Обнаружение микроорганизмов химическими методами

Анализ микроорганизмов по их липидному составу.

Липиды — обязательные компоненты мембран, окружающих цитоплазму каждой микробной клетки. Липидный состав различных микроорганизмов в значительной степени отличается друг от друга. Существует шесть (и даже больше) классов липидов, которые обнаружены у микроорганизмов, состоящих из индивидуальных липидов с шестью или более структурными особенностями. Каждый микроорганизм имеет свой особенный липидный профиль (основной липид), и это свойство было положено в основу их химической идентификации. Следует сразу оговориться, что данный метод не идеален, поскольку любые микроорганизмы могут существенно менять профиль липидов в зависимости от возраста культуры и условий культивирования клеток.

Широкое распространение вследствие простоты и доступности получил анализ, основанный на изучении и сравнении метиловых эфиров жирных кислот (МЭЖК), входящих в состав липидов. Полный процесс идентификации включает эстерификацию липидов, метилирование входящих в их состав жирных кислот, разделение на хроматографических колонках и количественное определение с помощью газовой хроматографии или высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Специальным образом обработанные колонки дают хорошее разрешение МЭЖК, что позволяет сравнивать их время удерживания с ранее идентифицированными липидными профилями (стандарты). Количество каждой жирной кислоты можно рассчитать по площади хроматографического пика, а абсолютные концентрации — при введении внутреннего стандарта.

Анализ МЭЖК, экстрагированных из почвенных образцов, позволяет быстро и относительно недорого идентифицировать состав популяции почвенных микроорганизмов. Интерпретация результатов, однако, иногда встречает значительные трудности вследствие идентичности многих липидов у различных представителей изучаемого микробного сообщества.