Помощь в написании студенческих работ
Антистрессовый сервис

Выделение и характеристика сериновой протеиназы BACILLUS BREVIS, лизирующей клетки дрожжей CANDIDA UTILIS

Диссертация: Выделение и характеристика сериновой протеиназы BACILLUS BREVIS, лизирующей клетки дрожжей CANDIDA UTILIS
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Ранее работами сотрудников лаборатории Кулаева И. О. (Вагабовым с соавт. /8,27,28/) было показано, что синтез такого важнейшего в структурном отношении полимера клеточной стенки как 1,3-глюкана может протекать независимо от интенсивности синтеза белков (в частности фермента глюкан-синте-тазы). Это означает, что увеличение скорости синтеза глюкана, которое наблюдается в определенные моменты… Читать ещё >

Выделение и характеристика сериновой протеиназы BACILLUS BREVIS, лизирующей клетки дрожжей CANDIDA UTILIS (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Содержание

  • ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ СТРОЕНИЕ И ФУНКЦИИ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ДРОЖЕЙ. II
  • 1. МОРФОЛОГИЯ МЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ДРОЖЕЙ
  • 2. СТРОЕНИЕ ОСНОВНЫХ КОМПОНЕНТОВ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ДРОЖЕЙ
    • 2. 1. Глюкан
    • 2. 2. Маннан
    • 2. 3. Хитин
    • 2. 4. Белок
  • 3. ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ ЛИЗИС КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ДРОЖЕЙ
    • 3. 1. Глюканазы
    • 3. 2. Маннаназы
    • 3. 3. Протеиназы
    • 3. 4. Хитиназы
    • 3. 5. Липазы
  • 4. СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ДРОЖЕЙ
  • ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
  • I. КУЛЬТУРЫ МИКРООРГАНИЗМОВ И УСЛОВИЯ ИХ
  • ВЫРАЩИВАНИЯ
  • 2. ПОЛУЧЕНИЕ МЕТОЧНЫХ СТЕНОК ДРОЖЖЕЙ
  • 3. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
    • 3. 1. Хроматография культуральной жидкости Вас. brevis штамм 5/4 на аффинных сорбентах бацитрацин ами-носилохром и фенилборонат-сефароза
    • 3. 2. Хроматографи сериновой протеиназы вас. brevis штамм 5/4 на сефадексе G
  • 4. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ АКТИВНОСТЕЙ
    • 4. 1. Протеолитическая активность
    • 4. 2. Дрожжелитическая активность
    • 4. 3. Гликозидазные активности
  • 5. АНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДУ
    • 5. 1. Определение белка
    • 5. 2. Определение редуцирующих Сахаров
    • 5. 3. Определение общего количества белка в клеточных стенках дрожжей
    • 5. 4. Определение общего количества углеводов в клеточных стенках дрожжей
  • 6. И30ЭЛЕКТР0Ф0К7СИР0ВАНИЕ
  • 7. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ
    • 7. 1. Электрофорез в полиакршгамидном геле без додецилсульфата Na
    • 7. 2. Электрофорез в полиакрилащцном геле в присутствии додецилсульфата Na
  • 8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА ПРОТЕИНАЗЫ ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ Вас. brevis ШТАММ 5/
    • 8. 1. Кислотный гидролиз белка
    • 8. 2. Определение полуцистина и метионина
    • 8. 3. Определение триптофана
    • 8. 4. Аминокислотный анализ белка
  • 9. ОПРВДЕЛЕНИЕ N — КОНЦЕВОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ПРОТЕИНАЗЫ ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ВАС. BREVIS ШТАММ 5/
    • 9. 1. Предварительная денатурация белка фенолом
    • 9. 2. Автоматический анализ аминокислотной последовательности белка
  • 10. ЗОНАЛЬНОЕ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ С. UTILIS в
  • ГРАДИЕНТЕ ПЛОТНОСТИ САХАРОЗЫ
  • 11. ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ С. UTILIS
  • 12. ОКРАШИВАНИЕ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ С. UTILIS ПРИМУЛИНОМ
  • РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
  • 1. ВЫБОР МИКРООРГАНИЗМА — АКТИВНОГО ПРОДУЦЕНТА ДРОЖЖЕЛИТШЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ
  • 2. ПРОТЕОЛИТИЧЕСКАЯ ПРИРОДА ДРОЖЖЕЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ВАС. BREVIS
  • ШТАММ 5/
  • 3. ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА СЕРИНОВОЙ ПРОТЕИНАЗЫ ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ВАС. BREVIS
  • ШТАММ 5/
  • Краткий обзор литературы
  • Полученные результаты
    • 3. 1. Ввделение протеиназы
    • 3. 2. Определение аминокислотного состава секре-тируемой протеиназы Bac. brevis штамм 5/
    • 3. 3. Определение N -концевой последовательности секретируемой протеиназы Bac. brevis штамм 5/
    • 3. 4. Определение молекулярного веса севретируе
  • МОЙ протеиназы Bac. brevis штамм 5/
    • 3. 5. Определение субстратной специфичности секретируемой протеиназы Bac. brevis штамм 5/
    • 3. 6. Ингибиторный анализ
    • 3. 7. Влияние температуры среды инкубации на дрожжелитическуго и протеолитическую активности протеиназы
    • 3. 8. Влияние рН среды инкубации на дрожкелити-чес1сую и протеолитическую активности протеиназы
  • 4. ЛИТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ПРОТЕИНАЗЫ ВАС. BREVIS
  • НА ЖИВЫЕ МЕТКИ ДРОЖЖЕЙ С. UTILIS

Проблема лизиса клеточных стенок дрожжей ферментами микробного происхождения широко освещается в отечественной и зарубежной литературе /20,41', 164,191/. Связано это в первую очередь с тем, что ферментативный гидролиз является наиболее эффективным и экономичным способом разрушения ригидной и устойчивой ко всякого рода воздействиям клеточной стенки дрожжей. Подобная устойчивость является существенным препятствием на пути использования дрожжей в качестве питательных кормовых добавок, при производстве биологически-активных веществ, содержащихся в протоплазме, при проведении биохимических и генно-инженерных исследований и т. д. К настоящему моменту можно выделить два взаимосвязанных аспекта этой проблемы и, соответственно, два направления, по которым развиваются исследования в этой области.

Первое (так сказать «практическое» направление) — поиск наиболее активных продуцентов дрожжелитических ферментов и использование этих ферментов с целью достижения наиболее полного лизиса клеточной стенки дрожжей и получения конечных продуктов (кормовые белково-витаминные лизаты, протопласты и т. д. в зависимости от области применения). Работы, проводимые в этом направлении не связаны с необходимостью иметь вы-сокоочшценные индивидуальные гидролазы, лизирующие клеточную стенку дрожжей по известному механизму.

Второе направление заключается в использовании литичес-ких ферментов для изучения структуры и функций всей клеточной стенки дрожжей и отдельных ее компонентов. Это направление неразрывно связано с первым и своим появлением обязано тому интересу, который проявляют исследователи к строению клеточной стенки дрожжей.

Клеточная стенка дрожжей играет важнейшую роль в функционировании клетки в целом. Основными структурными компонентами клеточной стенки дрожжей являются полисахариды — глюкан, ман-нан, хитин, находящиеся в тесной ассоциации с белком. Ригидная и прочная клеточная стенка составляет наружный скелет клетки, ответственный за поддержание ее формы. Помимо осуществления начальных стадий утилизации питательных веществ, клеточная стенка, как пограничная зона клетки, активно участвует в таких процессах, как транспорт различных соединений из внешней среды в цитоплазму и обратно, иммунологические реакции клеточной поверхности, клеточно-клеточные взаимодействия, осуществление контроля метаболических процессов факторами внешней среды и т. д. Все это делает клеточную стенку дрожжей интереснейшим объектом для исследователей, работающих в области физиологии и биохимии микроорганизмов. В этой связи высокоспецифические литические ферменты, с охарактеризованным механизмом действия (глюканазы, маннаназы, протеиназы, хитиназы) являются весьма удобным инструментом, с помощью которого можно изучать роль отдельных структурных элементов клеточной стенки во всех перечисленных процессах, а также их взаимосвязь и взаиморасположение — т. е. структуру самой клеточной стенки.

Таким образом обнаружение новых активных продуцентов дрожжелитических ферментов, а также выделение и характеристика механизма действия этих ферментов на клеточную стенку дрожжей находится в прямой связи с изучением строения самой клеточной стенки и отдельных ее компонентов.

В настоящее время в указанных направлениях достигнуты определенные успехи. Существуют препараты ферментов, способных в той или иной степени деградировать клеточную стенку дрожжей /19,41,133,191/. Накоплен большой фактический материал о структуре отдельных элементов клеточной стенки дрожжей /151, 164,175,176/, существует ряд гипотез, касающихся строения этой органеллы /41,122,141,183/. Однако многое в этих вопросах еще нуждается в дальнейшем выяснении.

Так, например, до сих пор ощущается недостаток препаратов литических ферментов, позволяющих эффективно и в большом количестве лизировать дрожжи с целью получения кормовой биомассы. В лабораторной практике для получения протопластов и клеточных органелл в большинстве случаев до сих пор используется кишечно-желудочный сок виноградной улитки Helix pomatia В этой связи работы, направленные на обнаружение новых активных продуцентов дрожжелитических ферментов приобретают особую актуальность.

Аналогичная ситуация сложилась и в области исследований, посвященных изучению строения и функций клеточной стенки дрожжей. Знания, которыми мы располагаем в этой области весьма неполны и, зачастую, противоречивы. Сказанное в первую очередь относится к белковому компоненту этой структуры о котором в настоящее время неизвестно практически ничего. Одним из путей получения информации по этому вопросу, как мы уже указывали, является выяснение механизма действия протеиназ на клеточную стенку дрожжей.

В связи с изложенным, целью настоящей работы явилось выделение и характеристика нового, высокоочищенного фермента, способного лизировать клеточные стенки дрожжей рода Candida (важных продуцентов кормового белка), а также изучение его ли-тического действия на живые клетки этих дрожжей. Для достижения указанной цели были поставлены следующие экспериментальные задачи: выбрать активный продуцент дрожжелитического фермента, выделить этот фермент в гомогенном состоянии, охарактеризовать его свойства, а также изучить зависимость устойчивости клеток дрожжей Candida utilis к действию выделенного фермента от стадии роста культуры и фазы почкования дрожжей.

В соответствии с поставленными задачами нами была выбрана бактерия Bacillus brevis штамм 5/4, культуральная жидкость которой обладала способностью активно лизировать клеточные стенки дрожжей (продуцент был выделен на кафедре микробиологии биологического факультета МГУ). Показано, что литичес-кое действие культуральной жидкости обусловливается присутствием в ней сериновой протеиназы типа субтилизина. Методами аффинной хроматографии фермент был выделен и охарактеризован как новая сериновая протеиназа, относящаяся к группе субти-лизинов (® 3.4.21).

На следующем этапе работы было проведено изучение некоторых закономерностей процесса лизиса клеток дрожжей с. utilis выделенной сериновой протеиназой. В частности показано, что в процессе роста культуры дрожжей происходит потеря клетками чувствительности к литическому действию протеиназы. Продемонстрировано, также, что наблюдаемые изменения в лизируемости клеток с. utilis связаны не с фазой клеточного цикла (фазой почкования) дрожжей, а со стадией роста культуры. Анализ количественных изменений в составе клеточной стенки дрожжей c. utiiis на разных стадиях роста культуры показал, что потеря клетками чувствительности к литическому действию изучаемой протеиназы сопровождается увеличением общей массы клеточной стенки и повышением содержания в ней углеводного компонента. По всей видимости отмеченные факты могут свидетельствовать от том, что биогенез клеточной стенки не зависит от фазы клеточного цикла дрожжей, а осуществляется под контролем факторов внешней среды.

На основании полученных результатов, а также сведений, опубликованных в литературе, предложена схема возможных изменений, происходящих в клеточной стенке дрожжей в процессе роста культуры.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

СТРОЕНИЕ И ФУНКЦИИ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ДРОМЕЙ.

I. МОРФОЛОГИЯ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ДРОЖЖЕЙ.

Электронномикроскопическое изучение клеточной стенки дрожжей дало исследователям основные представления о ее морфологии. Согласно современным взглядам клеточная стенка дрожжей состоит из микрокристаллического структурного компонента, представленного в основном фибриллами в-глгокана и аморфного матрикса манно-протеиновой природы /42/- толщина ее колеблется в пределах 1000−2500 А0 /38,165/.

Клеточная стенка дрожжей имеет слоистое строение. В большинстве случаев число слоев равно трем, однако, в зависимости от стадии роста, условий выращивания и способа фиксации, вида и даже штамма дрожжей оно может колебаться в широких пределах /6,216/.

Подобная морфологическая гетерогенность клеточной стенки дрожжей, наблюдаемая при электронномикроскопических исследованиях, в первую очередь, обусловлена ее химической неоднородностью. На электронных микрофотографиях клеточной стенки дрожжей отчетливо видно наличие двух электронноплотных слоев, наружный из которых представлен маннопротеинами, а также менее плотного промежуточного слоя, который содержит глгокан. Внутренний слой, возможно, включает в себя белки-ферменты, его иногда отождествляют с периплазмой /64,190,231/. Непосредственно к этому слою примыкает плазмалемма.

Иногда на поверхности клеток обнаруживается еще один слой рыхлого, неструктурированного материала — полисахаридная капсула /223/.

Интересными структурами,. наблюдающимися в месте образования дочерних клеток являются так называемые почечные рубцы. Они отличаются от остальной поверхности клеточной стенки главным образом высоким содержанием хитина. Этот полимер участвует в построении первичной перегородки (септы) между материнской и дочерней клетками /65,66/.

Таким образом основными компонентами клеточной стенки о. о дрожжей являются глюкан и маннан, находящиеся в тесной ассоциации с белком (структурный маннопротеин). Судя по результатам электронномикроскопических исследований эти компоненты, располагаясь слоями, образуют плотную, ригидную оболочку дрожжевой клетки — ее наружный скелет. В состав клеточной стенки дрожжей входит, также, хитин.

Изучению химического состава и строения глюкана, манно-протеинового комплекса и хитина посвящено много работ. Выполненные с помощью сочетания разнообразных физико-химических, энзиматических и электронномикроскопических методов эти исследования позволили определить не только химическое строение этих компонентов, но и частично изучить ультраструктуру самой клеточной стенки. Без подробного ознакомления с результатами этих исследований невозможно создать полную картину современных представлений о том, как устроена и функционирует эта клеточная органелла. В этой связи следующая глава обзора литературы посвящена вопросам строения основных компонентов клеточной стенки дрожжей.

ВЫВОДЫ.

1. Проведен сравнительный анализ дрожжелитической активности культуральной жидкости ряда микроорганизмов. Показано, что наиболее активным из испытанных продуцентов дрожжелити-ческих ферментов является бактерия Вас. brevis штамм 5/4.

2. Из культуральной жидкости Вас. brevis штамм 5/4 выделена методом аффинной хроматографии на бацитрацин-амино-силохроме и фенилборонат-сефарозе и охарактеризована новая сериновая протеиназа субтилизинового типа, обладающая способностью лизировать клеточные стенки и клетки дрожжей c.utiiis.

3. Показано, что: а) наиболее эффективно лизируются в присутсвии выделенной протеиназы клетки c. utiiis, находящиеся в начале логарифмической стадии ростаб) в процессе роста культуры дрожжей c. utiiis происходит потеря клетками чувствительности к литическому действию сериновой протеиназы Вас. brevis штамм 5/4.

4. Показано, что наблюдаемые изменения в лизируемости клеток c. utiiis связаны не с фазой клеточного цикла (фазой почкования дрожжей), а со стадией роста культуры. По всей видимости отмеченный факт может свидетельствовать о том, что биогенез клеточной стенки прямо не зависит от фазы жизненного цикла клетки и в значительной степени осуществляется под контролем факторов внешней среды.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

I. В настоящей работе методом аффинной хроматографии выделена в гомогенном состоянии и охарактеризована новая се-риновая протеиназа, секретируемая в среду культивирования Вас. brevis штамм 5/4. Отмеченное сходство ввделенного фермента с секретируемой протеиназой другого представителя этого рода — Вас. amyloliquefaciens наглядно демонстрирует факт систематической близости этих видов. Следует отметить, что в настоящее время систематическое положение вида Вас. amyloliquefaciens недостаточно ясно /5/. Учитывая представленные результаты, а также результаты, полученные в последнее время при изучении внутриклеточной сериновой протеиназы Вас. brevis /137 / можно с большой долей вероятности утверждать, что Вас. amyloliquefaciens является близкородственным виду Вас. brevis и различия между ними, вполне вероятно, носят штаммовый характер.

В целом же ферменты, образуемые некоторыми видами бацилл, родственными Вас. subtilis, так называемые субтилизины, образуют целое семейство эволюционно родственных протеиназ /34,157/. Однако, именно эволюционные и, как следствие, таксономические отношения внутри этого семейства в настоящее время далеки от выяснения. Еще в 1952 году работами Смита и сотр. было показано, что субтилизины Карлсберг и bpn* образуете, как предполагалось в то времядвумя штаммами одного вида бацилл — Вас. subtilis, очень значительно — примерно одной третьей частью общего числа аминокислотных остатков — отличаются друг от друга по первичной структуре.

Это интерпретировалось как пример удивительно высокого темпа изменчивости этих ферментов /76/. В дальнейшем, однако, выяснилось, что субтилизин BPN синтезируется Bac. amyloli-quefaciens, а субтилизин Карлсберг — Bac.licheniforrais. Высказывается предположение о существовании двух типов серино-вых протеиназ: типа BPN' и Карлсберг /120/. Вместе с тем недавно было показано, что сериновые протеиназы Bac. thurin-giensis и Bac. cereus вообще относятся к особому подсемейству субтилизинов — тиолзависимым протеиназам /40,214/.

Сказанное, на наш взгляд убедительно показывает, что изучение структуры и характеристика протеиназ, секретируемых представителями рода Bacillus? может оказать существенную помощь в расширении наших представлений о систематическом положении различных видов внутри него.

2. В работе, также, представлены убедительные доказательства того, что выделенный фермент способен лизировать клеточные стенки и клетки дрожжей c.utilis. Сам по себе этот, хотя и очень интересный, факт не является принципиально новым, так как и ранее отдельные исследователи отмечали способность протеиназ принимать участие в процессах деградации клеточной стенки дрожжей /95,183,227/. В нашей работе лишь подтверждается необоснованность мнения о том, что протеиназы не могут играть существенной роли в процессе ферментативной деградации клеточных стенок дрожжей /18,191/.

Полученные в нашей работе данные позволяют, также, утверждать, что белковый компонент имеет важное значение для поддержания целостности структуры клеточной стенки дрожжей C.utilis.

3. В настоящий момент в литературе продолжают появляться публикации, в которых говориться о том, что клеточная стенка дрожжей является структурой очень сложно организованной, что все ее компоненты тесно взаимосвязаны друг с другом как в структурном, так и в функциональном отношениях /209,211,217/. Скорее всего в процессах, идущих с участием клеточной стенки, важную роль играют не только отдельные молекулы полимеров (глюкана, маннана, хитина, белка), но и крупные надмолекулярные комплексы /211,217/. Важная роль в этих комплексах принадлежит белковому компоненту.

Состав и структура клеточной стенки дрожжей изменяется в течение жизненного цикла клеток. Осуществляются подобные изменения благодаря функционированию строго регулируемой системы гидролаз и синтетаз. В процессе морфогенеза эти ферменты деградируют, модифицируют и синтезируют заново компоненты клеточной стенки дрожжей /90,102,103/. Многие из этих ферментов ассоциированы с клеточной стенкой и присутствуют в ней в виде зимогенов. Каким образом клетка регулирует активность ферментов, необходимых ей на разных этапах развития, в настоящий момент не ясно.

В самое последнее время высказано предположение о том, что именно протеиназы, осуществляя ограниченный протеолиз белков клеточной стенки могут служить «включателем» для всей системы ферментов (как гидролаз так и синтетаз), участвующих в метаболизме клеточной стенки дрожжей /90/. Результаты, полученные в нашей работе, в какой то степени подтверждают это предположение. Однако, в настоящий момент совершенно неясно какова природа сигналов в ответ на которые в клетке происходит активация деятельности самих протеиназ. Логично предположить, что здесь возможны 2 пути. Первый — прямой генетический контроль процессов морфогенеза клеточной стенки дрожжейв этом случае изменения в клеточной стенке должны иметь положительную корреляцию с фазами клеточного цикла. Второйпуть метаболического контроля, тесно связанный с изменениями, происходящими во внешней среде, из которой поступают в клетку вышеупомянутые сигналы.

В связи с изложенным наибольший интерес представляют те результаты нашей работы, в которых наличие восприимчивости у клеток дрожжей к логическому действию выделенной нами протеиназы было использовано в качестве теста на изменения, происходящие в клеточной стенке дрожжей в процессе их роста и развития.

Результаты, полученные в этом разделе работы, наглядно свидетельствуют, что индивидуальные ферменты, в том числе и протеиназа, могут быть полезным инструментом в исследованиях, направленных на изучение структуры и функций клеточной стенкидрожжей. Так, например, нами показано, что в процессе роста культуры дрожжей c. utilis их клетки теряют чувствительность к литическому действию протеиназы. Следовательно в структуре их клеточной стенки действительно происходят существенные изменения. Дополнительные опыты по лизису протеиназой клеток дрожжей, находящихся на разных стадиях почкования, показали, что эти изменения связаны не с фазой клеточного цикла дрожжей, а со стадией роста культуры. Полученные результаты позволяют предположить, что биогенез клеточной стенки этих организмов находится не под прямым контролем ядерной ДНК (как фазы клеточного цикла), а в значительной степени опосредованы системами регуляции клеточного метаболизма, находящимися под влиянием факторов внешней среды.

Наглядно высказанную гипотезу можно представить следующим образом (см. схему на рис. 26):

1 — На каждой из трех выбранных нами стадий роста культуры (начало и середина логарифмической стадии и начало стационарной) клетки дрожжей имеют различную по составу, а, возможно, и по структуре клеточную стенку.

2 — На каждой стадии роста культуры материнская клетка дает начало почке с такой же клеточной стенкой как и у родительской особи.

Ранее работами сотрудников лаборатории Кулаева И. О. (Вагабовым с соавт. /8,27,28/) было показано, что синтез такого важнейшего в структурном отношении полимера клеточной стенки как 1,3-глюкана может протекать независимо от интенсивности синтеза белков (в частности фермента глюкан-синте-тазы). Это означает, что увеличение скорости синтеза глюкана, которое наблюдается в определенные моменты клеточного цикла может осуществляться за счет предсуществующей ферментативной системы клетки. Показано, также, что регулятором активности полисахарид-синтетаз служит уровень внутриклеточной АТФ. Эти факты, в совокупности с результатами нашей работы, свидетельствуют о том, что в целом биогенез клеточной стенки дрожжей в значительной степени находится под метаболическим контролем клетки. В свою очередь, система метаболического контроля находится у микроорганизмов под влиянием факторов окружающей среды. В нашей работе мы не исследовали вопроса о приU.

10 8.

РОСТА.

Рисунок 26. Схема возможных изменений, происходящих в клеточной стенке дрожжей в процессе роста культуры. А — кривая роста культуры дрожжейВ — % лизиса клеток дрожжей (2 часа инубации) — Компоненты клеточной стенки дрожжей: 9 — белок- 0 — углеводып — число клеток дрожжей в I мл среды. роде этих факторов (сигналов). Ими может быть как концентрация питательных веществ, так и концентрация клеточнх катаболитов в среде культивирования или даже густота клеток дрожжей (количество столкновений, которое претерпевает клетка в единицу времени). Дальнейшие работы по выяснению механизма метаболического контроля процессов биогенеза клеточной стенки дрожжей должны дать много новой и необходимой информации, которая может быть использована в практической деятельности? в частности, для обоснования технологии направленного получения дрожжей с различной толщиной клеточной стенки.

4. Заслуживает внимания описанный в работе факт активации эндогенной литической системы клеток дрожжей при действии на нее сериновой протеиназы. Сравнивая полученные результаты с известными из литературных источников примерами протеолити-ческой активации грибных (и в частности дрожжевых) синтетаз /68/ и гидролаз /194/ можно сделать вывод, что ограниченный протеолиз, вполне вероятно, является важнейшим механизмом регуляции активности ферментов, участвующих в метаболизме клеточной стенки. Таким образом, в последующих исследованиях следует обратить большее внимание на роль белкового компонента в тех «конформационных изменениях», которые, как предполагают некоторые исследователи, играют основную роль при переходе неактивной формы ферментов клеточной стенки в активную /&8,226/.

Сказанное приобретает особый интерес в связи с имеющимися представлениями о том, что окончательное формирование клеточной стенки происходит, возможно, путем ее самосборки из уже готовых крупных субмолекулярных комплексов /89/. В этом случае логично предположить, что белковый компонент этой структуры действительно может играть очень существенную роль в процессе окончательной ее компоновки. В настоящее время имеется достаточное количество примеров такой самос^борки белковых молекул в различные надмолекулярные клеточные структуры (рибосомы, жгутики бактерий, вирусные частицы) /85,138/.

Продолжение исследований в этом направлении должно предо ставлять значительный интерес и может внести ясность во многие поставленные здесь вопросы об устройстве и функционировании клеточной стенки дрожжей, а также, о роли факторов внешней среды в регуляции синтеза этой органеллы.

Показать весь текст

Список литературы

  1. В.Х., Белянова Л. П., Баратова Л. А., Степанов В. М. Субтилизин 72 сериновая протеиназа Bac.subtilis штамм 72, близкая субтилизину Карлсберг. Биохимия, 1979, т.44, №, с. 886−891.
  2. A.M., Андреева И. А., Черменский Д. И., Петрова Н. Т. Поиск актиномицетов продуцентов ингибиторов протеолитических ферментов. Микробиология, 1977, т. 46, }?2, с. 232−238.
  3. A.M., Родионова Н. А., Тиунова Н.А.
  4. В -глюканазы микроорганизмов. Прикладная биохимия и микробиология. 1982, т.18, № 6, с. 806−815.
  5. Бек-ер М. Е. Продукты микробного синтеза для животноводства. Вестник АН СССР, 1968, № 5,с. I09-II4.
  6. Берги. Краткий определитель бактерий. М.: Мир, 1980 с. 267.
  7. В.И. Мембранные структуры микроорганизмов. М.: Наука, 1973, с. 14−17.
  8. В.И., Пивоварова Н. И., Молотова В. П. В кн. Разработка и стандартизация бактериальных питательных сред. М.: Наука, I960, с. I6I-I78.
  9. В.М., Перес X., Циоменко А. Б., Кулаев И. С. Влияние циклогексимида на биосинтез глюкана в процессе роста дрожжей Saccharomyces carlsbergensis. Микробиология, 1981, т. 50, № 5, с. 823−828.
  10. С.П., Коновалов С. А., Гришина О. Е., Павлова Е.А.,
  11. Е.А., Ильченко В. И., Лещенко В. М., Шеклаков Н. Д. Ферментативный лизис микроскопических дрожжеподобных грибов препаратом из Actinomyces griseinus. Прикладная биохимия и микробиология, 1981, т.17, J&5, с. 669−675.
  12. У.У., Маркина В. Л. К вопросу о ферментативном лизисе дрожжевой клетки. Вести АНБССР сер. биол. н., 1982, М, с.55−59.
  13. Г. Гель-хроматография. М.:Мир, 1970, с. 180−189.
  14. Н.П., Витовская Г. А., Калошин В. Г., Колотинская Т. М. Структурные полисахариды некоторых видов Rhodotorula и Cryptococcus . Биохимия, 1974, т. 39, № 4, с. 787−792.
  15. И.С., Рубан Е. Л. Липазная активность протопластов дрожжей Candida lipolytic, а . Микробиология, 1972, т.41, № 6, с. 973−975.
  16. Е.Д. Стандартный метод определения протеолити-ческой активности для комплексных препаратов протеаз. Прикладная биохимия и микробиология, 1972, т.7, JS2, с. 225−232.
  17. Е.Д., Виха Г. В., Лапук В. А. Роль углеводных групп в иммуноглобулинах МЫ- ферментативное отделение углеводных групп от иммуноглобулинов. Биоорганическая химия, 1975, т.1, № 9, с. 1379−1384.
  18. В.Г. Детерминанты антигенной специфичности клеточных стенок дрожжевых организмов. Автореф.дис. на соискание уч.ст.канд.биол.наук. Л.:ЛГУ, 1974, 19 с.
  19. О.В., Ковалева Н. С., Юркевич В. В. Роль утлевод-ного компонента дрожжевой внеклеточной инвертазы в регуляции биосинтеза этого фермента. Докл. АН СССР, 1981, т. 258, М, с. I009-I0I3.
  20. С.А., Воротило С. П., Зюкова Л. А. Биосинтез глюканаз и маннаназ, входящих в комплекс литических ферментов термо-талерантным штаммом Actinomyces griseinus. Микробиология, 1974, т.43, №, с. 261−266.
  21. С.А., Воротило С. П., Соколова Л. Б. Ферментативный метод разрушения клеточных стенок дрожжей. Прикладная биохимия и микробиология, 1975, т. II, JM, с. 620−622.
  22. Л.Г., Головачева Р. С., Головина И. Г., Егорова Л. А., Позмогова И. Н., Хохлова Ю. М., Цаллина И. А., Имшенецкий А. А. (ред.). Современные представления о термофилии микроорганизмов. М.: Наука, 1973, с. 220−255.
  23. А.А. Сорбенты и хроматографические носители. М.: Химия, 1972, с. I17−153.
  24. Л.А., Якушева Л. Д., Степанов В. М., Синтез пептидных субстратов субтилизина и их аналогов. Биоорганическая химия, 1977, т. 3, JE2, с. 273−279.
  25. О.А., Зюкова Л. Н., Федорович P.M. Определение общего количества углеводов в сухих дрожжах. Прикладная биохимия и микробиология, 1975, т. II, Ж, с. 127−130.
  26. Н.М., Уголев A.M. Локализация инвертазы в дрожжевой клетке и периферическая пищеварительная полость. Докл. АН СССР, 1970, т. 195, Ш, с. 503−506.
  27. В.В. Протеолитические ферменты. М.: Наука, 1971, с. 247−254.
  28. К., Бешков М. Ферментативное расщепление клеточной стенки дрожжей. Научн.тр.Высш.ин-та вкусов. пром-ти. Пловдив, 1979, т. 26, Ш, с. 73−81.
  29. X. Изучение регуляции биосинтеза структурных компонентов дрожжевой клеточной оболочки. Автореф.дисс. на соискание уч.ст.канд.биол.наук, Пушино, ИБФМ АНСССРД983, 16с.
  30. X. Вагабов В. М., Заикин Е. В., Кулаев И. С. О влиянии циклогексимида на биосинтез глюкана и содержание АТФ и ГТФ в процессе почкования дрожжей s . carlsbergensis. Докл. АН СССР, 1982, т.267, Ж, с. 225−227.
  31. Г. М., Калюжный М. Я. Полисахариды дрожжеподобных организмов рода Candida, определяющие липофильные липофобные свойства. Тр. ВНИИ гидролиза растит, материалов. 1971, т.21, с. I10−217.
  32. В.М., Руденская Г. Н., Нестерова Н. Г., Куприянова Т. И., Хохлова Ю. М., Усайте И. А., Логинова Л. Г., Титло-хина Е.А. Сериновая протеиназа Thermoactinomyces vulgaris штамм ИНМИ-4а. Биохимия, 1980, т.45, МО, с. I87I-I879.
  33. А.Я. Электрофоретические методы в изучении про-теолитических ферментов. Дисс.канд.хим.наук, Москва, 1973.
  34. А.Я., Абрамов З. Т., Левин Е. Д., Степанов В. М. Множественность субтилизинов типа Novo Биоорганическая химия, 1975, т.1, МО, с. I44I-I448.
  35. А.Я., Степанов В. М. Внутриклеточные сериновыепротеиназы спорообразующих бацилл. Биохимия, 1981, т.46, №, с. 1347−1363.
  36. Н.А., Коб зева Н. Я. Эндо-1,Зб -глюканаза Actinomyces cellulosae. Биохимия, 1981, т.46, Ш, с. 11 751 182.
  37. Н.А., Пириева Д. А., Фениксова Р. В., Кузнецова В. Д. Образование хитиназы актиномицетами при глубинном культивировании. Микробиология, 1976, т.45, с. 280−283.
  38. B.C., Ильченко А. В., Дмитриев А. С. Сравнительное изучение особенностей тонкого строения дрожжей Torulop-sis candida } выращенных на глюкозе и гексадекане. Микробиология, 1975, т.44, № 3, с. 481−484.
  39. Фрей-Висслинг А. Сравнительная органеллография цитоплазмы. М.: Мир. 1976, с. 57−80.
  40. В.В. Полисахариды клеточных стенок диморфных дрожжей. Автореф.дисс. на соискание уч.ст.канд.биол. наук, Л., ЛГУ, 1974, 16 с.
  41. Г. Г., Епремян А. С., Гайда А. В., Остерман А. А., Ходова О. М., Степанов В. М. Тиолзависимые сериновые протеиназы . П Внеклеточная сериновая протеиназа Bacillus cereus. Биоорганическая химия, 1982, т. 8, ЖГ2, с. 1649−1658.
  42. .Х. Ферментативный лизис дрожжей . Шнек: Наука и техника, 1977, 189 с.
  43. Е. Архитектоника клеточных стенок дрожжей Изв. АН СССР, сер. биолГ’Ш, с. 410−421.
  44. Е.В., Григорьева С. П., Полумиенко А. Л. Получение клеточных лизатов дрожжей с целью выделениякрупных фрагментов митохондриальной ДНК. Прикладная биохимия и микробиология, 1883, т. 19, J&2, с. 240−243.
  45. А.Э., Тиунова Н. А. Выделение инвертазы из пивных дрожжей с помощью ферментных препаратов из Actinomyces celluiosae . Прикладная биохимия и микробиология, 1974, т. 10, М, с. 548−551.
  46. В.В. Основные черты механизма регуляции синтеза секретируемых ферментов их уровнем в среде.
  47. В сб.: Регуляция биохимических процессов у микроорганиз мов. Пущино, 1979, с. 43−56.
  48. Abd-El-Al Т.н., Fhaff H.J. Exo-B-glucanases in yeast.
  49. . J., 1968, v. 109, No. 3, p. 347−360. 47″ Al-Aidroos K., Bussey H. Chromosomal mutants of Saccharo-myces cerevisiae affecting the cell wall binding site for killer factor. can. J. Microbiol., 1978, v. 24, № 3, p. 228−237.
  50. Amri M.A., Bonaly B., Duteurtre В., Moll M. Yeast floccula-tion: influence of nutritional factors on cell wall composition. J. Gen. Microbiol., 1982, v. 128, N2 9, p. 20 012 009.
  51. Arnold W.N. Enzymes. In: Yeast cell envelopes: Biochemistry, biophysica and ultrastructure. Arnold N.N. (ed.), 1982, v. 2, p. 1−46.
  52. Bacon J.S.D., Gordon A.H., Jones D., Taylor J.F., Webley D.M. The separation of B-glucanases produced by Cytophaga johnsonii and their role in the lysis of yeast cell walls.- Biochem. J., 1970, v. 120, Ш 1, p. 67−78.
  53. Bacon J.S.D., Gordon A.H., Webly D.M. Fractionation of the в-giucanases in a Cytophaga johnsonii culture filtrate lys-ing yeast cell walls. Biochem. J., 1970, v. 117, № 2,p. 42−43.
  54. Ballou C.E. Structure and biosynthesis of the mannan component of the yeast cell envelope. Adv. Microbiol. Physiol., 1976, v. 14, p. 93−153.
  55. Ballou C.E., Lipke P.N., Rashke W.C. Structure and immuno-chemistry of the cell wall mannans from S. chevalieri, S. italicus, S. diastaticus and S.carlsbergensis. J. Bacterid., 1974, v. 117, Ni 2, p. 461−467.
  56. Ballou C.E., Rashke W.C. Polymorphism of the somatic antigen of yeast. Science, 1974, v. 134, № 4133, p. 127−134.
  57. Baudys M., Kostka v., Gruner K., Hausdorf G., Kohne W.E. Amino acid sequence of the small cyanogen bromide peptide of thermitase from Thermoactinomyces vulgaris. Relation to the subtilisins. Int. J. Pept. Prot. Res., 1982, v. 19, m 1, p. 32−39.
  58. Bauer H., Bush D.A., Horisberger M. Use of the exo ?-(1−3) glucanase from Basidiomycete QM806 in studies on yeast. -Experientia, 1972, v. 28, № 1, p. 11−13.
  59. Bishop C.T., Blank F., Gardner P.E. The cell wall polysaccharides of Candida albicans: glucan, mannan, chitin. Can.
  60. J. Chem., 1960, v. 38, № 6, p. 869−88I.
  61. Brown J.P. Susceptibility of the cell walls of some yeasts to lysis by enzymes of Helix pomatia. Can. J. Microbiol., 1971, v. 17, Ni 2, p. 205−208.
  62. Bush D, A., Horisberger M., Horman I., Wiirsch P. The wall structure of Schia0saccharomyces pombe. J. Gen. Microbiol., 1974, v. 81, № 1, p. 199−206.
  63. Bussey H., saville D., Hutchins K., Palfree R.G.E. Binding of yeast killer toxin to a cell wall receptor on sensitive Saccharomyces cerevisiae. J. Bacterid., 1979, v. 140, KS 3, p. 888−892.
  64. Cabib E., Bowers B. Chitin and yeast budding. Localization of chitin in yeast bud scars. J. Biol. Chem., 1971, v. 246, № 1, p. 152−159.
  65. Calleja G.B., Johnson B.F. Flocculation ina fission yeast an initial step in the conjugation process. Can. J. Microbiol., 1971, v. 17, N2 9, p. 1175−1177.
  66. Chang P.L., Trevithick J.R. Release of wall-bound invertase and trehalase in Neurospora crassa by hydrolytic enzymes. -J. Gen. Microbiol., 1972, v. 70, Kg 1, p. 13−22.
  67. Chattaway F.W., Holmes M.R., Barlow A.J.E. cell wall composition of the Mycelial and biastospore forms of Candida albicans. J. Gen. Microbiol., 1968, v. 51, № 3, p. 367−376.
  68. F.W., Shenolikar S., 0*Belly J. Changes in the cell surface of the dimorphic forms of Candida albicans by treatment with hydrolytic enzymes, J. Gen. Microbiol., 1976, v. 95, № 2, p. 339347.
  69. Correa J.V., Elango N., Polacheck I., Cabib E. Endochitinase, a mannan-associated enzyme from Saccharomyces cerevisiae. -J. Biol. Chem., 1982, v. 257, N2 3, p. 1392−1397.
  70. Dayhoff M.o. Atlas of protein sequence and structure, v. 4. Natl. Biomed. Res. Foundation, Silver spring, USA, 1969.
  71. Dmitriev A., Tsiomenko A., Kulaev I., Fikhte B. A cyto-bio-chemical study of the «canal» formation in the yeast cell wall. European J. Appl. Microbiol. Biotechnol., 198О, v. 9, Ш 3, P. 211−216.
  72. Doi K., Doi A., Fukui T. Joint Action of Two Glucanases produced by Arthrobacter in spheroplast formation from Baker’s Yeast. J. Biochem., 1971, v. 70, HS 4, p. 711−714.
  73. Doi K., Doi A., Ozaki Т., Eukui T. Lytic B-1,3-glucanase from Arthrobacter: pattern of action. Agr. Biol. Chem., 1973, v. 37, № 7″ P. I629-I633.
  74. Duell E.A., Inoue S., Utter M.F., Eddy A.A., Williamson D.H. A method of isolating protopasts from yeast. Nature, 1957, v. 179″ № 4572, p. 1252−1253.
  75. Duffus J.H., Levi C., Manners D. Yeast cell-wall glucans. -Adv. Microb. Physiol., 1982, v. 23, p. 151−181.
  76. Eddy A.A. The structure of the yeast cell wall. II. Degrada-tive studies with enzymes. Proc. Roy. Soc. London Ser. B, 1958, v. 149, P. 425−440.
  77. Eddy A.A., Rudin A.D. Part of the yeast surface apparently involved in flocculation. J. Inst. Brew., 1958, v. 64,1. N3 1, p. 19−21.
  78. Eiserling F.A., Dickson R.C. Assembly of viruses. Ann. Rev. Biochem., 1972, v. 41, p. 467−502.
  79. Erlanger B.F., Kokowsky N., Cohen W. The preparation and properties of two new chromogenic substrates of trypsin. -Arch. Biochem. Biophys., 1961, v. 95, NE 2, p. 271−278.
  80. Falcone G., Nickerson w.J. cell-wall mamman-protein of Baker^ yeast. Science, 1956, v. 124, № 3215, p. 272−273.
  81. Farkas V. Secretion of cell-wall glycoproteins by yeast protoplasts. Biochem.J., 1970, v.118, p.755−759*- Biochim. Biophys. Acta, 1973, v. 321, p. 246−255.
  82. Farkas V. Biosynthesis of cell walls of fungi. Microbiol. Rev., 1979, v. 43, № 2, p. 117−144.
  83. Fleet G.H. The occurrence and function of endogenous wall-degrading enzymes in yeast. In: FEMS Symp. Abstr. Cell Wall synthesis and autolysis. Madrid, Spain, 1984, p. 117.
  84. Fleet G.H., Phaff H.J. Lysis of yeast cell walls: glucanases from Bacillus circulans WL-12. J. Bacterid., 1974, v. 119, № 1, p. 207−219.
  85. Fleet G.H., Manners D.J. Isolation and composition of an alkali-soluble glucan from the cell walls of s.cerevisiae. J. Gen. Microbiol., 1976, v. 94, Ш 1, p. 180−192.
  86. Fleet G.H., Phaff H.J. Lysis of. yeast cell walls: glucanases from Bacillus circuians WL-12. J. Bacterid., 1974, v. 119, NS 1, p. 207−219.
  87. Fleet G.H., Phaff H.J. Fungae glucans structure and metabolism. — In: Encyclopedia of plant physiology. Berlin, Springer-verlag, 1981, v. 13 В, p. 416−440.
  88. Funatsu M., Oh H., Aizono Y., Shimodo T. Protease of Arthro-bacter luteus, properties and function on lysis of viable yeast cells. Agr. Biol. Chem., 1978, v. 42, If: 10, p. 19 751 977.
  89. Furuya A., Ikeda Y. Studies on the cell wall lytic enzymes produced ny S. treptomy ces species. II. The lytic enzymes of Streptomyces 62 strain. J. Gen. Appl. Microbiol., 1960, v. 6, Ki 1, p. 40−60.
  90. Gander J.E. Fungae cell wall glycoproteins and peptide-polysaccharides. Ann. Kev. Microbiol., 1974, v. 28, p. 103 119.
  91. Hackman R.H., Goldberg M. New substrates for use with chiti-nase. Anal. Biochem., 1964, v. 8, m 3″ p. 397−401.
  92. Ю1. Hamada Т., Nakajima Т., Matsuda K. Comparison of the mannanstructure from the cell-wall mutant Candida sp. M-7002, and its wild type. II. Immunochemical properties of the mannans. Eur. J. Biochem., 1981, v. 119, № 2, p. 373−379.
  93. Hien n.h., Fleet g.h. separation and characterization of six (1−3)B-glucanases from Saccharomyces cerevisiae. -J. Bacterid., 198З, v. 156, ш 3, p. 1204−1213.
  94. Hien N.H., Fleet G.H. Variation of С1−3)B-glucanases in Saccharomyces cerevisiae during vegetative growth, conjugation and sporulation. J. Bacterid., 1983, v. 156, N? 3, p. 1214−1220.
  95. Hoibrook J.в., Leaver A.G. A procedure to increase the sensitivity of straining by Coomassie Brilliant Blue G-250-perchloric acid solution. Anal. Biochem., 1976″ v. 75, N?2, p. 634−636.
  96. Horikoshi K., Koffler H., Arima K. Purification and properties of В 1,3-glucanase from the «Lytic enzyme» of Bacillus circulans. Biochim. Biophys. Acta, 1963, v. 73, fS 2, p. 267−275.
  97. Horisberger м., Rosset J. Localization of -gaiactomannan on the. surface of Schizo saccharomy ces pombe cells by scan-ing electron microscopy. Arch. Microbiol., 1977″ v. 112, IS 2, p. 123−126.
  98. Huotari F.I., Nelson Т.Е., Smith F., Kirkwood S. Purification of an Exo-B-D-(1−3)-glucanase from Basidiomycete species QM 806. J. Biol. Chem., 1968, v. 243, К 5, p. 952 956.
  99. Hutchins к., Bussey H. cell wall receptor for yeast killer toxinj involvement of (1−6)J3-D-glucan. J. Bacterid., 1983, v. 154, № 1, p. 161−169.
  100. Iizuka M., Torii Y., Fujisawa N., Sakanaka S., Yamamoto T. Enzymatic release of invertase from cell ghosts of Candida utilis. Agr. Biol. Chem., 1983, v. 47, Ш 11, p. 24 672 473.
  101. Jamieson A.D., Pruitt K.M., Caldwell R.C. An improved amylase assay. J. Dent. Res., 1969, v. 48, p. 483−486.
  102. Jaspers H.T.A., Christiansen K., van Steveninck J. An improved method for the preparation of yeast enzymes in situ. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1975, v. 65, Ki 4, p. 14 341 439.
  103. Kappeii о., Fiechter A. The mode of interaction between the substrate and cell surface of the hydrocarbon utilizing yeast Candida tropicalis. Biotechnoi. Bioeng., 1976, v. 18, № 7, p. 967−974.
  104. Kappeii 0., Fiechter A. Component from the cell surfaceof the hydrocarbon-utilizing yeast Candida tropicalis with possible relation to hydrocarbon transport. J. Bacterid., 1977, v. 131, Ш 3, P. 917−921.
  105. Kappeii 0., Miiller M., Fiechter A. Chemical and structural alterations at the cell surface of Candida tropicalis, induced by hydrocarbon substrate. J. Bacterid., 1978, v. 133, m 2, p. 952−95S.
  106. Keay L., Moser P.w. Differentiation of alkaline proteases from Bacillus species. Biochem. Biophys. Ees. Commun., 1969, v. 34, Ni 5, p. 600−604.
  107. Kessler G., Nickerson W.J. Glucomannan-protein complexes from cell walls of yeasts. J. Biol. chem., 1959, v. 234, № 9″ p. 2281−2285.
  108. King J., Laemmli U.K. Polypeptides of the tail fibres of Bacteriophage T4. J. Mol. Biol., 1971, v. 62, N1 3, p. 465 477.
  109. Kitamura K. A high yeast cell wall lytic enzyme producingmutant of Arthrobacter luteus. J. Ferment. Technol., 1982, v. 60, Ш 3, P. 253−256.
  110. Kitamura K. Preparation of yeast cell wall lytic enzyme from Arthrobacter luteus by its adsorption on B-glucan. J. Ferment. Technol.,'1982, v. 60, № 3, p. 257−260.
  111. Kitamura K. Ke-examination of Zymolyase purification. -Agr. Biol. Chem., 1982, v. 46, № 4, p. 963−969*
  112. Kitamura K. Protease that participates in yeast cell wall lysis during zymolyase digestion. Agr. Biol. Chem., 1982, v. 46, H§ 8, p. 2093−2099*
  113. Kitamura К., Kaneko Т., Yamamoto G. Lysis of viable yeast cells by enzyme of Arthrobacter luteus. Arch. Biochem. Biophys., 1971, v. 145, № 1, p. 402−404.
  114. Kitamura K., Kaneko Т., Yamamoto Y. Lysis of viable yeast cells by enzymes of Arthrobacter luteus. I. Isolation of lytic strain and studies on its lytic actiyity. J. Gen. Appl. Microbiol., 1972, v. 18, N2 1, p. 57−71*
  115. Kitamura K., Kaneko т., Yamamoto J. Lysis of viable yeast cells by enzyme of Arthrobacter luteus. II. Purification and properties of an enzyme zymolyase, which lyses viable yeast cells. J. Gen. Appl. Microbiol., 1974, v. 20, Ш 6, p. 323−344.
  116. Kitamura K., Yamamoto Y. Purification and properties of an enzyme, zymolyase, which lyses viable yeast cells. -Arch. Biochem. Biophys., 1972, v. 153, 'ffi 1, p. 403−406.
  117. Kitamura K., Yamamoto Y. Lysis of yeast cells showing low susceptibility of zymolyase. Agr. Biol. Chem., 1981, v. 45, Ш 8, p. 1761−1766.
  118. Kobayashi K., Miwa Т., Yamamoto S., Nagasaki S. Propertiesand mode of action ?-1,3-glueanase from Rhizoctonia sp. J.Ferment. Technol., 1981, v.59 N 1, p. 21−26.
  119. Kobayashi Y., TanakaH., Ogasawara N. Purification and properties of F-la, a 13−1,3-glucanase which is highly lytic toward the cell walls of Pilicularia oryzae Pg. -Agr.Biol.Chem., 197^. v. 38, N 5, p.973−978.
  120. Koch J., Rademacher K.H. Chemical and enzymatic changes in the cell walls of Candida albicans and Saccharomyces cerevisiae by scaning electron microscopy. Can"J. Microbiol., 1980, v.26, N 8, p. 965−970.
  121. Kurotsu Т., Marahiel M.A., Miiller K., Kleinkauf H. Characterization of an intracellular serine protease from sporu-lating cells of Вас.brevisrJ.Bacteriol., 1982, v.151, N 3 p. 1466−1472.
  122. Kushner D.J. Self-assembly of biological structures. -Bacterid. Rev., 1969, v. 33, N 2, p. 302−345.
  123. Kusunose M., Nakanishi Т., Minamiura Yamamoto Т., Yeast cell wall bound proteolytic enzymes. Agr.Biol. Chem., 1980, v. 44, N 12, p. 2479−2484.
  124. Lampen J.O. Release of penicillinase by Bacillus Licheniformis. J.Gen.Microbiol., 1967, v.48,N2,p.261−268.t
  125. Lampen J.O.External enzyme of yeast: their nature and fornuation. Ant. Van Leeuwenhoek, 1968, v.34,N1,p.1−18.
  126. Lehle L., Cohen R.E., Ballou С.E.Carbohydrate structure ofyeast invertase demonstration of a form with only core oligosaccharides and a form with completed polysaccharide chains.-J.Biol.Chem., l979, v.254,N23,p.12 209−122l8.
  127. Lellan Mc W.L. Phosphomannanase from Вас.circulans. In: Methods in enzymology, N.Y.-London, v.28:1972,p.921−925.
  128. Lellan Mc W.L., Daniel Mc L.E., Lampen J.0. Purification of phosphomannanase and its action on the yeast cell wall.- J. Bacterid., 1970, v. 102, m 1, p. 261−270.
  129. Lellan Mc V.L., Lampen J.O. Phosphomannanase (PR-factor), an enzyme required for the formation of yeast protoplasts.- J. Bacterid., 1968, v. 95, ш 3, p. 967−974.
  130. Li Y.T. Presence of L-D-mannosidic linkage in glycoproteins liberation of D-mannose from jack bean meal. J. Biol. Chem., 1966, v. 241, N2 4, p. 1010−1017.
  131. Lowry O.N., Eosenbrough N. J., Parr A.H., Randall E.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. Biol. Chem., 1951, v. 193, № 1, p. 265−267.
  132. Lyons T.P., Hough J.S. Flocculation of brewer’s yeast. -J. Inst. Brew., 1970, v. 76, liE 6, p. 564−571.
  133. Manners D.J., Masson A.J., Patterson J.C. The structure of, а В (1 — 3)-D glucan from yeast cell walls. Biochem. J., 1973, V. 135, Ni 1, p. 19−30.
  134. Manners D.J., Masson A.J., Patterson J.c. The heterogeneity of glucan preparations from the walls of various yeasts. -J. Gen. Microbiol., 1974, v. 80, № 2, p. 411−417.
  135. Markland F.S., Brown D.M., Smith E.L. Subtilisin Amylosacchariticus. I. Physicоchemical characterization. J.
  136. Biol. Chem., 1972, v. 247, № 17, p. 5596−5601.
  137. Markland F.S., Smith E.L., Subtilisin BPN. VII. Isolation of cyanogen bromide peptides and the complete amino acid sequence. J. Biol. Chem., 1967, v. 242, Ш 22, p. 51 985 211.
  138. Mendoza C.G., villanuera J.K. Production of yeast protoplasts by an enzyme preparation of Streptomyces sp. Nature, 1962, v. 195, № 4848, p. 1326−1327.
  139. Mendoza G.C., Villanueva J.K. Preparation of cell walls of yeast. canad. J. Microbiol., 1963, v. 9, N§ 1, p. 141−142.
  140. Minke R., Blackwell J. The Structure of -chitin. J. Mol. Biol., 1978, v. 120, Ni 2, p. 167−182.
  141. Mizusawa K., Yoshida F. Thermophilic Streptomyces alkaline proteinase. I. Isolation, crystallisation and physicochemical properties. J. Biol. Chem., 1972, v. 247, Ni 21, p. 6978−6984.
  142. Molano J., Bowers В., Cabib E. Distribution of chitin in the yeast cell wall. An ultrastructural and chemical study. J. of cell Biol., 1980, V. 85, № 2, p. 199−212.
  143. Monreal J., Uruburu F., Villanueva J.R. Lytic action of ?(1 3)-glucanase on yeast cells. — J. Bacterid., 1967, v. 94, N2 1, p. 241−244.
  144. Moore S. On the determination of cystine as cystein acid. J. Biol. Chem., 1963, v. 238, Ni 2, p. 235−237.
  145. Moore S. Chemistry and biology of peptide1. Michigan: Ann. Arbar. Published, 1972, p. 629−665.
  146. Moulki H., Bonaly R. Etude des parois de levures du genre Rhodotorula. IV. Variation de la Teneur en chitine. Bio-chim. Biophys. Acta, 1974, v. 338, Ni 1, p. 120−134.
  147. Munnelly K.P., Kapoor A. Characterization of an alkaline subtilopeptidase type Pfizer. Int. J. Peptide Protein Res., 1976, v. 8, Ni 2, p. 141−153.
  148. Muzzarelli R.A. Chitin, N.Y.: Pergamon Press, 1977, p. 1−309.
  149. Nagasaki s., Fukuyama J., Yamamoto s., Kabayashi R. Enzymic and structural properties of crystalline yeast cell lytic enzyme from a species of Fungi Imperfecti. iigr. Biol. Chem., 1974, v. 38, Ni 2, p. 39−357.
  150. Nagasaki S., Neumann N.P., Arnow P., Schable L.D., Lampen J.O. An enzyme which degrades the walls of living yeast. -Biochem. Biophys. Res. Commun., 1966, v. 25, Ni 2, p. 158 164.
  151. Nakajima Т., Ballou C.E. Characterization of the carbohydrate fragments obtained from Saccharomyces cerevisiae man-nan by alkaline degradation. J. Biol. Chem., 1974, v. 249, N2 23, p. 7679−7684.
  152. Nakadima Т., Ballou C.E. Structure of the linkage region between the polysaccharide and protein parts of saccharomy-ces cerevisiae mannan. J. Biol. Chem., 1974, v. 249, hi 23, p. 7685−7694.
  153. Nakajima Т., Ballou C.E. Microheterogenetic of the inner core region of yeast manno-protein. Biochem. Biophys. Res. Cominuns., 1975, v. 66, Ш 2, p. 870−879.
  154. Nakajima Т., Ballou C.E. Yeast mannoprotein biosynthesis: solubilisation and selective assay of four mannosyltransferases. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1975, v. 72,1. NS 10, p. 3912−3916.
  155. Nakamura K., Massushima A., Horikoshi K. The state of amino acid residues in alkaline protease produced by Bacillus Ш 221. Agr. Biol. Chem., 1976, v. 37, m 6, p. 1261−1267.
  156. Nelson Т.Е. The hydrolytic mechanism of exo-?-(1−3)-D-glu-canase. J. Biol. Chem., 1970, v. 245, K? 4, p. 869−872.
  157. Nickerson W.J. Symposium on biochemical bases of morphogenesis in fungi. IV. Molecular bases of form in yeasts. -Bacterid. Revs., 1963, v. 27, Ш 3, p. 305−324.
  158. Nishihara H., Toraya Т., Fukui S. Effect of chemical modification of cell surface components of a Brewer’s yeast on the floc-forming ability. Arch. Microbiol., 1977, v. 115, m 1, p. 19−23.
  159. Novaes M., Gascon S., Ochoa A.G., Villanueva J.R. Products of strezyme M. action on Candida utilis cell wall. Biochim. Biophys. Acta, 1966, v. 115, N? 2, p. 486−488.
  160. Nurminen Т., Oura E., Suomalainen H. The enzymic composition of the isolated cell wall and plasma membrane of baker’s yeast. Biochem. J., 1970, v. 116, № 1, p. 61−69.
  161. Obata T., Iwata M., Namba Y. Proteolic enzyme from oersko-via sp. CK lysing viable yeast cells. Agr. Biol. Chem., 1977, v. 41, № 12, p. 2387−2394.
  162. H. (En cell wall lytic activity produced by thermophilic actinomyces. III. Some properties of the components of the lytic enzyme produced by Micropolyspora sp. J. Ferment. Technol., 1972, v. 50, Ni 9, p. 580−591.
  163. Ottolenghi P. The uptake of bovine serum-albumin by a strain of saccharomyces and its physico-pathological consequences. c.R. Trav. Lab. carlsberg, 1976, v. 36, p. 95 111.
  164. Parrish F.W., perlin A.S., Reese E.T. selective enzymoly-sis of poly-B-D-glucans, and the structure of the polymers. can. J. Chem., 196О, v. 38, № 11, p. 2094−2104.
  165. Pastor F.J.I., Herrero E., Sentandreu R. Metabolism of Saccharomyces cerevisiae envelope mannoproteins. Arch. Microbiol., 1982, v. 132, № 2, p. 144−148.
  166. Peberdy J.F., Asaac s. An improve procedure for protoplast isolation from Aspergillus nidulans. Microbiol. Letters, 1976, v. 3, NS 1, p. 7−9.
  167. Phaff H.J. cell wall of yea%s. Ann. Rev. Microbiol., 1963, v. 17, p. 15−30.
  168. Phaff H.J. Structure and biosynthesis of the yeast cell envelope. In: The yeast-physiology and biochemistry. N.Y.-London, Acad. Press, v. 2: 1971, p. 135−210.
  169. Phaff H.J. Enzymatic yeast cell wall degradation. Adv. Chem. Ser. B, 1977, V. 160, p. 244−282.
  170. Pierce M., Ballou C.E. Cell-cell recognition in yeast characterization of the sexual agglutination factors from Saccharomyces kluyveri. J, Biol. Chem., 1983, v. 258,6, p. 3576−3582.
  171. Pozsgay M., Gaspar K., Elodi P. A method for designing peptide substrates for proteases. Tripeptidyl-p-nitroani-lide substrates for subtilisin Carlsberg. Europ. J. Bio-chem., 1979, v. 95, Ш 1, p. 115−119.
  172. Reichelt B.J., Fleet G.H. Isolation, properties, function, and regulation of endo-(l 3) B-glucanases in Sch. pombe. J. Bacterioi., 1981, v. 147, Ш 3, p. 1085−1094.
  173. Reuvers т., Tacoronte E., Garcia-Mendoza с., Noraes-Lodieu
  174. M. Chemical composition of cell walls of Saccharomyces fragi-lis. Can. J. Microbiol. 1969, v. 15, № 9, p. 989−993.
  175. Roelofsen P.A. Yeast mannan, a cell wall constituent of baker’s yeast. Biochim. Biophys. Acta, 1953, v. 10, Ш 3, p. 477−478.
  176. Rombouts P.M., Fleet G.H., Manners D.J., Phaff H.J. Lysis of yeast cell-walls non-lytic and lytic (1 — 6) B-D-gluca-nases from Bacillus circulans WL-12. Carbohydr. Research, 1978, V. 64, p. 237−249.
  177. Rombouts F.M., Phaff H.J. Lysis of yeast cell walls: lytic В 1−6 glucanases from Bacillus circulans WL-12. Eur. J. Biochem., 1976, v. 63, № 1, p. 109−120.
  178. Rombouts F.M., Phaff H.J. Lysis of yeast cell walls: lytic JB (1 — 3)-glucanases from Bacillus circulans WL-12. Eur. J. Biochem., 1976, v. 63, к? 1, p. 121−130.
  179. Rosenfeld L., Ballou C.E. An approach to the sequencing of yeast mannan. Biochem. Biopbys. Res. Commun., 1975, v. 63, m 3, p. 571−579.
  180. Rost к., Venner H. Enzymatische zellwandverdaung bei hefen durch schneckenenzym. Arch. Microbiol., 19&5, v. 51, Hi 2, p. 122−129.
  181. Roussel J.,, Harrison J., Steward J. Studies on the formation of speropiasts from stationary phase saccharomyces cerevisiae. J. Inst. Brew., 1973, V. 73, № 1, p. 48−54.
  182. Sawasaki Т., Shimokawa H. Enzymatic lysis of living Candida cells in the presence of chemical agents and antibiotics. Agr. Biol. Chem., 1970, v. 34, № 2, p. 243−247.
  183. Schechter J., Berger A. On the size of the active site in proteases. Biochem. Biophys. Res. Commun., 19&7, v. 27, II 2, p. 157−162.
  184. Scherrer R., Louden L., Gerhardt P. Porosity of the yeast cell wall and membrane. J. Bacterid., 1974, v. 118, m 2, p. 534−540.
  185. SchlenkP., Dainko J.L. Action of ribonuclease preparations on viable yeast cells and spheroplasts. J. Bacteriol., 1965, v. 89, N2 2, p. 428−436.
  186. R., неггего E., Elorza H.V. The assembly of the wall polymers in yeast. In: FEMS Symp. Abstr. cell wall synthesis and autolysis. Madrid, Spain, 1984, p. 59.
  187. Shibata Y. Enzymatic hydrolysis of glucans containing
  188. В 1,3- and B1,6-iinkages. J. Biochem., 1974, v. 75, № 1, P. 85−92.
  189. Shibata N., Mizugami К., Takano K., Suzuki S. Isolation of mannan-protein complex from viable cells of Saccharomyces cere-visiae X 2180−1A-5 mutant strains by the action of zymo-lyase-60 000. J. Bacterid., 198З, V. 156, ш 2, p. 552 558.
  190. Smith E.L., Delange R.J., Evans W.H., Landon M., Markland F.S. Subtilisin Carlsberg. V. The complete sequence comparison with subtilisin BPN. Evolutionary relationships.1968
  191. J. Biol. Chem.Vv. 243, N1 9, p. 2184−2191.
  192. Sugimoto H. Lysis of yeast cell wall by enzymes from Strep-tomycetes. Agr. Biol. Chem., 1967, v. 31, N2 10, p. 11 111 123.
  193. Suomalainen H., Nurminen Т., Oura E. Aspects of cytologyand metabolism of yeast. Progress in Industrial Microbiol., 1973, v. 12, p. 109−127.
  194. Svihla G., Dainko L., Schlenk F. Ultraviolet micrography of penetration of exogenous cytochrome С into the yeast cell. J. Bacterioi., 1969, v. 100, ш 1, p. 498−504.
  195. Svihla G., Schlenk F., Dainko J.L. Spheroplast of the yeast Candida utilis. J. Bacterioi., 1961, v. 82, ш 6, p. 808−814.
  196. Tamai Y., Shinmoto S., Naiho S., Takakuwa M. Purification and some physicochemical properties of five kinds of ther-mo-iabile antigens from yeast cell surface. Agr. Biol. Chem., 1982, v. 46, Ш 12, p. 2933.
  197. Tamai Y., Shinmoto H., Takakuwa M. Physicochemical and immunochemical properties of a thermolabile antigen (TLAb) from the yeast cell surface. Agr. Biol. Chem., 1983, v. 47, 2, p. 293−298.
  198. Tanaka H., Phaff H.J. Enzymatic hydrolysis of yeast cell walls. I. Isolation of wall-decomposing organisms and separation and purification of lytic enzymes. J. Bacterioi., 1965, v. 89, 6, p. 1570−1580.
  199. Villa T.G., Notario V., Villanuera J.R. Occurence of an Endo-1,3-B-glucanase in culture fluids of the yeast Candida utilis. Biochem. J., 1979, v. 177, № 1, p. 107−114.
  200. Villanuera J.R., Elorza M.V., Monreal J., Uruburu F. The use of purified lytic enzymes to obtain yeast protoplasts. Proc. Int. Symp. Yeast, Bratislava, 1966, p. 203−211.
  201. Villanuera J.R., Gacto M., Sierra J. Enzymic composition of a lytic system from Micromonospora chalcea AS. In: Yeast, mould and plant protoplasts. N.Y.-London: Acad. Press, 1973, P. 3−24.
  202. Vrsanska M., Biely P., Kratky Z. Enzymes of the yeast lytic system produced by Arthrobacter GJM-1 bacterium and their role in the lysis of yeast cell walls. Z. Allg. Microbiol., 1977, v. 17, Ш 3, p. 465−480.
  203. Vrsanska M., Kratky z., Biely P. Lysis of intact yeast cells and isolated cell walls by an inducible enzyme system of Arthrobacter GJM-1. z. Allg. Microbiol., 1977, v. 17,1. N2 2, p. 391−402.
  204. William Mc J.S. The structure, synthesis and function of the yeast cell wall a review. J. Inst. Brew., 1970, v. 76,1. Ш 5, p. 524−527.
  205. Yamamoto S., Fukuyama J., Nagasaki S. Production, purification, crystallization and some properties of yeast cell lytic enzyme from species of Fungi Imperfecti. Agr. Biol. Chem., 1974(a), v. 38, lii 2, p. 323−337.
  206. Yamamoto s., Nagasaki s. Studies on microbial enzymes active in hydrolysing yeast cell wall. J. Ferm. Technol., 1972, v. 50, m 3, p. 127−135.
  207. Yamamoto S., Nagasaki S., Lampen J.o. Studies on microbial enzymes active in hydrolysing yeast cell wall. J. Ferm. Technol., 1971, v. 49, № 4, p. 338−342.
  208. Yamamoto S., Shiraishi Т., Nagasaki S. Crystalline enzyme which degrades the cell wall of living yeast. Biochem. Biophys. Res. Communs., 1972, v. 46, NI 5, p. 1802−1809.
  209. Yu R.J., Bishop C.T., Cooper F.P., Hasenclever H.F., Blank F. structural studies of mannan from Candida albicans (serotypes A and B), Candida parapsilosis, Candida stellatoidea and Candida tropicalis. Can. J. Chem., 1967, v. 45, ш 19, p. 2205−2211.
  210. Yu R.J., Bishop C.T., Cooped’F.P., Blank F., Hasenclever H.F. Glucans from Candida albicans (serotype B) and from Candida paraphsiiosis. Canad. J. Chem., 1967, v. 45, Ni 19, p. 2264−2267.
  211. Zubatov A.S., Rainina E.I., Buchwalov I.В., Luzikov V.N. A cytochemical study of the localization of acid phosphatase in Saccharomyces cerevisiae at Different Growth Phases. Histochem. J., 1979, v. 11, № 2, p. 299-ЗЮ.
  212. Выражаю глубокую и искреннюю благодарность Игорю Степановичу Еулаеву за всестороннее руководство, постоянную заботу и внимание.
  213. Я благодарна Валентину Михайловичу Степанову за внимание к работе, ценные советы и подцержку.
  214. Я признательна Галине Николаевне Руденской за помощь в экспериментальной работе и участие в обсуждении полученных результатов.
  215. Благодарю Ермакову С. А., Рыженкову В. В., Селях И. О. и Тимохину Н. А. за помощь в проведении отдельных экспериментов.
Заполнить форму текущей работой

Сессия? Спокойно!