Сравнительный гистологический анализ эпидермоцитов, скелетных мышечных волокон и лимфоцитов крови при митохондриальной патологии у детей
Oldfors-AHolme-ETulinius-MLarsson-NG Tissue distribution and disease manifestations of the tRNA (Lys) A~>G (8344) mitochondrial DNA mutation in a case of myoclonus epilepsy and ragged red fibres./Acta-Neuropathol-Berl. 1995; 90(3): 328−33. Chitkara D. K., Nurko S., Shoffner J. M., Buie T., Flores A. Abnormalities in gastrointestinal motility are associated with diseases of oxidative… Читать ещё >
Сравнительный гистологический анализ эпидермоцитов, скелетных мышечных волокон и лимфоцитов крови при митохондриальной патологии у детей (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
Содержание
- 1. Результаты исследования свидетельствуют о тканевой полисистемности митохондриальных нарушений у больных с различными по природе нарушениями клеточного энергообмена
2. Наиболее выраженные гистологические изменения при митохондриальных болезнях проявляются в скелетных мышцах в виде прямых и косвенных признаков митохондриальной недостаточности — «рваных» красных волокон (ЛИР), нарушений активности митохондриальных ферментов, нарушений светогистохимического распределения кальция, гликогена и липидов, а также ультраструктурных изменений митохондрий.
3. Морфологические признаки полисистемных митохондриальных нарушений в клеточных элементах кожи выражены в эпителиоцитах базального слоя эпидермиса. Они могут быть обнаружены с помощью компьютерной морфометрии препаратов с гистохимическим выявлением активности митохондриальных ферментов, а также с помощью электронной микроскопии.
4. Признаки митохондриальных изменений в лимфоцитах периферической крови выявляются с высокой диагностической чувствительностью в отношении полисистемных нарушений клеточного энергообмена. *
Однако в силу относительно более низкой специфичности они нуждаются в подтверждении данными, полученными при изучении эпидермоцитов или скелетной мышечной ткани.
5. Выраженность митохондриальных изменений не всегда коррелирует в разных изученных объектах, что является свидетельством случайного мозаичного распределения измененных митохондрий в процессе онтогенеза.
Заключение
Проведенный в работе анализ литературных данных показал, что нарушения клеточного энергообмена, в основе которых, в первую очередь, лежит митохондриальная недостаточность, имеют самые различные тканевые представительства. Клинически это проявляется наиболее часто поражением нервной системы и органов чувств, скелетных мышц, сердца, а также ряда внутренних органов, причем случайное мозаичное распределение поврежденных митохондрий приводит к самым разнообразным сочетаниям симптоматики у больных. К болезням, причиной которых являются мутации митохондриальных генов, относятся слудующие синдромы: Кернса-Сейра (нарушения со стороны глаз, атаксия, мышечная слабость, нарушения сердечной проводимости и другие симптомы), Пирсона (вялость, нарушения со стороны крови, кишечника, поджелудочной железы), MELAS (энцефаломиопатия, лактат-ацидоз, инсультоподобные эпизоды), оптическая нейропатия Лебера и многие другие. Митохондриальные изменения выявлены при синдроме хронического утомления, мигренях, синдроме Экбома, болезни Мак-Ардля, проксимальной тубулопатии, витамин-независимом рахите, панцитопении, анемии, карликовости, диабете, гипопаратиреозе, кардиомиопатии, печеночной недостаточности, диарее, атрофии ворсинок кишечника, гиперпигментации и поражениях кожи.
Большинство изученных в этом отношении заболеваний характеризуются наличием мутаций митохондриальной ДНК. Однако, так как 98% наследственной информации о митохондриальных белках заложено в ядре, число наследственных митохондриальных нарушений, связанных с ядерными мутациями, должно быть несоизмеримо выше, чем вызванных внутримитохондриальными мутациями. Число таких состояний можно предсказать сейчас только гипотетически, а значит, большинство из них скрываются под масками различных заболеваний.
Распространенность состояний, связанных с митохондриальной недостаточностью, не ограничивается наследственными синдромами, вызываемыми мутациями генов, непосредственно ответственных за митохондриальные белки. Широкий круг других заболеваний включает в себя те или иные нарушения клеточной энергетики как вторичные звенья патогенеза. Изучение этих патологических состояний и распространение информации о важности анализа энергетических дисфункций тем более актуально, что в настоящее время существуют действенные методы коррекции митохондриальной недостаточности, которые помогают в лечении перечисленных выше, не всегда истинно «митохондриальных» заболеваний. Нарушения клеточной энергетики могут не проявляться в виде самостоятельного заболевания, однако сказываются на характере течения других болезней.
Все вышесказанное диктует актуальность разработки методов диагностики нарушений клеточной энергетики. Несмотря на важность клинических, биохимических и молекулярно-генетических методов такой диагностики, одну из ведущих ролей в лабораторном анализе митохондриальных нарушений играют морфологические методы. Скелетная мышечная ткань является идеальным объектом для этого. Она способна подавать сигналы «митохондриального дистресса» посредством выраженной пролиферации митохондрий и образования ИШ7, снижением гистохимической активности митохондриальных ферментов и другими гистохимическими, а также ультраструктурными изменениями.
Митохондриальные нарушения могут быть выявлены при морфологическом анализе других тканей (различных эпителиев, гладких миоцитов, лейкоцитов и др.). К сожалению, данные об информативности таких исследований в отношении выявления митохондриальных изменений единичны, хотя в целом и подтверждают наличие патологических признаков в митохондриях этих клеточных объектов при митохондриальных болезнях.
Все это и определило цель настоящего исследования: провести комплексный гистологический анализ митохондрий различных тканевых элементов у больных с клинико-биохимическими и цитохимическими признаками полисистемного нарушения клеточного энергообмена.
Для осуществления этой цели в рамках исследования были поставлены и решены следующие задачи:
1) провести комплексный гистологический, гистохимический и электронно-микроскопический анализ биоптатов скелетной мышечной ткани, взятых с диагностической целью у больных с клинико-биохимическими и цитохимическими признаками полисистемного нарушения клеточного энергообмена-
2) провести комплексный гистологический, гистохимический и электронно-микроскопический анализ биоптатов кожи, взятых с диагностической целью у больных с клинико-биохимическими и цитохимическими признаками полисистемного нарушения клеточного энергообмена-
3) провести сравнительный анализ полученного материала с цитохимическими показателями активности митохондриальных ферментов лимфоцитов периферической крови.
В рамках запланированной тематики было обследовано 30 больных детей в возрасте от 5 до 12 лет с клинико-биохимическими и цитохимическими признаками полисистемной митохондриальной недостаточности. Распределение детей по диагнозам было следующим: 17 детей с первичными митохондриальными заболеваниями (синдромы MERRF, MELAS, Кернса-Сейра, митохондриальные энцефаломиопатии и кардиомиопатии) — 10 детей с заболеваниями, которым сопутствовала вторичная" митохондриальная недостаточность (туберозный склероз, синдромы Марфана и Элерса-Данло). У трех больных со структурной миопатией, спинальной амиотрофией и лейкоэнцефалитом митохондриальной недостаточности не было выявлено.
Кроме того, в качестве группы сравнения использованы материалы исследований лимфоцитов и мышц 10 детей с различными заболеваниями без клинико-лабораторных признаков полисистемной митохондриальной недостаточности.
Клиническими критериями отбора служили: данные анамнеза, клинического осмотра в отделениях Московского НИИ педиатрии и детской хирургии МЗ РФ, данные лабораторных исследований (исследования сахарной кривой, концентраций пирувата и лактата в сыворотке крови, данные о состоянии системы перекисного окисления липидов, цитохимического анализа активности митохондриальных ферментов лимфоцитов периферической крови с помощью визуальной методики). Окончательным определяющим фактором для включения больного в группу исследования служило внесение в историю болезни предварительного диагноза, предполагающего наличие у больного митохондриальной недостаточности, и направление с целью уточнения диагноза на диагностическую биопсию скелетной мышечной ткани.
Исследованы биоптаты скелетных (передних бедренных) мышц, и кожи у детей, отобранных для исследования- проведен углубленный цитохимический анализ активности митохондриальных ферментов лимфоцитов периферической крови.
У всех 17 детей с клиническими и биохимическими признаками митохондриальных болезней (синдромы MERRF, MELAS, Кернса-Сейра, другие митохондриальные энцефаломиопатии, митохондриальные кардиомиопатии) в лимфоцитах как визуально, так и при компьютерной морфометрической оценке обнаружены выраженные нарушения цитохимической активности ферментов клеточного энергообмена. Эти параметры были изменены очень значительно и достоверно отличались от таковых у здоровых детей. Выявленные нарушения указывают на изменения процессов клеточного энергетического метаболизма.
Обследовано также 10 детей с заболеваниями (синдромы Марфана и Элерса-Данло, туберозный склероз), при которых доказано наличие вторичной митохондриальной недостаточности. Показатели цитохимической активности митохондриальных ферментов лимфоцитов у детей 2-ой группы также были изменены по сравнению с нормой, однако не так грубо, как в первой группе. Кроме того, не было отмечено признаков диспропорции в активности изученных митохондриальных ферментов лимфоцитов. Ни по одному из изученных коэффициентов соотношения энзимных активностей не было выявлено достоверной разницы с контрольными показателями.
В целом, согласно полученным данным цитохимического анализа изменения морфометрических параметров активности митохондриальных ферментов у больных 1-ой и 2-ой групп выражались в виде значительного снижения количества гранул и изменения их качественных параметров (увеличения площади мелких гранул и кластеров, округления гранул, снижения оптической плотности), что свидетельствовало о глубоком нарушении функции митохондрий и декомпенсации энергетического обмена. Повышение всех параметров или нормальное количество гранул при изменении лишь параметров, регистрируемых компьютером, наблюдалось у детей 2-ой группы. Эти изменения, по-видимому, отражали компенсаторное напряжение энергетического метаболизма при изученных заболеваниях.
Наличие характерных изменений показателей активности митохондриальных ферментов послужило основанием для проведения следующего этапа запланированного комплексного обследования с применением дополнительных методов гистологического анализа для уточнения характера распределения диагностически и патогенетически важных признаков митохондриальных нарушений по разным тканям.
У большинства детей 1-ой группы выявлены прямые и косвенные признаки митохондриальной недостаточности — ШЗР, нарушения активности митохондриальных ферментов, нарушения светогистохимического распределения кальция, гликогена и липидов, ультраструктурные изменения митохондрий. Последние включали в себя аномально увеличенные субсарколеммальные и интермиофибриллярные скопления митохондрий, деструкцию большинства из них (чаще по деэнергизованному типу, с истончением крист и вакуолизацией матрикса) при наличии отдельных сохранных митохондрий. Важно отметить, что ультраструктурные изменения митохондрий, иногда очень значительные, определялись не только в мышечных волокнах, но и в соединительно-тканых элементах, в частности, в эндотелиоцитах и адвентициальных клетках капилляров.
Таким образом, исследование скелетных мышц подтвердило наличие митохондриальной патологии у детей с митохондриальными болезнями.
У большинства детей второй группы обнаружено небольшое количество слабовыраженных ВШ7. У всех детей Ш^Р были позитивны в отношении окраски как на СДГ, так и на ЦО. Общая активность СДГ и ЦО была не изменена. При электронно-микроскопическом анализе обнаружены умеренные изменения митохондрий.
Таким образом, морфологическое исследование подтвердило наличие митохондриальной патологии у детей 1-ой и 2-ой групп. У больных 1-ой группы морфологические признаки митохондриальной недостаточности отличались большей степенью выраженности по сравнению со 2-ой группой.
Метод биопсии мышечной ткани довольно травматичен для ребенка, и не всегда исследование биоптата мышечной ткани выявляет нарушения клеточной биоэнергетики. В связи с этим для анализа при биопсии мышц была взята и кожа детей. Актуальность такого исследования обоснована тем, что патологически измененные митохондрии могут распределяться по организму мозаично, и, хотя вероятность их обнаружения в скелетной мышце значительно выше, чем в коже (в связи с разницей в абсолютном количестве), теоретически возможны варианты, когда патологические митохондрии присутствуют в коже и отсутствуют в мышцах.
При гистохимическом выявлении активности митохондриальных ферментов в коже обращало на себя внимание сравнительно меньшая, по сравнению с мышцами, окрашиваемость препаратов в целом. При этом наиболее интенсивное специфическое окрашивание определялось в эпителиоцитах базального слоя и потовых желез, причем наиболее интенсивно и четко выявлялась активность СДГ, которая и была в дальнейшем наиболее подробно исследована.
При визуальной оценке этих препаратов существенных различий в гистохимической активности у детей обследованных групп выявить не удалось. При компьютерной морфометрии было показано, что значения средней оптической плотности гранул формазана у детей первой группы было достоверно ниже, чем у детей второй группы. Таким образом, можно сделать вывод о снижении средних показателей активности митохондрий эпителиоцитов кожи у детей с митохондриальными болезнями. Более высокое, чем у других детей, значение показателя интервала яркости гранул формазана свидетельствовало о повышенной гетерогенности митохондрий у этих детей. Такое изменение совпадает с наблюдаемыми изменениями митохондриальной активности в скелетных и гладких мышцах, а также в других органах, когда при общем снижении активности в ткани функциональные характеристики митохондрий в отдельных клеточных элементах резко возрастают выше нормы. В целом это приводит к общей тканевой гетерогенности по значениям гистохимических показателей митохондриальной активности.
К больным с такими изменениями относились и те двое, у которых не было выявлено ЛМ7 в скелетных мышцах. Это наблюдение убедительно подтверждает гипотезу о возможности диагностического выявления признаков митохондриальных нарушений в различных органах и тканях при их случайном мозаичном распределении в организме. Ультраструктурные признаки изменений митохондрий, в виде умеренного увеличения их количества и деструкции по деэнергизованному типу наблюдались в тканевых элементах кожи одиннадцати детей первой группы, в том числе у обоих детей, в скелетной мышце которых не было обнаружено КЮ7. Наиболее выражены эти изменения были в эпителиоцитах базального и шиповатого слоев эпидермиса. Кроме того, их можно было отметить в фибробластах и клетках капилляров сосочкового слоя дермы.
Морфологические параметры структурных элементов кожи при обзорных методах исследования у всех больных 2-ой группы в основном соответствовали нормальным показателям.
Морфометрические характеристики распределения гистохимической активности сукцинатдегидрогеназы в коже больных второй группы свидетельствовали о достоверном отличии этих показателей от таковых у детей первой группы.
Средняя оптическая плотность гранул, свидетельствующая о среднем уровне активности этого митохондриального фермента, была выше, а гетерогенность митохондрий по уровню сукцинатдегидрогеназной активности, был ниже, чем у детей с «первичными» митохондриальными болезнями. Это свидетельствует об относительно более сохранном состоянии митохондрий эпителиоцитов кожи обследованных больных второй группы. В то же время при проведении электронно-микроскопического исследования было отмечено, что у шести из десяти детей второй группы имелись ультраструктурные признаки умеренных изменений митохондрий.
Таким образом, можно сделать вывод, что у больных второй группы с митохондриальной недостаточностью, сопутствующей течению основного заболевания, умеренно выраженные признаки митохондриальных изменений можно выявить в различных тканевых элементах, в том числе и в тех, что доступны для ультраструктурного анализа при проведении биопсии кожи.
У больных с неподтвержденной митохондриальной недостаточностью (болезнь «центрального стержня», лейкоэнцефалит, спинальная амиотрофия Верднига-Гофмана) в лимфоцитах периферической крови были обнаружены умеренные изменения. Однако они не сопровождались признаками митохондриальных изменений в других тканях. Эти изменения свидетельствовали о том, что при функциональных напряжениях метаболизма процессы, непосредственно связанные с аэробным окислением в митохондриях, и гликолитическая активность гиалоплазмы изменяются обратно пропорционально. Причем, видимо, более умеренные изменения характеризуются повышением активности аэробного катаболизма- в этих случаях единственным или наиболее выраженным изменением при цитохимическом анализе является повышение активности СДГ. При нарастании относительной декомпенсации активность СДГ может снижаться за пределы нижних значений референтных показателей, а активность ферментов, связанных с анаэробными процессами (ГФДГ, ЛДГ), нарастать. Можно считать, что определяемые у больных третьей группы изменения носят умеренно компенсаторный характер и связаны скорее всего с парциальным функциональным напряжением лимфоцитов.
Таким образом, полученные данные подтверждают теоретические представления о тканевой полисистемности поражения при митохондриальных заболеваниях. Результаты работы позволяют рекомендовать исследовать у больных с подозрением на митохондриальную природу заболевания максимально возможное число тканевых элементов при диагностической биопсии.
1. Дадали JL Митохондриальные болезни. Российский медицинский журнал, 1996 г., N5, с.19−21.
2. Казанцева JI. 3., Юрьева Э. А., Клембовский А. И. и соавт. Критерии дифференциальной диагностики наследственных нарушений нервно-психического развития, обусловленных патологией митохондрий. Пособие для врачей. М 1999:16.
3. Клембовский А. И., Сухоруков B.C. Митохондриальная недостаточность у детей. Архив патологии 1997; 59: 5: 3−7.
4. Клембовский А. И., Сухоруков В. С., Казанцева Л. З. Определение группы риска развития митохондриальной недостаточности среди детей с врожденными и наследственными метаболическими болезнями. Пособие для врачей. М. 1999. — с. 15.
5. Кнорре Д. Г., Мызина С. Д. Биологическая химия. Москва «Высшая школа» 1992 г.
6. Краснопольская К. Д. Информационное письмо. Наследственные митохондриальные болезни: методические подходы к диагностике и лечению. Бюллетень межрегионального общества медицинских генетиков. М 1997, N 1(5), с.9−18.
7. Ленинджер А. Основы биохимии. Под редакц. В. А. Энгельгардта Москва «Мир» 1985 г.
8. Лойда 3., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов, лабораторные методы.
9. Наследственные болезни нервной системы. Под ред. Ю. Е. Вельтищева, П. А. Темина. М: Медицина 1998: 496.
10. Наследственные нарушения нервно-психического развития детей. Под ред. П. А. Темина, Л. З. Казанцевой. М: Медицина 2001: 432.
11. Северин Е. С., Алейникова Т. Л., Осипов Е. В. Биохимия. М: Медицина 2000; 164с.
12. Сухоруков B.C. Общие вопросы патологии клеточной энергетики. В сб. «Актуальные вопросы современной педиатрии», МЗ РФ, М:2002а, 11−15.
13. Сухоруков B.C. Гетерогенность и клинико-морфологическаяIнеоднородность митохондриальной патологии у детей. Автореф. дисс. д.м.н., Москва, 1998.
14. Сухоруков B.C. Нарушения клеточного энергообмена у детей. Российский вестник перинатологии и педиатрии 20 026, т.47, № 5, 4450.
15. В. С. Сухоруков Гистологический анализ митохондриальных нарушений у человека. Сборник трудов Всерос.научн.конф. «Гистологическая наука России в начале XXI века: итоги, задачи, перспективы», Москва, 2003, Изд-во РУДН, 177−181.
16. Сухоруков B.C., Клембовский А. И., Невструева B.B. и др. Митохондриальная природа кардиомиопатий у детей. Архив патологии 1997а- 59: 12−18.
17. Сухоруков B.C., Клембовский А. И., Невструева В. В. и др. Характеристика морфологических изменений скелетной мышечной ткани при митохондриальных миопатиях у детей и их матерей. Архив патологии 19 976- 59: 18−21.
18. Сухоруков B.C., Нарциссов Р. П., Петричук С. В. Сравнительная диагностическая ценность анализа скелетной мышцы и лимфоцитов при митохондриальных болезнях. Архив патологии 2000; 62: 2: 19−21.
19. Тозлиян Е. В. Раннее выявление митохондриальных нарушений у детей с недифференцированными формами задержки нервно-психического развития. Автореф. дисс. к.м.н., Москва, 2003.
20. Adisa А. О., Odutuga A.A. Changes in the activities of three diagnostic enzymes in the heart of rats following the consumption of diets deficient in zinc and essential fatty acids. Biochem-Mol-Biol-Int. 1998 Oct- 46(3): 5716.
21. Attardi G. Role of mitochondrial DNA in human aging. Mitochondrion 2001; 1: Suppl. l: SI.
22. Ballinger S.W., Shoffner J.M., Hedaya E.V., et al. Maternally transmitted diabetes and deafness associated with a 10.4 kb mitochondrial DNA deletion. Nature Genet 1992; 1: 11−15.
23. Barrientos A., Casademont J., Saiz A. et al. Autosomal recessive Wolfram syndrome associated with an 8.5-kb mtDNA single deletion. Am J Hum Genet 1996; 58: 963−970.
24. Baysal BE, Ferrell RE, Willett-Broziek JE, Lawrence EC, Myssiorek D, Bosch A, van der Mey A, Taschner PE. Mutations in SDHD, a mitochondrial complex II gene, in hereditary paraganglioma. Science 2000 Feb 4−287(5454):848−51.
25. Behan W.M.H., Gow J.W., Simpson K., More I.A.R., Downie I., Holt I., Behan P.O. Mitochondrial findings in the chronic fatigue syndrome. / J.Pathol., 1994, v. 173, Suppl., p. 153.
26. Bindoff L. Mitochondria and the heart. European Heart Journal (2003) 24, 221−224.
27. Chen Q Mitochondrial encephalomyopathy. Report of a case. /Chung-Hua-Shen-Ching-Ching-Shen-Ko-Tsa-Chih- 1990 Feb- 23(1) — P 38−40, 63.
28. Chinnery P.F. Searching for nuclear-mitochondrial genes. Trends in Genetics Vol.19 No.2 February 2003 60.
29. Chitkara D. K., Nurko S., Shoffner J. M., Buie T., Flores A. Abnormalities in gastrointestinal motility are associated with diseases of oxidative phosphorylation in children. The American journal of gastroenterology Vol. 98, No. 4, 2003.
30. Chretien D., Benit P., Chol M., Lebon S., Rotig A., Munnich A., Rustin P. Assay of mitochondrial respiratory chain complex I in human lymphocytes and cultured skin fibroblasts. Biochemical and Biophysical Research Communications 301 (2003) 222−224.
31. Cohen B.H. Mitochondrial cytopathy in adults: What we know so far. Cleveland clinic journal of medicine, volume 68, number 7, July 2001, 625 642.
32. De-Stefano-NArgov-ZMatthews-PMKarpati-GArnold-DLImpairment of muscle mitochondrial oxidative metabolism in McArdles’s disease./Muscle-Nerve. 1996 Jun- 19(6): 764−9.
33. De Vivo D. The expanding spectrum of mitochondrial diseases. Brain & Development 1993; 15: 1−22.
34. Di Mauro S., Schon E. A. Mitochondrial Respiratory-Chain Diseases. N Engl J Med 2003;348:2656−68.
35. DiMauro S., Moraes C. Mitochondrial encephalomyopathies. Arch Neurol 1993; 50: 1197−1208.
36. Fliss M.S., Usadel H., Caballero O.L., et al. Facile detection of mitochondrial DNA mutations in tumors and bodily fluids. Science 2000; 287: 2017;2019.
37. Gietl C., Seidel C., Svendsen I. Plant glyoxysomal but not mitochondrial malat dehydrogenase can fold without chaperone assistense. Biochim.-Biophys.-Acta. 1996 May 20- 1274(1−2): 48−58.
38. Goncalves A., Oliveira C., Ferro M.A., Dinis M., Cunha L. Glutamate dehydrogenase deficiency in MachadoJoseph disease. Can J Neurol Sei 1993 May- 20(2): 14 750.
39. Hipolite I. Migraine: la piste des mitochondries. / J.IntMed., 1994, v.321, p.17.
40. Holmgren D., Wahlander H., Eriksson B.O., Oldfors A., Holme E., Tulinius M. Cardiomyopathy in children with mitochondrial disease: Clinical course and cardiological findings. European Heart Journal (2003) 24, 280−288.
41. Holt I.J., Harding A.E., Morgan-Hughes J.A. Deletions of muscle mitochondrial DNA in patients with mitochondrial myopathies. Nature 1988; 331:717−719.
42. Holt I.J., Harding A.E., Petty R.K.H., Morgan-Hughes J.A. A new mitochondrial disease associated with mitochondrial DNA heteroplasmy. / Am. J. Hum. Genet., 1990, v.46, p.428−433.
43. Jane F.G., Kenna P.F., Humphries P. (2002) — On the genetics of retinitis pigmentosa and on mutation-independent approaches to terapeutic intervention. The EMBO J., 857 864.
44. Karppa M., Syrajala P., Tolonen U., Majamaa K. Peripheral neuropathy in patients with the 3243A>G mutation in mitochondrial DNA. J Neurol (2003) 250 :216−221.
45. Kocaefe Y C, Erdem S, Ozguc M, Tan E. Four novel thymidine.
46. Phosphorylase gene mutations in mitochondrial neurogastrointestinal encephalomyopathy syndrome (MNGIE) patients. European Journal of Human Genetics (2003) 11, 102 104.
47. Koga A., Koga Y., Akita Y., Fukiyama R., Ueki I., Yatsuga S, Matsuishi T. Increased mitochondrial processing intermediates associated with threetRNALeu (UUR) gene mutations. Neuromuscular Disorders 13 (2003) 259 262.
48. Labrou N. E., Eliopoulos E., Clonis Y. D. Dye-affinity labelling of bovine heart mitochondrial malat degydrogenase and study of the NADH-binding site. Biochem.-J. 1996 Apr 15- 315 (Pt 2): 687−93.
49. Li Hong, John Duffy, Anna Hansson (2000) — Genetic modification of survival in tissue-specific knockout mice with mitochondrial cardiomyopathy. Medical Sciences, 3467 3472.
50. Lindal SLund ITorbergsen TAasly JMellgren SIBorud OMonstad P Mitochondrial diseases and myopathies: a series of muscle biopsy specimens with ultrastructural changes in the mitochondria./ Ultrastruct-Pathol- 1992 May-Jun- 16(3) — P 263−75.
51. Luft R. (1994) — The development of mitochondrial medicine Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 8731 8738.
52. Maly I. P., Toranelli M., Sasse D. Intra-acinar profiles of cytosolic and mitochondrial dehydrogenase isoensymes in rat liver. J-Histochem.-Cytochem. 1994 Jul- 42(7): 855−9.
53. Margulis L. Symbiosis in cell evolution. W.H.Freeman, San Francisco, CA 1981.
54. Materials of the 5 European Meeting on Mitochondrial Pathology (Italy 2001). Mitochondrion2001; 1: Suppl.l.
55. McArdle-AMcArdle-FJackson-MJPage-SFFahal-IEdwards-RHInvestigation by polymerase chain reaction of enteroviral infection in patients with chronic fatigue syndrome./Clin-Sci-Colch. 1996 Apr- 90(4): 295−300.
56. Moraes C.T., Shanske S., Tritschler H.J. et al. mtDNA depletion with variable tissue expression: a novel genetic abnormality in mitochondrial diseases. Am J Hum Genet 1991; 48: 492−501.
57. Nakamura-NHattori-NTanaka-MMizuno-Y Specific detection of deleted mitochondrial DNA by in situ hybridization using a chimera probe./ Biochim-Biophys-Acta. 1996 Sep 11- 1308(3): 215−21.
58. Nardin R. A., Johns D. R. Mitochondrial dysfunction and neuromuscular disease. Muscle Nerve 2001; 24: 170−191.
59. Nass S., Nass M.M.K. Ultramitochondrial fibers with DNA characteristics. J Cell Biol 1963; 19: 593−629.
60. Oldfors-AHolme-ETulinius-MLarsson-NG Tissue distribution and disease manifestations of the tRNA (Lys) A~>G (8344) mitochondrial DNA mutation in a case of myoclonus epilepsy and ragged red fibres./Acta-Neuropathol-Berl. 1995; 90(3): 328−33.
61. Olson W., Engel W., Walsh G., Einaugler R. Oculocraniosomatic neuromuscular disease with ragged-red fibers. Arch Neurol 1972; 26: 193 211.
62. Ovadi J., Huang Y., Spivey H. O. Binding of malat dehydrogenase and NADH channelling to complex 1. J.-Mol-Recognit. 1994 Dec- 7(4): 26 572.
63. Pavlakis S.G., Phillips P.C., DiMauro S. et al Mitochondrial myopathy, encephalopathy, lactic acidosis, and strokelike episodes: A distinctive clinical syndrome. / Ann.Neurol., 1984, v.16, p.481−488.
64. Plasterer T. N., Smith T. F., Morgan S. C. (2001) — Survey of human mitochondrial diseases using new genomic/proteomic tools. BioMed Central Ltd., 8843 8850.
65. Plioplys-AVPlioplys-S Electron-microscopic investigation of muscle mitochondria in chronic fatigue syndrome./Neuropsychobiology. 1995; 32(4): 175−81.
66. Popanda O., Fox G., at all. Modulation of DNA polimerases alpha, delta and epsilon by lactate dehydrogenase and 3-phosphoglycerate kinase. Biochim.-Biophys.-Acta. 1998 Apr 1- 1397(1): 102−17.
67. PretschW., Chatteijee B., Favor J., Merkle S., Sandulache R. Molecular, genetic and biochemical characterization of lactate dehydrogenase-A enzyme activity mutations in Mus musculus. //J. Mamm-Genome. 1998 Feb- 9(2): 144−9.
68. Raffaele L., Cooper J. M., Bradley J. L. (1999) — Deficit of in vivo mitochondrial ATP production in patients with Friedreich ataxia. Medical Sciences, 11 492−11 495.
69. Ristow M., Pfister M.F., Schubert M. (2000) — Frataxin activates mitochondrial energy conversion and oxidative phosphorylation. Medical Sciences, 12 239 12 243.
70. Rutig A., Colonna M., Bonnenfont J.P. et al. Mitochondrial DNA deletions in Pearson’s marrow/pancreas syndrome. Lancet 1989; 1: 902 903.
71. Scheffler I.E. A century of mitochondrial research: achievements and perspectives. Mitochondrion 2001; 1:1: 3−31.
72. Schuchmann S., Muller W., Heinemann U. Altered Ca2+ signaling and mitochondrial deficiencies in hippocampal neurons of trisomy 16 mice: a model of Down’s syndrome. J-Neurosci. 1998 Sep. 15 — 18(18): 7216−31.
73. Servidei S. Mitochondrial encephalomyopathies: gene mutation. Neuromuscular Disorders 13 (2003) 277−282.
74. Shapira A.H.V. Mitochondrial disorders. Biochim Biophys Acta 1999; 1410:2: 99−102.
75. Shapira A.H.V. Mitochondrial involvement in Parkinson’s disease, Huntington’s disease, hereditary spastic paraplegia and Friedreich’s ataxia. Biochim Biophys Acta 1999; 1410: 2: 159−170.
76. Shashidharan P., Michaelidis T.M., Robakis N.K. et al. Novel human glutamate dehydrogenase expressed in neural and testicular tissues and encoded by an Xlinked intronless gene. J Biol Chem 1994 Jun 17−269(24):1697l6.
77. Sligh J.E., Nusinowitz S, McGregor G.R. (2000) — Maternal germ-line transmission of mutant mtDNAs from embryonic stem cells-derived chimeric. Genetics, 14 461 — 14 466.
78. Stadhouders A. M., Paul H. K. Jap, Hans-Peter Winkler, Hans M. Eppenberger, Theo Wallimann (1994) — Mitochondrial Creatine kinase: A major constituent of pathological inclusions seen in mitochondrial myopathies. Medical Sciences, 5089 —5093.
79. Staniforth R. A., Cortes A. at all. The stability and hydrophobicity of cytosolic and mitochondrial malate dehydrogenases and their relation to chaperonin-assisted folding. FEBS-Lett. 1994 May 16- 344(2−3): 129−35.
80. Syed S.E., Engel P.C. Inhibition of glutamate dehydrogenase by covalent coenzymesubstrate adducts: a reexamination. Biochem Mol Biol Int 1993 Jun- 30(2):28 391.
81. Tanji H., Takeda A., Tateyama M et al. Progressive cerebellar ataxia and distal amyotrophy of CharcotMarieTooth type with hyperglutamataemia: two sibling cases. Rinsho Shinkeigaku 1995 Jul- 35(7):7937.
82. Traff-JHolme-EEkbom-KNilsson-BY Ekbom’s syndrome of photomyoclonus, cerebellar ataxia and cervical lipoma is associated with the tRNA (Lys) A8344G mutation in mitochondrial DNA./Acta-Neurol-Scand. 1995 Nov- 92(5): 394−7.
83. Tritschler H.-J., Medori R. Mitochondrial DNA alterations as a source of human disorders. Neurology 1993; 43: 280−288.
84. Utaka N., Marti R., Copeland W. C., Hirano M. (2003) — Site-specific somatic mitochondrial DNA point mutations in patients with thymidine Phosphorylase deficiency. Scholarly science clinical impact, 1913;1931.
85. Wallace D.C., Singh G., Lott M.T. et al. Mitochondrial DNA mutation associated with Leber’s hereditary optic neuropathy. Science 1988a- 242: 1427−1431.
86. Wallace D.C., Zheng X., Lott M.T. et al. Familial mitochondrial encephalomyopathy (MERRF): genetic, pathophysiological, and biochemical characterization of a mitochondrial DNA disease. Cell 19 886- 55: 601−610.
87. Williams A. J., Coakley J. at all. Automated analysis of mitochondrial enzymes in cultured skin fibroblasts. Anal.- Biochem. 1998 Jun 1- 259(2): 176−80.