Ультрамикроскопическое исследование посттравматической регенерации периферического нерва в условиях пластики аллотрансплантатом в эксперименте

Актуальность.

Несмотря на то, что посттравматическая регенерация периферических нервов изучается на протяжении более ста с лишним лет, однако она до сих. пор сохраняет научную актуальность, как с точки зрения теоретической, так и практической значимости. Необходимость экспериментальных исследований этого явления продиктованы, в первую очередь, запросами практического здравоохранения. Травматические повреждения периферических нервов являются одной из частых причин тяжелых функциональных нарушений конечностей, приводящих к длительной или постоянной утрате трудоспособности. Более 60% больных в молодом возрасте с повреждениями периферических нервов становятся инвалидами (Григорович К.А., 1981; Шевелев Н. И., 1983; Lundborg G., 1987; Mackinnon S.E., 1989).

В последние годы проблеме посттравматической регенерации периферических нервов был посвящен ряд экспериментальных и клинических исследований (Оглезнев К.Я., 1982; Hadlock Т., 2000; Haase S.C., 2003; Battiston В., 2005; Zang М. и Yannas I.V., 2005). Тем не менее, в показаниях и противопоказаниях к восстановительным операциям на нервах, обосновании вида операции и ведения послеоперационного периода, сроков хирургического вмешательства, остается много неясных вопросов. Особую значимость при этом имеет вид используемых пластических материалов и целесообразность их применения. Сложность решения данной проблемы обусловлена рядом причин. Одной из главных является недостаточная изученность фундаментальных аспектов посттравматического репаративного гистогенеза периферического нерва.

Нерешенными также до сих пор остаются весьма важные для клиницистов вопросы об этапах и скорости регенерации, полноте восстановления периферических нервов после травматических повреждений и хирургического вмешательства и морфологических критериях ее оценки.

Совершенствование микрохирургической техники в последние годы, использование атравматического шовного материала и эпиневралыюго шва значительно улучшили результаты пластики травмированных нервных стволов. Вместе с тем, мобилизация концов поврежденного нерва при диастазе более 2−2,5 см вызывает натяжение в области шва и резко ухудшает процессы регенерации. Это приводит к необходимости пластики нерва трансплантатом, причём большинство авторов в настоящее время отдают предпочтение различным видам аутопластики (LB Dahlin, G. Lundborg, 2001; I I. Fansa, 2003).

В то же время сложность и травматичность получения у больных аутологичных трансплантатов периферических нервов достаточных размеров и подходящего качества обуславливают использования других видов трансплантатов. Проведенные в этом направлении клинико-экспериментальные исследования ряда авторов показали, что существующие способы обработки, консервации и снижения иммуноспецифичности аллотрансплантатов не позволяют рассчитывать на положительный результат при использовании их в клинике. (С.П. Галич и соавт., 1983; N. Danielsen, 1994; С.Е. Schmidt, 2005; R.V. Weber и S. E Mackinnon, 2005). Среди специалистов, осуществляющих посттравматическую нейропластику, нет единого мнения о преимуществах разных способов замещении дефектов нерва аллотрансплантатами, практически отсутствуют исследования на ультраструктуриом уровне, демонстрирующие влияние материала аллотрансплантата на регенерацию его структурных компонентов.

Цель исследования:

Разработать способ получения и консервации аллотрансплантата для пластики посттравматического дефекта периферического нерва и установить динамику его ультрамикроскопических изменений в ходе регенерации в эксперименте.

Задачи исследования:

1. Разработать способ получения и консервации аллотрансплантата для замещения им травматического повреждения периферического нерва в эксперименте.

2. Исследовать ультрамикроскопические изменения аллотрансплантата периферического нерва в раннюю фазу посттравматического репаративного гистогенеза.

3. Установить динамику ультрамикроскопических изменений различных сегментов периферического нерва и аллотрансплантата в ходе посттравматической регенерации после замещения дефекта аллотрансплантатом.

4. Исследовать состояние аллотрансплантата и установить ультрамикроскопические характеристики изменений различных сегментов периферического нерва на заключительных этапах посттравматической регенерации и провести морфологическую оценку её- эффективности.

Научная новизна работы.

Впервые разработан способ получения, консервации нового вида аллостатического трансплантата и замещения им дефекта периферического нерва, установлена динамика ультраструктурных изменений аллостатического трансплантата в ходе посттравматической регенерации. Выявлены особенности структурной организации и закономерности перестройки аксон-глиальной системы периферического нерва в процессе репаративной регенерации и констатировано полноценное замещение аллостатического трансплантата нервной тканью путем регенерации нервных волокон в составе минифасцикул, окруженных периневрием. Разработанный вид аллотрансплантата стимулирует каркасную посттравматическую регенерацию нерва. Морфологические критерии восстановления целостности структуры периферического нерва с использованием электронной микроскопии позволяют оценить эффективность нового вида аллотрансплантата и использовать разработанный аллотрансплантат для замещения дефектов периферических нервов при их травматических повреждениях.

Научно-практическая значимость.

Выявленные ультрамикроскопические закономерности и динамика становления аксон-глиальных систем периферического нерва в эксперименте существенно дополняют современные представления о репаративной перестройке нервной ткани в процессе регенерации и ее особенностях при замещении травматических дефектов нервов аллостатическими видами трансплантатов. Полученные в процессе исследования результаты могут служить методической основой в разработке других видов аллотрансплантатов для пластики дефектов периферических нервов человека и животных. Созданный новый вид аллотрансплантата может быть предложен к внедрению в нейрохирургическую клинику в случаях, когда нецелесообразна или невозможна аутотрансплантация периферического нерва.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Разработанный препарат аллотрансплантата выполняет функцию проводника регенерирующих нервных волокон и обеспечения необходимой опоры и защиты в ходе их репаративной регенерации, не вызывает реакций отторжения организмом реципиента и грубого рубцевания.

2. Применение нового вида аллотрансплантата периферического нерва обеспечивает восстановление структурной организации нерва, что подтверждается ультрамикроскопическим исследованием.

Апробация материалов исследования.

Основные положения работы доложены на отчетной научной конференции НПО «Иммунопрепарат» (Уфа, 1991), заседаниях Башкирского отделения ВНОАГЭ (Уфа, 1991), IX Европейском конгрессе по нейрохирургии (Москва, 1991) и X Европейском конгрессе по нейрохирургии (Берлин, 1995).

Внедрение.

На основании полученных в ходе диссертационного исследования результатов разработаны технические условия и регламент производства аллостатического трансплантата для пластики травматических повреждений периферического нерва. Разработанный вид аллостатического трансплантата успешно апробирован, применяется в ряде клиник г. Уфы (нейрохирургические отделения ГКБ № 21, 22, РКБ им. Г.Г.Куватова) и г. Москвы (НИИ нейрохирургии им. Н. Н. Бурденко РАМН, клиническая больница им. С.П.Боткина) и производится серийно во Всероссийском Центре глазной и пластической хирургии (г.Уфа).

выводы.

1. Разработан способ получения и консервации нового вида аллотрансплантата периферического нерва для замещения травматических дефектов, сущность которого состоит в максимально возможном удалении белково-миелинового комплекса и сохранении соединительнотканного коллагенового каркаса.

2. Пластика дефекта периферического нерва полученным аллотрансплантатом способствует упорядоченной регенерации нервных волокон и их последующей миелинизации. Аллотрансплантат стимулирует неоваскулогенез и восстановление эндоневральной сосудистой сети. В процессе регенерации активное участие принимает периневрий, образующий минифасцикулы и защищающий регенерирующие аксоны от воздействия окружающих тканевых факторов.

3. Ультрамикроскопическое исследование отражает фазный характер динамики посттравматической регенерации периферического нерва после пластики дефекта аллотрансплантатом. В течение 1 месяца после операции в проксимальном отрезке нерва наблюдаются процессы восходящей дегенерации.

4. На ранних этапах регенерации, через 1 месяц рост новообразованных нервных волокон происходит путем обрастания трансплантата. Через 6 месяцев происходит полное замещение тканей донорского аллотрансплантата собственными структурными компонентами периферического нерва реципиента.

5. Полноценное морфологическое восстановление периферического нерва после травмы по данным электронной микроскопии происходит через 12 месяцев после операции путем окончательной резорбции аллотрансплантата и новообразования коллагеновых волокон с упорядоченной ориентацией. В дистальном отрезке нерва процессы валлеровской дегенерации завершаются успешной регенерацией нервных волокон.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Пластика травматических дефектов периферической нервной системы является одной из наиболее актуальных проблем современной реконструктивной нейрохирургии. В настоящее время общепризнанным «золотым стандартом» является аутопластика. Ввиду технических сложностей получения аутотрансплантата необходимой величины в клинике продолжаются поиски его полноценного заменителя. Апробированные в клинике различные виды аллотрансплантатов имеют существенные недостатки и не получили широкого признания и распространения.

Известно, что при использовании различных аллотрансплантатов для восстановления периферических нервов наблюдается ряд негативных явлений, ограничивающих их применение в практической хирургии. Они обусловлены или тканевой несовместимостью (отторжение, резорбция трансплантата) или несовершенством способов обработки или консервации, эмпирическим подбором аллотрансплантатов, что приводит к инкапсуляции алотрансплантата и развитию рубцовой ткани. В практике вышеперечисленные недостатки проявляются в виде таких послеоперационных осложнений, как сдавление нерва, рубцовая деформация и т. д. Аллотрансплантация нативных тканей вызывает выраженную иммунную реакцию на 14−21 сутки после пересадки, но в более поздние сроки эта реакция снижается с постепенным формированием рубцовой ткани на месте и вокруг аллотрансплантата.

В доступной литературе мы не нашли способов изготовления и консервации аллотрансплантатов периферического нерва, пригодного для использования в клинике. В связи с этим представляет значительный интерес разработка методов изготовления аллотрансплантата периферического нерва и исследование ультраструктурных патогистологических особенностей регенерации периферического нерва при пластике новым видом аллотрансплантата. Одним из перспективных направлений управления процессами регенерации периферического нерва после травмы является использование методов регуляции роста аксонов по искусственно созданным направляющим путям (Чумасов Е.И., 1986). Направляющие пути выполняют следующие функции: направляют регенерирующие нервные волокна из центрального конца нерва в периферический;

— создают каналы для диффундирующих нейротрофических факторов, секретируемых из поврежденного конца нервауменьшают последующее развитие грубоволокнистой (фиброзной) соединительной ткани. В дополнении к этому исследователи оптимизируют инкопорацию в направляющие каналы биологически активных веществ, которые могут стимулировать процесс регенерации (Hudson T.W. и et al., 2000).

Из вышеизложенного следует, что при определенных условиях с помощью аллотрансплантации можно стимулировать полноценную репаративную регенерацию периферического нерва. Разработанный в рамках настоящего исследования аллотрансплантат периферического нерва представляет собой коллагеновый каркас, в котором фибриллярная строма служит опорой, по которой происходит рост клеточных элементов из тканей реципиента (Фукс Б.Б., Фукс Б. И., 1968).

Коллаген известен как «структурный медиатор», выполняющий роль регулятора дифференцировки на клеточном и тканевом уровнях (Серов В.В., Шехтер А. Б., 1981). Его широкое применение в практической медицине связано с развитием реконструктивной хирургии и поиском новых материалов, выполняющих каркасную и пластическую функции при регенерации тканей. К основным достоинствам коллагена как пластического биоматериала, следует отнести его низкую токсичность и антигенность, высокую механическую прочность и устойчивость к тканевым протезам (Истранов JI. П., 1976). Источниками получения коллагена при изготовлении изделий для пластической хирургии служат ткани богатые этим белкомкожа, сухожилия, перикард и кость. Широкое распространение в медицинской практике за рубежом получил раствор кожного коллагена, на основе которого были разработаны различные изделия медицинского назначения такие как — имплантаты, покрытия для ран, хирургические нити для ушивания раневых поверхностей и т. д. («Zyderm», «Zyplast»). Коллаген также обладает также и свойствами нейротрофности (Baron van Evercooren А. и соавт., 1982).

В рамках настоящего исследования удалось получить аллотрансплантат периферического нерва, пригодный для практического применения. Результаты его применения в клинике показали, что данный аллотрансплантат с успехом заменяет аутотрансплантат (Оглезнев К.Я., Халиков В. Г., 1990). Клиническое применение разработанного аллотрансплантата позволило получить полезное восстановление двигательной и чувствительной функции у 68,8% оперированных больных. У большинства оперированных больных (60%) были неблагоприятные условия для регенерации поврежденных нервов (большой срок после травмы, повторные операции, повреждения 2 нервов с сухожилиями и сосудами).

Контроль успешности восстановления осуществлялся исследованием динамики микроультраструктурных изменений периферического нерва в эксперименте. В качестве экспериментальных животных были использованы кролики. Забор материала осуществляли в сроки 1 неделя, 1 месяц, 6 месяцев, 1 год.

В срок 1 неделя после операции в опытной и контрольной группах животных в проксимальном и дистальном отрезках нерва происходят однотипные изменения, вызванные валлеровской (ретроградной) и восходящей (антеградной) дегенерацией после пересечения нерва.

Наши исследования показали, что как ШК, так и макрофага выполняют важную роль в валлеровской дегенерации. Как в опытной, так и в контрольной группах обнаруживаются ШК и макрофаги в активном состоянии, содержащие в своем составе фагоцитированные остатки миелиновой оболочки. В дегенерирующих нервных волокнах были выявлены аксоплазматические массы, заполненные многочисленными флоккулярными плотными частицами, разбухающими митохондриями, дезинтегрированными нейрофиламентами и везикулами. Миелиновые овоиды лишены подлежащей аксолеммы или аксоплазмы (Sathornsumetee S., 2000).

На этом этапе исследования мы обнаружили также специализированные клеточные контакты между активированными эндоневральными фибробластами и макрофагами в период удаления макрофагами миелинового детрита. Специализированные контакты характеризовались парными субплазмалеммальными линиями конденсации относительно стабильной толщины и различной длины, иногда асимметричными. В этих областях межклеточное пространство было наполнено гранулярным материалом. Окаймленные пузырьки изредка обнаруживались в связи с субплазмалеммальными уплотнениями. Эти специализированные контакты отличались от всех описанных ранее контактов фибробластов, но морфологически были идентичны контактам между фагоцитами. (Ohara S. et al., 1986).

Наиболее важные отличия между контрольной и опытной группой обнаружены в области аллотрансплантата. В контрольной группе в области аллотрансплантата происходят процессы аналогичные процессам валлеровской дегенерации. Обнаружены активированные ШК и макрофаги, фагоцитирующие миелин. Миелиновая оболочка нервных волокон претерпевает процессы разрушения и распада. К аплотрансплантату устремляются различные эффекторные клетки, в том числе макрофаги, лимфоциты и фибробласты.

В опытной группе наблюдается совершенно другая картина. Отсутствуют явления, сходные с валлеровской дегенерацией. Цитоплазма ШК и макрофагов содержит очень незначительное количество фагоцитированного миелинового детрита. По-видимому источником миелина является сам аллотрансплантат, использованный в данном исследовании. Этот остаточный миелин находится в денатурированном состоянии и в значительной степени утрачивает первоначальные свойства нативного миелина.

В нашем исследовании обнаружено, что через 1 неделю после операции с обоих концов аллотрансплантата происходит заполнение незрелыми ШК. Эти клетки, которые локализовались в поверхностных слоях аллотрансплантата, они в основном организовывались в длинные цепи вдоль оси аллотрансплантата и постепенно полностью его колонизировали. ШК, мигрировавшие в область аллотрансплантата находятся в состоянии активации. Цитоплазма клеток и аксоплазма выглядят электронноплотными. Аксоплазма содержит большое количество элементов цитоскелета и митохондрии в активном состоянии. Это свидетельствует о начавшихся процессах регенерации нервных волокон и роста аксонов. Наблюдаются явления неоваскулогенеза. В целом электронномикроскопическая картина напоминает картину при аутотрансплантации. Как известно, при аутотрансплантации регенерация следует за валлеровской дегенерацией без признаков иммунной реакции. При этом ШК и макрофаги быстро удаляют миелин из нейролеммальных трубок. (Pollard J.D., Fitzpatrick L., 1973).

Очевидно, что базальная мембрана ШК аллотрансплантата в опытной группе не была атакована макрофагами реципиента и сохранялась в виде пустых трубок (каналов). Для дальнейшей успешной регенерации необходима базальная мембрана. Базальная мембрана не является неотъемлемой частью процесса аксональной регенерации, но может выполнять роль опоры для роста аксонов и миграции ШК (Nadim W. et al., 1990). Хотя периферический нерв обладает высоким потенциалом для регенерации после травмы, тем не менее, это сильно зависит от того, как регенерирующие аксоны устанавливают соответствующие контакты с эндоневральной базальной мембраной в периферическом отрезке нерва (Fawcett J.W., Keynes R.J., 1990).

Через 1 месяц после операции в данном исследовании морфологическая картина в опыте и контроле отличается еще больше.

Несмотря на то, что проксимальный отрезок нерва в контрольной и опытной группах имеют приблизительно одинаковую структуру, в области аллотрансплантата наблюдаются значительные отличия. В контроле наблюдается реакция отторжения, которая микроскопически проявляется в обильной круглоклеточной инфильтрации. При электронно-микроскопическом исследовании выявлено, что ткань аллотрансплантата населяется лимфоцитами, плазмоцитами и активированными макрофагами. Эти клетки разрушают архитектуру нерва, вызывают разрывы и последующее сжатие нейролеммальных трубок. (Pollard J.D., Fitzpatrick L., 1973; Colvin R.B., 1990). Происходит активное удаление чужеродных ШК из аллотрансплантата и постепенное превращение его в бесклеточную структуру.

В то же время в опыте морфологическая картина существенно отличается от контроля. При окраске азотнокислым серебром по Билыновскому-Гросс хорошо заметны признаки регенерации нервных волокон. Тонкие пучки аксонов прорастают во всех направлениях через трансплантат к дистальному отрезку нерва. Значительная часть аксонов в срок 1 месяц после операции регенерирует путем обрастания аллотрансплантата. Это можно объяснить тем, что в толще трансплантата еще не сформировались благоприятные условия для регенерации аксонов, т.к. кровеносные сосуды только начинают прорастать к центру трансплантата. Как известно, в отсутствие адекватного кровоснабжения репаративная регенерация в периферическом нерве сильно затруднена.

В опыте у всех исследованных животных обнаружен весьма важный для репаративной регенерации периферического нерва феномен минифасцикуляции. Регенерирующие аксоны оказываются окруженными отростками периневральных клеток и образуют своеобразные футляры. В составе этих футляров кроме регенерирующих аксонов обнаружены ШК, фибробласты, коллагеновые волокна.

Процесс мшшфасцикуляции начинается в проксимальном конце нерва и хотя теоретически это может привести к дальнейшей морфологической дезорганизации нормального строения нерва он выполняет 2 главные функции в регенерирующем нерве:

1) максимальное отделение нервной ткани от ткани мезодермального происхождения;

2) сохранение стабильного мезодермального окружения. Образование минифасцикул очень важно для результатов регенерации. Аксоны, которые не попали в минифасцикулы, теряют правильное направление и образуют неврому или позже фагоцитируются. (Hirasava G.Y., Marmor L., 1967). Периневральные клетки проявляют выраженную фагоцитарную активность и обнаруживают фрагменты базальной мембраны на своей поверхности. В составе миинфасцикул появляются тонкие (25−30 нм) коллагеновые фибриллы, тесно связанные с базальной мембраной вокруг цепочек ШК (лент Бюнгнера), появляется также аморфный межклеточный дефект между вновь синтезированными тонкими коллагеновыми фибриллами и нормальным коллагеном (50−60 нм). Обратимая эндоневральная минифасцикуляция является важным компонентом для поддержания регенерации аксонов в добавлении к лентам Бюнгнера.

Нами обнаружено, что внутри минифасцикул через 1 месяц после операции в опытной группе появляются миелинизированные нервные волокна небольшого диаметра. Сами минифасцикулы окружены соединительнотканными волокнами. Хотя морфологически эти волокна выглядели не измененными, их полного созревания не наблюдалось. В опытной группе аллотрансплантат не препятствует регенерации нервных волокон, что является следствием слабого уровня развития воспалительного процесса в ответ на применение аллотрансплантата.

Через 6 месяцев после операции в опытной и контрольной группах обнаружены существенные отличие в микрои ультраструктуре по сравнению с предыдущим сроком исследования. В опытной группе в проксимальном конце нерва регенерировавшие нервные волокна выглядят более зрелыми (окраска азотнокислым серебром по Бильшовскому-Гросс). Волокна входят в аллотрансплантат по всей его толщине. В самом аллотрансплантате обнаружено 2 вида строения нервных волокон: кабельного и рыхлого типа.

В контрольной группе в области контакта проксимального отрезка нерва и аллотрансплантата обнаружены беспорядочно регенерировавшие нервные волокна, которые образовали неврому. Внутрь аллотрансплантата вновь образованные нервные волокна не проникли. В основном регенерация завершилась путем обрастания аллотрансплантата. Среди регенерировавших волокон большая часть находится в неудовлетворительном состоянии, подвергаясь процессам дегенерации и некробиоза.

Кабельный" тип нервных волокон в опытной группе представляет собой пучок зрелых минифасцикул большего размера, чем в предыдущий срок. В состав минифасцикул входит значительно больше миелинизированных нервных волокон. Минифасцикулы ограничиваются несколькими слоями периневральных клеток, формируя, таким образом, зрелый периневрий. В отличие от предыдущего срока количество слоев периневральных клеток увеличивается в среднем 2 раза и составляет 4−5 слоев.

В контрольной группе большая часть аллотрансплантата, особенно центральная его часть, состоит из соединительной ткани. Основная масса регенерировавших нервных волокон располагается по периферии аллотрансплантата. Часть нервных волокон имеет минифасцикулярное строение, сходное с контрольной группой, однако отличается избыточной пролиферацией соединительной ткани, как внутри фасцикул, так и за их пределами. Значительная часть нервных волокон, которые регенерировали по периферии трансплантата, находится в состоянии вторичной дегенерации. Несмотря на наличие активного периневрия миелиновая оболочка таких аксонов похожа на миелиновую оболочку при валлеровской дегенерации. Возможно это связано с неудовлетворительным состоянием кровоснабжения аллотрансплантата ввиду развившихся процессов отторжения.

В составе минифасцикул в контрольной группе обнаружены макрофаги, отличающиеся вытянутыми цитоплазматическими отростками. По данным R.A.S Hughes. (1994) эта' популяция макрофагов играют решающую роль в презентации экзогенных антигенов Т-лимфоцитам в периферическом нерве. Некоторая часть аллотрансплантатов в контрольной группе даже через 6 месяцев содержит плазмоциты и нейтрофильные гранулоциты. Это свидетельствует о том, что процессы отторжения к этому сроку полностью не завершены.

В опытной группе к 6 месяцам после операции нервные волокна полностью прорастают через аллотрансплантат и достигают дистального отрезка нерва. В пустые нейролеммальные трубки прорастают как правило несколько аксонов. По-видимому, лишние аксоны претерпевают дегенерацию и отмирают. Поэтому часть аксонов имеют неудовлетворительную ультраструктуру, свидетельствующую о начавшихся процессах дегенерации и апоптоза. В толще алло’фансплантата обнаружена хорошая регенерация кровеносных сосудов. Это является необходимым условием для успешной регенерации нервных волокон.

В контрольной группе к 6 месяцам после операции отдельные нервные волокна достигают дистального отрезка нерва путем обрастания аллотрансплантата. В толще аллотрансплантата ни в одном случае не обнаруживались живые регенерирующие нервные волокна. Почти вся центральная часть аллотрансплантата оказалась заполненной соединительной тканыо. Отдельные аксоны, достигшие дистального отрезка нерва были сжаты коллагеновыми волокнами, либо находились в состоянии дегенерации.

В настоящем исследовании отличие мы не обнаружили существенного значения наличия живых ШК в аллотрансплантате. Регенерация периферического нерва успешно происходила в отсутствии ШК в аллотрансплантате. S.C. Haase и соавт. (2003) показали, что химически обработанный бесклеточный нервный трансплантат поддерживает аксональную регенерацию и функциональную регенерацию при пластике дефекта в 2 см и может выполнять роль кондуита (проводника) растущих аксонов. Таким образом, в срок 6 месяцев после операции в опытной группе использованный аллотрансплантат обеспечил необходимые условия для регенерации периферического нерва. Большая часть регенерировавших нервных волокон достигла дистального отрезка нерва и успешно нейротизировала его.

Через 1 год после операции в опытной и контрольной группах обнаружены существенные отличие в микрои ультраструктуре по как по сравнению с предыдущим сроком, так и между группами. Структура проксимального отрезка нерва в опытной и контрольной группах практически ничем не отличается от интактного нерва. Это свидетельствует о завершении процессов антеградной дегенерации. Проросшие через аллотрансплантат нервные волокна имеют более зрелый вид. Сохраняется 2 типа волокон: «рыхлого» и «кабельного» типа. Это различие между волокнами сохраняющееся в течение года после операции связано по-видимому с количеством межпучковой соединительной ткани. В области пересаженного аллотрансплантата произошла полная замена соединительнотканного каркаса собственными тканями реципиента. При этом минифасцикулярное строение регенерировавших нервных волокон к этому сроку наблюдения претерпело существенные изменения. Границы между фасцикулами исчезли ввиду отсутствия отростков периневральных клеток. Таким образом, происходит постепенное исчезновение структуры минифасцикул. Уменьшение и исчезновение структур минифасцикул следует рассматривать как морфологическое подтверждение «созревания нерва» (Lunborg G. et al., 1981).

В отличие от интактного нерва в области аллотрансплантата в опытной группе нами обнаружено несколько большее количество соединительной ткани. Размеры аксонов миелиновых нервных волокон в самом аллотрансплантате в опытной группе немного меньше размеров волокон интактного нерва (Gomez N. et al., 1996), В дистальном отрезке нерва в опытной группе обнаружены зрелые миелинизированные нервные волокна. В целом дистальный отрезок нерва имеет структуру интактного нерва. Отличие от интактного нерва заключаются в увеличенном количестве коллагеновых волокон и явлениях раздражения, выявленных в отдельных нервных волокнах. Эти явления связаны с реактивной перестройкой нерва и могут продолжаться более года.

В контрольной группе через 1 год после операции трансплантат также был замещен собственными тканями реципиента, однако ввиду реакции отторжения свежий аллотрансплантат не создал условий для успешной регенерации нервных волокон реципиента и не стал проводником аксонов. На месте аллотрансплантата обнаружено образование, состоящее из зрелой соединительной ткани.

Таким образом, использованный нами аллотрансплантат полностью выполнил свою функцию в качестве проводника регенерирующих нервных волокон и создал необходимую опору для регенерации нерва. Однако послеоперационное восстановление нерва к этому сроку не может считаться полностью завершенным.