Лабораторная работа № 12. Получение микроклубней картофеля in vitro

В практике биотехнологии на искусственных питательных средах с определенным набором биологически активных веществ можно укоренить побеги, а также индуцировать образование микроклубней. Для этого обычно используют среды с высоким содержанием минеральных солей (Мурасиге-Скуга), углеводов (сахарозы до 8% от объема среды), цитокининов, абсцизовой кислоты, хлорхолинхлорида.

В течение первых 10—12 суток после черенкования растения выращивают на обычном фотопериоде (16—17-часовой) с интенсивностью освещения 3—5 кЛк, при температуре 25 °C днем и 19—20°С ночью. Последующее культивирование проводят на 12-часовом фотопериоде при той же степени освещенности и температуре.

В некоторых случаях, после выращивания в условиях длинного дня пробирки переносят в холодильник с температурой 10 °C. Образование микроклубней происходит через 1—1,5 месяца. Микроклубни хранят в холодильнике при температуре +5°С и влажности воздуха до 95%. Их закладывают в стерильные пробирки без среды по 10 штук в каждую и закрывают пробками (срок хранения до 6 месяцев). Таким образом, создаются условия, соответствующие периоду покоя картофеля, что способствует лучшей всхожести и жизнеспособности растений. Весь период от микрочеренкования до получения микроклубней составляет 60—65 дней.

Цель работы: изучить процесс клубнеобразования у проростков картофеля.

Оборудование и материалы: ламинар-бокс, пробирки с питательной средой для получения микроклубней, флаконы с 96% спиртом для стерилизации инструментов, скальпели, пинцеты, препаровальные иглы, спиртовка, вата, стерильные чашки Петри.

Объект исследования: стерильные проростки картофеля с 5—6 сформированными листьями в пробирках.

Таблица 5

Модифицированная питательная среда Мурасиге — Скуга для клубнеобразования у картофеля.

Ход работы: в стерильных условиях, стерильными инструментами извлечь проростки с хорошо сформированными корнями из пробирок и перенести на питательные среды для индукции клубнеобразования. Пробирки с пересаженными в них растениями закрыть и перенести в культуральную комнату. В ходе опыта соблюдать световой и температурный режим режим.

Задание: провести наблюдение процесса клубнеобразования через 4, 6, 8 недель после начала культивирования. Результаты зарисовать, сделать выводы на основании теории гормональной регуляции. Заложить микроклубни на хранение.