Динамика популяции L. monocytogenes в козьем молоке

Динамика популяции L. monocytogenes в козьем молоке

В статье приведены результаты исследований динамики популяции L. monocytogenes в стерильных и нестерильных пробах козьего молока при различных температурных режимах. В опыте использованы три музейных штамма Listeria monocytogenes из коллекции кафедры ветеринарной санитарии КГУ им. А. Байтурсынова, которые в соответствии с паспортными данными обладали типичными морфологическими, культуральными, биохимическими и патогенными свойствами, выделенные из головного мозга, силоса и почвы. Для культивирования и выделения листерий из исследуемых объектов производили посевы на пластинки МПА с 0,004% налидиксовой кислотой. Установлено, что листерии способны размножаться в козьем молоке при различных температурных режимах.

В козьем молоке концентрация листерий зависела от температурного режима, рН и сопутствующей микрофлоры. В нестерильных пробах молока концентрация листерий была значительно ниже, чем в стерильном. В нестерильных пробах при понижении уровня рН происходило угнетение популяции листерий, которое сопровождалось значительным полиморфизмом и появлением D, L и R-форм.

Ключевые слова: возбудитель листериоза, жизнеспособность, козье молоко.

листерия молоко нестерильный проба Большинство крупных эпидемических вспышек листериоза с высоким процентом летальных исходов обусловлены потреблением молочных продуктов [1].

В США из 450 образцов козьего молока, собранного на 39 фермах, были выделены листерии в 35 пробах, из них L. monocytogenes — в 26 (5,8%) [2]. В Великобритании листерии обнаружены в 8,2% мягких сыров из козьего молока. Из них 20 образцов сыра содержали более 1000 КОЕ/г [3]. В Бельгии листерии обнаружены в сыре (3,8 КОЕ/г), приготовленном из сырого козьего молока [4]. В Иране было исследовано 48 проб козьего молока, из них 4,2% были контаминированы листериями [5]. В другом сообщении в этой стране при исследовании 420 проб молочных продуктов в 13 пробах козьего молока были обнаружены листерии (18,57%) [6].

В отечественной литературе мы не нашли работ, посвященных изучению жизнеспособности листерий в козьем молоке. В связи с этим, перед нами была поставлена цель изучить динамику популяции L. monocytogenes в стерилизованном и сыром козьем молоке. В задачи исследования входило установить влияние температуры, рН и сопутствующей микрофлоры козьего молока на динамику популяции листерии.

Свежее козье молоко с рН 6,68 разливали по 6 мл в пробирки, одну часть стерилизовали при температуре 125−130°С в течении 20 минут, затем пробы сырого и стерилизованного молока инфицировали листериями из расчета 1−3 тыс. КОЕ/мл. Опытные пробы молока выдерживали при температуре 4 °C в холодильнике, при комнатной температуре 18 °C и в термостате при 37 °C.

Таблица 1 — Динамика популяций L. monocytogenes в пробах стерильного козьего молока, тыс. КОЕ/мл

Таблица 2 — Динамика популяций L. monocytogenes в сырых пробах козьего молока.

Результаты исследований динамики популяции L. monocytogenes в стерилизованных пробах козьего молока отображены в табл.1. При температуре 4 °C концентрация листерий медленно возрастала и достигала на 6 сутки — 7250±154 тыс. КОЕ/мл, на 7 сутки — 50 000±154 тыс. КОЕ/мл.

В пробах при комнатной температуре отмечался более интенсивное размножение листерий, концентрация которых на 4 сутки составляла 218 333±38 625 тыс. КОЕ/мл, на 5 сутки — 575 000±15 450, а на 7 сутки снизилась до 75 000±15 450 тыс. КОЕ/мл.

В термостате при 37 °C максимальная концентрация листерий отмечалась на 4 сутки — 441 666±38 625 тыс. КОЕ/мл, на 6 сутки она снижалась до 300 000±38 625 тыс. КОЕ/мл, а на 7 сутки до 150 000±15 450 тыс. КОЕ/мл. На 4 сутки при 37 °C были обнаружены D-формы колоний.

Таким образом, в пробах стерильного молока популяция листерий значительно возрастала и на 4−5 сутки достигала максимальной величины.

Результаты исследований динамики популяции L. monocytogenes в сырых пробах козьего молока отображены в табл. 2. При 4 °C концентрация листерий на 7 сутки повышалась до 9333 тыс. КОЕ/мл, при этом рН молока снижалась незначительно, с 6,68 до 6,37−6,38.

При 18 °C максимальная концентрация листерий отмечалась на 4 сутки и составила 70 000 тыс. КОЕ/мл при рН4,30−4,33. На 7 сутки концентрация листерий снижалась до 7500 тыс. КОЕ/мл, при этом рН молока колебалась в пределах 4,42−4,46.

При температуре 37 °C концентрация листерий спустя сутки значительно возростала и составила 6916 тыс. КОЕ/мл, на 3 сутки до 33 333 тыс. КОЕ/мл, на 5 — достигла максимума — 53 333 тыс. КОЕ/мл, а затем снижалась и на 7 сутки составила 3750 тыс. КОЕ/мл. При этом исходная рН молока понижалась и на 2 сутки составила 4,52−4,54, на 4 сутки — 3,65−3,68 и на 7 сутки — 3,70−3,72.

В пробах нестерильного молока на 3 сутки при 37 °C появились единичные колонии D-формы, а на 7 сутки отмечался значительный полиморфизм — наряду с колониями S и D-форм обнаруживались R и L-формы. При 18°D-формы появились только на 7 сутки, а при 4 °C — на 4 сутки. В пробах стерильного молока D-формы колоний появились лишь при 37 °C на 4 сутки, а R и L-формы не наблюдались. В сырых пробах козьего молока при 18 °C и 37 °C наблюдалось значительное снижение рН в результате его скисания Максимальная концентрация в пробах стерильного молока была отмечена на 5 сутки при 18 °C — 575 000±15 450 тыс. КОЕ/мл. Это значительно выше, чем в нестерильном молоке (70 000±1545 тыс. КОЕ/мл).

Таким образом, динамика популяции L. monocytogenes в козьем молоке зависилат от температурного режима, рН молока и сопутствующей микрофлоры.

• 1. Schwartz B., Hexter D., Broome C.V. Investigation of an autbreak of listeriosis: new hypothesisfor the etiology of epidemic Listeria monocytogenes infection. J InfectDis 1989; 159:680−5.
• 2. Abou-Eleinin AA, Ryser ET, Donnelly CW. Incidence and seasonal variation of Listeria species in bulk tank goat’s milk. J Food Prot. 2000 Sep;63(9):1208−13.
• 3. Greenwood M. H, Roberts D, Burden P., The occurrence of Listeria species in milk and dairy products: a national survey in England and Wales., sbruary 1991.-p. 197−206. Int J FoodMicrobiol. 1991 Feb;12(2−3):197−206.
• 4. Frye C, Donnelly CW. Comprehensive survey of pasteurized fluid milk produced in the United States reveals a low prevalence of Listeria monocytogenes. J Food Prot. 2005 May;68(5):973−9.
• 5. Ebrahim Rahimi, Hassan Momtaz, Asma Behzadnia, Zeinab Torki Baghbadorani. Incidence of Listeria species in bovine, ovine, caprine, camel and water buffalo milk using cultural method and the PCR assay. Asian Pac. J Trop Dis. 2014 Feb; 4(1): 50−53.
• 6. Amir Masoud Shahbazi, Mojtaba Rashedi, Rafei Sohrabi. Comparative contamination of Listeria monocytogenes in traditional dairy products in Esfahan Province, Iran. African Journal of Dairy Farming and Milk Production Vol. 1 (2), September, 2013, pp. 024−027.