrix interactions. Annals New-York Academy of Sciences. 857: 143−154.
  134. N., Brooks W.H., Roszman T.L. 1996. Proteolytic cleavage of a-actinin by calpain in T cells stimulated with anti-CD3 monoclonal antibody. J. Immunol. 156: 32 153 221.
  135. Sen R., Baitimor D. 1986. Inducibility of k immunoglobulin enhancer-binding protein NF-kB by a post-translational mechanism. Cell. 47: 921−928.
  136. Shyu Y.J., Suarez C.D., Hu C.D. 2008. Visualization of AP-1 NF-kappaB ternary complexes in living cells by using a BiFC-based FRET. Proc Natl Acad Sei USA. 105(1): 151−156.
  137. J. V., Rottner K., Kaverina I., Anderson K.I. 1998. Assembling an actin cytoskeleton for cell attachment and movement. Biochim. Biophys. acta. 1404: 271−281.
  138. A., Gineitis D., Copeland J., Treisman R. 1999. Signal-regulated activation of serum response factor is mediated by changes in actin dynamic. Cell. 98: 159 169.
  139. Sridharan D., Brown M., Lambert W.C., McMahon L.W., Lambert M.W. 2003. Nonerythroid alphall spectrin is required for recruitment of FANCA and XPF to nuclear foci induced by DNA interstrand cross-links. J. Cell Sei. 116: 823−835.
  140. Sun L., Carpenter G. 1998. Epidermal growth factor activation of NF-kB is mediated thought IkBcx degradation and intracellular free calcium. Oncogene. 16: 2095−2102.
  141. J.A., Watts C. 1995. Macropinocytosis. Trends Cell Biol. 5(11): 424−428.
  142. Y., Katuri V., Dillner A., Mishra B., Deng C.X., Mishra L. 2003. Disruption of transforming growth factor-beta signaling in ELF beta-spectrin-deficient mice. Science. 299(5606): 574−577.
  143. D., Maniatis T. 1995. NF-kB: a lesson in family values. Cell. 80: 529−532.
  144. B., Nowak D.E., Jamaluddin M., Wang S., Brasier A.R. 2005. Identification of Direct Genomic Targents Downstream of the Nuclear Factor-KB Transcription Factor
  145. H., Staehelin T., Gordon J. 1979. Electrophoretic transfer of proteins from Polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Nat. Acad. Sei. 76: 4350−4354.
  146. A., Schlessinger J. 1990. Signal transduction by receptors with tyrosine kinase activity. Cell. 61:203−212.
  147. Varon C., Tatin F., Moreau V, Obberghen-Schilling E.V., Fernandez-Sauze S., Reuzeau E., Kramer I., Genot E. 2006. Transforming growth factor alpha induces rosettes of podosomes in primary aortic endothelial cells. Mol. Cell. Biol. 26: 3582−3594.
  148. M., Aligue R., Bachs O., Seratosa J. 1991. Presence of calmodulin and calmodulin-binding proteins in the nuclei of brain cells. J Neurochem. 57(2): 622−628.
  149. Verma I.M., Stevenson J.K., Schwartz E.M., Antwerp D. V, Miyamoto S. 1995. Rel/NF-kB/IkB family: initimate tales of association and dissociation. Genes & Development. 9: 2723−2735.
  150. Vincent C., Pruliere G., Pajot-Augy E., Campion E., Gamier V, Renard J.P. 1990. Effects of cryoprotectants on actin filaments during the cryopreservation of one-cell rabbit embiyos. Cryobiology. 27: 9−23.
  151. A., Fukuda M., Mishima M., Nishida E. 1998. Nuclear export of actin: a novel mechanism regulating the subcellular localization of a major cytoskeletal protein. EMBO J. 17: 1635−1641.
  152. Wei L., WangL., Carson J.A., AganJ.E., Imanaka-Yoshida K., Schwartz R.J. 2001. Betal integrin and organized actin filaments facilitate cardiomyocyte-specific RhoA-dependent activation of the skeletal alpha-actin promoter. FASEB J. 15(3): 785−796.
  153. K.M., Geiger B. 1997. Molecular interactions in cell adhesion complexes. Curr. Opin. Cell Biol. 9: 76−85.
  154. S. J., Woodgeft J.R. 2001. Extracellular matrix composition determines the transcriptional response to epidermal growth factor receptor activation. Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 98(8): 4472−4477.
  155. KG., Kothary R. 2005. Specrtin repeat proteins in the nucleus. BioEssays. 27: 144−152.
  156. Zhang S., Buder K., Burkhardt C, Schlott B., Gorlach M" Grosse F. 2002. Nuclear DNA helicase II/RNA helicase A binds to filamentous actin. J Biol Chem. 277: 843−53
  157. Zhong H., May M. J., Jimi E., Ghosh S. 2002. The phosphorylation status of nuclear NFkappaB determines its association with CBP/p300 or HDAC-1. Mol. Cell. 9: 625−636.
  158. Zhong H., Voll R.E., Ghosh, S. 1998. Phosphorylation of NFkappa B p65 by PKA stimulates transcriptional activity by promoting Silencing mediator of a novel bivalent interaction with the coactivator CBP/p300. Mol. Cell. 1: 661−671.
  159. Zhu P., Xiong W., Rodgers G., Qwarnstrom E.E. 1998. Regulation of interleukin 1 signalling through integrin binding and actin reorganization: disparate effects on NF-kappaB and stress kinase pathways. Biochem J. 330 (Pt 2): 975−981.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!