Подлинность. 
Фармакогностическое изучение черёмухи обыкновенной

А. Внешние признаки сырья.

Плоды — костянки шарообразной или продолговатояйцевидной формы, иногда к верхушке несколько заостренные, диаметром до 8 мм, морщинистые, без плодоножки, с округлым белым рубцом на месте ее отпадения. Внутри плода содержится одна округлая или округло-яйцевидная, очень плотная, светло-коричневая косточка диаметром до 7 мм с одним семенем. черемуха фармакологический лекарственный химический Поверхность плодов морщинистая, косточки — поперечно-ребристая. Цвет плодов черный, матовый, реже блестящий, иногда с беловато-серым или красноватым налетом на складках. Запах слабый. Вкус сладковатый, слегка вяжущий (ист. 3).

Б. Микроскопия.

На поперечном срезе плода виден эпидермис, состоящий из клеток с равномерно утолщенными стенками. Мезокарпий представлен рыхлой паренхимой, клетки которой заполнены хромопластами разнообразной формы, изредка встречаются проводящие пучки. Эндокарпий состоит из двух слоев склеренхим ткани: наружный — каменистые клетки округлой или слегка вытянутой по радиусу формы, внутренний — тангентально-вытянутые склеренхимные волокна. В наружном слое косточки встречаются паренхимные клетки с кристаллами оксалата кальция ромбической формы (ист. 2).

Государственная фармакопея Российской Федерации предлагает следующие виды определения основных биологически активных веществ.

1. Высокоэффективная жидкостная хроматография

На хроматограмме испытуемого раствора, времена удерживания основного пика цианидин-3-глюкозида должно совпадать со временем удерживания пика цианидин-3-глюкозида стандартного образца и составлять около 8,5.

Испытуемый раствор в количестве 1,0 мl подвергают хроматографическому разделению методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в следующих условиях: колонка стальная, например Reprosil-Pur C18-AQ или аналогичная.

Подвижная фаза: (А) — муравьиной кислоты раствор водный 1%, (Б) — ацетонитрил в градиентном режиме элюирования.

Скорость подвижной фазы — 0,25 мл/мин;

Температура колонки + 35 ^оС;

Длина волны детектирования: 510 нм;

Состав подвижной фазы программируют:

Условия градиентного элюирования антоцианов черёмухи обыкновенной.

На хроматограмме испытуемого спиртового раствора плодов черёмухи обыкновенной время удерживания основного пика цианидин-3-глюкозида должно совпадать со временем удерживания пика на хроматограмме стандартного образца цианидин-3-глюкозида (510 нм). Кроме того, наблюдается пик меньшей интенсивности, соответствующий цианидин-3-рутинозиду (антоцианы).

2. УФ-спектр

Аналитическую пробу плодов черёмухи измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3,0 мм. Около 1,0 г предварительно измельченного и просеянного сквозь сито с диаметром отверстий 3 мм сырья помещают в плоскодонную колбу вместимостью 150 мл, прибавляют.

25 мл растворителя — хлористоводородной кислоты раствора 1% в спирте 95%, присоединяют обратный холодильник и нагревают на водяной бане с температурой 80? С в течение 30 минут. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры и содержимое колбы сливают декантацией в мерную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию повторяют еще трижды указанным выше способом. Извлечения каждый раз декантируют в ту же мерную колбу. Объем фильтрата в мерной колбе доводят до метки хлороводородной кислоты раствора 1% в спирте 95%, и встряхивают (раствор А).

В мерную колбу ёмкостью 25 мл помещают 2 мл раствора А, добавляют 2 мл алюминия хлорида раствора 5% и доводят до метки растворителем (раствор Б). Измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре в диапазоне длин волн л = 450 — 600 нм, в качестве раствора сравнения используют алюминия хлорида раствора 5%.

Рисунок 8 — УФ-спектр поглощения антоцианов плодов черёмухи обыкновенной с использованием шифт-реактива алюминия хлорида (батохромный сдвиг на схеме показан зелёным цветом).

УФ-спектр поглощения испытуемого раствора Б в интервале длин волн от 450 до 600 нм должен иметь максимум поглощения при длине волны 575±5 нм (батохромный сдвиг) по сравнению с раствором Б без добавления алюминия хлорида, имеющего максимум поглощения при 535±5 нм (антоцианы).

3. Тонкослойная хроматография.

Аналитическую пробу плодов черёмухи измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3,0 мм. Около 2,0 г измельчённых плодов помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл хлористоводородной кислоты раствора 1% в спирте 95%, встряхивают и нагревают с обратным холодильником при температуре 50 °C на ультразвуковой водяной бане в течении 60 минут. Полученное извлечение сливают декантацией. Раствор упаривают в вакууме до половины объёма. На линию старта хроматографической пластинки размером 10Ч15 см в виде полосы длиной 10,0 мм, шириной 2,0 мм, наносят 5,0 мкл полученного раствора и 5,0 мкл раствора стандартного образца вещества — свидетеля цианидин-3-глюкозида. Пластинку помещают в камеру предварительно насыщенную парами со смесью растворителей этилацетат-уксусная кислота ледяная-муравьиная кислота-вода (100:10:10:25) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителей пройдёт 14 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, сушат при комнатной температуре в течение 15 минут и просматривают при естественном или искусственном освещении. На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться зоны адсорбции на уровне зоны адсорбции на хроматограмме раствора стандартного вещества цианидин-3-глюкозида красного цвета с R_f около 0,5−0,6. При проявлении парами зона адсорбции синеет. На хроматограмме испытуемого раствора кроме основной зоны адсорбции допускается наличие двух дополнительных зон адсорбции красного цвета (антоцианы).