Структура лакказы из Coriolus Hirsutus и строение ее активного центра

ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Структура лакказы из Coriolus Hirsutus и строение ее активного центра (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
Введение,
1. Глава 1. Обзор литературы
- 1. 1. История изучения активного центра медьсодержащих оксидаз и их представителя — лакказы
- 1. 2. Подходы к изучению структуры активного центра
- 1. 3. Условия получения кристаллов лакказ из различных источников
- 1. 4. Исследование структур лакказ методом рентгеноструктурного анализа
Ход полипептидной цепи лакказ
Структура активного центра лакказ на основе данных РСА
Особенности пространственного строения центра Т
Особенности пространственного строения Т2/ТЗ-кластера
- 1. 5. Механизм действия фермента
Внутримолекулярный перенос электрона

Уникальные каталитические свойства ферментов уже сейчас обеспечили им применение в самых разных областях биотехнологии: от научных исследований (генная инженерия, изучение структуры биополимеров и т. д.) до промышленных процессов (биосенсорные технологииорганический синтез, создание новых фармацевтических препаратовобесцвечивание бумажной пульпы и тканейдетоксификация ксенобиотиков, включая пестициды и нервнопаралитические агентыстабилизация напитков). Практический интерес к изучению ферментов продиктован прежде всего их каталитическими характеристиками: активностью и специфичностью действия. Установление взаимосвязи между структурой ферментов и их функциями является одной из главных задач биохимии и основой для создания прикладных биотехнологий.

К настоящему времени охарактеризованы несколько тысяч ферментов, для многих из них достаточно подробно описаны структуры их комплексов с субстратами и предложены вероятные механизмы проявления биологической активности. Кроме того, на основе полученных данных, используя метод направленного мутагенеза, создаются ферменты с повышенной стабильностью, каталитической эффективностью и желаемой субстратной специфичностью. Таким образом, белковая и генная инженерия открывают серьезные возможности для получения биокатализаторов с заданными свойствами, что расширяет сферу практического использования ферментативного катализа.

Семейство лакказ — медьсодержащих оксид аз, впервые обнаруженных более столетия назад в Японском лаковом дереве Rhus vernicifera, по-прежнему остается предметом фундаментальных исследований. Ферменты этого семейства найдены не только в растениях, но также в грибах, бактериях и насекомых. Лакказа обладает способностью катализировать окисление различных соединений, включая о, п-дифенолы, аминофенолы, полифенолы, полиамины, структуры лигнина, некоторые неорганические ионы, арилдиамины с сопутствующим восстановлением молекулярного кислорода до воды. Кроме того, она способна осуществлять прямой биоэлектрокатализ, то есть прямой перенос электрона с электрода на активный центр фермента. Физиологические функции лакказы поражают разнообразием и включают: участие в процессах формирования пигментов и образования плодовых тел грибов, биодеградацию лигнина и детоксификацию фенолов. Вышеперечисленные свойства данных ферментов обеспечивают возможность их широкого применения в различных отраслях биотехнологии.

Для более эффективного практического использования фермента в биотехнологии необходимым условием является детальное установление механизма катализа. Для получения фермента с более высокой стабильностью и активностью основным подходом является получение рекомбинантных ферментов и последующая модификация их точечными мутациями. Проведение таких исследований возможно только после расшифровки как первичной, так и пространственной структуры. Основные вопросы, до сих пор не решенные при исследовании данной группы ферментов, суммированы ниже:

— не выяснен механизм генерации окислительно-восстановительного потенциала Т1 -центра на структурном уровне, что имеет первостепенное значение для проявления каталитических свойств;

— не выяснен механизм восстановления кислорода и роль отдельных медных центров (Т2 и ТЗ) в этом процессе;

— не выяснен механизм биоэлектрокатализа и его связь с гомогенным катализом;

— не выяснена роль и структура отдельных интермедиатов в процессе катализа и условия их взаимных переходов.

Выяснение данных вопросов невозможно без определения пространственной структуры высокоредокспотенциальных лакказ, то есть ферментов, наиболее эффективно осуществляющих каталитическое превращение субстрата.

Установление трехмерной структуры ферментов на сегодняшний день проводится с использованием двух основных методоврентгеноструктурного анализа и ЯМР-спектроскопии высокого разрешения. Однако возможности ЯМР-спектроскопии при исследовании ряда белков ограничены. Особые трудности возникают при изучении парамагнитных металлобелков, так как взаимодействие их неспаренных электронов с ядерными спинами вызывает значительное изменение химических сдвигов ядер и увеличение скоростей ядерной релаксации (спин-решеточной и спин-спиновой), что приводит к уширению сигналов, препятствуя их детектированию в спектре ЯМР, и, таким образом, затрудняет получение данных о структуре изучаемой системы.

Очевидно, что основным методом изучения структуры лакказымедьсодержащего парамагнитного белка — является рентгеноструктурный анализ. Несмотря на получение фермента в кристаллическом виде, имеющиеся данные недостаточны для объяснения свойств лакказы. Таким образом, необходимо изучение структуры ряда высокоредокспотенциальных лакказ для установления взаимосвязи «структура — функции». В настоящей работе были поставлены следующие задачи: определение аминокислотной последовательности данного ферментаисследование структуры фермента и его активного центра при температурно-фазовых переходахопределение по дифракционным данным кристаллической структуры белка.

ВЫВОДЫ.

1. Разработан протокол очистки лакказы из Coriolus hirsutus методом препаративного электрофореза, который позволил получить гомогенный препарат фермента с высокой удельной активностью.

2. Определена аминокислотная последовательность лакказы из Coriolus hirsutus 072 по нуклеотидной последовательности кДНК. Установлено, что высокоредокспотенциальные грибные лакказы имеют более 70% степени сходства аминокислотных последовательностей, при этом аминокислотные остатки, координирующие ионы меди, 100% идентичны у лакказ и аскорбат оксидазы.

3. Показано, что лакказа существует в растворе в виде мономеров и димеров (соотношение 85% - 15%). Методами ЭПР и оптической спектроскопии установлено, что при размораживании препарата фермента происходит процесс конформационная перестройка активного центра, сопровождающаяся изменением каталитической активности.

4. Найдены условия роста монокристаллов лакказы из Coriolus hirsutus 072: 0.05 М К-фосфатный буфер рН 7.0, 10% в/о ПЭГ 1000, 10% в/о ПЭГ 8000. На синхротронном источнике рентгеновского излучения собран набор дифракционных данных с разрешением 1.85 А. Структура решена методом молекулярного замещения. Проведено кристаллографическое уточнение структуры до R-фактора 18.15%.

5. Показано, что аксиальные Phe 458 и Не 450 находятся на равном расстоянии (3.6 А) от иона меди Т1. Установлена коррреляция между длиной водородной связи между атомом Cys 448 О и атомом His 447 51N и величиной окислительно-восстановительным потенциалом иона меди Т1. Впервые получена структура нативного интермедиата, содержащего в центре трехъядерного кластера дополнительный кислородный лиганд.

6. На основании полученных структурных и спектроскопических данных предложен механизм восстановления молекулярного кислорода в процессе ферментативного катализа.

Показать весь текст

Список литературы

Malmstrom В. G. Early and more recent history in the research on multi-copper oxidases //In Multicopper oxidases (Messerschmidt A., Ed.), World Scientific, Singapore, New Jersey, London, Hong Kong, 1997, pp. 1−22.
Bertrand G. //Compt. Rend. Acad. Sci., 1894, v. T118, pp. 1215.
Keilin D., Mann T. Laccase, a blue copper-protein oxidase from the latex of Rhus succedanea.// Nature, 1939, v. 143, pp. 23 24.
Malmstrom B. G., Mosbach R., Vanngard T. An electron spin resonance study of the state of copper in fungal laccase.//Nature, 1959, v. 183, pp. 321 322.
Branden R., Deinum J., Coleman M. A mass spectrometric investigation of the reaction between 18Ог and reduced tree laccase. A differentiation between the two water molecules formed.// FEBS Lett., 1978, v. 89, pp. 180 182.
Gray H. В., Solomon E. I. Electronic Structures of Blue Copper Centers in Proteins.// Copper Proteins, ed. T. G. Spiro (Wiley, New York, 1981) pp. 1−39.
Gray H. В., Malmstrom B. G. On the relationship between protein-forced ligand fields and the properties of blue copper centers.// Comments Inorg. Chem., 1983, v. 2, pp. 203 209.
Spira-Solomon D. J., Allendorf M. D., Solomon E. I. Low-Temperature Magnetic Circular Dichroism Studies of Native Laccase: Confirmation of a Trinuclear Copper Active Site.// J. Am Chem. Soc., 1986, v. 108, pp. 5318 -5328.
Cole J. M., Avigliano L., Morpurgo L., Solomon E. I. Spectroscopic and chemical studies of the ascorbate oxidase trinuclear copper active site: Comparison to laccase.//J. Am Chew. Soc., 1991, v. 113, pp. 9080 9089.
Solomon E. I., Lowery M. D., LaCroix L. В., Root D. E. Electronic absorption spectroscopy of copper proteins.// Methods Enzy-mol., 1993, v. 226, pp. 1- 33.
Solomon E.I., Sundaram U.M., Machonkin Т.Е. Multicopper oxidases and oxygenases.// Chem. rev., 1996, v.96, N 7, pp.2563 2605.
Malmstrom B. G., Reinhammar В., Vanngard T. Two forms of copper (II) in fungal laccase.// Biochim. Biophys. Acta., 1968, v. 156, pp. 67 76.
Hanna P.M., McMillin D.R., Pasenkiewicz-Gierula M., Antholine W.E., Reinhammar B. Type 2 depleted fungal laccase.// Biochem. J., 1988, v. 253, N 2, pp. 561 -568.
Beinert H., Griffiths D. E., Wharton D. C., Sands R. H. Properties of the copper associated with cytochrome oxidase as studied by paramagnetic resonance spectroscopy.//J. Biol. Chem., 1962, v. 237, P. 2337 2346.
Blumberg W. E., Levine W. G., Margolis S., Peisach J. On the nature of copper in two proteins obtained from Rhus vernicifera latex.// Biochem. Biophys. Res. Commun., 1964, v. 15, P. 277 283.
Fee J. A., Malkin R., Malmstrom B. G., Vanngard T. Anaerobic oxidation-reduction titrations of fungal laccase. Evidence for several high potential electron-accepting sites.// J. Biol. Chem., 1969, v. 244, P. 4200 4207.
Malmstrom B. G., Finazzi Agro A., Antonini E. The mechanism of laccase-catalyzed oxidations: kinetic evidence for the involvement of several electron-accepting sites in the enzyme.// Eur. J. Biochem., 1969, v. 9, p. 383 391.
Messerschmidt A., Spatial structure of ascorbate oxidase, laccase and related proteins: implications for the catalytic mechanism.// A. Messerschmidt (Ed.), Multi-Copper Oxidases, Singapore, 1997, pp. 23 79
Messerschmidt A., Huber R. The blue oxidases, ascorbate oxidase, laccase and ceruloplasmin. Modelling and structural relationships.// Eur Biochem., 1990, v. 187, pp. 341 -352.
Solomon E.I. Binuclear copper active site: Hemocyanin, tyrosinase, and type 3 copper oxidases.// In Spiro, T.G., Ed. Copper Proteins. Wiley, New York, 1981, pp. 41−108.
Solomon E.I. Coupled binuclear copper proteins: Catalytic mechanisms and structure-reactivity correlations.// Prog. Clin. Biol. Res., 1988, v. 274, pp. 309−329.
Solomon E.I., Penfield K.W., Wilcox D.E. Active sites in copper proteins. An electronic structure overview.// Structure and Bonding, 1983, v. 53, pp. 1 57.
Cole J. L., Clark P. A., Solomon E. Spectroscopic and chemical studies of the laccase trinuclear copper active site: Geometric and electronic structure.// Am. Chem. Soc., 1990, v. 112, pp. 9534 9548.
La Mar G.N., W. de W., Horrocks Jr., Holm R.H. NMR of Paramagnetic Molecules.// Acad. Press, New York, 1973.
Bertini I., Luchinat C. NMR of Paramagnetic Molecules in Biological Systems.// Benjamin/Cummings, Menlo Park, CA, 1986.
Banci L., Bertini I., Luchinat C. Nuclear and Electron Relaxation. The Magnetic Nucleus-unpaired Electron Coupling in Solution, VCH, Weinheim, 1991
Piontek K., Antorini M., Choinowski T. Crystal structure of a laccase from the fungus Trametes versicolor at 1.90-A resolution containing a full complement of coppers.// J. Biol. Chem., 2002, v. 277, N 40, pp.37 663 37 669.
Hakulinen N., Kiiskinen L.L., Kruus K., Saloheimo M., Paananen A., Koivula A., Rouvinen J. Crystal structure of a laccase from Melanocarpus albomyces with an intact trinuclear copper site.// Nat. Struct. Biol., 2002, v. 9, N 8, pp. 601 -605.
Enguita F.J., Martins L.O., Henriques A.O., Carrondo M.A. Crystal structure of a bacterial endospore coat component. A laccase with enhanced thermostability properties.// J. Biol. Chem., 2003, v. 278, N 21, pp. 19 416- 19 425.
Zaitsev V. N., Zaitseva I., Papiz M., Lindley P. An X-ray crystallographic study of the binding sites of the azide inhibitor and organic substrates to ceruloplasmin, a multi-copper oxidase in the plasma.// Biol. Inorg. Chem., 1999, v. 4, pp. 579−587.
Graziani M.T., Antonilli L., Sganga P., Citro G., Mondovi В., Rosei M.A. Biochemical and immunological studies of deglycosylated Rhus vernicifera laccase.//Biochem Int., 1990, v. 21, N 6, pp. 1113 1124.
Messerschmidt A., Rossi A., Ladensteinm R., Huber R., Bolognesi M., Gatti G., Marchesini A., Pettuzzelli R., Finazzi-Agro A. X-ray Crystal Structure of the blue oxidase Ascorbate Oxidase from Zucchini // Mol. Biol., 1989, v. 206, pp. 513−529.
Messerschmidt A., Luecke H., Huber R. X-ray structures and mechanistic implications of three functional derivatives of ascorbate oxidase from Zucchini.// J. Mol. Biol., 1993, v. 230, N 3, pp. 997 1014.
Reinhammar B.R.M. Oxidation-reduction properties of the electron acceptors in laccase and stellacyanin.// Biochim. Biophys. Acta, 1972, v. 275, pp. 246 259.
Andreasson L.-E., Reinhammar B. Kinetic studies of Rhus vernicifera laccase. Role of metal centers in electron transfer.// Biochim. Biophys. Acta, 1976, v. 73, pp. 579−597.
Yaropolov A.I., Skorobogat’ko O.V., Vartanov S.S., Varfolomeyev S.D. Laccase: propeties, catalytic mechanism, and applicability.// Appl. Biochim. Biotech., 1994, v. 49, N 3, pp. 257 280.
Xu F., Palmer A., Yaver D. S., Berka R. M., Gambetta G. A., Brown S. H., Solomon E. I. Targeted mutations in a Trametes villosa laccase: Axial perturbations of the Tl Cu.//J. Biol. Chem., 1999, v. 274, pp. 12 372 12 375.
Farver O., Skov L.K., Pascher Т., Karlsson B.G., Nordling M., Lundberg L.G., Vanngard Т., Pecht I. Intramolecular electron transfer in single-site-mutated azurins. // Biochemistry, 1993, v. 32, pp. 7317 7322.
Froehner S.C., Eriksson K.E. Purification and properties of Neurospora crassa laccase.// J. Bacterid., 1974, v. 120, N 1, pp. 458 465.
Huang H., Zoppellaro G., Sakurai T. Spectroscopic and Kinetic Studies on the Oxygen-centered Radical Formed during the Four-electron Reduction Process of Dioxygen by Rhus vernicifera Laccase.// J. Biol. Chem., 1999, v. 274, N 46, pp. 32 718−32 724.
Kyritsis P., Messerschmidt A., Huber R., Salmon G.A., Sykes A.G. Pulse Radiolysis Studies on Ascorbate Oxidase from Zucchini.// J. Chem. Soc., Dalton Trans., 1993, v. 5, pp. 731 735.
Onuchic J. N., Beratan D.N. A predictive theoretical-model for electron-tunneling pathways in proteins.// J. Chem. Phys., 1990, v. 92, pp. 722 725.
Beratan D.N., Onuchic J. N., Gray H.B. Electron tunneling pathways in proteins// In Metal Ions in Biologycal Systems (Sigel H. and Sigel A. Eds.), Dekker, New York, 1991, pp. 97 -127.
Beratan D.N., Onuchic J.N., Betts J.N., Bowler В., Gray H.B. Electron mediation pathways in ruthenated proteins.// J. Am. Chem. Soc., 1990, v. 112, pp. 7915 -7921.
Cole J.L., Ballou D.P., Solomon E. Spectroscopic characterization of the peroxide intermediate in the reduction of dioxygen catalyzed by the multicopper oxidases// Am. Chem. Soc., 1991, v. 113, pp. 8544 8546.
Cole J.L., Tan G.O., Yang E.K., Hodgson K.O., Solomon E. Reactivity of the laccase trinuclear copper active site with dioxygen: An X-ray absorption edge study.// Am. Chem. Soc., 1990, v. 112, pp. 2243 2249.
Aasa R., Branden R., Deinum J., Malmstrom B.G., Reinhammar В., Vanngard T. A paramagnetic intermediate in the reduction of oxygen by reduced laccase.//FEBS Letters, 1976, v. 61, N2, pp. 115−119.
Andreasson L.-E., Branden R., Malmstrom B.G., Vanngard T. An intermediate in the reaction of reduced laccase with oxygen.// FEBS Letters, 1973, v. 32, pp. 187- 189.
Clark P. A., Solomon E. Magnetic circular dichroism spectroscopic definition of the intermediate produced in the reduction of dioxygen to water by native laccase.// Am. Chem. Soc., 1992, v. 114, pp. 1108 1110.
Morie-Bebel M.M., Morris M.C., Menzie J.L., McMillin D.R. A mixed-metal derivative of laccase containing mercury (II) in the Type 1 binding site.// J. Am. Chem. Soc., 1984, v. 106, pp. 3677 3687.
Branden R., Deinum J. Type 2 copper (II) as a component of the dioxygen reducing site in laccase. Evidence from EPR experiments with 170.// FEBS Lett., 1977, v. 73, N 2, pp. 144 146.
Langford V.S., Williamson B.E. Magnetic circular dichroism of the hydroxyl radical in an argon matrix.// J. Phys.Chem. A, 1997, v. 101, pp. 3119 3124.
Andreasson L.-E., Branden R., Reinhammar B. Kinetic studies of Rhus vernicifera laccase. Evidence for multi-electron transfer and an oxygen intermedaite in the reoxidation reaction.// Biochim. Biophys. Acta, 1976, v. 438, pp. 370−379.
Branden R., Deinum J. Effect of pH on oxygen intermediate and dioxygen reduction site in blue oxidases.// Biochem. Biophys. Acta, 1978, v. 524, N 2, pp. 297 304.
Aasa R., Branden R., Deinum J., Malmstrom B.G., Reinhammar В., Vanngard T. A 170-effect on the EPR spectrum of the intermediate in the dioxygen-laccase reaction.// Biochem. Biophys. Res. Commun., 1976, v. 70, N 4, pp. 1204- 1209.
Lindley P.F., Card G., Zaitseva I., Zaitsev V., Reinhammar В., Selin-Lindgren E., Yoshida K. An X-ray structural study of human ceruloplasmin in relation to ferroxidase activity // J. Biol. Inorg. Chem., 1997, v. 2, pp. 454 463.
Farver O., Pecht I. Electron transfer in proteins: in search of preferential pathways // FASEB J., 1991, N 11, pp. 2554 2559.
Farver O., Pecht I. Low activation barriers characterize intramolecular electron transfer in ascorbate oxidase.// Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1992, v. 89, pp. 8283 8287.
Farver O., Wherland S., Pecht I. Intramolecular electron transfer in ascorbate oxidase is enhanced in the presence of oxygen.// J. Biol. Chem., 1994, v. 269, pp. 22 933 -22 936.
Hansen F.B., Koudelka G.B., Noble R., Ettinger M.J. Effects of a Single Reduction? Reoxidation Cycle on the Kinetics of Copper Reduction in Rhus Laccase.// J. Biochemistry, 1984, v. 23, pp. 2057 2064.
Reinhammar B. J. An EPR signal from the half-reduced type 3 copper pair in Rhus vernicifera laccase. // Inorg. Biochem., 1981, v. 15, pp. 27 39.
Davis B.J. Disc electrophoresis: Method and application to human serum protein.// Ann. NY Acad. Sci., v. 121, pp. 404 407.
Westermeier R. Electrophoresis in practice, Weinheim-New York-Basel-Cambridge-Tokyo, VCH, 1993.
Варфоломеев С.Д., Наки А., Ярополов А. И. Кинетика и механизм каталитического восстановления молекулярного кислорода в присутствии лакказы.// Биохимия, 1985, т. 50, N 9, с. 1411−1419.
Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. // Anal. Biochem., 1987, v. 162, pp. 156- 159.
Matz M., Shagin D., Bogdanova E., Britanova O., Lukyanov S., Diatchenko L., Chenchik A. Amplification of cDNA ends based on template-switching effect and step-out PCR.// Nucleic Acids Res., 1999, v. 27, N 6, pp. 1558−1560.
Joensson L., Sjoestroem K., Haeggstroem I., Nyman P.O. Characterization of a laccase gene from the white-rot fungus Trametes versicolor and structural features of basidiomycete Laccases. // Biochim. Biophys. Acta, 1995, v. 1251, pp. 210−215.
Eggert C., LaFayette P.R., Temp U., Eriksson K.E., Dean J.F. Molecular analysis of a laccase gene from the white rot fungus Pycnoporus cinnabarinus.// Appl. Environ. Microbiol., 1998, v. 64, N 5, pp. 1766 1772.
Yaver D.S., Golightly E.J. Cloning and characterization of three laccase genes from the white-rot basidiomycete Trametes villosa: genomic organization of the laccase gene family Gene., 1996, v. 181, N 1−2, pp. 95 102.
Germann U.A., Lerch K. Isolation and partial nucleotide sequence of the laccase gene from Neurospora crassa: amino acid sequence homology of the protein to human ceruloplasmin.// Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1986, v. 83, N 23, pp. 8854−8858.
Nitta K., Kataoka K., Sakurai T. Primary structure of a Japanese lacquer tree laccase as a prototype enzyme of multicopper oxidases.// J. Inorg. Biochem, 2002, v. 91, N 1, pp. 125−131.
Huang H.-W., Sakurai Т., Maritabo S., Marchesini A., Suzuki Sh. EPR and magnetic susceptibility studies of the trinuclear copper center in native and azide-reacted zucchini ascorbate oxidase // J. Inorgan. Biochem., 1999, v. 75, pp. 20 25.
Abragam A., Bleany B. Electron paramagnetic resonance of transition ions, Clarendon Press, Oxford, 1970
McPherson A. Preparation and analysis of protein crystals, John Wiley & Sons, Inc., 1982.
Otwinowski Z., Minor W. // Meth. Enz., 1997, v. 276, pp. 307 326.
Malkin R., Malmstrom B.G., Vanngard T. The reversible removal of one specific copper (II) from fungal laccase.// Eur. J. Biochem., 1969, v. 7, N 2, pp. 253 -259.
Горбатова O.H., Степанова E.B., Королева O.B. Изучение некоторых биохимических и физико-химических свойств индуцибельной формы внеклеточной лакказы базидиомицета Coriolus hirsutus.// Прикладная биохимия и микробиология., 2000, т. 36, N 3, с. 272 277.
Salas C., Lobos S., Larrain J., Salas L., Cullen D., Vicuna R. Properties of laccase isoenzymes produced by the basidiomycete Ceriporiopsis subvermispora.// Biotechnol. Appl. Biochem., 1995, v.21, pp. 323 333.
Glenn J.K., Gold M.H. Purification and properties of an extracellular Mn (Il)-dependent peroxidase from the lignin-degrading basidiomycete Phanerochaete chrisosporium.// Arch. Biochem. Biophys., 1985, v. 242, pp. 329−341.
Gibson T.D., Hulbert J.N., Parker S.M., Woodward J.R., Higgins I.J. // Biosensors & Bioelectronics, 1992, N 3, pp. 701 -708.
Alden M., Magnusson A. Effect of temperature history on the freeze-thawing process and activity of LDH formulations.// Pharm Res., 1997, v. 4, pp. 426−30.
Svergun D.I., Semenyuk A.V., Feigin L.A. Small angle scattering data treatment by the regularization method.// Acta Cryst. A., 1988, v. 24, pp. 244−251.
Svergun D.I., Volkov V.V., Kozin M.B.- Stuhrmann H.B., Barberato C., Koch M.H.J. Shape Determination from Solution Scattering of Biopolymers.// J. Appl. Cryst., 1997, v. 30, pp. 798 802.
Maritano S., Carsughi F., Fontana M.P., Marchesini A. Study of the enzyme ascorbate oxidase by small angle neutron scattering.// Journal of Molecular Structure, 1996, v. 383, N 1−3, pp. 261 265.
Li K., Xu F., Eriksson K.E. Comparison of fungal laccases and redox mediators in oxidation of a nonphenolic lignin model compound.// Appl. Environ. Microbiol., 1999, v. 65, N 6, pp. 2654 2660.
Reinhammar B. Purification and properties of laccase and stellacyanin from Rhus vernicifera.// Biochem. Biophys. Acta., 1970, v. 205, N 1, pp. 35−47.
Hope H. Crystallography of biological macromolecules a generally applicable method.// Acta Cryst., 1988, v. B44, pp. 22 26.
Matthews B.W. Solvent content of protein crystals.// J. Mol. Biol., 1968, V. 33, pp. 491 -497.
Vagin A. A., Murshudov G. N., Strokopytov В. V. The BLANC program suite for Protein Crystallography.// J. Appl. Cryst., 1998, v. 31, pp. 98−102.
Murshudov G.N., Vagin A.A., Dodson E.J. Refinement of Macromolecular Structures by the Maximum-Likelihood Method.// Acta Cryst., 1997, v. D53, pp. 240 255.
Murshudov G.N., Lebedev A., Vagin A.A., Wilson K.S., Dodson E.J. Efficient anisotropic refinement of Macromolecular structures using FFT.// Acta Cryst., 1999, v. D55, pp. 247 255.
Jones T.A., Bergdoll M., Kjeldgaard M. O: A macromolecular modeling environment.// In Crystallographic and Modeling Methods in Molecular Design (Bugg C., Ealick S., Eds.), Springer-Verlag Press, 1990, pp. 189- 195.
Laskowski R.A., MacArthur M.W., Moss D.S., Thornton J.M. PROCHECK: a program to check the stereochemical quality of protein structures.// J. Appl. Cryst., 1993, v. 26, pp. 283 291.

Заполнить форму текущей работой