Инфектология как наука и место в ней микробиологии.
Микроскопические методы
Сложные методы. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоты и др. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Окрас методом Грама является сложным методом. Микробиологические методы позволяет точно установить факт наличия возбудителя в исследуемом… Читать ещё >
Инфектология как наука и место в ней микробиологии. Микроскопические методы (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
АО «Медицинский университет Астана»
Кафедра: Микробиологии, вирусологии им. Ш. И. Сарбасовой СРС № 2
Тема: Инфектология как наука и место в ней микробиологии. Микроскопические методы
- Введение
- 1. Основные методы выявления микроорганизмов
- 2. Микроскопические методы исследования морфологии бактерий и грибов
- Приготовление препаратов для микроскопического исследования
- Приготовление препарата для изучения микроорганизмов в нативном виде
- Приготовление фиксированных препаратов-мазков
- 3. Методы окраски мазков
Инфектология — наука, изучающая инфекционный процесс, инфекционную болезнь, инфекционную патологию, возникающую в результате конкурентного взаимодействия организма человека с патогенными или условно-патогенными микроорганизмами, и разрабатывающая методы диагностики, лечения и профилактики инфекционных болезней.
Инфекционный процесс - это комплекс взаимных приспособительных реакций на внедрение и размножение патогенного микроорганизма в макроорганизме, направленный на восстановление нарушенного гомеостаза и биологического равновесия с окружающей средой.
Современное определение инфекционного процесса включает взаимодействие трех основных факторов — возбудителя, макроорганизма и окружающей среды, каждый из которых может оказывать существенное влияние на его результат.
Патогенные микроорганизмы вызывают инфекционные заболевания у здоровых лиц. Патогенные микробы активно проникают в чувствительные организмы, так как паразитирование — важная часть их жизненного цикла.
Условно-патогенные микроорганизмы, как правило, лишены болезнетворных свойств и не вызывают инфекционных заболеваний у здорового человека. Условно-патогенные микробы вызывают поражения после пассивного переноса во внутреннюю среду организма. Важные условия их развития — массивность инфицирования и нарушения сопротивляемости организма.
Условно-патогенные и непатогенные (точнее, не способные вызывать поражения у здорового человека) микробы могут при определенных условиях вызывать оппортунистические (от англ. opportunity, возможность, удобный случай) инфекции. Подразделение микроорганизмов на непатогенные и условно-патогенные виды имеет нечеткие границы.
Некоторые микробы (например, условно-патогенные) способны размножаться в организме человека, не причиняя ему вреда. Это явление можно рассматривать как взаимную адаптацию микро — и макроорганизма. Такая форма паразитизма называется носительство.
1. Основные методы выявления микроорганизмов
Микроскопические методы включают приготовление мазков и препаратов для микроскопирования. В большинстве случаев результаты микроскопических исследований носят ориентировочный характер, так как многие микроорганизмы лишены морфологических и тинкториальных особенностей.
Микробиологические методы позволяет точно установить факт наличия возбудителя в исследуемом материале: включает культивирование, выделение чистой культуры и идентификацию микроорганизмов с учетом морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, токсигенных и антигенных свойств.
Биологические методы направлены на определение наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя, включают заражение лабораторных животных с последующим исследованием их.
Серологические методы выявления специфических антител и антигенов возбудителя — важный инструмент в диагностике инфекционных заболеваний.
Аллергологические методы. Антигены многих возбудителей обладают сенсибилизирующим действием, что используют для диагностики инфекционных заболеваний (кожно-аллергические пробы).
2. Микроскопические методы исследования морфологии бактерий и грибов
Приготовление препаратов для микроскопического исследования
Для приготовления препарата исследуемый материал берут из пробирки, колбы или чашки Петри бактериологической петлей или стерильной пипеткой. В некоторых случаях используют для этой цели препаровальные иглы.
Приготовление препарата для изучения микроорганизмов в нативном виде
Метод " висячей капли" . Препарат готовят на покровном стекле, в центре которого наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. Для микроскопии вначале используют малый сухой объектив 8Х, под увеличением которого находят край капли, а затем устанавливают объектив 40Х и исследуют препарат.
Метод " раздавленной" капли. На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покровным стеклом. Капля должна быть небольшой, не выходящей за край покровного стекла. Микроскопируют препарат с объективом 40Х. После микроскопии препараты «раздавленной» капли или «висячей» капли опускают в дезинфицирующий раствор.
Приготовление фиксированных препаратов-мазков
Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло наносят каплю воды или изотонического раствора хлорида натрия, в которую петлей вносят исследуемый материал и распределяют его таким образом, чтобы получить тонкий и равномерный мазок. При таком распределении материала в мазке при микроскопии можно увидеть изолированные бактериальные клетки. Если исследуемый материал содержится в жидком виде, то его непосредственно наносят петлей на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки, не давая капле закипать.
Для фиксации мазка предметное стекло (мазком вверх) медленно проводят 3 раза через пламя горелки. Микроорганизмы при фиксации погибают, плотно прикрепляясь к поверхности стекла, и не смываются при дальнейшей обработке. Более длительное нагревание может вызвать деформацию клеточных структур. Мазки крови, мазки-отпечатки органов и тканей и в некоторых случаях мазки из культур микроорганизмов фиксируют погружением на 15−20 мин. в метиловый или этиловый спирт, смесь Никифорова, сулемовый спирт и другие фиксирующие жидкости.
микроорганизм бактерия гриб препарат
3. Методы окраски мазков
Простой метод. Фиксированный мазок окрасить каким-либо одним красителем, например фуксином водным (1−2 мин) или метиленовым синим (3−5 мин), промыть водой, высушить и микроскопировать.
Сложные методы. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоты и др. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Окрас методом Грама является сложным методом.
Рис. 2. Окрас методом Грама (схема).
На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1−2 мин ее снять, а краситель слить.
Нанести раствор Люголя на 1−2 мин.
Обесцветить этиловым спиртом в течение 30−60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
Промыть водой.
Докрасить водным раствором фуксина в течение 1−2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать.
Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные — в красный.