Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Получение и культурно-морфологическая характеристика кератиноцитов кожи плодов кролика, кошки, собаки

Диссертация: Получение и культурно-морфологическая характеристика кератиноцитов кожи плодов кролика, кошки, собаки
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Отработаны методы выделения и культивирования клеток ЭСКП кролика, кошки и собаки. Установлено, что наиболее эффективным способом разделения эпидермального и дермального слоев кожи является применение 0,4% раствора диспазы, а также применение смеси из 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 7:1. Для ферментативной дезагрегации клеток ЭСКП кролика, кошки, собаки… Читать ещё >

Получение и культурно-морфологическая характеристика кератиноцитов кожи плодов кролика, кошки, собаки (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • Список условных сокращений
  • 1. Введение
  • 2. Обзор литературы
    • 2. 1. Культуры клеток кожи млекопитающих и история их получения
    • 2. 2. Гистологическое строение и эмбриогенез кожи млекопитающих
    • 2. 3. Методы получения и культивирования кератиноцитов млекопитающих
  • 3. Собственные исследования
    • 3. 1. Материалы исследований
      • 3. 1. 1. Питательные среды и растворы
      • 3. 1. 2. Постоянные линии и диплоидные штаммы клеток
      • 3. 1. 3. Штаммы вирусов
    • 3. 2. Методы исследований
      • 3. 2. 1. Получение первичной культуры клеток кожи
      • 3. 2. 2. Подсчет концентрации клеток в суспензии
      • 3. 2. 3. Определение доли жизнеспособных клеток и подсчет индекса пролиферации
      • 3. 2. 4. Цитологические методы исследования
      • 3. 2. 5. Кариологическое исследование
      • 3. 2. 6. Электронно-микроскопическое исследование
      • 3. 2. 7. Вирусологические исследования
      • 3. 2. 8. Криоконсервирование и создание банка культур клеток
    • 3. 3. Результаты исследований
      • 3. 3. 1. Разработка оптимальных условий ферментативного разделения эпидермального и дермального слоев кожи плодов кролика, кошки, собаки
      • 3. 3. 2. Разработка оптимальных условий ферментативной дезагрегации ЭСКП кролика, кошки, собаки
      • 3. 3. 3. Разработка оптимальных условий культивирования первичных культур ЭСКП кролика, кошки, собаки
      • 3. 3. 4. Определение эффективности ростовых свойств питательных сред для культивирования первичных культур ЭСКП кролика, кошки, собаки
      • 3. 3. 5. Субкультивирование клеток ЭСКП кролика, кошки, собаки
      • 3. 3. 6. Сравнительное изучение культурально-морфологических свойств полученных культур с постоянной линией RSK и диплоидным штаммом КЭК
      • 3. 3. 7. Изучение динамики митотической активности в процессе длительного культивирования клеток ЭСКП кролика
      • 3. 3. 8. Сравнительный кариологический анализ культуры клеток ЭСКП кролика и постоянной линии RSK
      • 3. 3. 9. Ультраструктурная характеристика состава клеточной культуры ЭСКП кролика
      • 3. 3. 10. Изучение влияния глубокого замораживания на жизнеспособность клеток ЭСКП кролика, кошки, собаки
      • 3. 3. 11. Изучение чувствительности культуры клеток ЭСКП кролика к вирусам
  • 4. Обсуждение результатов исследований
  • 5. Выводы
  • Практические предложения

Кожа образует внешний покров организма и является одним из наиболее крупных органов. Физиологическую значимость кожи трудно переоценить. Пограничное расположение кожи обусловливает ее непосредственное взаимодействие с внешней средой и ее повреждающими факторами. Поврежденная кожа не способна выполнять возложенные на нее функции, а обширные и долго не заживающие повреждения могут привести к летальному исходу.

Таким образом, кожа представляет собой важный объект для фундаментальных и прикладных исследований в биотехнологии, ветеринарии и гуманитарной медицине.

Первыми практический интерес к культурам клеток кожи проявили врачи-комбустиологи, т.к. одной из главных проблем лечения больных с обширной ожоговой травмой (30−40% поверхности тела) является закрытие раневых поверхностей. Однако закрыть все ожоговые раны при помощи одних лишь аутодермотрансплантатов часто бывает невозможно из-за дефицита донорских ресурсов.

Принципиальная возможность использования для заживления ран аутоклеток кожи, выращенных in vitro, была показана ещё в сороковых годах XX века в работах профессора зоологии Лондонского университета Р.В. Medawar (1948). Тогда же были предприняты первые попытки получения кератиноцитов.

В то же время группа ученых (Robbins F.C., Enders J.F., Weller Т.Н., 1949) в процессе изучения вируса полиомиелита показали возможность использования различных клеточных культур и, в частности, культур клеток кожи в качестве моделей для изучения и накопления вирусов.

Первичные и органные культуры клеток кожи нашли широкое применение в исследованиях дермотропных вирусов, а также в производстве вакцин против них (Рысмендева К.К., 1992; Животная клетка в культуре, 2000; Wurster D.H., Benirschke К., 1970).

Развитие методической базы для получения и культивирования кератиноцитов произошло благодаря изучению биологии дерматофитов и патогенеза дерматофитозов, т.к. жизнедеятельность этих грибов тесно связана с кератином эпидермиса (Ни F., Livingood C.S. et al., 1954; Alteras I., Gavrilescu M., 1965).

Культуры кератиноцитов хорошо зарекомендовали себя не только как основной компонент для создания трансплантационного материала, но также как чувствительная модель для вирусологических исследований, ценный инструмент в биотехнологическом производстве и фармакологии (Prunieras М., 1984; Livingood C.S., Ни F., 1954), доступный источник стволовых клеток (Papini S., Cecchetti D., Campani D. et al., 2003, Radu E., Simionescu O., Regalia Т., 2003; Спичкина О. Г., Калмыкова H.B., Кухарева JI.B. и др., 2006) и генетического материала (De Luca М., Pellegrini G., 1997).

К 1975 г. были достигнуты определенные успехи в культивировании трипсинизированных кератиноцитов (Rheinwald J.G., Green Н., 1975). Преимуществом данного метода является предварительное разделение кожи по базальной пластинке на дерму и эпидермальный слой с последующей дезагрегацией отделенного эпидермиса.

Использование фидерных слоев клеток и питательных сред с физиологически высоким содержанием кальция позволило решить техническую задачу получения эпидермальных пластов с целью их трансплантации.

Но разработанные еще в 1975 году методики выделения и последующего субкультивирования кератиноцитов сопряжены с рядом трудностей, а именно использование специфических, дорогостоящих реактивов, применение сложных и длительных приемов культивирования, ряд которых накладывает ограничения на возможности дальнейшего применения полученных культур.

У большинства известных перевиваемых линий клеток эпидермального слоя кожи при длительном пассировании снижается чувствительность к вирусам, ухудшается пролиферативный потенциал, меняются культурально-морфологические свойства. Всегда может возникнуть потребность оперативного получения новых перевиваемых линий кератиноцитов от различных видов животных.

Поэтому, представляется актуальной в научном и практическом отношениях разработка легко воспроизводимых, оперативных и унифицированных для различных видов животных методик получения культур кератиноцитов с их детальной культурально-морфологической, кариологической и ультраструктурной характеристикой.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы состояла в получении культур кератиноцитов кожи плодов кролика, собаки, кошки, изучение их культурально-морфологических свойств и чувствительности к вирусам.

В связи с этим были поставлены следующие задачи: получить первичные культуры клеток ЭСКП кролика, собаки, кошкиполучить субкультуры клеток ЭСКП кролика, собаки, кошки с преобладанием в составе монослоя клеток эпителиоподобной морфологиипровести сравнительное изучение культурально-морфологических свойств полученных культур со стабильной клеточной линией RSK и диплоидным штаммом КЭКпровести сравнительный кариологический анализ полученных культур со стабильной клеточной линией RSKпровести ультраструктурное исследование полученных культур клетокизучить чувствительность полученных культур к различным вирусамотработать метод глубокого замораживания (-196°С) полученных культурдепонировать полученные культуры клеток в криобанк ВИЭВна основе проведенных исследований разработать методические рекомендации по получению и культивированию кератиноцитов кожи плодов кролика, кошки, собаки.

Научная новизна. Получены первичные культуры и субкультуры клеток ЭСКП кролика, кошки, собаки с использованием различных диспергирующих агентов.

Получен диплоидный штамм кератиноцитов кожи плода кролика и постоянная клеточная линия ЭККГЖр. Изучены их культурально-морфологические и кариологические свойства. Представлена ультраструктурная характеристика полученных клеточных культур.

Показано, что субкультуры клеток ЭСКП кролика на 20 и 38 пассажах, диплоидный штамм клеток ЭСКП кролика на 45 пассаже, а также ЭККПКр обладают высокой чувствительностью к вирусу ВД-БС и слабой чувствительностью к вирусу ИРТ.

Практическая ценность работы. В результате проведенных исследований усовершенствованы методы получения первичных культур и субкультур клеток ЭСКП кролика, кошки, собаки. Получены и заложены в криобанк ВИЭВ субкультуры клеток ЭСКП кролика, кошки, собаки. Получен и заложен в криобанк ВИЭВ диплоидный штамм кератиноцитов кожи плода кролика и постоянная клеточная линия ЭККПКр и показана возможность их использования в вирусологических исследованиях.

Разработаны и опубликованы методические рекомендации по получению и культивированию кератиноцитов кожи плодов кролика, кошки, собаки.

Апробация. Основные материалы диссертации были доложены и обсуждены на:

Международной конференции «Сохранение генетических ресурсов» (Москва, ВИЭВ, 2006 г.);

3-ем Всемирном конгрессе регенеративной медицины (Лейпциг, 2007.

Межлабораторном совещании научных сотрудников ВИЭВ (2008 г.).

Секции «Ветеринарной биотехнологии» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2008.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, 1 работа находится в печати.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 135 страницах и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Материалы диссертации иллюстрированы 14 таблицами, 63 рисунками.

Список литературы

включает 105 публикаций, в том числе 67 иностранных.

120 5. Выводы.

1. Отработаны методы выделения и культивирования клеток ЭСКП кролика, кошки и собаки. Установлено, что наиболее эффективным способом разделения эпидермального и дермального слоев кожи является применение 0,4% раствора диспазы, а также применение смеси из 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 7:1. Для ферментативной дезагрегации клеток ЭСКП кролика, кошки, собаки рекомендуется применение смеси из 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 7:1. Клетки ЭСКП кролика, кошки, собаки активно пролиферируют в средах Игла ДМЕМ и Игла MEM с двойным набором аминокислот и удовлетворительно пролиферируют на средах Игла MEM, 199, а также смеси сред 199 и 0,5% ГЛА в соотношении 9:1. Питательные среды следует дополнять 5−7% фетальной сыворотки КРС.

2. Получены первичные культуры и субкультуры клеток ЭСКП кролика, кошки, собаки, изучены их культурально-морфологические свойства. Впервые получены диплоидный штамм ЭСКП кролика и постоянная линия клеток (ЭККПКр) и дана их культурально-морфологическая характеристика.

3. Дана ультраструктурная характеристика субкультур клеток и диплоидного штамма ЭСКП кролика и ЭККПКр. Субкультура, диплоидный штамм клеток ЭСКП кролика и ЭККПКр представлены различными типами клеток, которые по ультраструктурной организации могут быть идентифицированы как кератиноциты, меланоциты и клетки Лангерганса на различных стадиях дифференциации.

4. Для полученных культур оптимизированы условия глубокого замораживания и последующего восстановления. Для глубокого замораживания субкультур клеток ЭСКП кролика, собаки, кошки, а также для глубокого замораживания диплоидного штамма ЭСКП кролика и ЭККПКр применима криозащитная среда, состоящая на 50% из питательной среды Игла MEM, на 40% - из фетальной сыворотки КРС и на 10% - из ДМСО. Жизнеспособность восстановленных клеток ЭСКП кролика не зависела от пассажа и составляла 75−80%. Жизнеспособность клеток ЭСКП собаки и кошки на 4 пассаже была несколько ниже и составляла 65% и 5055% соответственно. Все полученные культуры депонированы в криобанке ВИЭВ.

5. Установлена высокая чувствительность клеток субкультуры, диплоидного штамма ЭСКП кролика и ЭККПКр к вирусу ВД-БС (титр вируса достигает 6,0−6,5 1§ ТЦД50/мл) и слабая чувствительность к вирусу ИРТ. Цитоморфологические изменения, вызываемые вирусом ВД-БС в культурах клеток ЭСКП кролика и ЭККПКр сходны с изменениями, развивающимися в культурах клеток КСТ и ПЭК.

6. Показана возможность применения ЭККПКр в качестве демонстративной модели для постановки реакции нейтрализации на ВД-БС.

Практические предложения.

1. Отработанные методы получения культур клеток ЭСКП кролика, кошки, собаки рекомендуются для научных учреждений и диагностических лабораторий.

2. Субкультуры клеток ЭСКП кролика, кошки, собаки могут быть использованы в научных исследованиях.

3. Диплоидный штамм ЭСКП кролика и постоянная клеточная линия ЭККПКр, высокочувствительные к вирусам ВД-БС, рекомендуются для вирусологических исследований и в качестве демонстративной модели для постановки реакции нейтрализации на ВД-БС.

4. «Методические рекомендации по получению и культивированию кератиноцитов кожи плодов кролика, кошки, собаки», РАСХН, М., 2008;12 с.

Показать весь текст

Список литературы

  1. , О.Г. Получение и характеристика культур диплоидных клеток из тканей животных / Анджапаридзе О. Г., Осидзе Д. Ф., Витина С. А. // Вопросы вирусологии. 1973. — № 1. — С.102−108.
  2. , B.JI. Частная гистология человека (краткий обзорный курс) / B.JI. Быков. — 2-е изд. перераб и доп. — СПб.: Сотис, 1999. 301 с.
  3. , А.В. Роль фидерных клеток в прикреплении и росте кератиноцитов человека и крысы / Васильев А. В., Волошин А. В., Терских В. В. // Цитология. 1991. — № 33 (12). — С. 84−89.
  4. , Б.К. Культура клеток и реконструкция ткани (На прим. кожи) / Б. К. Гаврилюк, Ю. А. Рочев, Т. И. Николаева // АН СССР, Науч. центр биол. исслед., Ин-т биол. физики Пущино: ОНТИ НЦБИ АН СССР. -1988.- 121 с.
  5. Гистология, цитология и эмбриология: Учеб. лит. для студ. мед. вузов. / Ю. И. Афанасьев, Н. А. Юрина, Е. Ф. Котовский и др.- Под ред. Ю. И. Афанасьев, Н. А. Юрина. 5-е изд., перераб. и доп. — М.: Медицина, 2002 — 744 с.
  6. Гистология: Учеб. для вузов / Н. В. Бойчук, P.P. Исламов, C. JL Кузнецов, Э. Г. Улумбеков, Ю. А. Челышев. М.: «Гэотар-Мед», 2001. — 672 с.
  7. , Ю.В. Влияние компонентов внеклеточного матрикса на распластывание кератиноцитов крысы на субстрате при культивировании в низкокальциевой среде / Горелик Ю. В., Блинова М. И., Пинаев Г. П. // Цитология. 1994.-№ 36 (12).-С. 1209−1212.
  8. , Ф.Д. Практикум по цитологии гистологии и эмбриологии сельскохозяйственных животных / Ф. Д. Гуков, В. И. Соколов, Е. В. Гусева. -Владимир.: ООО «Фолиант», 2002. 178 с.
  9. , Д.А. Цитопатогенное действие вирусов инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и парагриппа-3 в культуре клеток :
  10. Дис.. канд. вет. наук: 16.00.03 / Д. А. Данишевский — ВИЭВ. — Москва, 1981.-147 с.
  11. Животная клетка в культуре (Методы и применение в биотехнологии) / под ред. проф. Л. П. Дьяконова, проф. В. И. Ситькова // М.: Компания Спутник+, 2000. 400 с.
  12. , С.А. Вирусная диарея болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота : Дис.. докт. вет. наук: 16.00.03 / С.А. Жидков- ВИЭВ. -Москва, 1994.-352 с.
  13. , Т.Д. Создание аттестованных коллекций и банков культур клеток для научных исследований, производства препаратов, диагностики и лечения : Дис.. докт. биол. наук: 03.00.23 / Т.Д. Колокольцова- ГИСК. Москва, 2007. — 272с.
  14. , С.Л. Атлас по гистологии, цитологии и эмбриологии / С. Л. Кузнецов, Н. Н. Мушкамбаров, В. Л. Горячкина. М.: Медицинское информационное агентство, 2002. — 374 с.
  15. Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний / под. ред. проф. Э. Леннета, Н. Шмидт, перев. с англ. проф. С. Г. Дроздова // М.: Медицина, 1974. 776 с.
  16. , Л.Л. Выделение штамма перевиваемых клеток из тканей эмбриона человека. / Л. Л. Миронова, Н. Е. Гольдфрин, О. Ф. Сарычева // Кн.: Полиомиелит и другие энтеровирусные инфекции. М. — 1963. — С. 231−232.
  17. , Л.Л. Новые линии диплоидных клеток человека / Миронова Л. Л., Стобецкий И. В., Крючкова Г. П., Кудинова С. И., Кармышева В .Я., Малыгина И. Г., Попова В. Д., Ральф Н. М., Алпатова Г. А. // Вопросы вирусологии. 1987. — № 5.
  18. Г. Г. Влияние иммобилизованного фибронектина на кариотипическую изменчивость в клеточной сублинии фибробластов кожи индийского мунтжака / Полянская Г. Г., Горячая Т. С., Пинаев Г. П. // Цитология. 2005. — Том 47, № 10. — С. 925−932.
  19. , Г. Г. Влияние внеклеточного белка теплового шока на хромосомную изменчивость в клеточной культуре фибробластов кожи индийского мунтжака / Полянская Г. Г., Кинев А. В., Сакута Г. А., Асеева Е. В. // Цитология. 1997. — Том 39, № 11.- С. 1070−1082.
  20. , Г. Г. Влияние криоконсервации на цитогенетические характеристики клеточной сублинии фибробластов кожи индийского мунтжака / Полянская Г. Г., Семенова Е. Г., Шубин Н. А. // Цитология. -1990. Том 32, № 3. — С. 256−265.
  21. , Г. Г. Влияние ламинина на кариотипическую изменчивость в клеточной линии фибробластов кожи индийского мунтжака / Полянская Г. Г., Горячая Т. С., Пинаев Г. П. // Цитология. 2002. — Том 44, № 5. — С. 491−498.
  22. , Г. Г. Влияние микоплазменной контаминации на кариотипическую структуру клеточной линии индийского мунтжака / Полянская Г. Г., Ефремова Т. Н. // Цитология. 1992. — Том 34, № 3. — С. 82−88.
  23. , Г. Г. Влияние условий культивирования на кариотипическую структуру двух клеточных сублиний фибробластов кожи индийского мунтжака / Полянская Г. Г. // Цитология. 1989. — Том 31, № 7. — С. 807 817.
  24. , Г. Г. Закономерности кариотипической изменчивости в клеточных культурах при длительном культивировании в разных условиях (Обзор) / Полянская Г. Г. // Успехи совр. биол. 2000. — Том 120, № 6.-С. 529−539.
  25. , Г. Г. Исследование генотоксического влияния ципрофлоксацина на культивируемые клетки почки кенгуровой крысы и фибробласты кожи индийского мунтжака /. Полянская Г. Г., Сизова JI.C. // Цитология. 1996. — Том 38, № 9. — С. 958−973.
  26. , Г. Г. Кариотипическая характеристика клеточных сублиний почки кенгуровой крысы и фибробластов кожи индийского мунтжака / Полянская Г. Г. // Цитология. 1988. — Том 30, № 6. — С. 732−738.
  27. , Г. Г. Кариотипическая характеристика линии фибробластов кожи индийского мунтжака при культивировании с разными сыворотками / Полянская Г. Г., Сизова JI.C., Николаенко Н. С. // Цитология. 1993. — Том 35, № 2. — С. 86−96.
  28. , Г. Г. Особенности количественной изменчивости кариотипа в клеточных сублиниях фибробластов кожи индийского мунтжака / Полянская Г. Г., Самокиш В. А. // Цитология. 1999. — Том 41, № 9. — С. 747−751.
  29. , К.К. Сравнительное изучение чувствительности культур клеток кожи плода овцы и плода крольчихи к вирусу контагиозной эктимы овец и коз : Дис. канд. биол. наук: 03.00.06 / К. К. Рысмендеева — ВИЭВ. Москва, 1992. -172 с.'
  30. , Б.П. Жизнеспособность кожи при криоконсервировании / Б. П. Сандомирский, Н. А. Волкова // Киев.: Наукова думка, 1985. 88 с.
  31. , В.В., Эпидермальные кератиноциты человека и животных: Проблемы культивирования и трансплантации / В. В. Терских, А. В. Васильев // М.: Наука, 1995. 104 с.
  32. , Б.П. Общая эмбриология: Учеб. для биол. спец. ун-тов. / Б. П. Токин. 4-е изд. перераб и доп. — М.: Высш. шк., 1987. — 480 с.
  33. , Ю.С. Введение в клеточную биологию: Учеб. для вузов / Ю. С. Ченцов. 4-е изд. перераб и доп. — М.: ИКЦ «Академкнига», 2004. — 495 с.
  34. , С.И. Гистология, цитология и эмбриология. Краткий атлас: Учеб. пособие / С. И. Юшканцева, В. Л. Быков. СПб.: ЗАО «П-2», 2006. -96 с.
  35. , В.А. Вирусы и вирусные вакцины / В. А. Сергеев, Е. А. Непоклонов, Т. И. Алипер // М.: Библионика, 2007. 524 с.
  36. , В.Н. Вирусные болезни животных / В. Н. Сюрин, А. Я. Самуйленко, Б. В. Соловьев, Н. В. Фомина // М.: ВНИТИБП, 1998. 928 с.
  37. Adams, J.C. Changes in keratinocyte adhesion during terminal differentiation: reduction in fibronectin binding precedes alpha 5 beta 1 integrin loss from the cell surface / Adams J.C., Watt F.M. // Cell. 1990. — Vol. 63, № 2. — P. 425 435.
  38. Alteras I., Gavrilescu M. Considerations on the parabiosis of dermatophytes in tissue culture, preliminary research // Mycopathol Mycol Appl., 1965 Mar 25- № 25.-P. 61−72.
  39. Bertolero F. Effects of serum and serum-derived factors on growth and differentiation of mouse keratinocytes / Bertolero F., Kaighn M.E., Camalier R.F., Saffiotti U. // In Vitro Cell Dev Biol. 1986. — Vol. 22, № 7. — P. 423 428.
  40. Boyce S.T. Cultivation, frozen storage, and clonal growth of normal human epidermal keratinocytes in serum-free media / Boyce S.T., Ham R.G. // J. Tissue Cult. Meth. 1985. — Vol. 9, № 2. — P. 83−93.
  41. Briggaman R.A. Preparation and characterization of a viable suspension of postembryo human epidermal cells / Briggaman R.A., Abele D.C., Harris S.R., Wheeler C.E. // J Invest Dermatol. 1967. — Vol. 48. — P. 159−168.
  42. Carpenter G. Vanadate, epidermal growth factor and the stimulation of DNA synthesis / Carpenter G. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1981. -Vol. 102, № 4.-P. 1115−1121.
  43. Chen J.D. Human keratinocytes make uniguely liner phagokinetic tracks / Chen J.D., Helmod M., Kim J.P. // Dermatology. 1994. — Vol. 188. — P. 612.
  44. Coria M.F. Cell cultures of bovine embryonic skin: growth and characterization / Coria M.F. // Am. J. Vet. Res. 1969. — Mar- Vol. 30, № 3. -P. 369−375.
  45. De Luca M. The importance of epidermal stem cells in keratinocyte-mediated gene therapy / De Luca M., Pellegrini G. // Gene Ther. 1997. — Vol.4, № 5. -P. 381−383.
  46. Freshney R.I. Culture of Animal Cells. A manual of basic technique / R.I. Freshney // N-Y.: Alan R. Liss, Inc., 1987. P. 117
  47. Furukawa F. Characterization and practical benefits of keratinocytes cultured in strontium-containing serum-free medium / Furukawa F., Huff J. C, Lyons M.B., Weston W.L., Norris D.A. // J. Invest. Dermatol. 1988. — Vol. 90, № 5. — P. 690−696.
  48. Fusenig N.E. Mouse epidermal cell cultures. 2. Isolation, characterization and cultivation of epidermal cells from perinatal mouse skin / Fusenig N.E., Worst P.K. // ExP. Cell Res. 1975. — Vol. 93, № 2. — P. 443−157.
  49. Germain L. Improvement of human keratinocyte isolation and culture using thermolysin / Germain L., Rouabhia M., Guignard R., Carrier L., Bouvard V., Auger F.A. // Burns. 1993. — Vol. 19, № 2. — P. 99−104.
  50. Gilchrest B.A. Growth of human keratinocytes on fibronectin-coated plates / Gilchrest B.A., Nemore R.E., Maciag T. // Cell Biol. Int. Rep. 1980. — Vol 4, № 11.-P. 1009−1016.
  51. Gilchrest В.A. In vitro assessment of keratinocyte aging / Gilchrest B.A. // J Invest Dermatol. 1983. — Vol. 81 (1 Suppl). — P. 184s-189s.
  52. Gilchrest B.A. Attachment and growth of human keratinocytes in serum-free environment / Gilchrest B.A., Calhoun J.K., Maciag T. //J. Cell Physiol. -1982.-Vol. 112, № 2.-P. 197−206.
  53. Gragnani A. Thermolysin in human cultured keratinocyte isolation / Gragnani A., Sobral C.S., Ferreira L.M. // Braz J Biol. 2007. — Vol. 67, № 1. — P. 105 109.
  54. Guo M. Activation of human keratinocyte migration on type I collagen and fibronectin / Guo M., Toda K.I., Grinnell F. // J. Cell Sci. 1990. — Vol. 96 (Pt.2). — P. 197−205.
  55. Hawley-Nelson P. Optimized conditions for the growth of human epidermal cells in culture / Hawley-Nelson P., Sullivan I.E., Kung M. Hennings H., Yuspa S.H. // J. Invest. Dermatol. 1980. — Vol. 75, № 2. — P. 176−182.
  56. Hayflick L. The serial cultivation of human diploid cell strains / Hayflick L., Moorhead P. S.//Exp. Cell Res. 1961, — V.25, № 3.-P. 585−621.
  57. Hennings H. Calcium regulation of growth and differentiation of mouse epidermal cells in culture / Hennings H., Michael D., Cheng C., Steinert P., Holbrook K., Yuspa S.H. // Cell. 1980. — Vol. 19, № 1. — P. 245−254.
  58. Hodges G.M. The localization of trypsin in cultured mammalian cells / Hodges G.M., Livingston D.C., Franks L.M. // J. Cell Sci. 1973. — Vol. 12. — P. 887 902.
  59. Holbrook H. Phenotypic expression of epidermal cells in vitro / Holbrook H., Hennings H. // J Invest Dermatol. 1983. — Vol. 81. — P. 1 ls-24s.
  60. Horikoshi Т. Effect of oxygen on the growth of human epidermal keratinocytes / Horikoshi Т., Balin A.K., Carter D.M. // J. Invest. Dermatol. 1986. — Vol. 86, № 4. — P. 424−427.
  61. Hsu T.C. Primary cultivation and continuous propagation in vitro of tissues from small biopsy specimens / Hsu T. C, Kellogg D. S Jr. // J. Natl. Cancer Inst.- 1960, Vol. 25. P. 221−235.
  62. Huang Y. Effects of thrombin peptides on wound healing and proliferation and migration of normal human epidermal keratinocyte (NHEK) / Huang Y., Yang Z., Carney D. // Zhonghua Shao Shang Za Zhi. 2000. — Vol. 16, № 1. — P. 2629.
  63. Islam M.S. Isolation and characterization of putative epidermal stem cells derived from Cashmere goat fetus / Islam M.S., Zhou H.M. // Eur J Dermatol.- 2007. Vol. 17, № 4. — P. 302−308a.
  64. Islam M.S. Isolation and propagation of keratinocytes derived from Cashmere goat fetus / Islam M.S., Zhou H.M. // Tissue Cell. 2007. — Vol. 39, № 6. — P. 377−385b.
  65. Izumi K. Isolation of human oral keratinocyte progenitor/stem cells / Izumi K., Tobita Т., Feinberg S.E. // J Dent Res. 2007. — Vol. 86, № 4. — P.341−346.
  66. Jakic-Razumovic J. Organotypic skin cultures: a human model for basic studies / Jakic-Razumovic J., Zekusic M., Vladovic-Relja Т., Boranic M. // Croat Med J. 1998. — Vol.39, № 4. — P. 401−403
  67. Jensen P.K. Low Ca2+ stripping of differentiating cell layers in human epidermal cultures: an in vitro model of epidermal regeneration / Jensen P.K., Bolund L. // Exp Cell Res. 1988. — Vol. 175, № 1. — p. 63−73.
  68. Karasek M.A. Growth of postembryonic skin epithelial cells on collagen gels / Karasek M.A., Charlton E. // J Invest Dermatol. 1971. — Vol. 56. — P. 205 210.
  69. Khammo N. Development of an innervated model of human skin / Khammo N. Ogilvie J., Clothier R.H. // Altern Lab Anim. 2007. — Vol.35, № 5. — P. 487−491.
  70. Kurita T. Apoptotic cell death induced by serum and its prevention by thiols / Kurita Т., Namiki H. // J. Cell Physiol. 1994. — Vol. 161, № 1. — P. 63−70.
  71. Limat A. Postmitotic human dermal fibroblasts preserve intact feeder properties for epithelial cell growth after long-term cryopreservation / Limat A., Hunziker Т., Boillat C, Noser F., Wiesmann U. // In Vitro. 1990. — Vol. 26,№ 7.-P. 709−712.
  72. Ljungren C.A. Von der Fahigkeit des Hautepitels, auBerhalb des Organismus sein Leben zu behalten, Mit Beriicksichtingung der Transplantation / Ljungren C.A. // Deutsch Zschr Chir. 1898. — Vol. 47. — P. 608−628
  73. Maciag T. An endocrine approach to the control of epidermal growth: serum-free cultivation of human keratinocytes / Maciag Т., Nemore R.E., Weinstein R., Gilchrest B.A. // Science. 1981. — Vol. 211, № 4489. — P. 1452−1454.
  74. Marcelo C.L. Cyclic AMP, glucocorticoid and retinoid modulation of in vitro keratinocyte growth / Marcelo C.L., Tomich J. // J. Invest. Dermatol. 1983. -Vol. 81, № 1 suppl. — P. 64s-68s.
  75. Medawar P.B. The cultivation of adult mammalian skin epithelium in vitro / Medawar P.B. // Quart. J. Microsc. Sci. 1948. — Vol. 89. — P. 187−196.
  76. Mochizuki R. Expression of desmosomal proteins in rat keratinocytes during in vitro differentiation / Mochizuki R, Kamiyama M, Arai KY, Arai K, Uehara K. // J Vet Med Sci. 2002. — Vol. 64, № 2. — P. 123−127.
  77. Moorhead P. S. Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood / Moorhead P. S., Nowell P.C., Mellman W.J., Battips D.M., Hungerford D.A. // Exp Cell Res. -1960. № 20. — P. 613−616.
  78. Morhenn V.B. Separation of human skin cells by velocity sedimentation into functionally distinct fractions / Morhenn V.B., Starr E.D., Terrell C., Cox A.J., Engleman E.G. // J. Invest. Dermatol. -1982. Vol. 78, № 4. — P. 319−322.
  79. Murray J.C. Epidermal cells adhere preferentially to type IV (basement membrane) collagen / Murray J.C., Stingl G., Kleinman H.K., Martin G.R., Katz S.I. // J. Cell Biol. 1979. — Vol. 80. — P 197−202.
  80. Patrick C.W. Dermal fibroblasts genetically engineered to release nerve growth factor / Patrick C. W, Zheng В., Schmidt M., Herman P. S., Chauvin B.P., Fan Z., Stark В., Evans G.R. // Ann Plast Surg. 2001. Vol. 47, № 6. — P. 660−665.
  81. Pentland A.P. Effects of gas tension on epidermal keratinocyte DNA synthesis and prostaglandin production / Pentland A.P., Marcelo C.L., Jordan M.A., Voorhees J.J. // J. Invest. Dermatol. 1986. — Vol. 86, № 2. — P. 177−180.
  82. Pittelkow M.R. New techniques for the in vitro culture of human skin keratinocytes and perspectives on their use for grafting of patients with extensive bums / Pittelkow M.R., Scott R.E. // Mayo Clinic Proc. 1986. -Vol. 61.-P. 771−777.
  83. Praeger F.C. Use of strontium to separate calcium-dependent pathways for proliferation and differentiation in human keratinocytes / Praeger F.C., Stanulis-Praeger B.M., Gilchrest B.A. // J. Cell. Physiol. 1987. — Vol. 132, № 1. — P. 81−89.
  84. Price F.M. Approaches to enhance proliferation of human epidermal keratinocytes in mass culture / Price F.M., Taylor W.G., Camalier R.F., Sanford K.K. // J. Natl. Cancer Inst. 1983. — Vol. 70, № 5. — P. 853−861.
  85. Prunieras M. Epidermal cell culture systems in skin pharmacology / Prunieras M, Delescluse C. // Br J Dermatol. 1984. — Vol. 111 Suppl 27. — P. 43−57.
  86. Puck T.T. Genetics of somatic mammalian cells III. Long-term cultivation of euploid cells from human and animal subjects / Puck T.T., Cieciura, S.J., Robinson A. // J. Exp. Med. 1958 — Vol. 108, № 6. — P. 945−956.
  87. Radu E. Stem cells (p63(+)) in keratinocyte cultures from human adult skin / Radu E., Simionescu O., Regalia Т., Dumitrescu D., Popescu L.M. // J. Cell. Mol. Med. 2002. — Vol. 6, № 4. — P. 593−598.
  88. Rheinwald J.G. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: The formation of keratinizating colonies from single cells / Rheinwald J.G., Green H. // Cell. 1975. — Vol. 6. — P. 331−344.
  89. Robbins F.C. Cultivation of the Lansing Strain of Poliomyelitis Virus in Cultures of Various Human Embrionic Tissues / Robbins F.C., Enders J.F., Weller Т.Н. // Science. 1949. -vol.109. — P. 85−87.
  90. Thompson C.H. Optimised growth of human epidermal cells in vitro without the use of a feeder layer or collagen substrate / Thompson C.H., Rose B.R., Cossart Y.E. // Austr. J. ExP. Biol, and Med. Sci. 1985. — Vol. 63 (Pt 2). — P. 147−156.
  91. Tsukahara K. Inhibitory effect of an extract of Sanguisorba officinalis L. on ultraviolet-B-induced photodamage of rat skin / Tsukahara K, Moriwaki S, Fujimura T, Takema Y. // Biol Pharm Bull. 2001. — Vol. 24, № 9. — P. 9 981 003.
  92. Tsukahara K. Ovariectomy accelerates photoaging of rat skin / Tsukahara K, Moriwaki S, Ohuchi A, Fujimura T, Takema Y. // Photochem Photobiol. -2001. Vol. 73, № 5. — P. 525−531.
  93. Watt F.M. Epidermal stem cells in culture / Watt F.M. // J. Cell Sci. Suppl. -1988.-Vol. 10.-P. 85−94.
  94. Waymouth C. Construction and use of synthetic media and tissue in culture / Waymouth C. // N.Y. Acad. Press. — 1965. — Vol. 1. — P. 546−587Л
  95. Witte M.B. Upregulation of arginase expression in wound-derived fibroblasts / Witte M.B., Barbul A., Schick M.A., Vogt N., Becker H.D. // J Surg Res. -2002.-Vol. 105, № 1.-P. 35−42.
  96. Wurster D.H. Indian muntjac, Muntiacus muntjak: a deer with a low diploid chromosome number / Wurster D.H., Benirschke K. // Science. 1970. -Vol. 168, № 937.-P. 1364−1366.
  97. Zhu Z. Expression of P450 enzymes in rat whole skin and cultured epidermal keratinocytes / Zhu Z., Hotchkiss S.A., Boobis A.R., Edwards RJ. // Biochem Biophys Res Commun. 2002. — Vol. 297, № 1. — P. 65−70.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!